Artigo

Produtosnaturaiscomopontodepartidaparaadescobertadenovas substnciasbioativas:Candidatosafrmacoscomaoantiofdica, anticncereantiparasitria

Costa,PauloR.R.*
Rev.VirtualQuim.,2009,1(1),5866.DatadepublicaonaWeb:2deFevereirode2009 http://www.uff.br/rvq

Naturalproductsasstartingpointforthediscoveryofnewbioactivecompounds: Drugcandidateswithantiophidic,anticancerandantiparasiticproperties
Abstract:TheexperienceoftheLaboratoryofBioorganicChemistryoftheFederalUniversitydoRiodeJaneiro (LQBUFRJ) on the use of abundant natural products such as safrole, eugenol and derivatives, as starting materialforthesynthesisofnewanticancer,antiparasiticandantiophidicdrugcandidatesisbrieflydescribed. Twelve derivatives of the naturally occurring coumestan wedelolactone and six derivatives of the naturally occurringpterocarpanedunolweresynthesizedandevaluatedasantiophidic.Twocoumestans(LQB34,LQB 93) and one pterocarpan (LQB100) were more potent and bioselective than the natural products used as reference,beingactiveinvitro(antihaemorragiceffectandmyoprotection)andinvivo(mice)againstdifferent snakevenoms. Thenaturallyoccurringpterocarpan4hydroxymaackian(LQB79)andfivederivativeswerealsopreparedand evaluatedonleukemiacelllines,includingmultidrugresistance(MDR)celllines.Thenaturalproduct(LQB79) wasthemostpotentandbioselective. Fourteen compounds, bearing a new molecular architecture (pterocarpanquinone) designed by molecular hybridizationof4hydroxymaackian,lapacholandcalafungin,weresynthesizedandevaluatedasanticancerand antiparasitic.ThesepterocarpanquinonesshowedtobemoreactiveandbioselectivethanLQB79onleukemia, breastandlungcancercelllines,aswellasonPlasmodiumfalciparumandLeishmaniaamazonensisinculture. Oneamongthesecompounds,LQB118wasactiveinmiceinfected(footpad)byLeishmaniaamazonensis. Keywords:medicinalchemistry,naturalproducts,drugdiscovery,anticancer,antiparasitic,antiophidic

*Endereo completo: Laboratrio de Qumica Bioorgnica (LQBUFRJ), Ncleo de Pesquisas de Produtos Naturais,UniversidadeFederaldoRiodeJaneiro,CentrodeCinciasdaSade,CidadeUniversitria,BlocoH, CEP21.941590,RiodeJaneiro,R.J,Brasil. emailparacorrespondncia:prrcosta@ism.com.br;lqb@nppn.ufrj.br Rev.VirtualQuim.|Vol1||No.1||5866|58

 Volume1,Nmero1 Resumo
A experincia do Laboratrio de Qumica Bioorgnica da Universidade Federal do Rio de Janeiro (LQBUFRJ) no uso de produtos naturais abundantes como safrol, eugenol, e derivados, como matria prima para a sntese de novos candidatos a frmacos com ao anticncer, antiparasitria eantiofdicadescritadeformabreve. Dozederivadosdocumestanonaturalwedelolactone(entre eles trs produtos naturais) e seis derivados do pterocarpanonaturaledunolforamsintetizadoseestudados comoantiofdicos.Doiscumestanos(LQB34,LQB93)e um pterocarpano(LQB100)forammaispotentesebiosseletivos que os produtos naturais usados como referncia, sendo ativosinvitro(efeitoantihemorrgicoeproteomuscular) einvivo(camundongos)contradiferentestiposdeveneno. Opterocarpanonatural4hidroximaackiana(LQB79)ecinco derivados foram preparados e estudados em cultura de clulas de leucemia, incluindo com o fentipo MDR (resistncia a mltiplos frmacos). O produto natural (LQB 79)foiomaispotenteebiosseletivo. RevistaVirtualdeQumica JaneiroMaro,2009

Profs.AlcidesJ.M.daSilva(NNPNUFRJ),PauloR.R. Costa(NPPNUFRJ)eChaquipD.Netto(IQUFRJMaca)

Quatorze substncias possuindo uma nova arquitetura molecular (pterocarpanquinona) planejada por hibridizao molecular da 4hidroximaackian, lapachol e calafungina, foram sintetizados e avaliados como anticancergenoseantiparasitrios.Estaspterocarpanoquinonasmostraramsermaisativasebiosseletivosque LQB79emlinhagensdeclulasdeleucemia,cncerdemamaepulmo,efrenteaoPlasmodiumfalciparumea Leishmania amazonensis em cultura. Uma entre estas substncias, LQB118, foi ativa em camundongos infectados(lesocutneanapata)porLeishmaniaamazonensis.

palavraschave:qumicamedicinal,produtosnaturais,descobertadenovosfrmacos,anticncer,
antiparasitrio,antiofdico

*Endereo completo: Laboratrio de Qumica Bioorgnica (LQBUFRJ), Ncleo de Pesquisas de Produtos Naturais,UniversidadeFederaldoRiodeJaneiro,CentrodeCinciasdaSade,CidadeUniversitria,BlocoH, CEP21.941590,RiodeJaneiro,R.J,Brasil. emailparacorrespondncia:prrcosta@ism.com.br;lqb@nppn.ufrj.br 59Rev.VirtualQuim.|Vol1||No.1||5865|

 Volume1,Nmero1

RevistaVirtualdeQumica

JaneiroMaro,2009

Produtosnaturaiscomopontodepartidaparaadescobertade novassubstnciasbioativas:Candidatosafrmacoscomao antiofdica,anticncereantiparasitria

PauloR.R.Costa
LaboratriodeQumicaBioorgnica(LQBUFRJ),UniversidadeFederaldoRiodeJaneiro,CentrodeCinciasda Sade,CidadeUniversitria,CEP21.941590RiodeJaneiro,RJ,Brasil. prrcosta@ism.com.br;lqb@nppn.ufrj.br Recebidoem28dejaneirode2008 Ao usar produtos naturais bioativos como ponto de partida para o desenvolvimento de novos frmacosaindstriafarmacuticasedepara,emgeral,comabaixaconcentraodassubstncias selecionadasnasfontesnaturais,oquemuitasvezesinviabilizaaexploraocomercial.Porm,a sntesedestassubstnciasedederivadosplanejados,permitefrequentementequeseestabeleao farmacforoequesemoduleoperfilbiolgico,representandoumaexcelenteoportunidadeparaa atuaodequmicosorgnicossintticosequmicosmedicinais.Muitosprodutossintticosemuso emclnicaforaminspiradosemprodutosnaturais. A experincia do LQBUFRJ no uso de pterocarpanos e cumestanos como inspirao para a obteno de novos candidatos a frmacos para a quimioterapia antiofdica, anticncer e antiparasitria brevemente discutida neste artigo. Produtos naturais abundantes e de baixo custo,comoosalilbenzenossafrol,eugenol,ederivados,foramusadoscomomatriaprima.

1.Aimportnciadosprodutosnaturaisparaaindstriafarmacutica 2.NovosprottiposdesenvolvidosnoLaboratriodeQumicaBioorgnica(LQBUFRJ)para o tratamento de acidentes ofdicos e quimioterapia anticncer e antiparasitria, tendo pterocarpanos e cumestanos naturais como inspirao e alilbenzenos naturais e seus derivadoscomomatriaprima 3.Concluso

1. A importncia dos produtos naturais paraaindstriafarmacutica

Adescobertadoouroeasuaexcepcionalresistncia deteriorizao e a corroso fez com que se acreditasse que estas caractersticas pudessem ser transmitidas aos seres humanos. Os primeiros remdios preparados para combater o envelhecimento usavam ouro em sua formulao e aspessoaseramaconselhadasabeberemtaasde ouro para aumentar a sua longevidade. Durante a

idade mdia mdicosalquimistas europeus, entre eles destacandose Paracelso (14931541), introduziramousodeoutrosmetaiscomomercrio, enxofreeferro,almdesaisdemetaiscomosulfato de cobre, na teraputica. Entretanto, os produtos naturais foram os principais componentes das farmacopias por milhares de anos, sendo usados atfinsdosculoXIXnaformadechs,infuses,e outrasformulaesfarmacuticas.1 Os produtos naturais tambm se destacaram economicamente pelo uso como corantes, e o

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Costa,P.R.R. ndigo,isoladodeespciesdogneroIndigofera ea alizarina, isolada de Rubia tinctoria (Figura 1), so exemplossignificativos.EmfinsdosculoXIX,como florescimento da carboqumica na Alemanha, a alizarina foi sintetizada a partir do antraceno e comercializada por um preo vinte vezes menor do que o do produto natural. O ndigo tambm foi obtido de forma mais barata a partir de hidrocarbonetos isolados do carvo, anunciando a importncia que a Sntese Orgnica viria a assumir, brevemente, como estratgia para a obteno de insumosemgrandeescala.1 O isolamento de produtos naturais em forma pura, no final do sculo XIX, foi um passo decisivo para a criao da indstria farmacutica. Durante a primeira fase os produtos naturais se constituram naprincipalfontedeinsumosparaapreparaode medicamentos. A quinina (Figura 1) foi isolada da casca de quina (Cinchona sp) por P. J. Polletier e J. Caventou, em 1820. Em 1826 estes professores da cole Superieure de Pharmacie de Paris desenvolveram um mtodo para obteno em grande escala e passaram a comercializar a quinina em forma pura. Em 1848 Merck isola a papaverina de Papaver somniferum e instala na Alemanha a primeira farmciafbrica. Ambos contriburam de forma muito importante para o surgimento da indstriafarmacutica.1 Outros produtos naturais introduzidos em teraputica a partir do incio do sculo XX, alguns dos quais ainda so usados em clnica, so mostradosnaFigura2.1 Em 1897 foi lanado pela Bayer o primeiro frmacosinttico,ocidoacetilsaliclico(aspirina), inspirado na salicina, um glicosdeo natural isolado deSalixalbaeusadodesdeostemposdeHipcrates comoantiinflamatrio(Figura3).1 Asntesedeanalgsicoslocaiscomoaprocana, umprodutoderivadodacocana,podetambmser considerada um marco na implantao da indstria farmacutica(Figura3).1 Figura1.Primeirosprodutosnaturaisusadoscomo corantesemedicamentos O terceiro exemplo mostrado na Figura 3 trata dacloroquina,umpotenteantimalarialdesenvolvido durantea2guerramundial,inspiradonaestrutura daquinina.1

Figura2.Outrosprodutosnaturaisusados comodrogasefrmacos

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Costa,P.R.R. entre1981e2006,43eramprodutosnaturais,232 produzidos por hemisntese a partir de produtos naturaise572obtidosporsntesetotal.Entretanto, 262 entre estas ltimas substncias possuam um grupofarmacofricoinspiradoemprodutosnaturais oupoderiamserconsideradosanlogosdeprodutos naturais.2 Algunsexemplosadicionaisdefrmacosobtidos porsnteseouhemisntese,inspiradosemprodutos naturaissomostradosnaFigura4.2

2. Novos prottipos desenvolvidos no Laboratrio de Qumica Bioorgnica (LQBUFRJ) para o tratamento de acidentes ofdicos e quimioterapia anticncer e antiparasitria, tendo pterocarpanos e cumestanos como inspiraoealilbenzenosnaturaiseseus derivadoscomomatriaprima
Antiofdicos No final da dcada de 1980, o Prof. Walter B. Mors,doNPPNUFRJeoProf.PauloA.Melo,doICB UFRJ descobriram o potente efeito antiofdico da wedelolactona, um cumestano isolado de Eclipta prostata.3 A planta produz o cumestano sob algum tipo de estresse, como os espcimes que cresciam sob o sol e a goteira de um ar condicionado no estacionamento do CCSUFRJ. Extratos destes espcimes foram sempre ativos quando testados peloProf.PauloA.Melo. Entretanto, tentativas do Prof. Paulo A. Melo de cultivar esta planta conduziram a espcimes que simplesmente no produziam o mencionado cumestano. H que se acrescentar que a wedelolactona representou um alvo sinttico relativamente complexo e s recentemente este cumestanofoipreparadoemlaboratrio.4 Por outro lado, a cabenegrina AI, isolada por Nakanish e colaboradores de um medicamento popular brasileiro, o especfico pessoa, produzido por Frades Beneditinos no Cear a partir de uma mistura de plantas de natureza sigilosa, tambm apresentou um potente efeito antiofdico e foi patenteada por estes pesquisadores.5 Tal qual a

Figura3.Algunsdosprimeirosfrmacossintticos OsavanosdaQumica,FarmacologiaeBiologia MolecularapartirdemeadosdosculoXX,aliados introduo de novos ensaios bioqumicos, conduziram ao desenvolvimento da Qumica Medicinal, com o planejamento racional de frmacos baseado na abordagem fisiolgica. Gradativamente os produtos sintticos ganham posio de destaque no arsenal teraputico. A introduo do highthroughput screening nos anos 1990 por parte da indstria farmacutica e o desenvolvimento da Qumica Combinatorial, diminuram sensivelmente o interesse em produtos naturais entre 1984 e 2003, que se traduziu no menor volume de investimentos da Indstria Farmacutica neste setor. Entretanto diminuiu tambm, nos ltimos anos, o nmero de novos frmacos lanados no mercado e podese observar um ressurgimento no interesse por produtos naturaiscomofontedenovassubstnciasbioativas. Osavanosnastcnicasdeseparao,purificaoe identificaodemisturascomplexasdeprodutosea diversidade estrutural presente na natureza so os fatoresresponsveisporesterenovadointeresse.2 Embora o uso de produtos naturais in natura como insumos na Indstria Farmacutica tenha decrescido ao longo dos ltimos anos, estas substnciasaindavmsendobastanteusadascomo fontedeinspirao.Dos847frmacosdebaixopeso molecular (micromolculas) lanados no mercado

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Costa,P.R.R. cabrenegrina AI, o edunol, isolado por Chiapas e colsnoMxico6eporMatosnoCear,7tambmse mostrouumpotenteantiofdico. Astrssubstnciasmencionadasforamativasin vivo, em ensaios com camundongos, sendo a cabenegrina AI ativa tambm em ces, segundo Nakanishecols. Em 1998, ao iniciarmos a nossa participao no PRONEX Desenvolvimentos de Novos Frmacos: Qumica, Farmacologia e Toxicologia,8 foi estabelecida uma cooperao com o Prof. Paulo A. Melo, visando buscar substitutos para wedelolactonaeoedunolemsuaaoantiofdica.A avaliao da ao antiofdica vem sendo tambm usada para selecionar inibidores de lipases e proteases, que so as principais enzimas presentes nos venenos de serpentes e outros animais peonhentos. ForampreparadosnoLQBUFRJ umtotalde12 cumestanos9e7pterocarpanos,10entreelesquatro produtos naturais, sendo os demais de estrutura indita.NaFigura5selecionamosastrssubstncias mais promissoras, dois cumestanos e um pterocarpano, que apresentaram efeito inibitrio sobrefosfolipaseseproteasespresentesnoveneno, sendoesteprovavelmenteoprincipalmecanismode ao. EmtrabalhosenvolvendoacolaboraodoProf. Franois Noel (ICBUFRJ)9a,11 foi mostrado, pela primeira vez, que cumestanos, mas no os pterocarpanos, apresentam efeito inibitrio sobre NaKATPases e afinidade pelo stio alostrico (benzodiazepnico) de receptores do GABA. Como estas aes poderiam representar in vivo fonte de efeitos laterais adversos, foram consideradas como mais promissoras as substncias inativas nestes alvos farmacolgicos. Como se pode observar na Figura 5, a wedelolactona muito potente como antiofdico, porm tambm apresenta elevada potnciacomoinibidor deNaKATPaseseafinidade pelo receptor do GABA. O cumestano LQB34 j foi maisseletivo,enquantoqueocumestanoLQB9312e opterocarpanoLQB100foraminativosnestesalvos. ComooLQB93maispotente,foiasubstnciade escolha para um estudo farmacolgico mais aprofundado.13

Figura4.Frmacosesubstnciasemfaseprclnica produzidosporsnteseouhemisntese

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Costa,P.R.R.

Figura5.WedelolactonaederivadospreparadosnoLQBcomoantiofdicos Anticncergenoseantiparasitrios Foram preparados o pterocarpano 4hidroxi maackiana(LQB79),cujaaotxicaemclulasKB havia sido descrita previamente na literatura,14 e cinco derivados, os quais foram ensaiados em culturadediversaslinhagensdeleucemia,incluindo linhagens resistentes ao estresse oxidativo e linhagens com fentipo de resistncia a mltiplos frmacos (MDR). A citotoxicidade seletiva foi avaliada estudandose o efeito em linfcitos e clulas assemelhadas do tecido sanguneo (peripheralbloodmononuclearcellsPBMC). Oprodutonatural(LQB79)eseuderivadoorto quinona (LQB80) foram os mais potentes, porm LQB80mostrousetxicoparaasclulasPBMC.15,16 Comooprodutonaturalpoderiasermetabolizadoin vivo conduzindo a LQB80, estudos mais aprofundados foram interrompidos, conduzindo, posteriormente, ao planejamento de uma nova famlia de produtos, denominada de pterocarpanoquinona, desenhada por hibridizao molecular entre LQB79, lapachol e calafungina.17,18,19 Nestas novas molculas, o anel cateclico presente em LQB79 foi substitudo por um anel naftoquinona. Destacamos, entre as substncias preparadas, a LQB118,20 ativa nas mesmas linhagensdeclulasdeleucemia,clulasleucmicas frescasobtidasdepacientesdoInstitutoNacionaldo Cncer (INCA) e sobre clulas de cncer de pulmo.21 Esta substncia tambm apresentou atividade antileishmanicida in vitro e in vivo (camundongos).22 Outra pterocarpanoquinona merece destaque, a LQB86, com ao sobre Plasmodium falciparum em cultura, na faixa de nanomolar.19 Foram obtidas evidncias em laboratrio que LQB118podeserativadaporreduo,levandoaps rearranjomolecularaumaceptordeMichaelquefoi interceptado como um aduto de tiofenol.20 Este mecanismo pode responder pela ao txica sobre clulas resistentes ao estresse oxidativo, j que substncias que atuam principalmente por este mecanismo, como o lapachol por exemplo, foram inativas nestas clulas. Necessrio salientar que estas substncias no so substratos para bombas

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Costa,P.R.R. de efluxo presentes em clulas com fentipo MDR. comoprottipoativosobrelinhagensdeclulascom OfenmenoMDRseconstituiemumdosprincipais fentipo resistente a mltiplos frmacos (i.e. MDR) problemas e desafios a serem vencidos na e, ainda, como potente agente antiplasmodium e quimioterapiadocncerededoenasparasitrias. antileishmania. Os excelentes resultados biolgicos obtidos em nosso laboratrio a partir da sntese e avaliao farmacolgica de um nmero reduzido de substncias mostram que o uso de produtos naturaiscomofontedeinspiraoaliadoaousodos instrumentos da Qumica Medicinal ainda uma estratgia bastante til na prospeco de novas molculasbioativas.23,24

Agradecimentos
O autor agradece aos Professores Alcides J. M. da Silva (NPPNUFRJ), Paulo A. Melo (Instituto de CinciasBiomdicasUFRJ),FranoisNoel(ICBUFRJ), VivianB.Rumjanek(InstitutodeBioqumicaMdica UFRJ), Bartira R. Bergmann (Instituto de Biofsica UFRJ) e Doutor Eduardo C. TorresSantos (Instituto Oswaldo Cruz, FIOCRUZ) pela profcua colaborao ao longo dos ltimos anos, que conduziram aos resultadosselecionadosparaesteartigo. Figura6.Aoantineoplsicaeantiparasitriade pterocarpanoquinona O autor agradece ainda FAPERJ pela bolsa de CientistadoNossoEstado,aoCNPqpelabolsade produtividade em pesquisa nvel 1B e Universidade Federal do Rio de Janeiro, onde ProfessorTitular,peloambientopropcioatividade depesquisa. O autor agradece finalmente s Professoras Rosngela de A. Epifanio (IQUFF) e Ldia M. Lima (FFUFRJ) pela leitura do manuscrito, correes e sugestes. RefernciasBibliogrficas a)Brody, D. E.; Brody, A. R. As Sete Maiores Descobertas Cientficas da Histria, Parte 2, Cia das Letras, So Paulo, 2000; b) Qumica Medicinal. Mtodos e Fundamentos em Planejamento de Frmacos Editor Carlos A. Montanari. Captulo 17 A Sntese Orgnica e a Produo de Farmoqumicos, Ayres G. Dias e Paulo R. R. Costa, noprelo. a)Schmidt,B.;Ribnick,D.M.;Poulev,A.;Logendra, S.; Cefalu, W.T.; Raskin, I. Metabolism, Clinical and Experimental 2008, 57, S3 [CrossRef]; b) Rishton,
2 1

3.Concluso
Ao longo dos ltimos dez anos o Laboratrio de Qumica Bioorgnica (LQB) do NPPNUFRJ vem contribuindo para a identificao de novos compostos bioativos, tendo como fonte inspiradora arcabouos moleculares presentes em fontes naturais,aexemplodecumestanosepterocarpanos. Neste artigo foi demonstrada a evoluo desde a identificao de cumestanos antiofdicos, passando a pterocarpanos com amplo espectro de atividade biolgica at a descoberta da pterocarpanoquinona LQB118. Este derivado, planejado aplicandose a estratgiadehibridaomolecularsobreaestrutura do prottipo natural LQB79, representa exemplo mpar do sucesso do casamento entre a Qumica deProdutosNaturaiseaQumicaMedicinal.Ensaios de atividade antitumoral e antiparasitria, in vitro, realizadas com LQB118 demonstraram o potencial desta pterocarpanoquinona, de estrutura original,

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20 19 18

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Projeto coordenado pelos Professores Edson X. Albuquerque(UniversityofMarylandUSA),EliezerJ. Barreiro(FaculdadedeFarmciaUFRJ)ePauloR.R. Costa (Ncleo de Pesquisas de Produtos Naturais), realizadoentre1998e2002. a) da Silva, A. J. M.; Melo, P. A.; Silva, N. M. V.; Brito, F. V.; Buarque, C. D.; de Souza, D. V.; Rodrigues, V. P.; Poas, E. S. C.; Noel, F.; Albuquerque, E. X.; Costa, P. R. R. Bioorg. Med. Chem. 2001, 11, 283 [CrossRef]; b) Poas, E. S.; Lopes, D. V. S.; da Silva, A. J. M.; Pimenta, P. H. C.; Leito,F.B.;Netto,C.D.;Buarque,C.D.;Brito,F.V.; Costa,P.R.R.;Noel,F.Bioorg.Med.Chem.2006,14, 7962.[CrossRef]
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Para uma reviso sobre o uso de alilbenzenos e derivados em sntese de substncias bioativas ver: Costa,P.R.R.Quim.Nova2000,23,357.[CrossRef]

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