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APUNTES HISTO:

1--Partes y caractersticas del MICROSCOPIO CON QUE PARTES DEL MICROSCOPIO Y DEL PREPARADO DEBEMOS FAMILIARIZARNOS Espejo: Es quien nos permite iluminar correctamente el preparado. Hoy da algunas ctedras ya tienen microscopios que traen la lmpara incluida en el equipo. Platina: Es donde va apoyado el microscopio. Tiene un orificio central por donde va a pasar la luz. Tornillos de la platina: Permite mover al preparado hacia delante atrs y hacia los costados Revolver: Es donde estn atornillados los objetivos Objetivos: Son los lentes que estn ms cerca del preparado. Habitualmente hay 3 objetivos, aunque algunos microscopios agregan un cuarto. Se distinguen entre s por el aumento que generan, y que est escrito en ellos. Son: Objetivo panormico: Aumenta 5x (x significa veces, o sea aumenta 5 veces) Objetivo seco dbil: aumenta 10x Objetivo seco fuerte: aumenta 40x Objetivo de inmersin: aumenta 100x Tornillos: Permiten acercar o alejar al preparado de los objetivos: los hay de dos tipos: Macromtrico: es el que permite alejar o acercar de manera grosera. Es el de mayor tamao y permite hacer un enfoque general Micromtrico: es el que permite alejar o acercar de manera sutil y permite el enfoque fino Ocular: es el lente donde apoyamos el ojo. Aumenta 10x Portaobjetos: Es el vidrio donde se encuentra la muestra. Cubreobjetos: Es la lmina delgada que recubre la muestra histolgica Muestra: Es el preparado propiamente dicho que se encuentra en el portaobjetos. PASOS PARA ENFOCAR CORRECTAMENTE Y PODER VER Alej los objetivos de la platina con el tornillo macromtrico Acomod el preparado en la platina. Ac vamos a tener que tocar las superficies del preparado y sentir el lado donde se encuentre el portaobjetos. Es importantsimo que se ubique el cubreobjetos hacia arriba, mirando al objetivo, porque sino tendrs problemas para ver con el objetivo seco fuerte Acomod el objetivo seco dbil en el revolver de manera tal que quede alineado para ver. Acerc el objetivo seco dbil hacia el preparado usando el tornillo macromtrico, pero mirando desde afuera. No mires por el ocular, porque puedes romper el preparado. Acercalo hasta el mximo permitido por el tornillo macromtrico, o hasta que casi se apoye sobre el preparado. De ah que es fundamental mirar desde el costado. Cerciorate que la muestra est alineada y mirando al objetivo seco dbil

Ahora, si. Mir por el ocular y comenz a alejar usando lentamente el macromtrico hasta empezar a ver imgenes ntidas. Cuando comencemos a ver con claridad, usemos el tornillo micromtrico para poder hacer el enfoque fino. Recorr el preparado tratando de reconocer estructuras que llamen la atencin. Pas al objetivo seco fuerte cuando encuentres algo que quieras ver en detalle. Ac se torna fundamental usar para el enfoque SOLAMENTE EL TORNILLO MICROMETRICO, porque el objetivo seco fuerte est tan cerca del preparado, que un movimiento grosero podra romper al mismo. Volv al objetivo seco dbil y reiter los pasos 5, 6 y 7. Cuando quieras retirar el preparado, mirando desde afuera, y con el objetivo seco dbil alineado, alej al objetivo del preparado. Ahora s, retir el preparado de la platina y coloc otro preparado.

Si cumpliste con estos 10 simples pasos, no deberas tener problema alguno en poder ver. Sin embargo, siempre puede pasar que algo no se ve correctamente. Puede pasar que no puedas ver con el objetivo seco dbil, o que puedas ver con el ste pero no con el seco fuerte. CAUSAS HABITUALES QUE NO SE VE CON EL SECO DEBIL Mala iluminacin: Cuando la iluminacin es pobre no se puede observar correctamente, y a veces creemos que son los lentes los averiados. Debe brillar la luz como si la estuvisemos viendo directamente a ojo. El ocular est sucio: Muchas veces, tocamos al ocular con los dedos, dejando nuestra huella digital en el mismo, y eso hace que no se vea correctamente. La simple limpieza te permitir ver correctamente. El preparado est sucio: si lo agarraste por el cubreobjetos sin darte cuenta, tambin quedarn tus huellas digitales. Limpialo y se acab el problema. No est bien alineado el objetivo seco dbil en el revolver: Los objetivos tienen una traba en el revolver. Cuando lo hagan girar, sentirs el chasquido de trabado. El cubreobjetos est mirando hacia abajo: Es un error frecuente. Retir el preparado y tocalo con los dedos, para garantizar que el cubreobjetos est mirando hacia arriba. El objetivo no es el seco fuerte: Muchas veces pasa que errneamente colocamos el objetivo de inmersin en lugar del seco fuerte. Siempre que coloques un objetivo, lee previamente el aumento que tiene y record los aumentos de cada uno.

Finalmente, tenemos que saber valorar la informacin que nos brinda cada uno de los lentes, para

poder explotar el mximo posible el tiempo que tengamos frente al microscopio. El objetivo seco dbil nos permite ver una visin ms panormica del preparado. Veremos estructuras en su entorno, y como los tejidos se acomodan en el rgano. No nos va a permitir ver detalles de una clula o estructuras en particular. As, podremos ver como est organizado el rgano. El objetivo seco fuerte nos permite ver una clula en particular, o como est armada una estructura (por ejemplo, ver un acino individualmente). Este objetivo disminuye la superficie que se ve comparada con el objetivo seco dbil (que muestra una superficie mayor) pero al aumentar la imagen nos muestra los detalles sutiles.

2--Tcnica Histolgica - Los fundamentos para su uso correcto durante el ao En cada clase prctica ustedes debern reconocer, por medio del uso de un preparado histolgico y un microscopio, cada una de las clulas y tejidos que conforman a todos los rganos del cuerpo humano. Por como se lee, suena muy complicado. La realidad es que podemos buscar simplificar los conceptos con el fin de poder comprender tal universo aparentemente infinito. Pues bien. Marquemos los 3 conceptos fundamentales que todo alumno debe tener en cuenta para poder encarar tranquilo esta materia: Todo se reduce a formas geomtricas La tcnica de H y E se basa en la unin (o no, ya veremos que algunas estructuras no se tien) de dos colorantes a los componentes de una clula Las clulas en el cuerpo cumplen una funcin especial. Para poder hacerlo, requieren tener ms desarrollada una o varias organelas por encima del resto. Y este desarrollo hace que se tia de un color u otro.(no olvidar que en realidad la coloracin final de una clula es el resultado del predominio de un color sobre otro, es decir, en la clula hay sustancias basfilas y acidfilas; las que predominen van a dar la coloracin final de dicha clula) TODO SE REDUCE A FORMAS GEOMETRICAS Todas las clulas, fibras, molculas tienen una forma geomtrica tridimensional, por ejemplo: cubos, esferas, ovoide, cilindros, etc. Pero tienen que tener en claro un concepto: La tcnica histolgica nos muestra imgenes bidimensionales de estructuras que en la naturaleza son tridimensionales. Es decir, si yo corto a un cubo lo voy a ver cuadrado; si corto a un cilindro lo veo redondo (si es un corte transversal) o rectangular (si es longitudinal); finalmente, si uno corta una esfera, se ver redonda la imagen. Hagan la prueba mental o dibjenla y vern que estoy en lo cierto. Por eso, si uno aprende a reconocer los contornos de una estructura y la

reconoce como una forma geomtrica, se nos facilita las cosas para poder comenzar a organizarnos. De todas maneras, tengan en cuenta que existe algo llamado incidencia de corte, por lo que podemos llegar a ver las estructuras bidimensionales segmentadas, es decir, a un cuadrado lo puedo llegar a ver por la mitad, a una esfera la puedo ver de menor tamao que la realidad, etc, Igual, no se preocupen: eso viene con la prctica! LA TECNICA DE H Y E USA A LA HEMATOXILINA Y A LA EOSINA En los preparados de rutina, teidos con la tcnica de hematoxilina-eosina, podemos observar (desde el punto de vista tintorial) tres tipos de estructuras: A) Basfilas B) Acidfilas (eosinfilas) C) Negativas (Se ven de color blanco por no ser coloreadas con esta tcnica) Qu significa que una estructura del preparado sea de color azulado? Las estructuras basfilas, por definicin poseen afinidad por los colorantes bsicos (baso = bsico; filo = afinidad). El colorante bsico del mtodo de hematoxilina-eosina es la hematoxilina. La hematoxilina es de color azulado - violcea Por consiguiente, toda estructura de un tejido que sea basfila se teir con hematoxilina, y obviamente se observar de color azulado - violcea. A su vez, sabemos que las sustancias bsicas presentan afinidad por las cidas, debido a su composicin qumica. Por ende, las estructuras basfilas (como el ncleo de la clula) son aquellas con una composicin fundamentalmente cida.

En resumen: Una estructura de la clula rica en molculas cidas (por ejemplo el ncleo) ser basfila, y por esta razn tender a unirse con un colorante bsico (hematoxilina) el cual por ser de color azulado - violceo, dar al ncleo su color en una imagen de microscopa ptica (siempre y cuando se halla tratado al tejido con la tcnica de hematoxilina y eosina).
Qu significa que una estructura del preparado sea de color rosado claro? Una situacin inversa a la recin descripta sucede con la eosina, el cual es el componente cido de la tcnica de hematoxilina y eosina, y que por esta razn tie las estructuras bsicas. La eosina es de color rojo plido o rosado. (No confundir con PAS, que si bien lo describiremos luego, adelantamos que es de color rosado intenso) De modo que una clula con estructuras que contienen gran cantidad de componentes bsicos (por ejemplo las protenas de la mitocondrias) tender a ser teida por un colorante cido (eosina), y por tal motivo se observar al microscopio ptico de color rosado plido (acidfila) Cmo se interpreta una estructura que no se tie? Puede existir la eventualidad de que un conjunto de clulas posean citoplasmas que presenten

imgenes negativas, es decir que se vean blancas o transparentes. Esto puede significar que no poseen afinidad, ni por la hematoxilina ni por la eosina, o simplemente, puede significar que la clula ha perdido parte de su contenido debido a los pasos de la tcnica histolgica; en esta ltima eventualidad, al haberse perdido el contenido, obviamente, ya no queda nada por teir. Este ltimo caso ocurre con los lpidos, los cuales no resisten los pasajes de alcoholes de la tcnica de hematoxilina y eosina; por consiguiente, cuando se colorea un preparado rico en lpidos, luego de este pasaje de alcoholes, los mencionados lpidos simplemente han desaparecido. Los lpidos se pueden teir con la tcnica de Sudan. Esta tcnica tie a los lpidos de color negro - parduzco. Toda estructura que no se tie se interpreta como rica en lpidos? No. Las estructuras con alto contenido de glcidos, como ser glucgeno, mucoprotenas o proteoglicanos, no poseen afinidad por la hematoxilina ni por la eosina, y por ende determinan la formacin de una imagen negativa con esta tcnica, a pesar de no ser eliminadas por los alcoholes. Se pueden teir a las mencionadas estructuras con la tcnica de PAS, la cual le da un color rosa intenso (ms intenso que la eosina). ATENCIN: La tcnica histolgica ha desarrollado colorantes muy especficos para observar los detalles ms sutiles de los preparados. Las mencionadas tcnicas escapan a los objetivos de este captulo, que intenta aportar CONCEPTOS GENERALES que faciliten la metodologa de diagnstico diferencial. Qu estructuras de la clula son basfilas? Todas las ricas en molculas cidas, por ejemplo: Ribosomas (ricos en CIDO ribonucleico) Retculo endoplasmtico rugoso (rico en ribosomas) Ncleo celular (rico en CIDO desoxirribonucleico) Qu estructuras de las clulas son acidfilas? Todas las ricas en molculas bsicasMitocondrias Protenas contrctiles (msculo) Vesculas de almacenamiento de protenas de exportacin (no todas) Proteinas (no todas): -Intracelulares: citoesqueleto -Extracelulares: colageno, elastina Qu estructuras son PAS positivas? Todas las ricas en glcidos Vacuolas de clulas caliciformes

Vesculas de glndulas mucosas Glucoclix Membrana basal de los epitelios Qu estructuras son sudanfilas? Todas las ricas en lpidos Vaina de mielina de las neuronas Gotas de inclusin de colesterol (en clulas de la corteza suprarrenal por ejemplo). Tejido adiposo que almacena lpidos como una gota de inclusin 3) LAS CLULAS EN EL CUERPO CUMPLEN UNA FUNCIN ESPECIAL. Los organismos pluricelulares como el ser humano han conseguido a lo largo de la evolucin que existan grupos de clulas que cumplan funciones especiales distintas al resto. Pero ojo, estas funciones permiten que el ser humano como un TODO funcione correctamente. Ahora bien, podemos decir que, si bien las funciones de una clula de un acino seroso y un plasmocito es distinta (una produce enzimas y la otra produce anticuerpos), ambas coinciden en una cosa. Ambas producen protenas. Y toda clula que produce protenas debe tener una maquinaria biosinttica especfica para producirla.

CONCLUSION: Si la clula produce protenas, siempre tiene que tener el ncleo de cromatina laxa con nucleolo evidente. La laxitud nos muestra que se est transcribiendo ARNm para producir una protena, y el nucleolo nos pone en evidencia que se estn armando ribosomas en esa zona, fundamentales para poder sintetizar esa protena.
Fijense entonces que la clula, si su funcin es producir protenas en forma activa, tiene que tener un ncleo de cromatina laxa con nucleolo evidente, y su citoplasma debe tener polirribosomas en gran cantidad (si la protena no se exporta) o un REG y un Golgi desarrollados (siempre que haya REG desarrollado hay un golgi importante), por lo que la clula finalmente, segn todo lo antedicho, tiene un citoplasma basfilo. Y esto es bueno, porque sabiendo cuales son las funciones de las organelas, si a nosotros nos preguntan como es una clula que produce protenas de exportacin, rpidamente podremos responder que se trata de una clula con ncleo de cromatina laxa, nucleolo evidente y citoplasma basfilo, donde se evidencia un REG desarrollado y un Golgi importante. De todas maneras, recuerden que existen clulas como el fibroblasto, que si bien tiene una actividad biosinttica muy importante, con un ncleo de cromatina laxa y nucleolo evidente, su citoplasma es acidfilo. Por que? Dato interesante para averiguar. Un desafo interesante es buscar clulas que produzcan protenas en los libros y ver que dice... Eso s, Lo que diferencia a una clula

productora de protenas de otra es la forma celular, la ubicacin y forma del ncleo y la protena que produce. El resto, son iguales. Y as como podemos hacer grupo de pertenencia de clula productora de protenas, podemos formar varios grupos ms. Por ejemplo, cmo seran las siguientes clulas cuyas funciones son: 1) Producir hormonas esteoroideas 2) Tener actividad macrofgica 3) Ser clula madre 4) Contraererse Recuerden finalmente una frase que me transmitieron hace tiempo, y que fue muy orientadora para poder comprender a los preparados histolgicos:

Todas las clulas tienen a todas las organelas, pero aquellas que se encuentran en mayor cantidad, definen a la funcin que la clula cumple en el organismo, y finalmente definen la tincin que tendr dicho citoplasma

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