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Fernanda Morales
LISTERIA MONOCYTOGENES.
Características morfológicas y
químicas del microorganismo.
Características culturales,
patogénicas. Ciclo infectivo y
toxigénico. Profilaxis y alimentos
vulnerables.
Integrantes:
Andrade Darlene Fanny
Carvajal Cerón Maria José
Charrière Molina André Nicholas
Andrade Darlene – Carvajal María – Charrière André – Guillén Diana 1
Microbiología General - Gran Trabajo de Investigación – ESPOL – MSc. Mª. Fernanda Morales
Índice
Introducción………………………………………………………………...3
Características morfológicas y
Químicas del microorganismo………………………………………..4 - 6
Identificación, Tipificación,
Diagnóstico en el laboratorio……………………………………….…6 -
7
Características Culturales:
Factores intrínsecos y extrínsecos……………………………........8 -
11
Conclusiones………………………………………………………...20 -
21
Paper Investigativo…………………………………………..….….22 - 23
Bibliografía……………………………………………...……………23 -
24
Introducción
L
a invasión en los alimentos por parte de las bacterias patógenas, es una de las
amenazas sanitarias más peligrosas para el ser humano. Y con gravamen especial las
bacterias que de alguna manera logran evitar los controles homeostáticos del cuerpo.
Esta bacteria ha evadido durante muchos años la correcta identificación de la misma, por lo
que se la ha confundido con otros géneros como con las Corynebacterias.
En los últimos años y gracias al desarrollo de nuevos métodos de identificación microbiana,
se ha logrado distinguir, diferenciar y aislar las distintas cepas y especies del genero Listeria.
Listeria monocytogenes ha sido conocida como patógeno para animales desde comienzos
del siglo pasado, aproximadamente se dice que se descubrió en el año 1926 pero recién a
partir de los años 80’ se reconoció la importancia de la transmisión de listeriosis por medio
de los alimentos, un brote muy conocido se produjo en California en 1985 debido al
consumo de queso que consistió en 86 casos y 29 defunciones. La bacteria esta distribuida
ampliamente en la naturaleza, encontrándose en la superficie de vegetales, en el fondo
marino, agua y suelo en donde es transmitida con facilidad por contacto con superficies
contaminadas.
CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS.
La Listeria monocytogenes en productos patológicos o en
cultivos recientes se presenta como un bacilo corto
grampositivo de 1 a 2 μm de longitud y 0.5 μm de ancho, es
recto o ligeramente incurvado, por lo general con bordes
redondeados.
Aparece aislado, en
pequeños grupos, en
cadenas cortas de hasta 250 μm conservando su forma de
bacilo, aunque también presentan un alto índice de
pleomorfismo, en forma de Y, V y L. En cultivos observados
por aislamiento directo de muestras clínicas, tanto a partir
de tejidos infectados así como también de humores, la
forma más frecuente es la cocoide. En condiciones
desfavorables o cultivos envejecidos se observan formas
filamentosas o en empalizada.
La pared celular de las Gram positivas poseen de 1 a 2 capas de 20-80 nm cada una, el
contenido de peptidoglicano o mureína es mayor al 50% del peso en seco, el contenido de
lipoproteínas y de lípidos es del 0 a 3% (en contraste con el 58% de las Gramnegativas),
tiene muy poco contenido de proteínas sueltas y casi no hay lipopolisacáridos en la pared
celular.
Además de todas estas características propias de las bacterias Grampositivas, existe
estructuras de acido teicoico que no se encuentra en ninguna otra bacteria grampositiva,
esto se debe al peculiar modo de invasión de la Listeria monocytogenes, el cual
estudiaremos a fondo con más detalle.
Ácidos teicoicos: son cadenas de moléculas de glicerina o ribitol esterificadas entre sí por
puentes fosfato, portan una fuerte carga negativa (probablemente sirvan para "secuestrar"
cationes). Los ácidos teicoicos se unen a la mureína a través del fosfato formando una
amida.
Son muy antigénicos. Los grupos sustitutivos de los polioles incluyen D-alanina (como
éster), N-acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina, los sustituyentes son característicos de
las especies bacterianas.
a. Acido Ribitol- teicoico con unidades repetitivas unidas por enlaces 1,5-fosfo diéster de
D-ribitol y éster de D-alanina en posición 2 y sustituyentes glicosidícos en posición 4
(R= N-acetilglucosamina en S. aureus o alfa-glucosil en B. subtilis).
b. Acido Glicerol- teicoico con unidades repetitivas unidas por enlaces 1,3-fosfo diéster
(1,2, en algunas especies). (R =H o D-alanina o glucosil).
Diagnóstico en Laboratorio
Identificación de género.
Identificación de especie.
La identificación de especie es importante ya que todos los miembros del género Listeria son
capaces de contaminar alimentos pero sólo L. monocytogenes produce patología en
humanos. Dicha identificación se realiza mediante unas pocas reacciones bioquímicas y la
capacidad de producir hemólisis, característica esencial para distinguir L. monocytogenes de
L. innocua, que es la especie no patógena aislada con más frecuencia.
Sólo tres especies son hemolíticas, L. monocytogenes, L. seeligeri y L. ivanovii. Las dos
primeras producen una estrecha zona de hemólisis, a veces limitada al diámetro de la
colonia; L. ivanovii muestra una hemólisis amplia. La prueba de CAMP es positiva para L.
monocytogenes y L. seeligeri en la proximidad de una estría de Staphylococcus aureus,
mientras que L. ivanovii sólo da positiva la prueba de CAMP en presencia de una estría de
Rhodococcus equi.
Técnicas de tipificación.
CARACTERISTICAS CULTURALES:
Factores intrínsecos y extrínsecos
Factores Intrínsecos:
1) pH (Potencial de hidrogeniones)
2) actividad de agua(aw)
3) Potencial de óxido- reducción.
4) Contenido de elementos nutritivos
5) Componentes antimicrobianos
Dentro de los límites de algunos factores entre los cuales es posible el crecimiento de
Listeria monocytogenes tenemos:
1. pH
El rango de pH óptimo para Listeria monocytogenes es alrededor del neutro (7.2 – 7.4), sin
embargo también puede hacerlo dentro de un pH de 9.6 máximo y 5.6 mínimo. Alimentos no
procesados que tienen este pH incluyen maíz, melón, pollo, pescado, almejas, cangrejo,
granos. Los alimentos procesados frecuentemente tienen un pH más bajo debido a que
agentes acidulantes han sido añadidos o ácidos naturales han sido producidos durante la
fermentación.
Dentro de Listeria monocytogenes encontramos que crece óptimamente a una aw > 0.95 con
un rango de 0.90 a 1, algunas también pueden sobrevivir a una aw < 0.90 pero sin
crecimiento y se ha llegado a aw de 0.79 – 0.86 en estudios con salame.
La concentración de ClNa es uno de los factores que afecta la actividad de agua y por lo
tanto la disponibilidad de agua disponible para la Listeria monocytogenes. La concentración
de ClNa a la que puede crecer la Listeria es de 6.5% de sal, y puede sobrevivir a 25.5%
La Listeria como la mayoría de los microorganismos, requiere como fuente de energía a las
proteínas y carbohidratos, siendo los más sencillos de éstos los más requeridos por la
bacteria. En el caso de los carbohidratos, por lo general puede sintetizar energía de la
mayoría de los monosacáridos excepto glucosa, y siendo una bacteria invasiva ésta podría
tomar sus nutrientes del citosol de la célula huésped.
5. Componentes antimicrobianos.
Factores Extrínsecos:
Los parámetros extrínsecos de los alimentos están constituidos por aquellas propiedades del
medio ambiente de conservación que afectan tanto a los alimentos como a los
microorganismos. Las más importantes para los organismos vehiculados por alimentos son:
a. Temperatura de almacenamiento
b. Humedad relativa
c. Presencia y concentración de gases en el medio ambiente
1. Temperatura
Los estudios sobre el rango de crecimiento han mostrado que Listeria monocytogenes es
capaz de multiplicarse a cierta velocidad. Dependiendo de la temperatura, la tasa de
crecimiento puede ser lenta o rápida. Para Listeria monocytogenes, el rango de crecimiento
es entre -1 a 45° C.
Observando los rangos de tabla anterior, tenemos que Listeria monocytogenes esta dentro
de los microorganismos mesófilos donde se encuentran casi todos los organismos
patógenos, así como los que habitan en la carne. Y también dentro de los organismos
psicrófilos que se desarrollan bien en refrigeración, aunque su crecimiento es lento.
2. Humedad relativa.
CARACTERISTICAS PATOGENICAS:
Infectivas y toxigénicas. Ciclo infectivo.
Cabe recalcar que esta bacteria no genera ningún tipo de exotoxina; más bien produce una
endotoxina llamada Listeriolisina O (LLO).
La listeriolisina O es una exoproteína de 60 kDa, perteneciente a la familia de las citolisinas,
estas son enzimas que destruyen membranas citoplásmicas mediante la formación de poros
y son activadas por grupos SH2 presentes en la membrana.
Sin embargo, la Listeriolisina O es entre las citolisinas, la única producida por una bacteria
intracelular, además es activa a bajos pHs como los que imperan en el interior del
fagolisosoma. Además, esta hemolisina es responsable de la hemólisis tipo β que sirve para
identificar a las Listeria monocytogenes en agar sangre. A este respecto, diversos trabajos
han demostrado que las escasas cepas no hemolíticas de este patógeno suelen ser no
virulentas debido a que aunque llegan a invadir las células, son incapaces de escapar de la
vacuola fagocítica al no tener LLO.
es común que ante una infección de L. monocytogenes ocurra una reacción monolítica como
respuesta biológica, así como también ocurre una respuesta de carácter humoral, aunque no
sea un mecanismo efectivo en contra de Listeria. Se requiere generación de subgrupos de
células T específicas para los antígenos de la Listeria, con el efecto de que se resuelva la
infección y se establezca una protección prolongada.
La infección del tracto genital en la mujer embarazada es causa usual para que el medico
recomiende realizar un estudio de L. monocytogenes, normalmente la madre no presenta
síntomas característicos, excepto quizás los de gripe durante el último trimestre de
gestación.
La infección en el infante puede tomar dos formas que son: la infección de tipo temprana
que se trata de la infección en el útero y se presenta dentro de los dos días del nacimiento,
puede también inducir al aborto, nacimiento prematuro o muerte a corto tiempo después del
nacimiento, esta ocurre cuando la madre presenta bacteriemia es decir que existen bacterias
patógenas en la sangre o sus toxinas, se infecta la placenta y posteriormente el feto a través
de la vena umbilical y aparece septicemia la misma que se caracteriza por escalofríos y
fiebre que ocasiona alteraciones del sistema nervioso central. La segunda forma de
infección es de tipo tardía que se manifiesta usualmente con meningitis después de los
primeros cinco días de vida, esta infección se cree que es adquirida antes o después del
nacimiento.
CICLO INFECTIVO
Listeria monocytogenes una vez que arriba al tracto gastrointestinal previa la ingestión de
alimentos contaminados y una vez en el intestino, crece eficazmente dentro de los
enterositos, lo cual permite que parte de su población alcance la circulación sanguínea y se
disemine por vía hematógena. La patogenia correspondiente se ha logrado estudiar in vitro,
debido principalmente a que el bacilo es capaz de reproducirse en el interior de macrófagos
y células intestinales indiferenciadas cultivadas en el laboratorio. Su periodo de incubación
es entre 3 y 70 días, es decir hasta que se presenten los síntomas de la listeriosis transcurre
este periodo de tiempo.
• Entrada a célula.
• Escape del fagosoma y multiplicación intracelular.
• Desplazamiento intracitoplásmico.
• Migración de una célula a otra.
Entrada a célula
Una vez concretada la lisis del fagosoma, el microorganismo se libera al citosol, en donde se
multiplica con un tiempo de generación de 50 minutos, lo que se considera una alta
velocidad de crecimiento para un patógeno intracelular.
Desplazamiento intracitoplásmico
Puede ocurrir también que al salir de una célula llegue al torrente sanguíneo o linfático, en
cuyo caso, seguirá el curso normal de la sangre hasta que llegue a algún tejido afín a sus
mecanismos de reconocimiento celular.
Entre las medidas de prevención o profilaxis encontramos: evitar el contacto con animales
salvajes y domésticos durante el embarazo. Las mujeres embarazadas deben evitar el
consumo de quesos blandos, carnes frías y ensaladas frías de un bar de ensaladas. Los
productos alimenticios importados tales como quesos blandos no pasteurizados también se
deben evitar. Se recomienda la cocción adecuada de los alimentos.
Una buena higienización, higiene personal, almacenamiento, cocción, y métodos adecuados
de servir, cuando se aplica en casa, almacenes y ambientes de los servicios de comida
pueden reducir el riesgo de problemas con Listeria monocytogenes.
- Antes de preparar alimentos, deben lavarse bien las manos y las superficies utilizadas para
picar alimentos; los alimentos no deben ser preparados por personas que están enfermas.
Deben usarse utensilios limpios para preparar cada
alimento.
Se ha creado una vacuna a partir de la bacteria Listeria monocytogenes. Esta bacteria fue
exterminada con rayos gamma y la vacuna protegió a ratones infectados con la bacteria
viva, a diferencia de lo que sucedió con las vacunas producidas a partir de desactivación por
calor.
Las vacunas pueden fabricarse de diversas maneras: usando una forma atenuada o
debilitada de la bacteria o virus vivos, utilizando un germen muerto o empleando piezas de
ADN de la bacteria o virus. Las vacunas producidas a partir del germen debilitado deben
conservarse en frío, pero se ha encontrado que los ratones podían ser protegidos por una
vacuna fabricada a partir de Listeria monocytogenes irradiada que había sido liofilizada en
un polvo.
Generalmente, las vacunas protegen a los roedores pero no logran ser efectivas en las
personas por lo que la idea debe ser sometida a nuevos estudios, concluyen los
especialistas.
Conclusión
Una vez desarrollado este trabajo podemos concluir:
• La motilidad fuera del huésped es debido a flagelos periféricos, y una vez dentro de
éste conserva un flagelo polar. No es esporulado, ni capsulado.
• La tinción utilizada para diferenciar a la Listeria es por tinción Gram, la cual la toma
uniformemente, y en cultivos viejos tiende a perder la grampositividad.
• Es la única bacteria de crecimiento intracelular que produce una citolisina como LLO,
además esta citolisina se activa solo a pH bajos.
• La migración de una célula a otra, ocurre por un fenómeno llamado protrusion el cual
es producido por el movimiento actínico de la bacteria. Cuando la bacteria ha llegado
al otro extremo de la membrana celular no se detiene sino que sigue empujando
generando la protrusion que luego penetra en la nueva célula. Esta protrusion luego
se separa de la célula antigua y se forma una vacuola de doble membrana en la
nueva célula.
• Los alimentos más vulnerables son leches, quesos, carnes, embutidos, vegetales, y
demás crudos o mal cocidos. Además de quesos y conservas producidas o
maduradas caseramente.
• Para prevenir debe evitarse la contaminación cruzada, se debe cocer bien los
alimentos a servirse, debe evitarse el contacto directo con animales infectados,
Paper
El paper trata sobre las investigaciones recientes sobre los efectos de la internalina A en la
adherencia a células epiteliales.
En experimentos con ratones que no tienen los mismos receptores E-caderina que los
humanos, se encontró que cuando se les administraba dosis altas de Listeria, estos no
desarrollaban la enfermedad.
Luego se trato transgénicamente a estos ratones y se cambiaron los genes que especializan
a los receptores E-caderina, y se colocaron genes que estimulaban la especialización de
receptores E-caderina similar al de los humanos.
Luego, cuando se inoculo con Listerias vivas a estos ratones trransgénicos desarrollaron
Listeriosis y el estudio de sus células mostró rastros de invasión por Listeria monocytogenes.
Bibliografía
• Institut Pasteur. Annual report of Bacteria-Cell Interactions for year 2000 - 2005.
http://www.pasteur.fr/recherche/RAR/RAR2002/Ibc-en.html#debut. Sábado, 11 de
junio de 2007.
• The Microbial World. The cell wall surrounds and holds in the microbe.
http://www.microbiologytext.com/index.php?
module=Book&func=displayarticle&art_id=60. Sábado, 4 de junio de 2007.