c
 


 
 
 


 
 
 

 
   

 
  c  



 —  
  
 

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de

microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El
material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el
   c
 y el crecimiento de los microorganismos es el c
 . Se
han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial

debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en

composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la
que se añadirán otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la

preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el
crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que
crecen en él.

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho

menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de

enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación
de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa
se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes.

También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH
básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya
que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram-positivas).

c





   

 

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve

afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos,
son ajenos por completo al propio medio.

°   
    

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,

como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos
casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para
ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que
tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de

carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida
de los factores nutritivos lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es

utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de
nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen
utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la
peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a

muchos medios de sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc.
Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como
las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del
crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica.
„uy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

0      


Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo

productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido o sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y

comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está
ampliamente extendido en el laboratorio.

          

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de

oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán
adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio,
los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas
parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los
anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de
las citadas condiciones.

     ! 

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en
los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las
estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así
que se deseque el medio.




" —#  

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

$ %

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe
olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metabólicos normales.

&  

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y

43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC,
y los saprófitos tienen rangos más amplios.

' (
 


Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
(que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizarte)

—
  
    

Podemos decir que la microbiología empieza su verdadero desarrollo como

ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la
observación de los primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a
punto de los medios de cultivo y la utilización del agar como solidificante, marcan
dos importantes puntos de inflexión en su evolución.
La primera noticia de la utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo
Brefeld, que consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos
realizados a base de gelatina.

Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor
tamaño) y no fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado
al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido.

 ! realizó sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de

patata como soporte nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne
líquido, diseñado por Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina, logrando un medio
sólido transparente ideal para la observación de la morfología macroscópica de las
colonias microbianas.

En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en

relación con los medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el
agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante.

En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal

planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas
bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.

Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre

las bacterias quimioautótrofas (utilización de nitrógeno y azufre sobre todo)
tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de
enriquecimiento. Diseñaron este tipo de medios de tal forma que su especial
composición química favorecía el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos
que, en función de sus procesos metabólicos, eran los únicos capaces de utilizar
para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.

En 1892 Würtz impulsó el uso de los medios diferenciales, incorporando

indicadores de pH a la composición de ciertos medios con lo cual se podía
observar la producción de ácidos en la fermentación en ciertos microorganismos.

p     

     

Líquidos
 Semisólidos

Sólidos

  
 ) 

    
   :

Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia

variedad de organismos difíciles de hacer crecer. A menudo están
enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX,
FV, aglutinina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las
bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)

Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se

añaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de
bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las
sustancia añadidas, se varía el tipo y grado de selectividad („ac
Conkey, Kanamicina-Vancomicina)

enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora

competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado
(Selenito, medio con Vitamina K).

Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas

especiales que satisfacen requerimientos de grupos específicos de
bacterias, ayudando a su identificación (Lowenstein).

    *:

diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las

peculiaridades fisiológicas (nutrición y respiración sobre todo)
específicas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados
se puede llegar a la identificación de casi cualquier bacteria
(Oxidación-Fermentación)

 
   !  

Se añadirán antibióticos antibacterianos para inhibir el crecimiento de las bacterias

saprofitas que suelen contaminar las muestras. Los más usados son el
Cloranfenicol y la Gentamicina. Se añade también actidiona (Cicloheximida) que
inhibe el desarrollo de hongos saprofitos ambientales (aunque tiene el
inconveniente de que inhibe también el crecimiento de c    

  

).

 +    + 

El ágar Sabouraud dextrosa, modificado por Emmons, contiene un 2% de glucosa

y es ligeramente ácido (pH=6.9), se considera el medio estándar para recuperar y
mantener una amplia variedad de hongos que pueden aislarse en el laboratorio de
micología clínica. Es el medio estándar para observar la morfología típica de los
hongos, pero no es el medio ideal de crecimiento o para estudiar la esporulación.

Este medio permite el crecimiento de actinomicetos aerobios, pero el SAB original

(4% de glucosa), dificulta la recuperación de algunos hongos, sobre todo de
ÿ
  
.

Se utiliza indistintamente en tubo o en placa.

 +   c
 
  + ,c-+ %.,c

Es el medio SAB clásico con la incorporación de los antibióticos Gentamicina y

Cloranfenicol, que permiten el crecimiento de casi todos los hongos filamentosos y
levaduras al mismo tiempo que inhiben a una gran mayoría de bacterias.

Se utiliza en tubo o en placa.

  %.°
    %. 

El ágar BHI (Brain-Heart infusion) es un medio enriquecido que facilita la

recuperación de c    
  

 (sobre todo en muestras estériles
como LCR) y que se utiliza para la conversión hongo-levadura de hongos como
   y 

  .

  %. c
 
/  /c
! °
 

   %. c,,c

Los antibióticos añadidos inhiben el crecimiento de la mayoría de las bacterias y

hongos saprofitos (aunque también de algunos hongos patógenos). La
incorporación de sangre de carnero mejora el crecimiento de hongos dimórficos

    
 


    

Se prepara con pulpa de patata como base y, al ser un medio muy pobre, se utiliza
para estimular el desarrollo in vitro de las estructuras de reproducción sexual de la
mayor parte de los hongos. También estimula la producción de pigmentos en
hongos como por ejemplo, p   . Se puede añadir zanahoria y bilis (para
favorecer la obtención de clamidosporas de c





) o
glucosa/dextrosa (para diferenciar p  
  )

   #

„edio a base de granos de arroz blanco que se utiliza para diferenciar

„  
 
 (que no se desarrolla en este medio) de otras especies de
„  

 c# 0

Se utiliza para estimular las características diferenciales de     y

para estimular la fermentación de   


 


Es el medio indicado para detección de Criptococcus neoformans.

Esta levadura es la única conocida actualmente, de interés clínico, que produce la

enzima fenoloxidasa. El ágar de Alpiste contiene sustratos para esta enzima por lo
que el crecimiento de Criptocco se detecta por la formación de colonias de color
pardo.

 c!   c  

Es un medio diferencial que permite la identificación presuntiva de algunas

especies habituales de c


en función del color y morfología que adoptan
cuando crecen en este medio.

Puede utilizarse como medio para aislamiento primario.



 
   
   

„edios de cultivo de bacterias

Preparación y colonias de
Bacterias

„edios generales
‡ Ajar Soya Tripticasa
(TSA)*
‡ Ajar marino 2216 o Novell
‡ Agar Nutritivo**
* añadir 2.0 % NaCl
** añadir 2.5 % NaCl

„edios selectivos
‡ Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis,
Sacarosa (TCBS): 6
 
‡ Agar Cetrimida:  


„edios diferenciales
‡ Agar Eosina Azul de „etileno:
coliformes y  

Tablas de información de algunos medios de cultivo.


°
    1 2   
 
p 
  

/   
  * 

c   c   3*
  

NH4Cl 0.52 g fuente de N
KH2PO4 0.28 g fuente de P y K
„gSO4 7H2O 0.25 g fuente de S y „g++
CaCl2 2H2O 0.07 g fuente de Ca++
Azufre
1.56 g fuente de energía
elemental
C02 5%* fuente de C
Agua 1000 ml
pH 3.0
* Aerear el medio en forma intermitente con aire conteniendo 5% de CO2.


 
0
  
4   
      

c   c   3*
  

Fuente de vitaminas y otros
Extracto de carne 1.5 g
factores de crecimiento
Extracto de Fuente de vitaminas y otros
3.0 g
levadura factores de crecimiento
Peptona 6.0 g Fuente de aminoácidos, N, S, y P
Glucosa 1.0 g C y fuente de energía
Agar 15.0 g Agente inerte solidificante
Agua 1000 ml
pH 6.6




 
 2   
 !

 
 

c   c   3*
  

Acidos Casamino 7.5 g Fuente de aminoácidos, N, S y P
Extracto de
10.0 g Fuente de factores de crecimiento
levadura
Citrato trisódico 3.0 g C y fuente de energía
KCl 2.0 g fuente de K+
„gSO4 7 H2O 20.0 g fuente S y „g++
FeCl2 0.023 g fuente Fe++
fuente de Na+ para halofílicas e
NaCl 250 g
inhibidor para no halofílicas
Agua 1000 ml
pH 7.4


Descripcion de algunos medios de dcultivo diferenciales:

Agar Nutritivo

„edio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el aislamiento de

microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.
Su uso está descrito en muchos procedimientos para el análisis de alimentos,
aguas y otros materiales de importancia sanitaria.

Fundamento
Es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus
requerimientos
nutricionales.
No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de
carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano.
El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u
otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes.
Características del medio: ámbar claro

Base Agar Gelosa Sangre

„edio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos

microorganismos. Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el
aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente
exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observación de
reacciones de hemólisis.
También, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar
el medio agar chocolate.
Fundamento

La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor

nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún
de aquellos nutricionalmente exigentes.
El cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite
detectar hemólisis.
Características del medio
„edio preparado: ámbar.
„edio preparado con 5% de sangre
de carnero: rojo cereza
E.„.B. Agar

Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de

rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas
las especies de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento :

Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para
obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras
especies de bacilos Gram negativos. La diferenciación entre organismos capaces
de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está
dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto
inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas.
„uchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico
brillo metálico.
Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o
rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras.

Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes. La siembra en profundidad

permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans.

„ientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de
color azul lavanda. esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de
acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de
metileno a sus membranas.
Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y
transparentes. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies
de Salmonella y Shigella.

„ac Conkey Agar

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil

desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies
de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Fundamento:
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla
de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la flora Gram
positiva.

Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las
colonias, y la precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no
fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
Estafilococo 110 Agar

Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciación presuntiva de

estafilococos, en base a la producciónde pigmentos, la fermentación de manitol y la
hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.

Fundamento:

Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicación

alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios sólidos selectivos:
Baird Parker „edio, „anitol Salado Agar, o Estafilococo „edio 110.
En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la tripteína aportan los nutrientes
para el desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima
gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El
cloruro de sodio, se encuentra en alta concentración, para inhibir el desarrollo de la
flora acompañante excepto Staphylococcus spp., lográndose así un medio selectivo
para el desarrollo de estos microorganismos.

Las ventajas de este medio por sobre los otros mencionados anteriormente, es que
permite, en la misma placa, obtener pruebas de identificación presuntiva de especie
como ser: desarrollo de pigmentos, fermentación de manitol e hidrólisis de la
gelatina.
Resultados:
Observar las características de las colonias y realizar las pruebas de identificación
de microorganismos.
1-Fermentación de manitol: agregar unas gotas de púrpura de bromocresol a las
zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa
donde no hay desarrollo bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos
zonas.
Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento
bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio.
Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento
bacteriano y la zona sin inocular.
-Hidrólisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solución saturada de sulfato
de
amonio y colocar en estufa, a 35-37 ºC, en aerobiosis durante 10 minutos.
Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.
Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias

Características del medio

„edio preparado: ámbar claro, opalescente con precipitado.
Sal y „anitol Agar
„edio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y
diferenciación de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de
muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y otros materiales de
importancia sanitaria.
También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de
Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS „edio, „edio „arino, etc.),
aunque algunas especies pueden no desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina.
Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las
colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante.
Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona
roja o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de
cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. En el
medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de
carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono
fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el
agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es
el indicador de pH.
Sistema Nacional de Encuestas de Salud
La ENSANUT 2006 (www.insp.mx/) es la encuesta más compleja
que se haya realizado; el INSP recabó información relacionada
al estado de salud y nutrición de la población mexicana,
a la prevalencia de algunos padecimientos crónicos e
infecciosos, a la calidad y respuesta de los servicios de salud,
y al gasto en salud que realizan los hogares mexicanos.
Con esta encuesta pretende, además, evaluar los cambios
de prevalencias en la población mexicana, al comparar estos
resultados con los de las encuestas nacionales de Nutrición
del 1988 y 1999, y de Salud de 1986, 1994 y 2000.
La información recabada a nivel estatal permite diferenciar
las características de la población urbana y rural
(localidades con menos de 2500 habitantes), distribuir a la
población en cuatro estratos de ingreso y ubicarla en los
principales grupos poblacionales (niños (infantes (0- 12 meses),
preescolares (1 a 5 años), escolares (6-11 años), adolescentes
(12-19 años), adultos (> 20 años) y adultos mayores
> 60 años).
Tamaño de la muestra
El tamaño de muestra nacional fue de 48 600 viviendas, lo
que permite estimar prevalencias de 0.4% y más.
Diseño
El diseño muestral de la ENSANUT 2006 es probabilística,
polietápico, estratificado y por conglomerados.
Para el levantamiento, la encuesta se dividió en dos componentes:
salud y nutrición. El país se dividió en cuatro rutas
donde el levantamiento se hizo en forma simultánea: noroeste,
noreste, sur y centro del país.
Pirámides de población
La población general presentó una distribución por sexo casi
homogénea, donde 52.1% de la población son mujeres y
47.9% hombres.