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Ó
(Krause)Kallunki)
ABSTRACT
During this work several organic solvent extracts of bark and leaves of Angostura longiflora
(Evanta), medicinal plant from the Amazon, were evaluated against different Leishmania
parasites. A total of 59 bark extracts aganisnt Leishmania amazonensis complex (PH8 and
690), up to 61 extracts for the Leishmania braziliensis complex (M2903 and 2252), 58
extracts for the Leishmania chagasi complex (642) and 61 extracts for the Leishmania
donovani complex (pp75). All reported Leishmanicidal activity (promastigotes) with values of
the Medium Inhibiting Concentration (IC50) that varies between 76.5µg/ml until 125µg/ml,
the analysis of variance on the basis of the IC50 values on Leishmania of the same species
(but different strand) did not demonstrate significant difference. Nevertheless on different
species (same pathology) significant difference were observed, being the most effective the
bark extract against L. donovani complex (IC50-90.4µg/ml). In the same way 18 leaves
extract were evaluated. IC50 values vary between 52.7µg/ml and 77.9µg/ml. In the
comparative analysis between bark and leaves, on the bases of the IC50 values, the results
differ significantly, the leaves extracts display better biological activity than the bark. Taking
into account the statistical analysis, we considered that the clinical studies Phase I and II on
the basis of Angostura longiflora (Evanta) should use a product base on bark and leaves
extracts. In addition, we provide data of biological activity against epimastigotes of
Trypanosoma cruzi with values of IC50 of 49,7µg/ml (bark) and 32µg/ml (leaves)
Key words: Leishmaniasis - Tripanosomiasis - vegetal Species -Antiparasitic.
INTRODUCCION
Las Leishmaniasis son un conjunto de enfermedades muy diferentes entre si, producidas por
distintas especies de un protozoario perteneciente al género Leishmania. Estas enfermedades
de evolución crónica se caracterizan por comprometer piel, mucosas y vísceras dependiendo
de la especie de Leishmania causante y de la respuesta inmune del huésped.(1).
Por otro lado en América latina la enfermedad de Chagas está considerada como un grave
problema para la salud pública, estimándose que entre 16-18 millones de personas están
infectadas y cerca de 90 millones bajo riesgo de transmisión. Bolivia presenta en el momento
la más grave situación epidemiológica entre los 19 países afectados en el continente, cerca
de dos tercios de su territorio se encuentra infestado por el vector principal (Triatoma
infestans), aproximadamente 1.800.000 de bolivianos ya se encuentran infectados por el
agente causal Trypanosoma cruzi y más de 3.700.000 se hallan bajo riesgo de infección (3).
Todo esto se agrava por el marco de extrema pobreza en el que se debate la población
afectada, donde las carencias materiales se agregan a las barreras culturales para la
comprensión de la situación, con el consiguiente desconocimiento de la magnitud del
problema. A pesar de la existencia de tratamientos contra este tipo de enfermedades el
elevado porcentaje de reacciones adversas que se presentan a desalentado su uso por el
ambiente médico. A pesar de las cifras epidemiológicas de ambas enfermedades, y al ser un
problema asociado a la pobreza, ofrece poco incentivo comercial a la industria farmacéutica,
para desarrollar drogas efectivas y económicas.
Hace varios años entidades locales como el Fondo Nacional de Medio Ambiente (FONAMA)
y la Universidad Mayor de San Andrés (UMSA) de La Paz han realizado estudios botánicos,
biológicos y químicos sobre plantas medicinales utilizadas por diferentes grupos étnicos,
demostrando que Angostura longiflora Krause, usada por las comunidades indígenas como
antiparasitario es la planta más promisoria en el tratamiento contra las Leishmaniasis, por su
alta eficacia y poca toxicidad.
METODOLOGÍA
Las especie vegetal fue colectadas de la region de Santa Rosa de Maravilla (San
Buenaventura) provincia Iturralde. Los extractos orgánicos fueron obtenidas por métodos de
extracción ácido-base, sohxlet y reflujo a partir del material vegetal. Los extractos etanólicos
Las formas promastigotes de leishmania: complejo L.amazonensis (cepa PH8, cepa 690 ),
complejo L.brasiliensis (cepa M2903, cepa 2252), complejo L.donovani (cepa pp75).
complejo L. chagasi (cepa 642) provistas por Dr. Jean-Pierre Dedet (Instituto Pasteur-
Francia), y epimastigotes de una cepa de Trypanosoma cruzi (tulahuen), fueron cultivados a
26 °C en medio Scheneider y Liver Infusión Tryptose (LIT) respectivamente suplementado al
5 % con suero bovino fetal inactivado (56 °C por 30 minutos).(4)
RESULTADOS Y DISCUSION
Todos los extractos orgánicos de hojas (IC50 entre 52.7µg/ml y 77.9µ g/ml) y de corteza
(IC50 entre 76.5µg/ml y 125µ g/ml) de Angostura longiflora (Evanta) presentaron actividad
Leishmanicida in vitro sobre promastigotes de diferentes cepas de Leishmania: complejo
L.amazonensis (690 y PH8), complejo L.braziliensis (M22903 y 2252), complejo L. donovani
(pp75), complejo L. chagasi (642).(Grafica 1-2)
Gráfica 1
Actividad Leishmanicida in vitro de extractos orgánicos de corteza de Angostura longiflora (Evanta) sobre
promastigotes de L.amazonensis(PH8 y 690) L.braziliensis(M2903 y 2252) L.donovani (pp75) L.chagasi(642)
Gráfica 2
Sin embargo al realizar el mismo análisis sobre complejos diferentes L.donovani (pp75) y L.
chagasi (642), pero misma patología (Leishmaniasis visceral) se puede evidenciar actividad
biológica significativamente diferente.(P < 0.01) (Tabla2)
Tabla 2
Análisis de varianza una via (Anova) de extractos orgánicos de hojas de Angostura longiflora
sobre promastigotes de L donovani ( pp75) y L. chagasi (642)
Groups Count Sum Average Variance
pp75 18 950.7 52.8166667 484.766176
642 18 1402.57 77.9205556 785.8325
ANOVA
Source of
Variation SS df MS F P-value F crit
Between Groups 5671.84714 1 5671.84714 8.92783417 0.00518433 7.44410045
Within Groups 21600.1775 34 635.299338
Total 27272.0246 35
Por otro lado tambien se realizó el análisis de varianza (una via) entre los promedios de las
IC50 de extractos orgánicos de corteza y hoja de Angostura longiflora (Evanta) para cada
una de las cepas de Leishmania en estudio. (Gráfica 3).
Gráfica 3
Total 96293.9252 76
Análisis de varianza una via (Anova) entre extractos orgánicos de corteza y hoja de Angostura
longiflora sobre promastigotes de Leishmania amazonensis (PH8)
Por lo que podemos concluir que los extractos orgánicos de hojas presentan una mayor
actividad Leishmanicida que los extractos de corteza, excepto el complejo L braziliensis
(cepa 2252) que pese a presentar diferencias en sus medias (corteza76,5µ g/ml y hoja
64,7µ g/ml) y luego del análisis de varianza (una via), asumimos que la variabilidad existente
entre esta poblaciones estudiadas que supuestamente provenían del efecto de los tratamientos
son del mismo orden de magnitud que de los errores, por lo tanto, se considera que las
medias de los tratamientos son iguales y las diferencias observadas se deben a la variabilidad
biológica o a un error experimental.
Tomando en cuenta los análisis estadísticos desarrollados consideramos que los estudios
clínicos Fase I y II en base a Angostura longiflora (Evanta) deberá presentar un producto
base de extractos de corteza y hoja para la actividad leishmanicida.
Gráfica 4
Se realizó el análisis de varianza una via (Anova) entre grupos de extractos orgánicos de
corteza y hoja de Angostura longiflora sobre epimastigotes de Tripanosoma cruzi (tulahuen ).
Debido que P es menor que 0.01, se rechaza la hipotesis nula. Por lo tanto, las diferencias
entre promedios de la IC 50 son significativas (ver tabla 24).
Tabla 24. Promedios de la IC50 de extractos orgánicos de corteza y hoja de Angostura longiflora
sobre epimastigotes de Trypanosoma cruzi (tulahuen)
BIBLIOGRAFIA
1. ATIAS ,Antonio. (1999) Parasitologia Medica .editorial Mediterraneo Santiago Chile
p242-268.
2. World Health Organization (WHO). (1998) Rapport Sur la Santé dans le Monde, 1998;
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(Krause)Kallunki)
y GIMENEZ, T. Alberto 1
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Instituto de Investigaciones Fármaco Bioquímicas, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas,