METABOLISMO O BIOTRANSFORMACIN DE FRMACO Resumen: Las interacciones moleculares, la formacin y degradacin de sustancias, la

generacin de energa y su disipacin calrica, el intercambio de materia y energa con el entorno, constituyen la esencia bioqumica del ser humano, cuya actividad est vinculada a protenas especficas, que actan como catalizadoras acelerando los distintos procesos vitales. Estas molculas, denominadas enzimas, permiten que las sustancias endgenas como exgenas (xenobiticos) puedan ser asimiladas y/ finalmente desechadas. As, en lo que nos compete, las protenas enzimticas de las que se har mencin en el presente trabajo, la superfamila de citocromo p450 y b5, tienen gran importancia en el procesamiento de las drogas y de los frmacos, sobre todo en lo que respecta a su farmacocintica, es decir la accin del organismo sobre la sustancia, la cual est determinada por genes especficos cuyo polimorfismo da por resultado productos codificados que modifican la respuesta final en diferentes individuos de la misma especie (variablidad gentica). Palabras claves: enzimas, metabolismo, biotransformacin, citocromos p450, citocromo b5, polimorfismo gentico.
Summary: Molecular interactions, the formation and degradation of chemicals, power generation and heat dissipation, the exchange of matter and energy with the environment, are the essence of human biochemistry, whose activity is linked to specific proteins that act as catalysts accelerating the various life processes. These molecules, called enzymes, allow endogenous and exogenous substances (xenobiotics) can be assimilated and / finally discarded. Thus, what concerns us, the enzyme proteins which will be considered in the present study, the cytochrome p450 superfamila and b5 are of great importance in the processing of drugs and pharmaceuticals, especially as regards its pharmacokinetics, ie the body's action on the substance, which is determined by specific genes whose polymorphism results in products that modify the response coded end in different individuals of the same species (genetic variable). Keywords: enzymes, metabolism, biotransformation, cytochrome P450, cytochrome b5, genetic polymorphism.

INTRODUCCIN: Metabolismo:

Como seala Ochoa (2009), la palabra Metabolismo deriva del trmino griego Metabol que significa Cambio-Transformacin. Aristteles (384 a 322 a.C), gran filsofo, sabio y fisilogo griego agrega en su libro IV de la Metafsica, en cuanto a Metabol, que todos los seres naturales estn en movimiento, explica que dos son los cambios: a) Substancial, que implica Generacin (gnesis) y Corrupcin (de la substancia) y b) Accidental, que abarca la kinesis Cuantitativa (crecimiento y disminucin), Cualitativo (alteracin) y Locativo (traslacin). Al relacionar con lo que precede y procede en los procesos moleculares, se podra afirmar que el estagirita tena razn, y que desde tan temprano en la ciencia se intentaba explicar los por qu de la dinmica de los movimientos de la materia y energa de los seres, principalmente vivos y particularmente humanos, y comprender los cambios que condujeron a la instalacin de los procesos de biotransformacin molecular actual, gracias a mutaciones positivas y negativas, que, de acuerdo a Watson y Crick (1953) corresponden a cualquier cambio en la secuencia de nucletidos del ADN. Estas modificaciones saltatorias, espontneas o inducidas, van estructurando un patrn de caractersticas que se reflejan en las distintas rutas metablicas (secuencia ordenadas de reacciones qumicas Ochoa; 2009), por medio de las cuales el ser humano asimila elementos nutritivos de los alimentos o degrada material de desecho y como obtiene o traduce la energa.
Biotransformacin: Una vez que el xenobiotico o substancia que se absorbe diariamente por diferentes vas, interacta en los receptores y ejerce su efecto, se producen una serie de reacciones metablicas tendientes a concluir con la accin farmacutica y favorecer su eliminacin. Farmacocintica: rama de la farmacologa que estudia la cintica, es decir la forma cmo cambia la velocidad de las reacciones, en condiciones variables, a las que se ve sometido el frmaco en su paso por el organismo, que incluyen la absorcin, distribucin, metabolismo o biotransformacin y excrecin, a menudo asociados al anagrama ADME. En otras palabras, explica qu sucede con el frmaco desde el momento en el que es administrado hasta su total eliminacin.

FASES DE BIOTRANSFORMACIN Fase I de funcionalizacin: Introduccin o exposicin de un grupo funcional, que por lo regular culmina la actividad farmacolgica del frmaco o xenobiotico, aunque en ocasiones puede intensificarlo. Muchos de los profrmacos, es decir compuestos farmacolgicamente inactivos sintetizados con el fin de alcanzar en mayor medida los sitios de accin, se transforman en metabolitos activos por mecanismos como oxidacin, reduccin y principalmente hidrlisis de una amina o u ester (Goodam et Gilman;

2003). La finalidad de este primer paso es conseguir una molcula con mayor cantidad de grupos
polares y por ende ms hidrosoluble. Las reacciones se realizan principalmente en el sistema microsomal, mitocondrial o citosol de los hepatocitos, sin embargo tambin tenemos biotransformaciones en riones, vas gastronintestiales, piel y pulmones (Goodam et Gilman;

2003). Las enzimas participantes forman parte de la superfamilia de citocromos P-450 que incluye
una hemoprotena con actividad de oxigenasa y otra con funcin reductasa. y el P-450 IA oxida al alfa-benzo-pireno (Goodam et Gilman; 2003).. Existen varios Citocromos P-450 que se diferencian en su especificidad, por ejemplo, el P-450 IIE oxida al etanol

Figura 2. Tomado de:

A continuacin detallaremos los principales procesos y su localizacin. A nivel del Sistema Microsomal: - Oxidacin: inespecfica, realizada por medio de enzimas de la familia de citocromos p450 y b5, en xenobiticos de tipo hidrocarburos alifticos, aromticos, esteroides, prostaglandinas y cidos grasos (Goodam et Gilman; 2003). Se pueden tener formas inactivas del frmacos o, por defecto dos productos: y Formas activas Dizepam nordiazepam oxacepam

L-dopa y Metabolitos txicos

dopamina

Paracetamol altas dosis A nivel del Sistema Mitocondrial: - Oxidacin especfica: como la que se presenta en: y y MAO noradrenalina aldehdos

epxidos

Aldehidodeshidrogenasa

Citosol: - Oxidacin especfica: y y Acetildeshidrogenasa Xantinadeshidrogenasa alcohol xantinas

La reduccin se realiza exclusivamente por enzimas del Sistema Microsomal (REL), mientras que la hidrlisis se produce en el plasma, as como en diferentes regiones del tracto digestivo. Por esa razn, frmacos hidrosolubles no deben administrarse va oral.

Cuadro 1. Tomado de: http://superfund.pharmacy.arizona.edu/toxamb/c2-3-4-2.html

Fase II de biosntesis: Abarca una serie de reacciones de conjugacin catalizadas por enzimas citoslicas. En las cuales se agrega un grupo polar de tamao relativamente grande a los productos de las reacciones de la Fase I o a los xenobiticos, con la participacin de compuestos donadores de alta energa, debido a la termodinmica desfavorable de este tipo de reacciones (Goodam et Gilman; 2003).. El resultado final es un incremento de la hidrosolubilidad del xenobitico. Sistema microsomal: Glucuronoconjugacin: nica en sistema Microsomal consiste en agregar un grupo glucuronil en un grupo hidroxilo, amino o sulfhidrilo del frmaco, con la catlisis de la enzima UDP glucuronil transferasa, localizada en el retculo endoplsmico, y la donacin del grupo polar por UDP glucurnico. Los productos glucuronidados son muy solubles en agua y se excretan en la orina y en la bilis. La mayor parte de xenobioticos son substrato de esta enzima. A nivel mitocondrial: Sulfatacin: consiste en la transferencia de un grupo sulfato de PAPS (3-fosfoadenosil-5fosfosulfato) a un grupo hidroxilo o amino en el xenobitico, con la catlisis de enzimas

solubles citoslicas de tipo sulfotransferasas. El producto es un sulfato orgnico ionizado, muy soluble en agua que se excreta en la orina. Conjugacin o aminoacidacin: consiste en formar un enlace peptdico (covalente) entre el grupo amino de un aminocido, normalmente glicina o cido glutmico, y un carboxilo en el xenobitico. Los conjugados resultantes son eliminados en la orina. Acetilacin o Glutationizacin: consiste en la adicin de glutatin (GSH), a travs de su grupo sulfhidrilo (nucleoflico), a un carbn electroflico del xenobitico, con la catlisis de enzimas glutatin-S-transferasa, en donde el propio glutatin, un tripptido, Glu-GliCis,es cofactor de alta energa. El producto resultante se rompe en el rin produciendo el Cis-derivado, que se acetila para producir un conjugado del cido mercaptrico, el cual se excreta en la orina. Esta reaccin es importante en la destoxificacin de epxidos y perxidos Metilacin: posee el menor papel en la biotransformacin de xenobiticos, excepto en la destoxificacin de arsnico, cuyos compuestos inorgnicos transforman en metabolitos monometilados y dimetilados de menor toxicidad. La reaccin consiste en la transferencia de un grupo metilo a un hidroxilo, amino o sulfhidrilo, con la catlisis de enzimas metiltransferasas y donacin de grupos metilo es la SAM (S-adenosil-metionina). La metilacin del ADN es un proceso importante en fase G2 del ciclo celular.

Cuadro 2. Tomado de: http://superfund.pharmacy.arizona.edu/toxamb/c2-3-4-2.html

CITOCROMOS P450 Definicin: citocromo p450 (CPY o citocrome p450 en ingls) abarca una superfamilia de protenas enzimticas (biocatalizadores) tipo hemoprotenas, localizadas en las membranas del retculo endoplsmico de los hepatocitos y de otras clulas corporales. Como hemoprotena (Figura 1,) consisten de una parte proteica (apoprotena) y un grupo HEM prosttico (Fossi et al., 1994)

Figura 2. Tomado de: http://citocromop450.com/citocromos-p450-antecedentes-generales/

que tienen como sustrato a una amplia variedad de compuestos endgenos y exgenos.

Las

enzimas del CYP se han identificado en todos los reinos vivientes, es decir, en los animales, plantas, hongos, bacterias y arqueas. Se conocen ms de 11.500 protenas distintas CYP. Los citocromos P450 humanos son principalmente protenas asociados a membranas, localizados en la membrana interna de las mitocondrias o en el retculo endoplsmico celular. Los CYP metabolizan miles de compuestos endgenos y exgenos. Antecendetes Citocromo P450En un principio los diferentes laboratorios obtuvieron resultados distintos y se cre cierta confusin con respecto a las funciones y caractersticas de las enzimas citocromo P450. Esto fue aclarado cuando se determin que existan varios tipos de molculas de citocromos P450 se podan encontrar en individuos de una misma especie (Guengerich, 1993). Las enzimas citocromo P450 son los componentes terminales del sistema enzimtico oxigenasa de funcin mixta (MFO)(Livingstone,1993). La mayora de CYP pueden metabolizar sustratos mltiples, y muchos pueden catalizar reacciones mltiples, lo que explica su importancia central en el metabolismo de gran cantidad de molculas

endgenas y exgenas. En el hgado, estos sustratos incluyen las drogas y compuestos txicos, as como productos metablicos como la bilirrubina (un producto de degradacin de la hemoglobina).

Figura 3.. Citocromo Tomado de: http://citocromop450.com/

Las enzimas del citocromo P450 estn presentes en la mayora de los otros tejidos del cuerpo, y juegan un papel importante en la sntesis de hormonas y distribucin (incluyendo el estrgeno y la sntesis de testosterona y el metabolismo), la sntesis del colesterol y el metabolismo de la vitamina D. Los citocromos P450 hepticos son los ms ampliamente estudiados. La reaccin ms frecuente catalizada por este grupo enzimtico es la reaccin monoxigenasa, en la que se inserta un tomo de oxgeno molecular (O2) en un sustrato orgnico, mientras que el tomo resultante se reduce a agua (H2O). Esta accin permite deducir que las protenas enzimticas trabajan dentro de la cadena de transferencia de electrones en los sistemas contenedores de P450.

RH + O2 + 2H+ + 2e

ROH + H2O

Familias del citocromo P450 en el ser humano: Incluyen aproximadamente 18 familias y 43 subfamilias, cuyos elementos son codificados por 57 genes y 59 subgenes. En la tabla 1 se exponen las familias y superfamilias ms importantes:

Tabla 1. Superfamilia de Citocromos p450.

Familia CYP1 Funcin Metabolismo de drogas y esteroides (especialmente estrgenos) Metabolismo de drogas y esteroides Miembros 3 subfamilias, 3 genes, 1 pseudogen Nombres CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1

CYP2

13 subfamilias, 16 genes, 16 pseudogenes

CYP3

CYP4

Metabolismo de drogas y esteroides (incluyendo testosterona) Metabolismo del cido araquidnico

1 subfamilia, 4 genes, 2 pseudogenes 6 subfamilias, 11 genes, 10 pseudogenes

CYP2A6, CYP2A7, CYP2A13, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C18, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1, CYP2F1, CYP2J2, CYP2R1, CYP2S1, CYP2U1, CYP2W1 CYP3A4, CYP3A5, CYP3A7, CYP3A43 CYP4A11, CYP4A22, CYP4B1, CYP4F2, CYP4F3, CYP4F8, CYP4F11, CYP4F12, CYP4F22, CYP4V2, CYP4X1, CYP4Z1 CYP5A1 CYP7A1, CYP7B1

CYP5 CYP7

CYP8 CYP11 CYP17 CYP19 CYP20 CYP21 CYP24 CYP26 CYP27

Tromboxano A2 sintetasa Biosntesis de las sales biliares (7-alpha hidroxilasa del ncleo esteroideo) Variada Biosntesis de esteroides Biosntesis de esteroides 17-alfa hidroxilasa Biosntesis de esteroides Desconocida Biosntesis de esteroides Degradacin de la vitamina D Hidroxilasa del cido retinico Variada

1 subfamilia, 1 gen 2 subfamilias, 2 genes

2 subfamilias, 2 genes 2 subfamilias, 3 genes 1 subfamilia, 1 gen 1 subfamilia, 1 gen 1 subfamilia, 1 gen 2 subfamilias, 2 genes, 1 pseudogen 1 subfamilia, 1 gen 3 subfamilias, 3 genes 3 subfamilias, 3 genes

CYP8A1 (prostaciclin sintetasa), CYP8B1 (biosntesis de sales biliares) CYP11A1, CYP11B1, CYP11B2 CYP17A1 CYP19A1 CYP20A1 CYP21A2 CYP24A1 CYP26A1, CYP26B1, CYP26C1 CYP27A1 (biosntesis de sales biliares), CYP27B1 (vitamina D3 1alfa hydroxylase), CYP27C1 (funcin desconocida) CYP39A1 CYP46A1

CYP39 CYP46 CYP51

1 subfamilia, 1 gen, 3 CYP51A1 (lanosterol 14-alfa de pseudogenes AUTORA: Valle Ana (2011) con referencia de http://metallo.scripps.edu/PROMISE/CYTB5.html

7-alfa hidroxilacin del 24-hidroxicolesterol Colesterol 24hidroxilasa Biosntesis del colesterol

1 subfamilia, 1 gen 1 subfamilia, 1 gen

Citocromos b5 Definicin: Se definen como una familia de protenas de electrotrasnferencia que tienen uno o dos grupos HEM b, no covalentemente unido a la protena. El ligando de hierro Hem es proporcionado por un residuo de histidina. CYP b poseen una amplia gama de propiedades e importante funcin en diferentes procesos de xido reduccin (redox).

Figura 3. Tomado de: http://metallo.scripps.edu/PROMISE/CYTB5.html

Se presentan en s variantes microsomal y mitocondrial, que son liposolubles, mientras que las de los eritrocitos y otros tejidos animales son solubles en agua . La familia de protenas citocromo b5 incluye hemoprotena con dominios covalentemente asociadas a otros dominios redox, como flavocitocromo b2 (lactatodeshidrogenasa), sulfito oxidasa, nitrato reductasa, CYP desaturasa. Tabla 2. Superfamilia de Citocromos b5 de acuerdo a su perfil de alineacion
Superfamilia Homologa de dominio Pfam PFCL 3D alineacin -

00026 ; cytochrome b 5 00006 ; cytochrome b 5 PF00173 ; heme_1 00026 ; citocromo b 5 core 00006 ; citocromo b 5 PF00173 ; heme_1 00071 ; L lactate dehydrogenase hilos 00071 ;-lactato deshidrogenasa L 00132 ; nitrate reductase 00132 , la nitrato reductasa 00143 ; sulfite oxidase 00143 ; sulfito oxidasa 03768 ; stearoylCoA desaturase 03768 ; desaturasa stearoylCoA AUTORA: Valle Ana (2011) con referencia de http://metallo.scripps.edu/PROMISE/CYTB5.html

ASPECTOS GENTICOS DE BIOTRANSFORMACIN DE FRMACOS De acuerdo al polimorfismo gentico que determina diferencias fenotpicas en el metabolismo se ha clasificado a los individuos en dos grandes grupos: Metabolizadores extensos o rpidos Metabolizadores limitados o lentos

Todas las deficiencias en el metabolismo de un frmaco se heredan con carcter autosmico recesivo. Se menciona que el primer polimorfismo gentico de biotransformacin medicamentosa fue descrito hace ms de 30 aos u corresponde a la N-acetilacin de isoniazida (Goodam et Gilman; 2003), en donde se evidencin una menor concentracin de acetiltransfersa en acetiladores lentos. En ese sentido, se menciona que aproximadamente el 50% de los estadounidenses caucsicos y negros y entre el 60 y 70% de los europeos del norte poseen este fenotipo, en contraste con el 10% de asiticos. Este hecho se correlaciona a la incidencia de cncer vesical en el fenotipo de acetilador lento respecto a la incidencia coln rectal en acetiladores rpidos (Goodam et Gilman; 2003). Otro polimorfismo referido por los autores se vincula al metabolismo oxidativo de algunos frmacos, entre los que encontramos el dficit de hidroxilasa de debrisoquina por mutacin del gen CYP2D6, que genera una protena truncada o de menor actividad enzimtica. Esta mutacin se ha encontrado en un 5 a 10% de estadounidenses caucsicos y apenas el 1% de asiticos. Inclusive, se investiga la relacin entre el metabolizador extenso de CYP2D6 y neoplasias pulmonares o vesciales (Goodam et Gilman; 2003). Asimismo, existe un polimorfismo gentico en la hidroxilacin estereoselectiva de s-mefentoina , con una mutacin de un nico par de bases con crezcin de sitio de separacin aberrante e introduccin de codn de cesacin en la posicin 4 (Goodam et Gilman; 2003), que abarca a un 3 a 5% de estadounidenses caucsicos y 20% de asiticos. REFERENCIAS; a) Convencionales:

CAMPBELL, M.; O. FARRELL, S. (2004). Bioqumica: Ciencias e ingenieras. 4ta Edicin. Editorial Cengage Learning

CASTELLS S.; HERNNDEZ-PREZ M. (2007). Farmacologa en enfermera. Editorial Elsevier Espaa DEVLIN T.; DABN, M. et al. (1999). Bioqumica: libro de texto con aplicaciones clnicas. Volumen 1. 3era Edicin. Editorial Revert Pp. 291 GOODMAN, L.; GILMAN, A. (2003). Las bases farmacolgicas de la teraputica. Edicin 10. Editorial McGraw-Hill Interamericana. HORTON, R.; MORAN, R.; OCHS, D.; SCRIMGEOUR, G. (1995). Bioqumica. Editorial Prentice Hall Hispanoamericana LEHNINGER, A. (1989). Bioqumica: las bases moleculares de la estructura y funcin celular. Edicin2. Editorial Omega MELLONI, J.; DOX, I.; EISNER, G. (1983). Diccionario mdico ilustrado. Editorial Medical.

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