INFORME PRACTICA DE LABORATORIO No.

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OBSERVACION DE CELULAS BACTERIANAS

INTEGRANTES:

BERRIO SOTO RICARDO JOSE

DIAZ URIBE MARIA PAULA
HERNÁNDEZ ROMERO SHIRLEY SOFIA
MOLINA MONTIEL LORENA SOFIA

DOCENTE:

JANY LUZ ALARCÓN

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
BIOLOGIA I

MONTERÍA, CÓRDOBA
16/06/2019
 1. INTRODUCCIÓN

Las bacterias son organismos unicelulares y de estructura sencilla, claro en comparación

con otros organismos, pertenecen al reino monera y se encuentran en gran abundancia
distribuidas por todo el planeta, según estudios son los seres vivos más abundantes sobre
la tierra; son de tamaño extremadamente diminuto y para su observación es necesario el
uso del objetivo de 100X del microscopio óptico u otros microscopios de tecnología
mucho más avanzada. A pesar de ser seres tan pequeños su importancia es
desmesuradamente grande tanto para el hombre como para los ecosistemas y la vida
misma, en la naturaleza desempeñan muchos papeles entre estos ayudar a los ciclos de
nutrición y/o utilización de estos, formando una relación de mutualismo con otros seres
como las plantas, también pueden ayudar a descomponer sustancias, muchas de estas de
alta toxicidad o capaces de ocasionar graves daños al medio ambiente como el mercurio,
el uranio o plutonio los cuales son usados sobre todo en las industrias y allí es donde
entran las bacterias como una herramienta que posibilita la descomposición de dichas
sustancias esto refleja una utilización muy práctica de las bacterias por parte del hombre,
pero existen muchos usos como la producción de licores y alimentos como el yogurt, el
queso y otros derivados de lácteos. Estas habilidades especiales de las bacterias se deben
a su estructura, su gran capacidad para adaptarse a condiciones extremas y la facilidad
con la cual su material genético puede ser manipulado entre otras, por esto es importante
dentro de la biología el estudio, utilización e investigación de las bacterias, estas serán el
centro de atención y motivo de estudio en el presente laboratorio citado de manera clara y
precisa a manera de informe. (Vázquez, C. Martín, A. De Silóniz, Ma I & Serrano, S
(2010) Técnicas básicas de Microbiología. Observación de bacterias. Recuperado el 16
de Junio de 2019, de Revista Reduca:
http://revistareduca.es/index.php/biologia/article/viewFile/819/834 )

2. OBJETIVOS

 Determinar la presencia de bacterias y clasificarlas según sus características, en

muestras de origen natural (yogurt, vinagre, frotis bucal, paja) y en levaduras.
 Adquirir habilidad en la utilización de los distintos métodos de observación de las
bacterias.
 Observar e identificar las diferentes formas bacterianas utilizando técnicas
sencillas de coloración, y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones
bacterianas.
 Conocer las distintas formas de acción de los colorantes de acuerdo a su carácter
químico.

3. MARCO TEORICO

Las bacterias son organismos unicelulares procariontes, esto quiere decir que están
formados por una sola célula carente de núcleo. Su ácido desoxirribonucleico (ADN) se
encuentra libre en el citoplasma y no tienen organelos, como las mitocondrias,
cloroplastos o aparato de Golgi. A pesar de su sencilla organización celular, cuentan con
una pared celular (capa de polisacáridos) que envuelve la célula proporcionándole rigidez
y protección. Son tan pequeñas que es imposible verlas a simple vista, solamente cuando
llegan a agruparse formando colonias es cuando las podemos reconocer.
Además de contar con una pared celular, cuando las condiciones ambientales se tornan
hostiles muchas bacterias forman en su interior estructuras de protección llamadas
endosporas, las cuales contienen el material genético y las sustancias necesarias para
poder sobrevivir. Algunas son tan resistentes que permiten a la bacteria sobrevivir a altas
temperaturas e incluso a largos periodos de tiempo. Se reproducen asexualmente por
medio de una forma de división celular denominada fisión binaria, que produce copias
genéticamente idénticas a la célula original. En condiciones ideales, algunas bacterias se
duplican en cuestión de minutos por lo que podrían en principio, dar origen a una
población de millones de bacterias en poco tiempo.
Son prácticamente omnipresentes ya que habitan casi todos los hábitats de la Tierra, los
científicos las consideran como los seres más numerosos del planeta. Una de las razones
por las cuales son tan exitosas es porque pueden utilizar una amplia variedad de fuentes
de alimento. Algunas bacterias llevan a cabo la fotosíntesis, proceso mediante el cual
utilizan la energía lumínica y el dióxido de carbono para sintetizar su alimento
(autótrofas), algo parecido a lo que realizan las plantas. Otras obtienen su energía de
moléculas inorgánicas como azufre, amoniaco o nitritos (quimiolitótrofas) y algunas más
se alimentan de la materia orgánica en descomposición (quimiorganotrofos).
Las bacterias desempeñan funciones que son importantes para otras formas de vida.
Muchas son endosimbiontes, esto quiere decir que viven dentro de otros organismos o en
estrecha asociación con ellos. Por ejemplo, existen bacterias que habitan en el tracto
digestivo de los animales, incluyendo el ser humano, y les ayudan a procesar los
nutrimentos que por sí solos serían incapaces de digerir. A pesar de las ventajas que
obtenemos de las bacterias, principalmente en la obtención de alimentos, medicamentos e
inclusive en la industria, muchas son causante de enfermedades, algunas con importantes
repercusiones en la historia humana. Por ejemplo, la “peste bubónica” en la cual
murieron 100 millones de personas en Europa en el siglo XIV, fue causada por una
bacteria.

3.1. TIPOS DE BACTERIAS Y CLASIFICACION:

Existen distintos criterios para clasificar a las bacterias, algunos de ellos son:

 Según la respiración:
Bacterias aerobias: para respirar, este tipo de bacterias se valen del oxígeno.
Bacterias anaerobias: estas, en cambio, no utilizan oxígeno, sino que deben sustituirlo
por moléculas inorgánicas como las del sulfato o carbonato.
 Según sus necesidades de crecimiento:
Bacterias autótrofas: estas bacterias tienen la capacidad de sintetizar las sustancias que
necesitan para su metabolismo de sustancias inorgánicas. Dentro de este tipo se
encuentran las fotosintetizantes que, gracias a los pigmentos que las componen, se valen
de la energía de las radiaciones luminosas. También existen las quimiosintetizantes que
utilizan la energía generada a partir de las reacciones químicas generadas por la
oxidación.
Bacterias heterótrofas: este tipo de bacterias parasitan a los seres vivos y usan los
compuestos orgánicos que estos elaboran. Dentro de este grupo existen las bacterias
patógenas o parasitarias son las causantes de enfermedades en los seres vivos. También
están aquellas bacterias de la putrefacción o saprófitas que descomponen las sustancias
orgánicas en las que viven y se valen de su materia orgánica muerta para poder
alimentarse. Otro tipo de bacterias son las simbióticas, que viven en cooperación con
otros organismos. Por último, están aquellas que realizan fermentaciones, de las que se
vale el humano, como el ácido acético, fermentos lácticos, entre otros.
 Según su forma:
Cocos: estas, también conocidas como bacterias redondeadas, pueden hallarse de forma
aislada, como los micrococos, en pares, como los diplococos, en cadena arracimada,
como es el caso de los estafilococos o, en cadenas arrosariadas como los estreptococos.
Leptothrix: son bacterias que las conforman filamentos tabicados y su tamaño es grande.
Bacilos: son alargadas, curvas o rectas y pueden o no poseer flagelos.
Espirilos: estas bacterias son curvas helicoidalmente y pueden poseer un arrollamiento
completo, como es el caso de las espiroquetas, o bien, un arrollamiento incompleto, como
el de los vibriones.

3.2. OBSERVACION MICROSCOPICA DE BACTERIAS.

El examen microscópico de microorganismos constituye una de las técnicas

características de la Microbiología y aunque es posible observar ciertos microorganismos
sin colorear (Ej. protozoarios), en el caso de las bacterias se hace necesaria la coloración
de los preparados para aumentar el contraste con el fondo. Para obtener el máximo
aprovechamiento de la observación microscópica, debe poder relacionarse el
comportamiento tintorial con la estructura y composición química de las diferentes partes
de la anatomía bacteriana.

3.3. COLORANTES Y MORDIENTES

Los colorantes utilizados en Microbiología son compuestos orgánicos que contienen

grupos cromóforos y auxocromos unidos a anillos aromáticos.
La presencia de grupos cromóforos en una molécula (grupos azo, nitro, etc.) no es
suficiente para que ésta actúe como colorante, esto es que se fije a las estructuras a
colorear. Para ser colorante debe poseer grupos que sean capaces de disociarse llamados
auxocromos. Por ejemplo, el 1, 3,5 trinitrobenceno, es un compuesto coloreado, pero no
es un colorante. Sin embargo, si se reemplaza un H por un OH en el anillo bencénico, se
obtiene el ácido pícrico que también es coloreado, pero al poseer un grupo disociable
(auxocromo) actúa como colorante.
La distinción entre colorantes ácidos y básicos depende de la carga de la parte de la
molécula responsable del color. Si es negativa se trata de un colorante ácido y si es
positiva se trata de un colorante básico. Esta diferencia es importante debido a que, según
sean ácidos o básicos, los colorantes tendrán afinidad por diferentes zonas de la anatomía
 celular. Algunos colorantes utilizados comúnmente en Microbiología son fucsina básica,
cristal violeta, safranina, azul de metileno, etc.
En algunas coloraciones se utilizan sustancias capaces de formar complejos insolubles
con los colorantes y que ayudan al proceso de coloración: los mordientes. Ejemplos de
mordientes comúnmente usados son el Lugol, el ácido tánico y algunas sales.
Lógicamente, es de esperar que el colorante imparta su color a las estructuras celulares,
sin embargo, hay un fenómeno llamado metacromacia en el cual se observa un color
diferente. Por ejemplo, pueden visualizarse corpúsculos metacromáticos rojos en ciertos
preparados teñidos con azul de metileno. Una explicación que da cuenta de este
fenómeno se muestra en la figura. El colorante, al interaccionar con ciertas estructuras
polianiónicas como los polifosfatos, se dispone de tal manera que cambia la longitud de
onda de absorción. Pueden observarse corpúsculos metacromáticos (gránulos de volutina)
en varios géneros microbianos y en general, su presencia denota algún déficit nutricional
en el medio de cultivo. (PROYECTO BIOSFERA, MICROOBIOLOGIA 2°
BACHILLERATO. Recuperado el 16 de junio de 2019, de
http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/micro/contenidos4.htm )

4. MATERIALES Y REACTIVOS

 Portaobjetos y cubreobjetos.
 Frasco lavador.
 Cultivos bacterianos.
 Solución de Lugol al 1%
 Puentes de coloración.
 Mechero de alcohol.
 Asas bacteriológicas.
 Mecheros.
 Aceite de inmersión.
 Papel absorbente.
 Muestras bacterianas de origen natural: sarro dental, yogur, vinagre, suelo etc.
 Azul de metileno al 1%
 Agua destilada.
 Metanol.
 Solución salina isotónica.
 Colorantes (ácidos y básicos)
 Nigrosina.
 Microscopio.

5. PROCEDIMIENTO
6. RESULTADOS Y ANALISIS
Para comenzar con el experimento agregamos yogurt, sarro y vinagre en un portaobjetos,
cada uno con una gota de agua destilada, pero al vinagre no se le agregó el agua ya que
este es una sustancia liquida que no necesita esta para observarse. Luego fijamos las 3
muestras con un mechero pasándolo lentamente por la llama de este:

Luego teñimos las 3 muestras con azul de metileno y dejamos actuar por 2 minutos:

Luego que pasaron los 2 minutos lavamos las muestras, pero no directamente ya que
luego se nos iba todo el material que íbamos a observar:
 Tras fijar la muestra y dejarla secar, en el microscopio observamos la muestra de yogurt
en 100X pero antes se agregaba el aceite inmersión.
Logramos observar las bacterias diplococos que se caracterizan por ser cocos
(Streptococcus thermophilus) asociados formando parejas, cocos que tenían forma
esférica y los estreptococos que estaban en forma esférica y agrupada por cadenas (figura
1).

 La placa bacteriana en la boca humana es muy variada y más aún en el ámbito bacteriano,
pues se cuenta con unas 200 a 300 tipos de éstas. Las bacterias más comunes y las que
fueron avistadas en la práctica fueron estafilococos de forma redondeada (cocos) que se
presentan asociadas en racimos, estreptobacilos que presentan forma de varillas, que
pueden encontrarse en solitario o formando filamentos largos y ondulados de varios
bacilos (Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus), también cocos y diplococos.
(figura 2)

 Luego con la muestra de vinagre hicimos los mismo que en las muestras anteriores y
observamos una pequeña cantidad de bacilos (Lactobacillus delbrueckii subsp.
Bulgaricus). (figura 3)

7. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

7.1. ¿Qué tipos de morfología y agrupación aparecen en los frotis de los cultivos?
 R/: Las bacterias de la preparación del yogur eran bacilos y cocos (diplococos y
estreptococos).

7.2. ¿Qué fin tiene la fijación de muestras al realizar un frotis bacteriano?

R/: La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas
y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología bacteriana y las
posibles agrupaciones de células que puedan haber.

7.3. Señale las ventajas y desventajas de la tinción simple respecto al examen en

fresco.
R/:
 Ventajas del examen fresco:
* Es un método rápido.
* Evita las distorsiones que pueda haber durante la fijación y la coloración.
* Permite la observación de microorganismos vivos.
* Permite observar ciertas funciones fisiológicas como movilidad.
Desventajas del examen fresco:
* Falta de contraste.
* A veces necesita cámaras para observar la movilidad.
 Ventajas de la tinción simple:
* Es un método rápido y sencillo.
* Permite la observación de la morfología bacteriana, forma, tamaño y tipo de
agrupaciones de los microorganismos.
* Se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las formas y
las estructuras básicas.
* Se utiliza para incrementar el contraste.
 Desventajas de la tinción simple:
* Utiliza un solo colorante.

7.4. ¿Qué técnicas se pueden emplear para la tinción de flagelos, esporas y

capsulas bacterianas? Explique el fundamento de cada técnica usada
R/:
Tinción de cápsulas bacterianas.
La cápsula es una estructura que rodea externamente la pared de algunos
microorganismos y constituye una barrera física que protege a la célula del ambiente
externo, proporcionando numerosas ventajas a los microorganismos que son capaces
de sintetizarla, por ejemplo, en las bacterias patógenas la cápsula permite la adhesión
al hospedador o protege de la fagocitosis, en otros casos incrementa las posibilidades
de sobrevivir en condiciones de desecación en bacterias que colonizan ambientes
naturales, o bien previenen el ataque de algunos virus, en otras ocasiones son
importantes factores de virulencia en algunas especies clínicamente relevantes como
es el caso de Streptococcus pneumoniae y también proporcionan importantes ventajas
al facilitar la adhesión a superficies sólidas
Técnica de tinción negativa:
No se trata de una tinción propiamente dicha ya que no se utilizan colorantes
con cromóforos, ni se lleva a cabo ninguna reacción entre estructuras celulares y los
 colorantes. En este caso el frotis se hace con una gota de una solución de nigrosina o
tinta china, ambos son productos particulados, insolubles, que formarán una película
opaca a la luz. En este tipo de tinción se prescinde de la fijación por calor, se deja
secar la preparación y se observan los microorganismos brillantes sobre un fondo
oscuro.
Tinción de esporas.
Esta tinción permite poner de manifiesto la endospora bacteriana, una forma de
resistencia producida por algunos géneros de bacterias gram positivas. Las
endosporas aseguran la supervivencia de estas bacterias en condiciones desfavorables
(altas temperaturas, desecación, radiaciones ultravioletas, gamma y agentes
químicos), durante largos periodos de tiempo.
Técnica de tinción de esporas de WIRTZ-CONKLIN.
Tiñe selectivamente las endosporas.
• Tinción con verde de malaquita.
• Calentamiento a emisión de vapores durante 60 segundos, para que el colorante
penetre a través de las paredes de la endosporas.
• Se lava con agua durante 30 segundos que elimina el colorante verde de todas las
partes de la célula, con excepción de las esporas.
• Se tiñe con el colorante rosa safranina.
Las endosporas retienen el color verde; el resto de la célula toma el color rosa.
Tinción de flagelos.
Técnica:
Permite observar los flagelos.
• Se fija químicamente la suspensión bacteriana, mediante formol, y se hace la
extensión en un portaobjetos.
• Se deja secar al aire sin calentamiento alguno.
• Se cubre la preparación con una mezcla de ácido tánico y el colorante rosanilina, de
preparación extemporánea. El ácido tánico (mordiente) engruesa los flagelos y la
rosanilina (colorante) los tiñe.
• Se retira el exceso de colorante con agua.
• Por último, se deja secar al aire, antes de su observación al microscopio.

7.5. Investiga acerca de los colorantes catiónicos anionicos y liposolubles da

ejemplo de cada uno de ellos.
R/:
 COLORANTES ANIONICOS: son aquellos que poseen una carga neta negativa,
también llamados colorantes básicos por tener en su estructura un grupo amino.
 COLORANTES CATIONICOS: son aquellos que poseen una carga neta
positiva, también llamados colorantes ácidos, por tener en su estructura un grupo
sulfúrico o carboxílico normalmente.
Los catiónicos son solubles en medio básico mientras que los anionicos lo son en
medio acido.
 LIPOSOLUBLES: un colorante liposoluble es un colorante cuya afinidad a
soluciones predomina a compuestos orgánicos, son extraídos de materia orgánica y
estos rechazan las moléculas de agua.
Ejemplos:
 Anionicos: anaranjado de metilo, derivados de trifenilmetano, derivados del xanteno.
Catiónicos: azul de metileno, amarillo básico 11
Liposolubles: anilina.

7.6. En general ¿en qué consiste la fermentación?, ¿a cuáles de los grupos

taxonómicos estudiados en esta práctica pertenecen los microorganismos más
comunes en la fermentación, cite algunos ejemplos.
• La fermentación es un proceso catabólico de oxidación incompleto, siendo el
producto final un compuesto orgánico. Estos productos finales son los que
caracterizan los diversos tipos de fermentaciones. El proceso de fermentación
anaeróbica se produce en ausencia de oxígeno como aceptor final de los electrones
del NADH producido en la glucolisis (que funciona como proceso anaerobio). La
necesidad de un aceptor final, para los electrones procedentes del NADH, distinto del
oxígeno hace que se emplee un compuesto orgánico que se reducirá para poder re
oxidar el NADH. El compuesto orgánico que se reduce (acetaldehído, pirúvico) es un
derivado del sustrato que se ha oxidado anteriormente. En los seres vivos, la
fermentación es un proceso anaeróbico y en él no interviene la cadena respiratoria.
Son propias de los microorganismos, como las bacterias y levaduras. También se
produce la fermentación en el tejido muscular de los animales, cuando el aporte de
oxígeno a las células musculares no es suficiente para el metabolismo y la contracción
muscular.

7.7. Menciona algunos procesos industriales que se realizan basados en la

fermentación.
Numerosas industrias humanas sacan provecho a la fermentación para obtener
determinadas sustancias. Por ejemplo, en las industrias alimenticias del queso, se llevan a
cabo procesos de fermentación propiónica, o en la preservación de muchos tipos de
comestibles se acude a la presencia del ácido láctico, que actúa como preservante, debido
a la fermentación láctica.
Algo similar ocurre con la industria alcohólica, tanto de vinos, cervezas u otro tipo de
licores, que requieren de un proceso de elaboración en el que interviene la fermentación
alcohólica. Por el contrario, si algunos licores como el vino se dejan destapados mucho
rato, el oxígeno añadido iniciará la fermentación acética y la bebida empezará a
avinagrarse.

1)Fermentación alcohólica:
Consiste en la transformación del piruvato (ác. pirúvico) procedente del glucólisis, en
etanol (y CO2); dependiendo de la especie de levadura se puede obtener cerveza, güisqui,
ron, sidra, vino, ... (aquí radica su interés para el hombre).
2)Fermentación láctica:
Consiste en la transformación, que llevan a cabo determinadas bacterias, del piruvato
procedente de la glucólisis en ácido láctico. Si el sustrato es lactosa, ésta se hidroliza para
dar glucosa y galactosa; ambas, por vía glucolítica, dan piruvato, y éste, ácido láctico. A
través de esta fermentación se pueden obtener productos derivados de la leche como
quesos, yogures, kéfir, ... (aquí radica su interés).

8. CONCLUSIÓN

Las bacterias poseen poca coloración, por lo cual se dificulta mucho su observación, pero
para esto los científicos han diseñado métodos de coloración que permiten dar una
imagen de la forma, tamaño y estructura de una bacteria existen varios tipos de
colorantes, estos pueden ser ácidos o básicos algunos de estos como la nigrosina (tinta
china) o el azul de metileno los cuales son común mente utilizados.
Se pueden clasificar de muchas formas, entre estas según su forma; se pueden distinguir
así varios tipos como los cocos que son bacterias de forma esférica circular, estos a su vez
forman ciertos grupos por ejemplo si se encuentran en pares se les denomina diplococos,
están los estreptococos, estafilococos entre otros, también se pueden hallar bacterias de
forma alargada las cuales se llaman bacilos (por su forma de bastón) pueden presentar
flagelos o no, existen bacterias en forma de espiral muy parecidas a un resorte, forman
hélices y pueden presentar flagelos.
La distinción entre colorantes ácidos y básicos depende de la carga de la parte de la
molécula responsable del color. Si es negativa se trata de un colorante ácido y si es
positiva se trata de un colorante básico. Esta diferencia es importante debido a que, según
sean ácidos o básicos, los colorantes tendrán afinidad por diferentes zonas de la anatomía
celular. Por ejemplo, la nigrosina es un colorante ácido que actúa alrededor de la célula,
es decir no tiñe el interior y esto facilita la observación de la estructura bacteriana, el azul
de metileno es un colorante básico, este tiñe la bacteria uniformemente y permite que
observemos su interior y estructuras pertenecientes a la bacteria.

9. BIBLIOGRAFIA

 Castro, R. (2008) Observação de Bactérias no Vinagre. Recuperado el 16 de Junio

de 2019, de:
http://www.notapositiva.com/pt/trbestbs/biologia/11_observ_bacterias_vinagre.htm
 Bartow, J. (2010) Streptococcus thermophilus. Recuperado el 16 de Junio de 2019,
de: http://web.mst.edu/~microbio/BIO221_2010/S_thermophilus.html
 Espina, A. (s.f.) Hilo Seda Dental. Recuperado el 16 de Junio de 2019, de
http://www.chamberidental.com/hilo-seda-dental.html