Quim. Nova, Vol. 27, No. 5, 807-812, 2004 ESTRATGIAS PARA AUMENTO DE SENSIBILIDADE EM ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS Fbio R. P.

Rocha* Instituto de Qumica, Universidade de So Paulo, CP 26077, 05513-970 So Paulo - SP Leonardo S. G. Teixeira Departamento de Engenharia e Arquitetura, Universidade Salvador, Av. Cardeal da Silva, 132, 40220-141 Salvador - BA Recebido em 6/5/03;aceito em 19/2/04; publicado na web em 17/6/04

STRATEGIES TO INCREASE SENSITIVITY IN UV-VIS SPECTROPHOTOMETRY. Spectrophotometry is one of the most widespread analytical techniques due to its simplicity, reliability, and low-cost instrumentation for both direct measurements and coupled to other techniques or processes such as chromatography, electrophoresis and flow analysis. However, the application is often limited by sensitivity. This article describes some advances that greatly improve the performance of spectrophotometric measurements, especially in order to increase sensitivity, including the employment of liquid-core waveguides and solid-phase spectrophotometry. Keywords: UV-VIS spectrophotometry; long-pathlength spectrophotometry; solid-phase spectrophotometry.

INTRODUO Espectrofotometria na regio UV-VIS do espectro eletromagntico uma das tcnicas analticas mais empregadas, em funo de robustez, custo relativamente baixo e grande nmero de aplicaes desenvolvidas1. Consultando-se o banco de dados do Analytical Abstracts, verifica-se ca. 40000 ocorrncias relacionadas espectrofotometria2. Os procedimentos envolvem medidas diretas de espcies que absorvem radiao, medidas aps derivao qumica e acoplamento a diversas tcnicas ou processos, como cromatografia, eletroforese e anlises em fluxo. Alm disso, constitui-se em uma importante ferramenta para determinao de parmetros fisico-qumicos, tais como constantes de equilbrio e de velocidade de reaes. Apesar da extensa utilizao, vrias inovaes recentes relacionadas s medidas espectrofotomtricas ainda so pouco conhecidas. Com respeito ao aspecto instrumental, notvel a evoluo desde os procedimentos baseados em comparaes visuais e dos fotmetros empregando filtros para a seleo de comprimentos de onda at os equipamentos mais recentes, que empregam arranjos de fotodetectores. Esses permitem a aquisio de espectros de absoro em intervalos de tempo da ordem de milsimos de segundos e so disponveis, inclusive, em verses miniaturizadas acopladas a computadores do tipo palm-top3. A espectrofotometria fundamentada na lei de Lambert-Beer, que a base matemtica para medidas de absoro de radiao por amostras no estado slido, lquido ou gasoso, nas regies ultravioleta, visvel e infravermelho do espectro eletromagntico. Para medidas de absoro de radiao em determinado comprimento de onda, temse: A= log(Io/I) = bc, onde A a absorvncia, Io a intensidade da radiao monocromtica que incide na amostra e I a intensidade da radiao que emerge da amostra. A absortividade molar () uma grandeza caracterstica da espcie absorvente, cuja magnitude depende do comprimento de onda da radiao incidente. O termo c a concentrao da espcie absorvente e b, a distncia percorrida pelo feixe atravs da amostra4. Muitas das inovaes referentes espectrofotometria consistem em estratgias para aumento de sensibilidade, visando ampliao da

faixa de aplicao da tcnica e permitindo, em alguns casos, que medidas em concentraes da ordem de nmol L-1 sejam efetuadas. Considerando-se a lei de Lambert-Beer, possvel reunir as alternativas para aumento de sensibilidade em trs grupos. O primeiro refere-se ao emprego de estratgias para a formao de produtos com maiores absortividades molares, incluindo a sntese de novos reagentes e a formao de agregados micelares5. Em um segundo grupo, encontram-se estratgias para aumento do caminho ptico, permitindo que medidas sejam efetuadas com celas de at 5 m de caminho ptico6. O terceiro grupo refere-se a procedimentos que exploram a concentrao da espcie a ser detectada previa ou simultaneamente deteco7. Algumas das alternativas para aumento de sensibilidade em medidas espectrofotomtricas so discutidas neste artigo. PRODUTOS COM MAIOR ABSORTIVIDADE MOLAR A constante de proporcionalidade que relaciona a absorvncia com o caminho ptico e a concentrao das espcies absorventes, denominada absortividade molar (), empiricamente assume valores mximos da ordem de 105 L mol-1 cm-1, para absoro de radiao na regio UV-VIS. A magnitude de depende da seo transversal de captura (S) da espcie e da probabilidade de ocorrncia da transio eletrnica (P), relacionada absoro de radiao, da maneira descrita pela Equao 18. Considerando-se esta equao, pode-se planejar modificaes estruturais nos reagentes, de modo a maximizar a seo transversal de captura e/ou a probabilidade de ocorrncia de transies eletrnicas, visando o aumento da absortividade molar da espcie. = 8,7x1019 PxS (1)

*e-mail: frprocha@iq.usp.br

Para a determinao espectrofotomtrica de espcies na regio UV-VIS, normalmente necessrio o uso de reagentes para a converso da espcie de interesse em uma forma que permita a medida de absoro de radiao com maior sensibilidade e/ou seletividade. Sendo assim, espcies que absorvem fracamente podem ser convertidas em compostos com maior absortividade molar, visando a determinao de menores quantidades do analito9,10. A sensibilidade e a seletividade de reagentes orgnicos usados para determinao espectrofotomtrica podem ser modificadas pela

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incorporao de diferentes substituintes na molcula do reagente cromognico. Por exemplo, dentre os vrios reagentes disponveis para determinaes espectrofotomtricas de metais, os compostos heterocclicos contendo a estrutura ,-diamina (-N=C-C=N-), conhecida como grupo funcional ferrona, so uma das classes de reagentes cromognicos mais estudadas. Os compostos mais conhecidos desta classe so a 1,10-fenantrolina e a 2,2-bipiridina, que formam quelatos estveis e intensamente coloridos com ferro(II) e cobre(I). Vrias modificaes nas estruturas desses reagentes foram realizadas com o objetivo de melhorar a sensibilidade nas determinaes espectrofotomtricas e alguns exemplos so mostrados na Tabela 1. Da mesma forma, podem ser citados os reagentes da famlia da cuprona, conhecidos pela alta seletividade para a determinao de cobre(I). Exemplos de reagentes dessa famlia, que geram complexos de cobre com diferentes absortividades molares so 2,2-biquinolina ( = 6220 L mol-1 cm-1 em 546 nm), neocuprona ( = 7950 L mol-1 cm-1 em 545 nm) e batocuprona ( = 13900 L mol-1 cm-1 em 479 nm)11. Outra estratgia que pode ser empregada para aumento da sensibilidade em determinaes espectrofotomtricas a formao de complexos ternrios. Reaes entre um complexo AB e um terceiro componente C no necessariamente ocorrem pelo mecanismo de substituio regido pela diferena energtica das ligaes A-B e A-C (I). O terceiro componente pode vir a fazer parte do produto, formando um complexo ternrio (II) 12: AB + C AB + C AC + B ABC (I) (II)

Por exemplo, na interao do complexo azul de cobre(II)-piridina com nions salicilato (Sal2-) poderia se esperar a formao do composto verde, salicilato de cobre, de acordo com a reao: [Cu2+.piridina2] + Sal2CuSal + 2 piridina

Entretanto, em solues contendo cobre(II), piridina e salicilato, um complexo azul formado, com caractersticas espectrais diferentes dos compostos binrios e com absortividade molar muito maior, devido formao de um complexo ternrio12. Da mesma maneira, ferro(III) forma um complexo amarelo com EDTA em ampla faixa de pH, enquanto complexos estveis com perxido de hidrognio no so usualmente observados. Entretanto, um complexo violeta formado a partir da mistura de ferro(III), EDTA e H2O2 em pH 10. Diferentes complexos ternrios so formados com vandio, resultando em aumento de sensibilidade para a determinao do on metlico13-15. Na reao de vandio(IV) com o 2-(2-tiazolilazo)-pcresol (TAC), por exemplo, h a formao de um complexo verde com absoro mxima em 624 nm e absortividade molar de 2,36 x 103 L mol-1 cm-1. Por outro lado, na presena de cido ascrbico, o complexo formado possui colorao vermelha e absoro mxima em 525 nm, com absortividade molar de 2,11 x 104 L mol-1 cm-1 15. A formao de complexos ternrios pode ocorrer atravs de associao inica, como ocorre com complexo catinico formado entre um on metlico e a 1,10-fenantrolina com o nion vermelho de bromo-pirogalol 16. Entretanto, sistemas micelares envolvendo surfactantes tm sido mais comumente usados17, visto que essas substncias modificam algumas propriedades reacionais, podendo me-

Tabela 1. Efeito de alteraes estruturais em ligantes sobre as absortividades molares de complexos de ferro e cobre5 Ligante (L) MAX/nm 435 2,2-bipiridina 435 1,10-fenantrolina 7000 510 11100 CuL2+ /(L mol-1 cm-1) 4500 MAX/nm 522 FeL32+ /(L mol-1 cm-1) 8650

454 neocupronaa

7950

457 batofenantrolina

12140

533

22350

434

480000

395

140000

sulfonato de ,,,-tetrafenilporfirinab a. solvente: lcool isoamlico; b. complexos com estequiometria 1:1

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lhorar a sensibilidade e seletividade18. A presena de surfactantes pode ocasionar a formao de um novo complexo com diferentes propriedades espectrais (usualmente com maior absortividade molar), alm de poder proporcionar tambm maior estabilidade e seletividade quando comparado com o complexo binrio19. Estudos sobre os efeitos de surfactantes na formao de complexos permitem concluir que maiores modificaes espectrais ocorrem quando a carga do surfactante responsvel pela formao da micela oposta do on do complexo formado entre o reagente cromognico e o analito20. Por exemplo, o surfactante catinico brometo de N-cetil-N,N,Ntrimetil amnio (CTAB) usado na determinao espectrofotomtrica de estanho com violeta de pirocatecol (PCV). Um complexo vermelho formado entre o PCV e o estanho(IV) em pH 2,5, com absortividade molar estimada em 6,5 x 104 L mol-1 cm-1 em 555 nm21. A presena de CTAB promove a formao de um complexo verde com absortividade molar de 1,0 x 105 L mol-1 cm-1 em 660 nm22. Outro exemplo do uso do CTAB a determinao de urnio com 2(2-tiazolilazo)-p-cresol (TAC). A presena de CTAB promove um aumento de sensibilidade, com absortividades molares estimadas em 1,31 x 104 L mol-1 cm-1 e 5,79 x 103 L mol-1 cm-1 na presena e na ausncia do surfactante, respectivamente19. Outros exemplos do emprego de surfactantes em procedimentos espectrofotomtricos com alta sensibilidade so apresentados na Tabela 21,23-26. ESPECTROFOTOMETRIA DERIVATIVA A espectrofotometria derivativa consiste na representao das derivadas da absorvncia em relao ao comprimento de onda, em funo do comprimento de onda4. A diferenciao da lei LambertBeer permite obter as Equaes 2-4, que mostram que as derivadas dnA/dn so sempre proporcionais s concentraes do analito, sendo as aplicaes analticas baseadas neste fato. dA/d = c b (d/ d) d2A/d2 = c b (d2/d2) dnA/dn = c b (dn/ dn) (2) (3) (4)

O aumento de sensibilidade observado na espectrometria derivativa baseado na observao de que a amplitude da derivada n da absorvncia em relao ao comprimento de onda (Dn= dnA/d) inversamente proporcional largura de banda do espectro ordinrio (W)28,32: Dn 1/Wn (5)

Por esta razo, a sensibilidade em mtodos derivativos depende no somente dos parmetros instrumentais e da forma de medida do sinal (mtodo da tangente, pico-a-pico ou zero-a-pico), como tambm das caractersticas do espectro de absoro ordinrio28,29. A ordem da derivada deve ser cuidadosamente selecionada, visto que usualmente verifica-se um aumento do nvel de rudo com o aumento da ordem de derivao33. AUMENTO DE CAMINHO PTICO A sensibilidade de medidas espectrofotomtricas tambm pode ser incrementada atravs do aumento do caminho ptico da cela de medida, devido ao conseqente aumento no nmero de espcies absorventes que interagem com o feixe de radiao. Esse artifcio freqentemente sugerido em procedimentos espectrofotomtricos de rotina34 sendo, entretanto, o caminho ptico limitado a ca. 5 cm. Essa limitao surge devido excessiva atenuao do feixe de radiao com o aumento do caminho ptico, devido reflexo e refrao pela soluo e pelas paredes da cela. O transporte de radiao por distncias relativamente longas eficientemente efetuado empregando-se cabos de fibras pticas. Estes dispositivos consistem de um ncleo constitudo por um material com ndice de refrao n1, recoberto por um material (revestimento) que apresenta menor ndice de refrao (n2). O conjunto usualmente recoberto por uma capa protetora, normalmente de plstico. Ambos os materiais devem ser transparentes, sendo usual o emprego de vidro ou polmeros. Se um feixe de radiao atinge o revestimento com ngulo 1, parte da radiao refletida dentro do cabo e parte transmitida com ngulo de refrao 2. Os ngulos de incidncia (1) e de refrao (2) so relacionados atravs da lei de Snell (Equao 6). Como sen 2 1, a equao 6 define um conjunto de ngulos de incidncia (cone de aceitao), que implicaro na completa reflexo do feixe de radiao no interior do cabo de fibra ptica, com perdas desprezveis por transmisso atravs do revestimento. Convm ressaltar que a capacidade da fibra ptica em coletar radiao externa (e portanto o cone de aceitao) depende do ndice de refrao do meio externo. n1 sen 1 = n2 sen 2 sen 2 = n1/n2 sen 1 (6)

Os mtodos de derivao espectral envolvem diferenciao eletrnica ou por software e so disponveis em muitos espectrofotmetros UV-VIS27. Em geral, a derivao espectral visa determinaes simultneas, bem como aumento de seletividade. Entretanto, freqentemente observa-se aumento de sensibilidade e melhoria do limite de deteco28,29. Um exemplo a determinao de nquel com azul de hidroxinaftol (HNB)30. Nquel(II) reage com HNB em pH 5,7 formando um complexo vermelho estvel, com mximo de absoro em 563 nm. O limite de deteco foi estimado em 23 g L-1, quando se utilizou a espectrofotometria ordinria e 6 g L-1 aplicando a primeira derivada. Aumento de sensibilidade foi tambm observado na determinao de nquel usando Br-PADAP como reagente cromognico31. Limites de deteco de 1,8 g L-1 e 0,2 g L-1 foram estimados utilizando espectrofotometria ordinria e derivativa, respectivamente.

O caminho ptico de medida pode ser aumentado empregandose celas que se comportem como guias de onda, de maneira similar ao que ocorre com os cabos de fibra ptica. Para tanto, o material do qual a cela construda deve apresentar ndice de refrao inferior ao do lquido no qual a absorvncia ser medida35. Entretanto, os

Tabela 2. Exemplos de procedimentos baseados na formao de complexos ternrios com surfactantes Analito Ni Al Co Fe V Reagente Fenilfluorona Cromoazurol S 5-Br-PADAP Cromoazurol S Eriocromocianina R Surfactante CPa HCP
b

MAX / nm 540 640 586 645 575

/ (L mol-1 cm-1) 100000 125000 92400 135000 79000

Ref 1 23 24 25 26

Triton X-100 CTAc CTAc

a. CP - cloreto de cetilpiridinio; b. HCP- cloreto de hexadecilpiridinio e c. CTA- brometo de cetiltrimetilamnio.

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materiais usualmente empregados para a construo de celas espectrofotomtricas apresentam ndices de refrao superiores ao da gua, dificultando o uso para a construo de guias de onda para medidas em solues aquosas. A estratgia adotada inicialmente foi o aumento do ndice de refrao dos lquidos, atravs do emprego de solventes orgnicos ou adio de quantidades elevadas de solutos inertes35. Nesse sentido, foi proposto o emprego de celas constitudas por capilares de vidro com at 50 m de comprimento, preenchidas por solventes orgnicos com ndice de refrao superior ao do vidro (nvidro = 1,474). Estas celas permitiram um aumento de sensibilidade de 300 a 3000 vezes para a determinao de fosfato, iodeto, cobre e mercrio em solues de dissulfeto de carbono (n = 1,62)36. Apesar de engenhosas, essas alternativas so de pouca aplicao prtica pois, usualmente, as medidas espectrofotomtricas so efetuadas em solues aquosas diludas. Outra alternativa explorada foi o emprego de celas capilares de ao inox (1 m) ou vidro revestido por fitas de alumnio (0,5-1 m), para favorecer a reflexo da radiao no interior do tubo e minimizar as perdas durante o transporte atravs da cela. Desta forma, foi possvel aumentar 300 vezes a sensibilidade, alcanando limite de deteco de 5 ng L-1 para a determinao de fosfato pelo mtodo do azul de molibdnio37. O emprego de guias de onda para medidas em solues aquosas diludas (ndice de refrao em torno de 1,33) tornou-se mais usual com o desenvolvimento de um fluoropolmero amorfo, denominado Teflon AF-2400, que apresenta ndice de refrao de 1,2938. Esses tubos podem ser empregados para construo de celas com longo caminho ptico, atravs de configuraes similares mostrada na Figura 1. Desta forma, foram desenvolvidos procedimentos espectrofotomtricos para a determinao de diversas espcies, resultando em aumento de sensibilidade de at duas ordens de grandeza e limites de deteco da ordem de nmol L-1 (Tabela 36,39-45). O caminho ptico de medida tambm pode ser aumentado empregando-se celas de multi-reflexo. Embora essa estratgia seja bastante empregada para anlise de gases, permitindo alcanar caminhos pticos efetivos superiores a 100 m em medidas espectroscpicas no infravermelho46, o emprego para medidas em lquidos ainda limitado. Alguns exemplos incluem a construo de celas para medidas por eletroforese capilar47 e anlise por injeo em fluxo48, com aumento de sensibilidade de 40 e 1,7, respectivamente. Celas construdas com capilares de slica fundida47 ou vidro borossilicato48 espelhados por um depsito de prata foram empregadas. Regies dos capilares foram protegidas previamente ao depsito, visando obter janelas para entrada e sada do feixe de radiao proveniente de um laser de He-Ne 47 ou de um diodo emissor de luz48. O nmero de reflexes internas foi estimado em 44 47 e 19 48 e o efeito do ngulo

Figura 1. Arranjo experimental empregado para medidas espectrofotomtricas com longo caminho ptico: a- cabos de fibra ptica; b- adaptadores na forma de T com volume interno reduzido empregados para alinhamento do feixe de radiao e para entrada e sada de solues; c- guia de onda (tubo de Teflon AF-2400); d- vista ampliada de parte do adaptador para entrada de soluo: o cabo de fibra ptica (1) inserido no interior do guia de onda (2) para facilitar o alinhamento do feixe de radiao. A soluo introduzida pelo espao entre o guia de onda e o cabo de fibra ptica em seu interior

de incidncia da radiao foi avaliado e discutido. SEPARAO E CONCENTRAO DO ANALITO Devido s limitaes de sensibilidade de metodologias com deteco espectrofotomtrica, freqentemente necessrio recorrer a etapas preliminares para separao e concentrao dos elementos desejados, com conseqente aumento de sensibilidade. Dentre essas tcnicas, pode-se citar a extrao lquido-lquido, precipitao e extrao slido-lquido. Na extrao lquido-lquido, um solvente no qual a espcie de interesse apresente maior solubilidade empregado para favorecer a transferncia de fase da soluo da amostra para o solvente. Conseqentemente, ocorre a separao e, como o solvente usualmente empregado em quantidades menores que a amostra, a concentrao do analito. No caso da determinao de ons metlicos, muitos reagentes orgnicos podem ser usados para a formao de complexos, possibilitando a transferncia de fase. O 1-(2-piridilazo)-2-naftol (PAN), por exemplo, pode ser utilizado para extrao de Fe(III), Cr(III), Mn(II), Ni(II), Cu(II) e Zn(II), entre outros, atravs de seus quelatos poucos solveis em meio aquoso, empregando solventes orgnicos apropriados, para posterior quantificao por espectrofotometria UV-visvel49. Devido baixa solubilidade de vrios quelantes, estes reagentes tambm podem ser usados em procedimentos de separao e pr-concentrao por precipitao. Por exemplo, quando uma soluo alcolica de PAN adicionada a uma amostra aquosa, o reagente se cristaliza e precipita vrios complexos metlicos por co-cristalizao50. Esses complexos podem

Tabela 3. Procedimentos com alta sensibilidade empregando espectrofotometria com longo caminho ptico Espcie Cr(VI) Mo(VI) Fe(II) Fe(II) NO2NO3H 2S Cu(II) Fenis Cr(VI) Al(III) Caminho ptico (cm) 500 500 447 200 450 450 160 440 100 50 50 Faixa de resposta (nmol L-1) 1-30 2-30 0,5-10 1-50 < 30 < 30 1-160 100-1000 < 900 < 30000 Sensibilidade (L mol-1) 22,3 0,1 27,0 0,1 10,6 0,2 4,11 20,4 0,3 18,4 0,8 2,40 0,08 6,13 0,02 Limite de deteco (nmol L-1) 0,2 0,6 0,2 0,1 0,5 1,5 5 0,4 10 100 180 Ref 6 6 39 40 41 41 42 43 44 45 45

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ser posteriormente solubilizados para determinao por espectrofotometria UV-visvel. Entre os procedimentos de separao e concentrao para a determinao por espectrofotometria, a extrao em fase slida tem sido a mais utilizada, devido simplicidade e aos melhores fatores de enriquecimento do analito51. A separao baseada na soro do analito na fase slida, que pode estar associada a um reagente orgnico, e eluio com solvente apropriado. Elevados fatores de concentrao podem ser alcanados pelo emprego de um grande volume de amostra e eluio com um pequeno volume de solvente. MEDIDAS EM FASE SLIDA Medidas de absorvncia podem realizadas diretamente em um suporte slido, no qual o analito foi retido. A primeira proposta neste sentido foi feita por Yoshimura e colaboradores52, que empregaram uma resina de troca inica com difenilcarbazida, 1,10fenantrolina, tiocianato de amnio ou Zincon imobilizados na fase slida para a determinao de cromo, ferro, cobalto e cobre, respectivamente. Desde ento, o uso da espectrofotometria em fase slida (EFS) vem crescendo devido simplicidade, facilidade de automao e baixos limites de deteco que podem ser alcanados7,53. Na EFS, uma matriz slida utilizada para reteno da espcie de interesse, permitindo a concentrao do analito, que acumulado em um pequeno volume da fase slida54-57. Alm do aumento de sensibilidade, outras vantagens podem ser observadas, como a integrao de etapas de reao, reteno e deteco; menor consumo de reagentes e aumento de seletividade. A reteno do analito na fase slida pode ocorrer devido interao direta da espcie com a fase slida58,59, reteno de um produto da reao entre o analito e um reagente60-62, ou reteno do analito por um reagente previamente imobilizado no suporte slido63,64. A aplicao de uma destas estratgias depender da espcie qumica a ser analisada, do suporte slido e da reao envolvida. Assim como os procedimentos de pr-concentrao em fase slida, a EFS pode ser implementada em batelada ou em fluxo. Os procedimentos em batelada envolvem o contato direto do analito com a fase slida em um recipiente sob agitao, para posterior transferncia para a cela de medida. As medidas so geralmente efetuadas em mais de um comprimento de onda, visando compensar diferenas de empacotamento da fase slida. Nos procedimentos em fluxo, utiliza-se uma coluna ou uma cela que possa ser adaptada diretamente no caminho ptico de um espectrofotmetro, sendo as medidas efetuadas simultaneamente reteno da espcie de interesse. Desta forma, o tempo de anlise consideravelmente reduzido e as

diferenas de empacotamento da fase slida entre as medidas so evitadas65,66. Alguns pr-requisitos desejveis para emprego de um sistema para medidas por espectrofotometria em fase slida so63,67: reversibilidade, estabilidade da fase slida no meio de trabalho, transparncia do suporte slido e cintica de reteno rpida. O ltimo fator particularmente importante em sistemas em fluxo, que usualmente trabalham com tempos de residncia curtos. Neste caso, a reteno rpida do analito permite fatores de extrao maiores e, conseqentemente, maior sensibilidade, sem comprometer a freqncia de amostragem. A sensibilidade das medidas por EFS depende do caminho ptico ocupado pela fase slida e do volume de amostra utilizado na determinao. Alguns exemplos do aumento de sensibilidade em relao espectrofotometria convencional e dos limites de deteco que podem ser alcanados so apresentados na Tabela 468-72. Frenzel e Krekler60 compararam trs estratgias para a determinao espectrofotomtrica de fenis. A primeira envolveu pr-concentrao do produto da reao entre fenol e 4-aminoantipirina (4-AAP) por extrao com CCl4. A segunda foi baseada na extrao/concentrao do produto utilizando slica funcionalizada C18, eluio com metanol e posterior determinao. No terceiro procedimento, a absorvncia foi monitorada diretamente na fase slida. Os limites de deteco encontrados foram 8, 11 e 0,4 g L-1, respectivamente. Este exemplo ilustra o aumento de sensibilidade quando se utiliza EFS em comparao com procedimentos para pr-concentrao em fase slida, nos quais o analito deve ser eludo previamente medida, sendo inerente a perda de sensibilidade por diluio. OUTRAS ALTERNATIVAS Os procedimentos descritos anteriormente referem-se medida da quantidade de radiao absorvida pela amostra, denominados mtodos de transmisso ou espectrofotometria convencional. Apesar desta estratgia ser a mais amplamente utilizada, existem mtodos alternativos baseados na medida da potncia absorvida pela amostra, denominados mtodos calorimtricos. Esses procedimentos so inerentemente mais sensveis que a espectrofotometria convencional, apresentando limites de deteco da ordem de 10-7 mol L-1, de duas a trs ordens de magnitude inferiores aos obtidos por medidas diretas de absoro1,73. As duas principais tcnicas deste grupo so a espectrofotometria de lentes trmicas e a espectrofotometria fotoacstica. Na espectrofotometria de lentes trmicas, so medidas alteraes de ndice de refrao da soluo do analito, em funo da variao de temperatura que ocorre devido absoro de radiao.

Tabela 4. Exemplos de procedimentos com alta sensibilidade explorando espectrofotometria em fase slida Espcie Zn(II) S2Cu(II) Fe(III) V(IV) Cr(VI) PO43sulfatiazol V(IV) Reagente/suporte 1-(2-tiazolylazo)-2-naftol / slica funcionalizada C18 N,N-dimetil-p-fenilenediamina/Fe3+ / slica funcionalizada C18 1-(2-piridilazo)-2-naftol / resina aninica (Dowex 50W-X4) SCN- / resina aninica (Dowex 1-X2) Alaranjado de xilenol / resina aninica AG 1-X2 1,5-difenilcarbazida / resina catinica AG 50W-X2 Molibdato de amnio; verde de malaquita / Sephadex LH-20 Reteno direta / Sephadex SP C-25 gel Eriocromo cianinaR / Sephadex DEAE A-25 Limite de deteco (g L-1) 10 1,7a 1 10 0,8b 0,1c 0,2 20 3 0,6 Vamostra (mL) 0,6 0,5 0,9 2 5 4,4 4,4 250 250 1000 Ref 56 57 63 64 68 69 70 71 72

a. Limite de deteco 30 vezes inferior ao obtido em procedimento em soluo empregando mesmo volume de amostra; b. sensibilidade 280 vezes superior obtida por medidas em soluo e c. sensibilidade 160 vezes superior obtida por medidas em soluo.

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Alm da elevada sensibilidade, possvel efetuar medidas com pequenos volumes de amostra e a tcnica apresenta faixa dinmica de resposta consideravelmente maior que a espectrofotometria convencional1,74. A espectrofotometria fotoacstica (ou optoacstica) explora a expanso trmica da amostra irradiada e pode ser aplicada a gases, slidos e lquidos. Descries detalhadas dos conceitos, instrumentao e aplicaes destas tcnicas podem ser encontradas em artigos de reviso73-75. CONCLUSES E PERSPECTIVAS As estratgias descritas neste artigo permitem aumentar consideravelmente a sensibilidade de procedimentos espectrofotomtricos e, conseqentemente, ampliar a aplicao da tcnica a anlise de traos. Desta forma, os procedimentos espectrofotomtricos podem ser revisitados e caractersticas favorveis como robustez, baixo custo e simplicidade, podem torn-los competitivos com outras metodologias dedicadas determinao de espcies qumicas em baixas concentraes. Algumas das estratgias descritas, como o aumento do caminho ptico e as medidas diretas em fase slida, so de aplicao geral e a disseminao de seu uso depende, principalmente, da disponibilidade comercial de instrumentao adequada. Celas construdas a partir de guias de onda so comercialmente disponveis. Estas celas apresentam caminho ptico de at 500 cm e volumes relativamente reduzidos (ca. 2,5 L/cm), sendo adequadas para medidas espectrofotomtricas inclusive em sistemas de anlises em fluxo. As medidas em fase slida, por outro lado, tm sido implementadas empregando espectrofotmetros dedicados a medidas em soluo, o que resulta em limitaes da quantidade de suporte slido que pode ser empregada. Apesar dessas limitaes poderem ser superadas em laboratrios de pesquisa, por exemplo pela construo de celas especiais ou pelo emprego de fontes de radiao com maior potncia, a disponibilidade de equipamentos dedicados certamente importante para ampliar a sua utilizao. AGRADECIMENTOS Os autores agradecem ao CNPq, Finep e FAPESP pelas bolsas e apoio financeiro. REFERNCIAS

35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42. 43. 44. 45. 46. 47. 48. 49. 50. 51. 52. 53. 54. 55. 56. 57.

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