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Microbiología General - Gran Trabajo de Investigación – ESPOL – MSc. Mª.

Fernanda Morales

LISTERIA MONOCYTOGENES.

Características morfológicas y
químicas del microorganismo.
Características culturales,
patogénicas. Ciclo infectivo y
toxigénico. Profilaxis y alimentos
vulnerables.

MSc. Mª. Fernanda Morales

Integrantes:
Andrade Darlene Fanny
Carvajal Cerón Maria José
Charrière Molina André Nicholas
Andrade Darlene – Carvajal María – Charrière André – Guillén Diana 1
Microbiología General - Gran Trabajo de Investigación – ESPOL – MSc. Mª. Fernanda Morales

Guillén Flores Diana Paola


25/06/2007

Andrade Darlene – Carvajal María – Charrière André – Guillén Diana 2


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Índice

Introducción………………………………………………………………...3

Características morfológicas y
Químicas del microorganismo………………………………………..4 - 6

Identificación, Tipificación,
Diagnóstico en el laboratorio……………………………………….…6 -
7

Características Culturales:
Factores intrínsecos y extrínsecos……………………………........8 -
11

Características patogénicas y Ciclo


infectivo………………………………………………………………12 - 17

Alimentos vulnerables y prevención………………………………17 - 19

Conclusiones………………………………………………………...20 -
21

Paper Investigativo…………………………………………..….….22 - 23

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Bibliografía……………………………………………...……………23 -
24

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Introducción

L
a invasión en los alimentos por parte de las bacterias patógenas, es una de las
amenazas sanitarias más peligrosas para el ser humano. Y con gravamen especial las
bacterias que de alguna manera logran evitar los controles homeostáticos del cuerpo.

Esta bacteria ha evadido durante muchos años la correcta identificación de la misma, por lo
que se la ha confundido con otros géneros como con las Corynebacterias.
En los últimos años y gracias al desarrollo de nuevos métodos de identificación microbiana,
se ha logrado distinguir, diferenciar y aislar las distintas cepas y especies del genero Listeria.

La Listeria monocytogenes es la especie


mas importante del genero Listeria,
pertenece a la familias de las
Listeriaceae. Tanto de sus características
morfologías, patogénicas y de los
factores que influyen en su crecimiento
trataremos en el desarrollo de este
trabajo, en esta introducción queremos
eso, inmiscuirnos en lo concerniente a
rasgos mas generales de esta bacteria.

El género Listeria comprende seis


especies (L. monocytogenes, L. ivanovii,
L. innocua, L. welshimeri, L. seeligeri, y
L. grayi), pero L. monocytogenes es
reconocida como el principal patógeno y
solo en raras ocasiones han estado
implicadas L. ivanovii y L. seeligeri.

Es una bacteria patógena, cuyo principal


medio de transmisión al hombre es a través de los alimentos contaminados en cualquier
punto de la cadena alimentaria, desde la materia prima hasta el producto terminado.

Listeria monocytogenes ha sido conocida como patógeno para animales desde comienzos
del siglo pasado, aproximadamente se dice que se descubrió en el año 1926 pero recién a
partir de los años 80’ se reconoció la importancia de la transmisión de listeriosis por medio
de los alimentos, un brote muy conocido se produjo en California en 1985 debido al
consumo de queso que consistió en 86 casos y 29 defunciones. La bacteria esta distribuida
ampliamente en la naturaleza, encontrándose en la superficie de vegetales, en el fondo
marino, agua y suelo en donde es transmitida con facilidad por contacto con superficies
contaminadas.

Se ha encontrado en por lo menos 37 especies diferentes de mamíferos, tanto domésticos


como salvajes, entre otros. Los portadores humanos de esta bacteria frecuentemente se
relacionan con actividades como agricultura, ganadería y el manejo de productos cárnicos.

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CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS.
La Listeria monocytogenes en productos patológicos o en
cultivos recientes se presenta como un bacilo corto
grampositivo de 1 a 2 μm de longitud y 0.5 μm de ancho, es
recto o ligeramente incurvado, por lo general con bordes
redondeados.

Aparece aislado, en
pequeños grupos, en
cadenas cortas de hasta 250 μm conservando su forma de
bacilo, aunque también presentan un alto índice de
pleomorfismo, en forma de Y, V y L. En cultivos observados
por aislamiento directo de muestras clínicas, tanto a partir
de tejidos infectados así como también de humores, la
forma más frecuente es la cocoide. En condiciones
desfavorables o cultivos envejecidos se observan formas
filamentosas o en empalizada.

Es un microorganismo móvil mediante flagelos. La coloración


de flagelos en Listeria es difícil. Se ha confirmado la
predominancia de flagelos periféricos, que se rompen con
facilidad, manteniendo un solo flagelo polar. La formación de
flagelos se produce a 22º C y es prácticamente nula a 37º C.

De 22 a 28º C presenta una motilidad a saltos de un extremo


a otro, pero a 37º C la motilidad es mínima o nula, y a
temperaturas de 25º C es óptima y desarrolla la figura de un
“pino invertido”. No es esporulado (no produce esporas), ni capsulado, y da lugar a formas L,
cuando se cultiva en medios con penicilina o glicina.
Mediante una prueba de motilidad se puede diferenciar con prontitud la Listeria de los
difteroides que forman parte de la flora normal de la piel.

Se tiñe bien por los colorantes derivados de la anilina. Toma la


tinción de Gram uniformemente, sin embargo, cuando se fuerza la
decoloración o en cultivos viejos, pierde la grampositividad. No
presenta granulaciones metacromáticas ni zonas cromófilas o
cromófobas en el citoplasma.

Características de la Pared Celular

La pared celular de la Listeria monocytogenes no varía demasiado de las paredes celulares


del resto de gram positivas excepto en 2 caracteres:

1. Presencia en la pared celular de ácidos teicoicos específicos y únicos para los


diferentes serotipos de L. monocytogenes.
2. Presencia en la membrana de endotoxinas que estimulan la fagocitosis de la bacteria.

La pared celular de las Gram positivas poseen de 1 a 2 capas de 20-80 nm cada una, el
contenido de peptidoglicano o mureína es mayor al 50% del peso en seco, el contenido de
lipoproteínas y de lípidos es del 0 a 3% (en contraste con el 58% de las Gramnegativas),

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tiene muy poco contenido de proteínas sueltas y casi no hay lipopolisacáridos en la pared
celular.
Además de todas estas características propias de las bacterias Grampositivas, existe
estructuras de acido teicoico que no se encuentra en ninguna otra bacteria grampositiva,
esto se debe al peculiar modo de invasión de la Listeria monocytogenes, el cual
estudiaremos a fondo con más detalle.

Los serotipos de L. monocytogenes que afectan al ser humano son 1 a, 1 b y 4 b, son


2 2
los únicos que afectan al ser humano, porque generan en la pared celular, más
específicamente, en los ácidos teicoicos, terminales glucosídicas que son reconocibles por
la mayoría de las células del cuerpo humano.

Los ácidos teicoicos componen el


20% del peso de la pared celular,
contiene un polímero fosfodiester
de glicerol o ribitol, unido por grupo
fosfatos (lo que le confiere la
característica diester). Puede
haber aminoácidos acoplados a la
cadena como la D-alanina. El ácido
teicoico está unido a la muraína, y
su extremo puede terminar en un
terminal glucosídico, proteico o de
alguna otra índole.

El terminal adherido al ácido


teicoico es el que confiere características únicas a la Listeria monocytogenes y en este caso
4 son los importantes: Internalina A, Internalina B, Listeriolisina O y substitutos glucosídicos
adheridos a residuos de ribitol en el ácido teicoico. Siendo el ácido teicoico el responsable
de la respuesta antígeno(O)-anticuerpo en el ser humano, las estructuras adheridas a este le
confieren a determinados serotipos alta especificidad. En el caso del serotipo 1 b, el grupo
2
poliribitol-fosfato del ácido, es sustituido por UDP-N-acetilglucosamina (uridin difosfato); en
el serotipo 4 b el UDP-N-acetilglucosamina es adherido (no sustituido) al ácido teicoico; y en
el caso del serotipo 1 a, hay enlaces entre el ácido teicoico y substitutos glucosídicos.
2
Todos estos son antígenos somáticos que los fagosomas reconocen y promueven la
fagocitosis mediada por receptores.

Ácidos teicoicos: son cadenas de moléculas de glicerina o ribitol esterificadas entre sí por
puentes fosfato, portan una fuerte carga negativa (probablemente sirvan para "secuestrar"
cationes). Los ácidos teicoicos se unen a la mureína a través del fosfato formando una
amida.

Son muy antigénicos. Los grupos sustitutivos de los polioles incluyen D-alanina (como
éster), N-acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina, los sustituyentes son característicos de
las especies bacterianas.

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Estructura de los ácidos teicoicos de la pared celular:

a. Acido Ribitol- teicoico con unidades repetitivas unidas por enlaces 1,5-fosfo diéster de
D-ribitol y éster de D-alanina en posición 2 y sustituyentes glicosidícos en posición 4
(R= N-acetilglucosamina en S. aureus o alfa-glucosil en B. subtilis).

b. Acido Glicerol- teicoico con unidades repetitivas unidas por enlaces 1,3-fosfo diéster
(1,2, en algunas especies). (R =H o D-alanina o glucosil).

Identificación, Tipificación y diagnóstico en laboratorio

Diagnóstico en Laboratorio

L. monocytogenes se aísla fácilmente de muestras orgánicas habitualmente estériles como


sangre, líquidos cefalorraquídeo y amniótico, placenta y tejido fetal. Estas muestras deben
ser remitidas al laboratorio y procesadas tan pronto como sea posible o en su defecto
conservarse a 4º C durante un máximo de 48 h. Las muestras clínicas habitualmente
estériles pueden ser inoculadas directamente en medios habituales como el agar sangre.
Las muestras de sangre pueden inocularse en cualquier sistema convencional de
hemocultivos.
Para el estudio de portadores las muestras de heces son más productivas que las torundas
rectales. Las muestras de heces deben ser inoculadas en un medio de enriquecimiento
selectivo, de los que existen diversas formulaciones.

Las muestras no estériles pueden conservarse a 4º C durante 24-48 h como máximo. Si se


va a producir una mayor demora en su procesamiento deben ser congeladas a -20º C para
evitar el sobrecrecimiento bacteriano. Este tipo de muestras, así como las alimentarias,
deben ser enriquecidos con un medio selectivo para Listeria antes de sembrarse en placas.
Tradicionalmente se ha usado un método de enriquecimiento en frío, utilizando un caldo de
crecimiento no selectivo mantenido a 4º C durante dos o más meses para su posterior
subcultivo en placas.

Identificación de género.

La observación en la tinción de Gram de una colonia de bacilos grampositivos que sean


catalasa positiva, produzcan ácido de la D-glucosa, hidrolicen la esculina, den positivas las
reacciones de Voges-Proskauer y del rojo metilo y sean móviles, debe hacernos pensar que
nos encontramos ante una bacteria perteneciente al género Listeria.
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Debido a que comparte algunas características con otros géneros bacterianos


grampositivos, se debe establecer el diagnóstico diferencial con algunos de ellos. Del género
Streptococcus puede diferenciarse por la tinción de Gram (bacilo grampositivo), la movilidad,
la prueba de la catalasa (positiva) y la sensibilidad a la gentamicina (sensible). De
Erysipelothrix rhusiopathiae puede diferenciarse por el crecimiento a 4º C (crece), la prueba
de la catalasa (positiva), la movilidad (móvil) y la sensibilidad a la vancomicina (sensible). De
las corinebacterias móviles, por la hidrólisis de la urea (negativa), la reacción de Voges-
Proskauer (positiva) y por la producción de ácido de la D-glucosa en condiciones
estrictamente aerobias (positiva).

Identificación de especie.

La identificación de especie es importante ya que todos los miembros del género Listeria son
capaces de contaminar alimentos pero sólo L. monocytogenes produce patología en
humanos. Dicha identificación se realiza mediante unas pocas reacciones bioquímicas y la
capacidad de producir hemólisis, característica esencial para distinguir L. monocytogenes de
L. innocua, que es la especie no patógena aislada con más frecuencia.

Sólo tres especies son hemolíticas, L. monocytogenes, L. seeligeri y L. ivanovii. Las dos
primeras producen una estrecha zona de hemólisis, a veces limitada al diámetro de la
colonia; L. ivanovii muestra una hemólisis amplia. La prueba de CAMP es positiva para L.
monocytogenes y L. seeligeri en la proximidad de una estría de Staphylococcus aureus,
mientras que L. ivanovii sólo da positiva la prueba de CAMP en presencia de una estría de
Rhodococcus equi.

Técnicas de tipificación.

Mediante estas técnicas se consiguen diferenciar distintos subtipos dentro de la misma


especie. Se aplican en estudios taxonómicos y sobre todo en estudios epidemiológicos
(localización del origen de los brotes epidémicos, encuestas y seguimientos
epidemiológicos, etc.).

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CARACTERISTICAS CULTURALES:
Factores intrínsecos y extrínsecos

Es importante y fundamental que dentro del estudio de Listeria monocytogenes se conozca


el manejo correcto de factores que influyen en su crecimiento, tanto dentro de la bacteria
como por fuera de ella (factores intrínsecos e extrínsecos).

Cada factor de alguna manera la define y la restringe a determinados y específicos tipos de


hábitat. El conocimiento de estos ayudara a evitar este tipo de ambiente en la industria y
almacenamiento alimenticio, para que Listeria monocytogenes no se puedan proliferar.

Factores Intrínsecos:

Son aquellos factores que afectan a la supervivencia y multiplicación de los


microorganismos en los alimentos. Estos parámetros son:

1) pH (Potencial de hidrogeniones)
2) actividad de agua(aw)
3) Potencial de óxido- reducción.
4) Contenido de elementos nutritivos
5) Componentes antimicrobianos

Dentro de los límites de algunos factores entre los cuales es posible el crecimiento de
Listeria monocytogenes tenemos:

1. pH

El rango de pH óptimo para Listeria monocytogenes es alrededor del neutro (7.2 – 7.4), sin
embargo también puede hacerlo dentro de un pH de 9.6 máximo y 5.6 mínimo. Alimentos no
procesados que tienen este pH incluyen maíz, melón, pollo, pescado, almejas, cangrejo,
granos. Los alimentos procesados frecuentemente tienen un pH más bajo debido a que
agentes acidulantes han sido añadidos o ácidos naturales han sido producidos durante la
fermentación.

La acidez o alcalinidad extrema de los alimentos puede jugar un papel importante en la


disminución de la multiplicación de la Listeria monocytogenes. Por esta razón, muchos
industrias conserveras utilizan estos métodos en alimentos para reducir o eliminar el
crecimiento de Listeria monocytogenes.

2. Actividad agua (aw)

Un requisito fundamental para el desarrollo de cualquier bacteria es que se encuentre a una


actividad agua alta (aw), esto se refiere a que las moléculas de agua no se encuentran
unidas, absorbidas u ocluidas. aw se refiere a la proporción entre la presión de vapor en
presencia de un soluto y la del agua pura.

La actividad de agua puede afectar el crecimiento y la supervivencia de Listeria


monocytogenes. Este microorganismo crece mejor a una alta actividad de agua, pero es la
única con la habilidad de crecer a actividades de agua muy bajas, esto se corrobora por la
observación de supervivencia por largos periodos de tiempo a una baja actividad de agua.

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Dentro de Listeria monocytogenes encontramos que crece óptimamente a una aw > 0.95 con
un rango de 0.90 a 1, algunas también pueden sobrevivir a una aw < 0.90 pero sin
crecimiento y se ha llegado a aw de 0.79 – 0.86 en estudios con salame.

3. Potencial de óxido-reducción. (REDOX)

El potencial de óxido-reducción determina la facilidad y la orientación con la que podría


ocurrir una transferencia de electrones entre distintos compuestos. Cuando se produce una
transferencia de electrones de un compuesto a otro, se crea una diferencia de potencial
entre ambos. Esta diferencia se puede medir con un instrumento adecuado y se expresa en
milivoltios (mV).

El pH es importante en el potencial de óxido-reducción (Eh), cuanto más alto sea menos


oxidante será el alimento. El crecimiento de un microorganismo variará el potencial según su
capacidad aerobia:
• Aerobios (necesitan oxígeno): Se oxidan, pierden electrones y la variación de
su Eh será positiva.
• Anaerobios no requieren de oxígeno): Se reducen, ganan electrones y la
variación de su Eh es negativa.

Listeria monocytogenes es un microorganismo anaerobio facultativo, su acción patógena se


activa a un pH ácido, es decir que su potencial de oxido-reducción debería estar en un rango
probable acorde con las bacterias anaerobias facultativas, de -200 a +200 mV.

4. Contenido de elementos nutritivos.

Como la mayoría de las bacterias Grampositivas necesitan de agentes antioxidantes que


promuevan su reducción, dichos agentes antioxidantes son por lo general vitaminas del
complejo B, la mayoría de carnes poseen cantidades abundantes de vitamina B.

La concentración de ClNa es uno de los factores que afecta la actividad de agua y por lo
tanto la disponibilidad de agua disponible para la Listeria monocytogenes. La concentración
de ClNa a la que puede crecer la Listeria es de 6.5% de sal, y puede sobrevivir a 25.5%

La Listeria como la mayoría de los microorganismos, requiere como fuente de energía a las
proteínas y carbohidratos, siendo los más sencillos de éstos los más requeridos por la
bacteria. En el caso de los carbohidratos, por lo general puede sintetizar energía de la
mayoría de los monosacáridos excepto glucosa, y siendo una bacteria invasiva ésta podría
tomar sus nutrientes del citosol de la célula huésped.

5. Componentes antimicrobianos.

La barrera antimicrobiana principal en contra de la Listeria es cualquier tejido, unión celular


que la bacteria no pueda reconocer para su posterior invasión.
En el caso del ser humano y de otros mamíferos, las barreras serían la piel y tejidos
similares, siendo la puerta de entrada los tejidos conectivos.

Factores Extrínsecos:

Los parámetros extrínsecos de los alimentos están constituidos por aquellas propiedades del
medio ambiente de conservación que afectan tanto a los alimentos como a los
microorganismos. Las más importantes para los organismos vehiculados por alimentos son:

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a. Temperatura de almacenamiento
b. Humedad relativa
c. Presencia y concentración de gases en el medio ambiente

1. Temperatura

Los estudios sobre el rango de crecimiento han mostrado que Listeria monocytogenes es
capaz de multiplicarse a cierta velocidad. Dependiendo de la temperatura, la tasa de
crecimiento puede ser lenta o rápida. Para Listeria monocytogenes, el rango de crecimiento
es entre -1 a 45° C.

La temperatura óptima es aquella en la que la tasa de crecimiento es la más alta. Listeria


monocytogenes tiene un rango óptimo de crecimiento, que va desde los 30 a 37° C, aunque
lentamente puede crecer a 4° C, propiedad que se aprovecha como carácter selectivo.

Temperaturas de congelación pueden inactivar moderadamente a Listeria monocytogenes,


pero la bacteria puede aún sobrevivir. Por le general la Listeria no sobrevive a temperaturas
de cocción.
Se puede comparar a la Listeria monocytogenes con los distintas clasificaciones de los
microorganismo.

TIPO TEMP. MÍN º C TEMP. OPT º C TEMP. MÁX º C


Termófilos 40 – 50 55 – 65 70 – 100
Mesófilos 20 – 30 30 – 40 45 - 50
psicrófilos -5 – 10 10 – 15 15 - 20
L. monocytogenes -20 - 4 30 – 37 45

Observando los rangos de tabla anterior, tenemos que Listeria monocytogenes esta dentro
de los microorganismos mesófilos donde se encuentran casi todos los organismos
patógenos, así como los que habitan en la carne. Y también dentro de los organismos
psicrófilos que se desarrollan bien en refrigeración, aunque su crecimiento es lento.

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2. Humedad relativa.

La humedad relativa concierne a las condiciones de almacenamiento de los alimentos


posiblemente infectados con L. monocytogenes. Los alimentos almacenados en ambientes
secos tienden a influir en el crecimiento de la bacteria. Como crece en alimentos con
actividad de agua (aw) elevada y por lo tanto se benefician más de ambiente con humedad
relativa alta.

3. Presencia y concentración de gases en el medio ambiente.

El almacenamiento de alimentos en atmósferas con porcentajes crecientes de CO2, hasta


llegar a una cifra alrededor del 10%, se denomina almacenamiento en “atmósfera
controlada”, siendo así la L. monocytogenes es uno de los microorganismos a los que poco
o nada afecta este factor y más bien conserva estos valores como óptimos para su
crecimiento.

La Listeria monocytogenes no soporta la presencia de ozono en ninguna concentración.

Condiciones óptimas para el crecimiento de Listeria monocytogenes


Temperatura: óptima 37 ºC, rango -1,5 - 45 ºC
pH: óptimo 7,0, rango 4,6 - 9,0
Actividad de agua
mínimo para crecer 0,92
(aw):
Cloruro de sodio: límite máximo para crecer 10% a 11,5%
Atmósfera gaseosa: no es inhibida en presencia de 5 - 10% de CO2

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CARACTERISTICAS PATOGENICAS:
Infectivas y toxigénicas. Ciclo infectivo.

Características Infectivas y Toxigénicas.

La Listeria monocytogenes es una bacteria patógena. El tracto gastrointestinal es la puerta


de entrada a las infecciones causadas por la Listeria, es decir que alcanza el epitelio
intestinal y se disemina por vía linfohemática por medio de la síntesis de una endotoxina,
esta toxina produce notable daño celular, permitiendo la división celular invasiva dentro de
las células del cuerpo humano.

Estudios recientes en animales de experimentación demuestran la infección por vía oral y


destacan el rol de la flora microbiana normal en la modulación de la colonización del
intestino y la subsecuente penetración de la barrera de epitelio intestinal, además se indica
que el principal factor de virulencia es la función que realiza su toxina.

Cabe recalcar que esta bacteria no genera ningún tipo de exotoxina; más bien produce una
endotoxina llamada Listeriolisina O (LLO).
La listeriolisina O es una exoproteína de 60 kDa, perteneciente a la familia de las citolisinas,
estas son enzimas que destruyen membranas citoplásmicas mediante la formación de poros
y son activadas por grupos SH2 presentes en la membrana.

Sin embargo, la Listeriolisina O es entre las citolisinas, la única producida por una bacteria
intracelular, además es activa a bajos pHs como los que imperan en el interior del
fagolisosoma. Además, esta hemolisina es responsable de la hemólisis tipo β que sirve para
identificar a las Listeria monocytogenes en agar sangre. A este respecto, diversos trabajos
han demostrado que las escasas cepas no hemolíticas de este patógeno suelen ser no
virulentas debido a que aunque llegan a invadir las células, son incapaces de escapar de la
vacuola fagocítica al no tener LLO.

La L. monocytogenes presenta tropismo hacia al feto y la placenta de la mayoría de los


animales, además por el sistema nervioso central de monos y del hombre. En los humanos

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es común que ante una infección de L. monocytogenes ocurra una reacción monolítica como
respuesta biológica, así como también ocurre una respuesta de carácter humoral, aunque no
sea un mecanismo efectivo en contra de Listeria. Se requiere generación de subgrupos de
células T específicas para los antígenos de la Listeria, con el efecto de que se resuelva la
infección y se establezca una protección prolongada.

En los adultos la mayoría de manifestaciones clínicas son meningitis, bacteriemia primaria,


endocarditis e infección de las meninges del sistema nervioso central y pueden ocurrir en
mujeres embarazadas y en personas con factores debilitantes, como leucemias, mielomas,
neoplasias, diabetes, tratamiento con antibióticos de amplio espectro, corticoides e
inmunosupresores, irradiaciones y afecciones hepáticas.

La infección del tracto genital en la mujer embarazada es causa usual para que el medico
recomiende realizar un estudio de L. monocytogenes, normalmente la madre no presenta
síntomas característicos, excepto quizás los de gripe durante el último trimestre de
gestación.

La infección en el infante puede tomar dos formas que son: la infección de tipo temprana
que se trata de la infección en el útero y se presenta dentro de los dos días del nacimiento,
puede también inducir al aborto, nacimiento prematuro o muerte a corto tiempo después del
nacimiento, esta ocurre cuando la madre presenta bacteriemia es decir que existen bacterias
patógenas en la sangre o sus toxinas, se infecta la placenta y posteriormente el feto a través
de la vena umbilical y aparece septicemia la misma que se caracteriza por escalofríos y
fiebre que ocasiona alteraciones del sistema nervioso central. La segunda forma de
infección es de tipo tardía que se manifiesta usualmente con meningitis después de los
primeros cinco días de vida, esta infección se cree que es adquirida antes o después del
nacimiento.

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CICLO INFECTIVO

Listeria monocytogenes una vez que arriba al tracto gastrointestinal previa la ingestión de
alimentos contaminados y una vez en el intestino, crece eficazmente dentro de los
enterositos, lo cual permite que parte de su población alcance la circulación sanguínea y se
disemine por vía hematógena. La patogenia correspondiente se ha logrado estudiar in vitro,
debido principalmente a que el bacilo es capaz de reproducirse en el interior de macrófagos
y células intestinales indiferenciadas cultivadas en el laboratorio. Su periodo de incubación
es entre 3 y 70 días, es decir hasta que se presenten los síntomas de la listeriosis transcurre
este periodo de tiempo.

Pasos en la invasión de células y extensión intracelular por Listeria


monocytogenes: i) La bacteria invade la mucosa intestinal. ii) Una vez que esté injerida
la bacteria produce la listeriolisina (LLO) para escaparse del fagosoma. iii) La bacteria
entonces se multiplica rápidamente en el citoplasma y iv) se mueve a través del
citoplasma para invadir las células adyacentes polimerizando la actina a las colas.

El ciclo infectivo de L. monocytogenes inicia con su internalización a la célula hospedera, por


fagocitosis en el caso de los macrófagos. En todo caso, es el propio microorganismo es el
que promueve su ingreso, asegura su libertad en el citosol de la célula eucarionte, prolifera
eficazmente y se desplaza hacia el exterior, para inducir su ingreso a las adyacentes, sin
que ello represente su exposición a la acción defensiva de anticuerpos. En concreto, los
eventos implicados en el proceso infectivo global, son:

• Entrada a célula.
• Escape del fagosoma y multiplicación intracelular.
• Desplazamiento intracitoplásmico.
• Migración de una célula a otra.

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Entrada a célula

La primera etapa de este proceso ocurre cuando Listeria monocytogenes promueve su


fagocitosis por parte de la célula target, como enterositos, células dendríticas, hepatocitos,
células endoteliales, macrófagos y células M ubicadas en folículos linfáticos solitarios
localizados en el ileon.

En el intestino, la L. monocytogenes se adhiere a la mucosa intestinal, más específicamente,


a las células epiteliales de la misma, mediante un mecanismo de fagocitosis mediada por
receptores. Estos receptores de las células epiteliales son los E-caderina y funcionan como
medios de enlace entre células epiteliales.

La Listeria monocytogenes se interpone


entre estos enlaces E-caderina-E-caderina,
mediante la internalina A, la cual reconoce
los enlaces E-caderina y los rompe para
unirse a estos. Esto funciona como un
complejo antígeno-anticuerpo que produce
un reordenamiento en el citoesqueleto del
citoplasma de la célula. Las células a las
que comúnmente se une por este
mecanismo son los enterositos y las células
M ubicadas en los folículos linfáticos del
íleon.

Cabe recalcar que este mecanismo


internalina A-E-caderina funciona
exclusivamente para células epiteliales, en
el caso de otro tipo de células, se utiliza otro tipo de internalina, la internalina B. Las cuales
se diferencia en dos aspectos, el tipo de enlace por el cual están unidos a la pared celular de
la bacteria, y el tipo de receptor que activan.

La Inl-B activa un receptor que se encuentra en la mayoría de células, denominado MET, y


está enlazado a la pared celular por un enlace no covalente relativamente débil, por lo que a
veces se lo encuentra suelto en el espacio entre la bacteria y la célula previa a la fagocitosis.
La Inl-A activa el receptor E-caderina, presente solo en células epiteliales; y está unida a la
pared celular por medio de un enlace covalente fuerte.

Una vez en el fagosoma la Listeria activa un mecanismo de defensa el cual consiste en la


liberación de una serie de toxinas que la ayudarán a liberarse de la acción enzimática de la
fagocitosis.
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Escape del fagosoma y desarrollo intracelular

La Listeria monocytogenes es llevada al interior de la célula por la fagocitosis, esta vacuola


formada por partes de la membrana celular, pasa a
denominarse fagosoma, la cual se una a un lisosoma y
comienza su acción enzimática en contra de la Listeria.
La Listeria libera la Listeriolisina O, que es activada a pH
ácido, como los que imperan en el interior del
fagolisosoma, tiene una actividad máxima a pH = 5 y es
inactiva a pH = 7. Adicionalmente, L. monocytogenes
produce catalasa (cataliza al H2O2), súper óxido
dismutasa (cataliza al anión súper óxido O2-), fosfolipasa
y proteínas de estrés que previenen la oxidación
provocada por las enzimas del fagolisosoma y la
liberación consecuente de la Listeria.

Tanto las fosfolipasa como la LLO tienen modos de


acción similares, las dos son formadoras de poros, mientras el sustrato de la fosfolipasa son
los fosfolípidos de la membrana del fagolisosoma, por su parte el sustrato de la LLO es el
colesterol al cual se une y se multiplica de 20 a 80 veces formando un poro permeable.

Dado que la LLO presenta una actividad máxima a pH = 5 y es inactiva a pH = 7, origina


escasos efectos dañinos sobre la membrana celular cuando la bacteria se encuentra libre en
el citosol; su vida media es muy corta en dicho ambiente, ya que se degrada rápidamente al
ser fosforilada, dicha fosforilación no ocurre en el fagolisosoma.

Una vez concretada la lisis del fagosoma, el microorganismo se libera al citosol, en donde se
multiplica con un tiempo de generación de 50 minutos, lo que se considera una alta
velocidad de crecimiento para un patógeno intracelular.

Desplazamiento intracitoplásmico

En términos prácticos, puede señalarse que el


microorganismo también manipula los componentes
del citoesqueleto de la célula hospedera para poder
transitar intracelular e intercelularmente. Esta
particular forma de locomoción ha recibido gran
atención de la comunidad científica.

La movilidad de L. monocytogenes se sustenta en


el hecho de que, durante el proceso de
internalización, la superficie bacteriana adsorbe
varios filamentos cortos de actina (situados
originalmente en la membrana de la célula “blanco”)
de esta manera, la morfología del microorganismo muestra estructuras (actínicas)
semejantes a la cola de un cometa. Consecuentemente, la polimerización
de la actina aporta la fuerza locomotora para que Listeria transite en el
ambiente intracelular a velocidades de 0.05 a 0.3 μm/seg. En general, las
colas propulsoras se constituyen por filamentos de 0.2 μm, integrados por
73 monómeros de actina interconectados entre sí. De la polimerización
actínica dependen la fuerza y rapidez del desplazamiento bacteriano. Cabe
señalar que la actina representa uno de los componentes proteicos más
abundantes del citoesqueleto hospedero.
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Migración de una célula a otra.

La adquisición de movilidad asociada a filamentos actínicos tiene como su principal


propósito el de que Listeria pueda invadir a otras células del hospedero, llegando al borde de
su primera célula target en donde en lugar de detenerse hace protrusion, es decir se impulsa
hacia la célula adyacente; en concreto, una vez que ha proliferado en el citosol de su primer
“blanco”, los bacilos se desplazan hacia la membrana celular de éste y la “empujan”
progresivamente (con base en la polimerización actínica de las colas que ha adsorbido),
provocando que produzca prolongaciones alargadas, llamadas filópodos o protrusiones,
desde cuyo interior continúan ejerciendo presión; de esta manera, dichas proyecciones
terminan siendo “fagocitadas” por la célula adyacente, con lo cual la bacteria volverá a
quedar encerrada dentro de un fagosoma (secundario), esta vez de doble membrana, del
cual procederá a escapar gracias a la listeriolisina y a repetir los eventos que protagonizó
anteriormente es decir repetir el ciclo.

Puede ocurrir también que al salir de una célula llegue al torrente sanguíneo o linfático, en
cuyo caso, seguirá el curso normal de la sangre hasta que llegue a algún tejido afín a sus
mecanismos de reconocimiento celular.

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Alimentos de más alto riesgo y métodos preventivos:

Los alimentos más frecuentes que han sido fuente de


transmisión de Listeria en el ser humano han sido los quesos
madurados caseramente o sin producción industrial.
Leches caseras, carnes, embutidos no tratadas, lácteos mal
pasteurizados o sin pasteurización alguna.

Huevos procedentes de animales infectados también han sido


importantes trasmisores de Listeria, esto se evita con la correcta
manipulación de aves de corral. Sin embargo la búsqueda de la
bacteria en esos animales casi siempre ha sido negativa.
Otro foco de transmisión son los establecimientos de comida
rápida y en helados, vegetales crudos, en carnes fermentadas y
pescados crudos.

Entre las medidas de prevención o profilaxis encontramos: evitar el contacto con animales
salvajes y domésticos durante el embarazo. Las mujeres embarazadas deben evitar el
consumo de quesos blandos, carnes frías y ensaladas frías de un bar de ensaladas. Los
productos alimenticios importados tales como quesos blandos no pasteurizados también se
deben evitar. Se recomienda la cocción adecuada de los alimentos.
Una buena higienización, higiene personal, almacenamiento, cocción, y métodos adecuados
de servir, cuando se aplica en casa, almacenes y ambientes de los servicios de comida
pueden reducir el riesgo de problemas con Listeria monocytogenes.

Los principios básicos incluyen:

• Evitar la Contaminación Cruzada.

- Antes de preparar alimentos, deben lavarse bien las manos y las superficies utilizadas para
picar alimentos; los alimentos no deben ser preparados por personas que están enfermas.
Deben usarse utensilios limpios para preparar cada
alimento.

- La carne cruda, vacuno, cerdo, aves, pescados, mariscos y


las verduras, no deben prepararse, cortarse, ni dejarse en la
misma superficie usada para alimentos cocinados u otros.

- Los jugos de productos crudos no deben dejarse gotear en


otros alimentos durante el almacenamiento o manipulación.

- Deben limpiarse bien las superficies de trabajo, utensilios y


platos, con agua caliente y jabón, y desinfectarse inmediatamente después del uso.

- Controle el tiempo y temperatura de los alimentos durante el almacenamiento, deshielo,


preparación y servido.

- La congelación de alimentos no destruye bacterias; apenas previene su multiplicación. Los


alimentos deben guardarse refrigerados para retardar crecimiento bacteriano, y no deben
guardarse demasiado tiempo. Las porciones de alimentos que no se van a consumir deben
ser refrigeradas inmediatamente.

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Destruir las bacterias potencialmente dañinas.

- La comida debe servirse caliente (más de 60 º


C). Recaliente comida a una temperatura interior
de 77 º C. En los servicios de comidas calentar
todas las comidas de origen animal a 77 º C por
16 segundos.

- Deben cocinarse carne, aves y mariscos


completamente para matar microorganismos
por ejemplo la carne a 71º C y aves a 85 º C.

- Las verduras también pueden llevar Listeria


monocytogenes. Estas deben fregarse
completamente. Además, ablandadas por calor
durante cocción, son medios excelentes para el
crecimiento bacteriano. Estas no deben
cocinarse demasiado después porque aumenta
la oportunidad de crecimiento bacteriano.

• Se aconseja a los consumidores seguir las instrucciones de los fabricantes en


cuanto al almacenamiento, manipulación y cocción de productos, como también
observar la nota: "Manténgase Refrigerado" o "Manténgase congelado" puestas
en las etiquetas de productos alimenticios, incluso la fecha de vencimiento en
alimentos perecibles.

Se ha creado una vacuna a partir de la bacteria Listeria monocytogenes. Esta bacteria fue
exterminada con rayos gamma y la vacuna protegió a ratones infectados con la bacteria
viva, a diferencia de lo que sucedió con las vacunas producidas a partir de desactivación por
calor.

“A pesar de haber sido completamente desactivadas a través de la radiación, y que son


incapaces de causar la enfermedad, las bacterias patógenas irradiadas evidentemente
retienen ciertas características que impulsan al sistema inmunológico a aumentar las
defensas”, señaló el creador en un comunicado.

Las vacunas pueden fabricarse de diversas maneras: usando una forma atenuada o
debilitada de la bacteria o virus vivos, utilizando un germen muerto o empleando piezas de
ADN de la bacteria o virus. Las vacunas producidas a partir del germen debilitado deben
conservarse en frío, pero se ha encontrado que los ratones podían ser protegidos por una
vacuna fabricada a partir de Listeria monocytogenes irradiada que había sido liofilizada en
un polvo.
Generalmente, las vacunas protegen a los roedores pero no logran ser efectivas en las
personas por lo que la idea debe ser sometida a nuevos estudios, concluyen los
especialistas.

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Conclusión
Una vez desarrollado este trabajo podemos concluir:

• Listeria monocytogenes, es un bacilo corto Grampositivo de 1 a 2 μm de longitud por


0.5 μm de ancho.

• Aparece en pequeñas colonias que pueden variar de forma (pleomorfismo) desde


bacilo hasta cocoides (en cultivos viejos).

• La motilidad fuera del huésped es debido a flagelos periféricos, y una vez dentro de
éste conserva un flagelo polar. No es esporulado, ni capsulado.

• La tinción utilizada para diferenciar a la Listeria es por tinción Gram, la cual la toma
uniformemente, y en cultivos viejos tiende a perder la grampositividad.

• La Listeria monocytogenes posee dos características sui generis que son: la


presencia de ácidos teicoicos únicos y específico, y la presencia de
proteínas especiales que estimulan la fagocitosis de la bacteria a la célula.

• Las proteínas especiales son la internalina A y la internalina B.

• Se han descubierto alrededor de 11 serotipos de L. monocytogenes pero


solo 3 son patógenas al hombre: ½ a, ½ b y 4 b.

• El pH adecuado para la L. monocytogenes es de 7.2 a 7.4 pero puede sobrevivir a pH


extremos.

• La actividad agua óptima para la L. monocytogenes es de 0.95 con un rango de 0.98


a 0.79.

• El potencial REDOX a la que Listeria monocytogenes prolifera, es por lo general los


mismos que en las bacterias anaeróbicas facultativas.

• Tiene tolerancia a una concentración de 6.5 – 25.5 % de ClNa.

• Soporta temperaturas desde -1 a 45º C y su óptimo se encuentra entre 30º C a 37º C.


Por lo general crece mejor en ambientes con humedad relativa alta.

• A 10% de concentración de CO2 en el ambiente, la Listeria monocytogenes crece


óptimamente, pero en presencia de ozono no sobrevive.

• Por lo general, el tracto gastrointestinal es la vía de ingreso para las infecciones


causadas por L.monocytogenes. Alcanza el epitelio intestinal y procede a realizar su
ciclo infectivo, para luego llegar a la sangre y linfa.

• Listeria monocytogenes no produce ninguna exotoxina, más bien produce una


endotoxina llamada Listeriolisina O. La LLO es una proteína hemolítica formadora
de poros.

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• Es la única bacteria de crecimiento intracelular que produce una citolisina como LLO,
además esta citolisina se activa solo a pH bajos.

• En adición presenta un tropismo orientado hacia el torrente sanguíneo y de ahí hasta


la placenta y el feto. Busca estos ambientes porque en estos no hay competencia de
parte de otros microorganismos por componentes nutritivos.

• Las manifestaciones de la enfermedad en el ser humano son: septicemia,


meningoencefalitis, cerebritos e infecciones focales. Puede producir aborto,
nacimiento de producto muerto e infecciones cutáneas.

• El ciclo infectivo de la Listeria monocytogenes consta de 4 pasos: entrada a célula,


destrucción del fagolisosoma, desplazamiento citoplásmico, migración a otras células.

• La entrada celular ocurre por fagocitosis mediada por la internalina A y por la


internalina B.

• El escape del fagolisosoma se debe a la acción de proteínas formadoras de poros


como la LLO y las fosfolipasas; y de enzimas protectoras, como la súper oxido
dismutasa y la catalasa.

• Una vez destruido el fagolisosoma, la bacteria se reproduce y luego comienza un


transito citoplásmico que ocurre gracias a una polimerización de segmentos de actina,
los cuales la bacteria obtiene a lo largo del proceso de la entrada celular.

• La migración de una célula a otra, ocurre por un fenómeno llamado protrusion el cual
es producido por el movimiento actínico de la bacteria. Cuando la bacteria ha llegado
al otro extremo de la membrana celular no se detiene sino que sigue empujando
generando la protrusion que luego penetra en la nueva célula. Esta protrusion luego
se separa de la célula antigua y se forma una vacuola de doble membrana en la
nueva célula.

• Luego de esto la bacteria vuelve al ciclo mediante la destrucción de la vacuola de


doble membrana.

• Los alimentos más vulnerables son leches, quesos, carnes, embutidos, vegetales, y
demás crudos o mal cocidos. Además de quesos y conservas producidas o
maduradas caseramente.

• Para prevenir debe evitarse la contaminación cruzada, se debe cocer bien los
alimentos a servirse, debe evitarse el contacto directo con animales infectados,

• Se ha creado una vacuna a partir de la bacteria Listeria monocytogenes. Esta


bacteria fue exterminada con rayos gamma y la vacuna protegió a ratones infectados
con la bacteria viva.

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Paper

Internalin A can mediate phagocytosis of Listeria monocytogenes


by mouse macrophage cell lines.
by: Sawyer RT, Drevets DA, Campbell PA, Potter TA. from: Department of Medicine,
National Jewish Center for Immunology and Respiratory Medicine, Denver,
Colorado.

Listeria monocytogenes internalin A (InlA) is a surface protein that mediates the


attachment of Listeria to, and invasion of, hepatocytes, epithelial, and endothelial
cells. In this study, we tested whether InlA could also mediate phagocytosis of L.
monocytogenes by the non-listericidal mouse macrophage cell lines J774A.1 and
H36.12j. Recombinant InlA (rInlA) was used to derive mouse monoclonal anti-InlA
antibodies (mAb) and rabbit anti-InlA antibodies. Fluorescence microscopy
demonstrated that these anti-InlA antibodies reacted with wild-type L. monocytogenes,
L. ivanovii, and L. innocua+, a mutant transformed with the inlAB operon that
expresses surface InlA but failed to react with Bug 8, an InlA/InlB-negative transposon
mutant of L. monocytogenes or with noninvasive Listeria sp. Fluorescence
microscopy, radiolabeling, and flow cytometry showed that rInlA bound specifically to
both macrophage cell lines. Incubation of macrophages and wild-type L.
monocytogenes in the presence of rInlA or pretreatment of Listeria with anti-InlA
antibodies specifically inhibited, by at least 50%, the phagocytosis of Listeria by both
of these cells. By comparison, treatment with these reagents failed to affect the
phagocytosis of Streptococcus pyogenes by either macrophage cell line nor did these
reagents alter the ability of macrophages to internalize wild-type L. monocytogenes.
We found that Bug 8, but not wild-type L. monocytogenes, failed to grow within both of
these non-listericidal macrophage cell lines. In contrast to infection by wild-type L.
monocytogenes, Bug 8 was rapidly eliminated from the spleens of both C57Bl/6 and
DBA/2 mice. Data presented here show that only invasive Listeria sp. have surface
InlA and that L. monocytogenes can enter non-listericidal macrophage cell lines by
binding of bacterial InlA to the macrophage cell surface.

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Resumen del Paper

El paper trata sobre las investigaciones recientes sobre los efectos de la internalina A en la
adherencia a células epiteliales.
En experimentos con ratones que no tienen los mismos receptores E-caderina que los
humanos, se encontró que cuando se les administraba dosis altas de Listeria, estos no
desarrollaban la enfermedad.

Luego se trato transgénicamente a estos ratones y se cambiaron los genes que especializan
a los receptores E-caderina, y se colocaron genes que estimulaban la especialización de
receptores E-caderina similar al de los humanos.

Luego, cuando se inoculo con Listerias vivas a estos ratones trransgénicos desarrollaron
Listeriosis y el estudio de sus células mostró rastros de invasión por Listeria monocytogenes.

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