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muy bajas temperaturas, generalmente entre -80 ºC y -196 ºC (el punto de ebullición del
nitrógeno líquido) para disminuir las funciones vitales de una célula o un organismo y
Durante slow freezing las células son enfriadas a temperaturas por debajo de su
mismo tiempo que se forma este hielo en el medio extracelular, hay un incremento
y la formación de hielo intracelular se evita. Aun así, surgen algunas desventajas al usar
este método: se piensa que el chilling injury es debido a los efectos de la exposición a
interacciones mecánicas entre las células y el hielo, (Mazur, 1970, 1972, 1977).
vitrificar debe ser rebajado a un nivel no tóxico, y la velocidad debe ser incrementada
Para lograr una técnica adecuada de criopreservación, en primer lugar hay que
célula que pueden incidir en la viabilidad del producto congelado. Al ser un proceso
eventos celulares que tienen lugar durante los procesos de criopreservación; las bajas
forma, pequeñas moléculas como las de agua (PM: 18), etanol (PM: 46), glicerol (PM:
92) y oxígeno pasan a través de la membrana mientras que la glucosa (PM: 180) no lo
hace. Cuanto menos polar es una molécula más rápido puede pasar la membrana,
(Lotan, 1981).
Los lípidos (colesterol y ácidos grasos), como componentes más abundantes de
las bicapas determinarán la rigidez de las membranas y por tanto el transporte de las
ácido graso, más fácilmente se forman uniones de van der Waals y más rígida es la
fisiológicas por la unión de sus anillos a las cadenas de ácidos grasos pero impide que
Las membranas celulares son las estructuras que sufren mayor daño en los
-16 ºC alterando de esta manera las funciones de la membrana y dándole un alto grado
rapidez (décimas de segundo) con la que suceden los cambios osmóticos en los procesos
ellas de ATP y/o iones H+), en consecuencia, los procesos de difusión y ósmosis son los
tienden a alcanzar una distribución homogénea en todo el espacio que les es accesible.
La magnitud de la tendencia a difundir desde una zona a otra si está presente una
membrana que separe las dos zonas está definida por la ley de difusión de Fick, que
relaciona el gradiente entre las dos zonas (gradiente químico o de concentración), con
movimiento del agua desde soluciones con baja concentración de soluto hasta
carga eléctrica, peso o fórmula química, es por tanto una propiedad coligativa (es decir
las propiedades colectivas que una solución tiene cuando estos compuestos están
presentes).
no existen fenómenos de difusión ni energía térmica suficiente para llevar a cabo las
descongelación.
las reacciones químicas (metabólicas) ocurren más lentamente a medida que desciende
biológica se detiene. Sin embargo, también ocurre que antes de llegar a estas
muere.
enfriamiento y recalentamiento.
Una célula es básicamente un pequeño saco que encierra una disolución de agua
y sales. A este saco le rodea lo que se llama una membrana semipermeable, un tejido
especial que sólo deja pasar el agua a través de él, pero no las sales que tiene disueltas,
de ahí su nombre. Por ello, cuando el agua sale o entra en la célula la concentración de
un sentido tal que tiende a igualar las concentraciones de las disoluciones. O sea, si se
sumerge la célula en una disolución de sales más concentrada que el interior celular,
entonces el agua (y sólo el agua) sale de la célula; esta, por lo tanto, se encoge y reduce
de volumen. Si, por el contrario, se sumerge la célula en una disolución más diluida que
el interior celular, entonces empezará a entrar agua dentro de la célula intentando diluir
pura y disolvemos sales en ella, entonces el agua no se congelará a 0º C, sino por debajo
de esta temperatura; a una temperatura tanto más baja cuanta más cantidad de sal se
inicialmente las células se tienen sumergidas dentro de un recipiente que contiene una
solución salina isotónica, es decir, con la misma concentración que el interior celular.
Cuando se empieza a enfriar este preparado, el frío alcanza antes la solución exterior
que el interior celular. Esto trae como consecuencia que se empiece a formar hielo en el
intra y extracelulares.
estar más concentrada: tanto más concentrada cuanto más agua salga. Y es aquí cuando
formará hielo desciende: será más difícil que el agua de dentro de la célula se congele y
dañe sus estructuras. Así, mientras se enfríe poco a poco, el proceso continuará
descenderá aún más la temperatura necesaria para que se forme hielo dentro. Por ello,
con una velocidad de enfriamiento suficientemente lenta podemos evitar por completo
supervivencia celular. Y es que aunque no se forme hielo aparecen dos nuevos factores
que perjudican gravemente a la célula. Por una parte está el hecho de que en cierto
instante la concentración de sales dentro de la célula llega a ser tan alta que resulta muy
tóxica. Por otra parte, al salir tanta agua de la célula su volumen disminuye
factores son tantos o más perjudiciales que la formación de hielo intracelular. Por ello,
en los protocolos de preservación de células aisladas hay que enfriar a una velocidad
que sea lo suficientemente lenta como para evitar en lo posible la formación de hielo
celular.
líquido ya que crea un líquido cuya entropía es menor que la entropía del cristal,
termodinámica serían violadas por el logro de un estado líquido con la misma entropía
predomina los vibracionales grados de libertad. Otra forma de ver la transición vítrea es
tejido o de células por mucho tiempo cuando se las mantiene a baja temperatura. Los
grado de protección al cristal de agua que confieren y por la toxicidad química que
pueden tener sobre las células. El grado de protección a las células está directamente
vinculado al grado de asociación que tengan con el agua molecular. A mayor afinidad,
utilizan en conjunto con los medios nutritivos líquidos que conforman las mezclas
congelantes.
protector penetre el tejido sin alcanzar los niveles tóxicos referidos, antes del inicio del
vitrificar a una concentración que no sea tóxica para éstos durante el proceso de
líquido.
enfriamiento.
temperatura a las que los embriones y los medios van a estar alojados durante la
1.4.1. Definición.
disminuyen el punto eutéctico de una solución dada (punto en el cual una composición
implica que se alcanzará una concentración dada de solutos a una temperatura menor, de
forma que la célula estará más deshidratada y el gradiente osmótico al que estará
celular:
y el propanodiol.
estructura de la membrana.
grupo de los glicoles. Es un líquido transparente algo viscoso y poco volátil. Es muy
asociados a los agentes penetrantes. Los más utilizados son la sacarosa, glucosa,
dextrosa y dextrano.
de la membrana plasmática, que ocurre cuando entra crioprotector y sale agua, ya que
las velocidades son distintas (sale más rápido el agua). Por lo tanto, en criopreservación,
después se hidratan.