Apuntes de Inmunologia

APU TES DE I MU OLOGIA leonalcon@hotmail.com Profra.: Da. Mara Dolores Maldonado TEMA 1. INTRODUCCIN AL ESTUDIO DE LA INMUNOLOGA (I) 18.02.
10 INMUNIDAD NATURAL. Concepto de inmunologa, caractersticas y breve historia.- El trmino inmunidad deriva de la voz latina immunitas, que se refiere a la proteccin frente a los procedimientos judiciales que se ofreca a los senadores romanos durante el ejercicio de su cargo. Histricamente inmunidad ha significado proteccin contra la enfermedad infecciosa. La inmunidad se define en trminos cientficos como la resistencia a las enfermedades, concretamente a las enfermedades infecciosas. La inmunologa es la ciencia que estudia el sistema inmune (SI). Las clulas y las molculas responsables de la inmunidad forman el sistema inmunitario y la respuesta colectiva y coordinada frente a sustancias extraas se denomina respuesta inmunitaria. La funcin fisiolgica del SI es la defensa contra microorganismos infecciosos, de lo que se infiere la prevencin de infecciones y la erradicacin de las mismas provocadas por dichos microorganismos. Sin embargo las sustancias extraas no infecciosas tambin pueden desencadenar respuestas inmunitarias. Por consiguiente, una definicin ms completa de la inmunidad es la de una reaccin frente a sustancias extraas, incluidos los microorganismos y macromolculas tales como protenas y polisacridos, con independencia de las consecuencias fisiolgicas o patolgicas de dicha reaccin. La inmunologa es una ciencia con aspectos mdicos y metodolgicos. El SI es muy complejo y su alteracin produce inmunodeficiencias, enfermedades autoinmunes, alergias, tumores. Inmunodeficiencias: Son un grupo de procesos patolgicos heredados o adquiridos, debidos a la ausencia o funcionamiento defectuoso de algunos elementos celulares o moleculares de la inmunidad innata o adquirida. Ejemplo: en la enfermedad granulomatosa crnica, se forman mltiples granulomas como resultado de una eliminacin defectuosa de las bacterias por las clulas fagocticas. Esta enfermedad es causada por un defecto en el sistema de NADPH oxidasa de las enzimas que generan el radical superxido implicado en la eliminacin de las bacterias. Enfermedad autoinmune: Enfermedad cuya patologa se debe a respuestas inmunitarias adaptativas contra antgenos propios. Ejemplo: Artritis reumatoide, esclerosis mltiple, lupus eritematoso Alergias: Es una reaccin sintomtica exagerada a un antgeno ambiental, normalmente inocuo. Resulta de la interaccin entre el antgeno y los anticuerpos o las clulas T sensibilizadas o primed generadas por la exposicin previa al mismo antgeno.
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Tumores: El SI detiene la aparicin de tumores, ya que chequea el crecimiento de las clulas, pero una alteracin de esta funcin puede provocar la aparicin de un tumor. Ejemplo: leucemias y linfomas. El estudio de la inmunologa es relevante por tres aspectos: 1 Aspectos clnicos. Es una ciencia capaz de experimentar y hacer observaciones clnicas, extrayendo conclusiones de ellas. 2 Aspectos mdicos. El SI a veces funciona por exceso y aparecen las alergias, y otras por defecto apareciendo las inmunodeficiencias. 3. Aspectos metodolgicos. Se ha conseguido crear herramientas, como los anticuerpos monoclonales, que permiten la identificacin de clulas y tejidos, e incluso se pueden utilizar en otras ciencias de la vida como la farmacologa para la administracin de frmacos que nos interesa que acten en un lugar concreto y especfico del organismo y no en otro, es decir, que el anticuerpo se cargara con el frmaco y actuara como una bala mgica que se dirige al punto concreto donde se quiere que ese frmaco tenga una intervencin teraputica. El origen de la inmunologa se atribuye a Edward Jenner (1749-1823), quien descubri en 1796 que la viruela vacuna proporcionaba proteccin frente a la viruela humana, enfermedad a menudo letal (como se pudo comprobar en la pandemia de 1.519 en Europa y en los nativos americanos cuando esta enfermedad fue exportada al Nuevo Mundo). Jenner tom lquido de una pstula de una mujer vaquera que ordeaba vacas y lo inocul a un nio de ocho aos, James Phipps, quien desarroll la enfermedad de la viruela vacuna de forma leve. Dos meses despus volvi a inocularlo, pero esta vez con materia procedente de pstulas de viruela humana y el nio no desarroll la enfermedad. En la dcada de 1880, Louis Pasteur (1822-1895) elabor una vacuna contra el clera de las gallinas y desarroll una vacuna frente a la rabia que obtuvo un xito espectacular tras su primer ensayo en un nio que haba sido mordido por un perro rabioso. Pasteur utiliz el virus de la rabia inactivado (cultivado en un medio en el cual perdi su virulencia) y se convirti en el primer gran inmunlogo experimental. Inmunidad innata y adaptativa.- La defensa frente a los microorganismos est mediada por las reacciones tempranas de la inmunidad innata y las respuestas tardas por la inmunidad adaptativa. La inmunidad innata comprende los mecanismos de defensa bioqumicos y celulares presentes incluso antes de que se produzca la infeccin y que estn preparados para responder con rapidez ante esta. El sistema inmunitario innato o natural (SIN) constituye la primera barrera defensiva que tiene el organismo. Son los primeros sensores de la infeccin. Estos mecanismos reaccionan slo frente a microorganismos patgenos y no frente a sustancias no infecciosas y responden esencialmente de la misma manera ante infecciones repetidas. Cuando el SIN no es capaz de inactivar o frenar el proceso infeccioso se activa el sistema inmunitario adaptativo (SIA). Se denomina inmunidad adaptativa porque se produce como una respuesta a la infeccin y se adapta a sta. En contraste con la inmunidad innata, la inmunidad adaptativa es estimulada por la exposicin a agentes infecciosos. Esta forma de
inmunidad aumenta en magnitud y en capacidad de defensa con cada exposicin sucesiva a un microorganismo determinado. Las caractersticas que definen la inmunidad adaptativa son: - Especificidad. Los antgenos inducen una respuesta especfica contra ellos mismos, provocada por la interaccin con receptores antignicos especficos. - Memoria. Esta caracterstica es la base de la adquisicin activa de inmunidad, y supone una capacidad mayor de respuesta inmunitaria en el segundo o posteriores contactos con el antgeno (respuesta ms rpida y contundente). - Tolerancia. El sistema inmunitario debe eliminar o inactivar cualquier clula capaz de reconocer y responder frente a lo propio. Inmunidad natural o innata, barreras defensivas.- Los microorganismos al penetrar en las superficies epiteliales del cuerpo por primera vez, se encuentran inmediatamente con barreras formadas por clulas y molculas que pueden desencadenar una respuesta inmunitaria innata. Estas barreras pueden ser: Barreras fsicas o anatmicas. La piel (epidermis y dermis) y las mucosas. La piel es la primera barrera defensiva. Tiene un pH cido (cidos grasos) producido por las glndulas sebceas, que es efectivo contra las infecciones producidas por hongos. En personas que han perdido la piel, por ejemplo en individuos con quemaduras, pueden producirse infecciones cutneas y desencadenar un shock. Personas que se lavan mucho pierden este pH y pueden sufrir patologas de la piel como por ejemplo fornculos. Barreras bioqumicas. Producto de las secreciones mucosas (lgrimas, jugos gstricos, mucosa respiratoria y mucosa urogenital). Las mucosas producen sustancias que evitan la colonizacin de patgenos. La lgrima y la saliva poseen lisozimas implicadas en la lisis bacteriana. El jugo gstrico tiene un pH cido, por lo que individuos que toman sustancias alcalinas de forma habitual y lo pierden son ms propensos a padecer enfermedades gstricas infecciosas. La flora saprfita del intestino y de la vagina impide que estos rganos sean colonizados por agentes patgenos, ya que compiten con los microorganismos patgenos tanto por el espacio como por los nutrientes y adems pueden producir sustancias antibacterianas. La espermina del semen tiene capacidad antisptica. Barrera fagoctica. En la barrera fagoctica se incluyen las clulas del sistema monoctico o macrofgico (M/). Se llaman monocitos cuando circulan por el torrente sanguneo y se habla de macrfagos cuando actan en los tejidos. Segn el tejido en el que se encuentran, los macrfagos se denominan: - Cerebro: clulas microgliales. - Pulmones: macrfagos alveolares. - Hgado: clulas de Kupffer. - Riones: fagocitos mesangliales renales. - Articulaciones: clulas A sinoviales. - Clulas natural killers ( K). Son linfocitos de apariencia grande, habitualmente con granulacin citoplasmtica, y su accin consiste en lisar ciertas clulas tumorales. Las clulas NK son importantes en la inmunidad innata contra los virus y otros patgenos
intracelulares, as como en la citotoxicidad mediada por clulas T y dependientes de anticuerpos (ADCC). Posee receptores KIR, KAR y de la fraccin Fc de las IgG. En condiciones normales la NK chequea a las clulas del organismo y si reconoce a una clula como propia se activa el receptor KIR (inhibicin) y sigue con su camino. Pero si una clula NK se encuentra en su chequeo continuo del organismo una clula tumoral o infectada por un virus, se activa el receptor KAR. ste inhibe al receptor KIR, y como consecuencia se activa la clula NK y libera sus grnulos, los cuales llevan perforina. Las perforinas perforan la clula tumoral o infectada creando poros que alteran la smosis de la clula. Si no es suficiente la accin de las perforinas, se liberan granzimas. Las granzimas penetran por los poros formados por las perforinas y destruyen la clula. - Sistema del complemento. Consta este sistema de un conjunto de molculas plasmticas implicadas en distintas cascadas bioqumicas cuyas funciones son potenciar la respuesta inflamatoria, quimiotaxis sobre fagotitos, facilitar la fagocitosis por recubrimiento del microorganismo (a este fenmeno se le llama opsonizacin) con una de las protenas del complemento (la C3b), lo que facilita la fagocitosis y dirigir la lisis de clulas incluyendo la apoptosis. Est formado por unas 20 protenas sricas que controlan la inflamacin, y son sintetizadas principalmente en el hgado, aunque en los tejidos inflamados pueden producirlas los macrfagos y tambin en el rin. - Protenas de fase aguda. Se trata de protenas, sintetizadas en el hgado, que se encuentran en la sangre poco despus del inicio de una infeccin en respuesta a la liberacin de interleucinas IL1 e IL6 por parte del macrfago. Estas protenas participan en las primeras fases de la defensa del husped contra la infeccin. Las protenas de fase aguda actan como opsoninas, que son molculas que facilitan la fagocitosis ya que sus receptores se encuentran en los fagocitos, y tambin activan al sistema de complemento. - Interfern alfa y beta (I F e I F). Son molculas producidas por leucocitos y fibroblastos respectivamente, pero tambin en otras clulas. Son citoquinas que pueden inducir a las clulas no infectadas e infectadas a resistir la replicacin vrica. Se producen en fases muy precoces de la infeccin y constituyen la primera lnea defensiva frente a muchos virus. Los INF desempean tres funciones principales. En primer lugar, inducen resistencia a la replicacin vrica activando los genes celulares que destruyen el ARNm, inhibiendo por tanto la traduccin de protenas vricas y algunas del husped. En segundo lugar, inducen la expresin del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase I en la mayora de las clulas no infectadas del cuerpo. En tercer lugar, activan las clulas NK que destruyen las clulas infectadas por el virus de forma selectiva. - Interleucinas. Son citoquinas producidas por los leucocitos. Inducen el crecimiento y diferenciacin de linfocitos y clulas precursoras hematopoyticas. Muchas interleucinas conectan la respuesta inmunitaria innata con la adaptativa.
- Factor de necrosis tumoral (T F). Se trata de una citoquina secretada por las clulas T CD4 inflamatorias y es directamente citotxica para algunas clulas. Las IL-1, IL-6 y el TNF son tambin pirgenos endgenos que aumentan la temperatura del cuerpo, lo cual parece contribuir a eliminar las infecciones, actuando en el hipotlamo y alterando la regulacin de la temperatura del cuerpo. En las clulas musculares y adipositos altera la movilizacin de la energa a fin de aumentar la temperatura del cuerpo. A temperaturas elevadas, la replicacin vrica y bacteriana disminuye, por lo que la respuesta inmunitaria adaptativa opera de forma ms eficiente.
Cuando penetra un patgeno, los fagocitos (leucocitos o glbulos blancos que fagocitan partculas extraas) son las primeras clulas en activarse y liberan citoquinas. Entre las citoquinas liberadas estn la IL-1, la IL-6 y el TNF. La IL-1 y el TNF actan de forma simultnea. Estas citoquinas tienen una accin local y una reaccin sistmica o general, la cual tienen lugar si la accin local no es suficiente para frenar el avance del patgeno Barrera inflamatoria. La inflamacin se define tradicionalmente por los cuatro signos principales que son: calor, dolor, rubor (enrojecimiento) y tumor (hinchazn), siendo todos ellos consecuencia de los efectos que producen las citoquinas y otros mediadores inflamatorios, al actuar sobre los vasos sanguneos locales. Los macrfagos que encuentran bacterias en los tejidos son inducidos a liberar citoquinas que incrementan la permeabilidad de los vasos sanguneos, permitiendo que lquidos y protenas pasen al interior de los tejidos. Tambin producen quimioquinas que dirigen la migracin de los neutrfilos (micrfagos o polimorfos nucleares PMN) al sitio de inflamacin. La capacidad de adhesin de las clulas endoteliales de los vasos sanguneos tambin cambia, de tal forma que los neutrfilos se adhieren a la pared del vaso sanguneo y son capaces de migrar a travs de la pared del mismo (diapdesis). Se ha demostrado que los neutrfilos son los
primeros que penetran en los tejidos desde la sangre, seguidos de los macrfagos La acumulacin de lquido y clulas en el sitio de infeccin causa enrojecimiento, hinchazn, calor y dolor, sntomas que en conjunto se denomina inflamacin. Los neutrfilos y los macrfagos son las principales clulas inflamatorias. En fases posteriores de la respuesta inmunitaria, los linfocitos (son los leucocitos de menor tamao) activados tambin contribuyen a la inflamacin. Las citoquinas IL-1, IL-6 y TNF son proinflamatorias. Por ejemplo, cuando se produce una picadura de mosquito, se da una respuesta local en la zona de la picadura: rubor, hinchazn, calor y dolor, es decir, se da una inflamacin local. La IL-1 y el TNF actan sobre los vasos sanguneos ms prximos, provocando vasodilatacin. Adems, hay una migracin de polimorfos nucleares hacia la zona afectada (diapdesis), los cuales salen junto con lquidos. Si con todo esto se resuelve el proceso, nos quedamos aqu. Pero si el proceso no se resuelve se produce una gran cantidad de citoquinas que se dirigen no slo a los vasos colindantes, sino a todo el cuerpo, de modo que actan sobre la grasa, el msculo y el hipotlamo para aumentar la temperatura corporal. Estructura molecular de la inmunidad innata.- El sistema inmune posee una serie de molculas denominadas PRR (Pattern Recognition Receptor) o receptor de reconocimiento de patrones, que son las denominadas protenas codificadas en lnea germinal. Estas protenas reconocen a los PAMP (Pathogen Associated Molecular Patterns) o patrones moleculares, que son molculas o estructuras muy conservadas en familias enteras de patgenos microbianos. Los PRR son poco especficos para el reconocimiento de los agentes patgenos y se clasifican en: - Secretados: funcionan como opsoninas - Endocticos: van en la superficie de los fagocitos como receptores - Sealizadores: activan las vas de seales de traduccin en el interior de la clula y se conocen como TLR (Toll Like Receptors) en humanos y como Toll en la mosca, que inducen la liberacin de citoquinas (IL) y seales coestimulatorias para activar a las clulas de la inmunidad innata para que se ponga en marcha la respuesta inmune. Las TLR son protenas de membrana que reconocen molculas estructurales de bacterias y activan la respuesta del SI. Resumen de los mecanismos de la inmunidad innata: a) Los fagocitos reconocen a los microbios que han penetrado: fagocitan, engullen y destruyen junto con los lisosomas (respuesta inmune sencilla). b) Las clulas NK van chequeando todas las clulas a su paso y cuando localiza la clula infectada por un virus, se activa y descarga sobre ella todo el contenido de sus grnulos, provocando perforaciones en la membrana y alteraciones electrolticas que produce la muerte de la clula. c) Protenas del complemento: actan como opsoninas, o neutralizando y matando al agente infeccioso. Si no es as el receptor del complemento tipo 3 provoca la atraccin de leucocitos al foco de infeccin. Por otro lado, las protenas del complemento activan la fagocitosis para que otras clulas del sistema inmune innato engullan a los agentes patgenos y los destruyan en su interior.
d) Citoquinas o IL. Los agentes infecciosos van a ser reconocidos por los receptores de los fagocitos que se activan y liberan IL, TNF (que activa a los neutrfilos encargados de la inflamacin), e IL-12 que activa a las NK. Estas liberan INF que a su vez activa la capacidad bactericida de los macrfagos.
TEMA 2. INTRODUCCIN AL ESTUDIO DE LA INMUNOLOGA (II) Respuesta inmune especfica o adquirida (caractersticas).- Cuando la inmunidad innata no puede controlar el proceso infeccioso, enva informacin a las clulas de la inmunidad especfica para que se activen. Existe interconexin entre ambas respuestas inmunes, pero la inmunidad adquirida tarda algn tiempo en ponerse en marcha. Un agente patgeno se puede adherir a un epitelio, pero si ste se encuentra ntegro el patgeno se desprende y no habr infeccin. Cuando hay un epitelio debilitado, el patgeno puede penetrar al interior del tejido, una vez dentro se activa la respuesta inmune innata y en concreto llega al foco de la infeccin local una gran cantidad de clulas fagocticas e inflamatorias, que tienen el objetivo de destruir el agente patgeno para neutralizar y paralizar la infeccin. Cuando el patgeno penetra por la piel en el organismo, porque la respuesta innata y la barreras defensivas no son suficientes, se activan los fagocitos de la piel, los cuales se dirigen por va linftica hasta el ganglio linftico ms prximo con el patgeno en su interior para presentrselo a los linfocitos T y B, que tardan una semana en activarse y transformarse en clulas T efectoras o en clulas plasmticas, que por va linftica se dirigen a la infeccin para destruirla y acabar con el proceso infeccioso. Los linfocitos ya sensibilizados migran al foco de infeccin, donde llevan a cabo su funcin (los linfocitos B no llegan a este foco, sino que llegan slo los anticuerpos).
Las caractersticas de la inmunidad especfica son: Especificidad: el sistema inmune tiene la capacidad para dar una respuesta especfica a cada agente patgeno. Al nacer tenemos aproximadamente un repertorio inmune de 1091011 especificidades. Diversidad: presenta unos 1011 receptores de diferente especificidad, existiendo incluso receptores para patgenos con los que no nos vamos a encontrar en toda nuestra vida. Memoria: la primera vez que somos colonizados por un patgeno, se forma una respuesta inmune primaria. Si nos ponemos en contacto nuevamente con dicho patgeno la respuesta es ms rpida y contundente, porque el sistema inmune guarda
memoria del primer contacto. En la manipulacin de esta memoria estn basadas las vacunas.
No se conoce bien cual es el mecanismo responsable de la memoria, existiendo dos teoras sobre este mecanismo: - Las clulas de memoria son de larga vida y permanecen en estado de reposo en sangre. Con la nueva infeccin se activan y se da la respuesta inmune secundaria. - Las clulas de memoria se mantienen activas debido a que se mantienen los antgenos en complejos inmunes, producindose la respuesta secundaria cuando se d un incremento de los niveles de antgeno. Esta teora se ha descartado porque supone un alto coste. Autolimitacin: el sistema inmune no puede estar activo permanentemente. Una vez que se activa lo hace con el objetivo de destruir al agente patgeno, y una vez que ste desparece las clulas vuelven al estado de reposo, ya que cuando la respuesta inmune ha sido suficiente hay receptores que informan al sistema inmune para que cese la activacin. A veces el sistema inmune no consigue eliminar al patgeno y entonces lo asla, formndose los granulomas: procesos inflamatorios crnicos que originan tejido necrtico alrededor del patgeno. En ocasiones los granulomas se abren al exterior, pero otras veces no se abren, y si dan problemas debe usarse ciruga para extraerlos. Autotolerancia: el sistema inmune debe tener cuidado para no destruir las clulas propias. Para lograr esto las clulas del sistema inmune especfico deben ser previamente educadas. Los linfocitos B se educan o maduran en la mdula sea y los linfocitos T en el timo, de modo que los linfocitos autorreactivos, es decir, los que reconocen y destruyen nuestros antgenos, son destruidos. Tambin se produce una reeducacin en los rganos linfoides secundarios. En ocasiones el individuo puede desarrollar enfermedades autoinmune (artritis reumatoide o lupus eritematoso), en las cuales el SI afecta al propio organismo. Especializacin: el sistema inmune monta en cada ocasin la respuesta inmunolgica ms adecuada segn el patgeno y la va de entrada usada por ste. Tipos de respuesta inmune especfica: humoral y celular.- La inmunidad especfica se puede dividir en respuesta inmune celular y respuesta inmune
humoral. La primera es llevada a cabo por los linfocitos T, los cuales llevan todos un cluster de diferenciacin CD3. La respuesta inmune humoral est mediada por molculas de la sangre y las secreciones mucosas, denominadas anticuerpos, que son producidas por los linfocitos B, los cuales se transforman en clulas plasmticas con capacidad de liberar anticuerpos (IgM, IgE, IgA, IgD e IgG). Ambos tipos de linfocitos, T y B, provienen de la mdula sea, concretamente de una estirpe linfoide. Los linfocitos B y sus receptores, los anticuerpos (Ig), forman un complejo binario anticuerpo-antgeno para reconocer al antgeno (Ag). Los linfocitos T forman complejos trimoleculares porque para reconocer al antigeno necesitan del MHC (complejo mayor de histocompatibilidad) para que se lo presente. Ambos tipos de linfocitos tienen diferentes caractersticas: CARACTERSTICAS Integracin con antgenos LI FOCITO B LI FOCITO T Complejo binario formado Complejo trimolecular que por Ig de superficie y Ag comprende: TCR, pptido y molcula MHC S No No S Protena, polisacrido, Slo protena lpido Accesible, hidroflico, Interno, desnaturalizado, mvil, a menudo pptido pptido lineal capaz de conformacional unirse a MHC
Unin a antgenos solubles Participacin de MHC Naturaleza qumica del antgeno Propiedades del epitopo (determinante Ag)
Epitopo: Parte del antgeno que es reconocible por el receptor del anticuerpo. Paratopo: Parte del receptor que se une especficamente al epitopo. Fases de la respuesta inmunitaria.- Se puede distinguir tres fases: Fase de reconocimiento: los linfocitos B y T deben reconocer al patgeno para activarse. Este reconocimiento ocurre en los rganos linfoides secundarios (ganglios linfticos, bazo y tejido linfoide asociado a las mucosas), donde se encuentran afincados estos linfocitos. Los linfocitos reconocen especficamente a los patgenos mediante sus receptores de superficie, el BCR (B Cell Receptor) y el TCR (T Cell Receptor). Ambos receptores pertenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas. Una vez se activan, los linfocitos salen de estos rganos linfoides y migran hacia el tejido infectado. Fase de activacin: existe una teora que sostiene que se requieren dos seales para la activacin de los linfocitos, tanto los linfocito B como los T. Una de estas seales procedera del patgeno, lo que se ve apoyado por la presencia de clulas presentadoras de antgenos, y la otra seal procedera de las molculas coestimuladoras (protenas de membrana o secretadas por los macrfagos), las cuales refuerzan la unin entre el linfocito T y la clula presentadora de antgenos. La ausencia de estas molculas hace que el linfocito no se active correctamente, y se habla de anergia. Una vez activado, en el interior del linfocito se realizan una serie de modificaciones: aumenta el tamao y la sntesis de protenas, se da proliferacin celular y los linfocitos se diferencian en clulas efectoras (linfocito B transformado en clula plasmtica y linfocito T actuando sobre la
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clula infectada). Adems, pueden aparecer clulas de memoria (linfocitos T activos pero no efectores). Una vez que se han formado las clulas efectoras, estas pueden atacar directamente al antgeno, o se reservan en el torrente circulatorio como clulas de memoria las cuales tienen una vida muy larga, y son muy importantes en el caso de una segunda infeccin por el mismo patgeno. En esta propiedad se basa la creacin de las vacunas. Fase efectora o de resolucin: su obligacin es la eliminacin del patgeno y que el individuo recupere su equilibrio homeosttico, por lo que al final de la respuesta inmune habr una gran cantidad de apoptosis. De las clulas que han intervenido en esta respuesta muchas morirn, por lo que los restos y las clulas deterioradas deben eliminarse. Los macrfagos son los encargados de fagocitar las clulas viejas o que han intervenido en la respuesta inmune y han quedado lesionadas. Linfocitos B. Anticuerpos y sus funciones biolgicas.- Los linfocitos B, se denominan as porque en los mamferos maduran en la mdula sea (Bone Marrow), aunque en las aves maduran en la bolsa de Fabricio. Son clulas que poseen receptores de membrana especficos, como son las inmunoglobulinas (Ig), denominados BCR (B cell receptor), capaces de reconocer antgenos. Cuando los linfocitos B se activan, se convierten en clulas plasmticas, responsables de la produccin de inmunoglobulinas solubles, que son los anticuerpos especficos que reconocen antgenos en su forma nativa participando de esta forma en la denominada inmunidad humoral. Los anticuerpos son los receptores de membrana de los linfocitos B. Pero estos anticuerpos pueden quedarse en la membrana de estas clulas o ser secretados, por lo que tambin pueden reconocer antgenos mviles. Cuando se activa el linfocito B, se liberan anticuerpos al medio para que puedan neutralizar al agente patgeno y facilitar la fagocitosis. Los anticuerpos pueden actuar como opsoninas recubriendo al microorganismo, facilitando con ello la fagocitosis, pero tambin pueden provocar directamente la lisis del patgeno junto con la activacin de opsoninas del complemento. Un antgeno es una sustancia extraa que desencadena la formacin de anticuerpos y puede causar una respuesta inmune. La definicin moderna abarca a todas las sustancias que pueden ser reconocidas por el sistema inmune adaptativo, bien sean propias o ajenas. Los anticuerpos pueden reconocer como antgeno a casi todos los tipos de molculas biolgicas, sin embargo los linfocitos T slo reconocen pptidos.
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Unicamente las macromolculas son capaces de estimular a los linfocitos B para que inicien las respuestas inmunolgicas humorales. Las molculas que estimulan respuestas inmunolgicas se denominan inmungenos. Las sustancias qumicas pequeas pueden unirse a los anticuerpos pero no pueden activar a los linfocitos B por s mismas, por lo que no son inmungenos. Para generar anticuerpos de sustancias qumicas especficas pequeas en el laboratorio, se suelen fijar estas a macromolculas antes de la inmunizacin. En estos casos, la sustancia qumica se denomina hapteno y la macromolcula transportador. El complejo hapteno-transportador, a diferencia del hapteno aislado, puede actuar como un inmungeno. Linfocitos T. Tipos y funciones biolgicas.- Se denominan as porque maduran en el timo. Son los responsables de la llamada inmunidad celular especfica. Presentan en su membrana receptores denominados TCR (T cell receptor). Los linfocitos T son incapaces de reconocer al antgeno si no se lo presentan las molculas del MHC. Para que se d este reconocimiento debe formarse un complejo trimolecular: TCR, pptido o antgeno y MHC. Los linfocitos T reconocen secuencias peptdicas cortas y pueden ser de dos tipos: - Linfocitos T helper o cooperadores. Estos linfocitos actan sobre antgenos del espacio intercelular y presentan la glucoprotena CD4 en su membrana. Las clulas presentadoras de antgenos (CPA) son poblaciones celulares especializadas en captar microorganismos y otros antgenos exgenos mediante endocitosis o fagocitosis y procesarlos en fragmentos. Estos fragmentos son presentados a los linfocitos Th, mediante la colaboracin de molculas MCH clase II, y proporcionan seales que estimulan la proliferacin y la diferenciacin de linfocitos. Una clula presentadora de antgenos, por ejemplo un fagocito, degrada el antgeno en su interior celular. Respecto a los linfocitos Th, cuando una bacteria es fagocitada por un macrfago, sus protenas se cargan a nivel del RE en molculas de MHC de clase II, se transportan y se muestran al exterior. Los linfocitos Th reconocen al complejo MHCIIpptido, lo cual hace que se activen. Una vez activos, los linfocitos pasan a ser clulas efectoras que liberan citoquinas, aumentando con ello la capacidad bactericida de la clula presentadora del antgeno. Cuando la CPA es un macrfago, se activa la sntesis de enzimas lticas que son vertidas al fagolisosoma, consiguindose as la destruccin del patgeno.
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- Linfocitos T citotxicos. Estos linfocitos actan sobre antgenos del espacio intracelular y presentan en su membrana la glucoprotena CD8. Destruyen directamente clulas cancerosas o infectadas especialmente por virus. Cuando una clula es infectada, la clula presentadora de antgeno (CPA) procesa las protenas vricas y las carga en las molculas del MHC clase I, las cuales son producidas por el retculo endoplsmico. Estas molculas migran en una vescula de secrecin desde el RE hasta la membrana, de modo que se muestra el antgeno al linfocito T citotxico o linfocito Tc, que se activa al reconocer con su TCR al complejo MHCI-pptido. De esta forma la clula seala que est infectada. El linfocito Tc activado libera sustancias txicas, como las perforinas y otras molculas, que actan sobre la clula husped infectada destruyndola. En consecuencia, detiene las infecciones vricas, entre otras.
Hiptesis de la seleccin clonal.- La enunciaron Talmage, Lederberg y Burnet. Recoge esta hiptesis los postulados de la teora de la seleccin natural. Postula que los linfocitos B portan en su membrana celular receptores que son anticuerpos. Cada linfocito B tiene un nico tipo de anticuerpo. Cuado penetra un antgeno en el organismo slo se unirn a l los linfocitos con los anticuerpos especficos para reconocer los determinantes antignicos (epitopos). Cuando un linfocito reconoce y se une a un determinante antignico, se produce su activacin. Esta activacin provoca que el linfocito se divida rpidamente y se diferencie para producir un clon de clulas que se dividen en clulas de memoria y clulas plasmticas. Las clulas plasmticas son las que segregan grandes cantidades de anticuerpos especficos contra el antgeno. Cuando un organismo muere tiene el mismo repertorio inmunolgico que cuando nace, pero tendr distintos clones expandidos de algunos linfocitos segn donde haya vivido. Postulados de la teora de la seleccin clonal: - Cada linfocito posee una sola clase de receptor con especificidad nica. - La interaccin entre una molcula de antgeno extraa y un linfocito con un receptor capaz de unirse a dicha molcula con afinidad elevada da o provoca la activacin linfocitaria. - Las clulas efectoras diferenciadas derivadas de un linfocito activado poseern receptores con especificidad idntica a las de las clulas parentales de las que dichos linfocitos derivan. - Los linfocitos que poseen receptores especficos contra molculas propias son delecionados en un estadio temprano del desarrollo de las clulas linfoides, y por tanto no estn presentes en el repertorio de linfocitos maduros. Los anticuerpos monoclonales son anticuerpos que provienen de un clon de linfocito, y que reconocen a un nico antgeno. La tcnica de obtencin de anticuerpos monoclonales fue desarrollada en 1975 por Khler y Milstein, y se basa en inocular a un
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ratn un antgeno X, y sacrificarlo a los 15 das para obtener los linfocitos del bazo. Entre estos hay linfocitos que sintetizan anticuerpos del antgeno X. Si estos linfocitos se fusionan con una lnea mutante de mieloma (clulas inmortales), que no crece en medio HAT (no pueden sintetizar nucletidos porque son auxtrofos de timina), podremos separar las clulas hbridas obtenidas (hibridomas) que s crecen en medio HAT. En este medio slo sobreviven las clulas hbridas, ya que las de mieloma no pueden sintetizar nucletidos al tener bloqueada la va de novo por la aminopterina presente en el medio HAT y mueren, y los linfocitos B no hibridados no sobreviven porque no son inmortales.
Los hibridomas obtenidos tienen dos caractersticas importantes: la inmortalidad y la capacidad de sintetizar anticuerpos anti-antgeno X. Haciendo diluciones seriadas del cultivo se podrn localizar los linfocitos deseados. De este modo se obtienen los anticuerpos monoclonales, que se utilizan en inmunohistoqumica, farmacia y medicina, que por ejemplo nos permiten identificar clulas, o bien la funcionalidad de estas, o la capacidad de direccionar frmacos a determinados tumores.
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TEMA 3. ESTRUCTURA DEL SISTEMA INMUNE: CLULAS DEL SISTEMA INMUNE Ontogenia del sistema inmunitario: Formacin y maduracin de las clulas implicadas en la respuesta inmunitaria.- Las clulas del sistema inmune provienen de clulas madre pluripotenciales de la mdula sea. Esta se encuentra en el tejido seo trabecular o esponjoso en el interior de los huesos largos, cortos y planos. Existen dos tipos de mdula: la mdula sea amarilla, que es grasa y tiene un papel de reservorio energtico, y la mdula sea roja, donde se encuentran los precursores de las clulas sanguneas y clulas del sistema inmune. El proceso de formacin de todas las clulas de la sangre se denomina hematopoyesis. Todas las clulas de la sangre descienden de una clula pluripotencial comn que se compromete para diferenciarse en linajes concreto (p. ej., eritroide, megacarioctico, granuloctico, monoctico y linfoctico). Estas clulas pluripotentes se dividen para producir dos tipos de clulas madre ms especializados: - Progenitor linfoide, que genera las clulas del SI, los linfocitos T y B. Estos se distinguen por las localizaciones donde maduran y por sus receptores de antgeno. Tambin a partir de este progenitor se generan las clulas Natural Killer (NK). - Progenitor mieloide, que genera los polimorfos nucleares: eosinfilos, neutrfilos y basfilos. Hay un precursor desconocido en sangre que dar lugar a los mastocitos, los cuales se encuentran en los tejidos y participan en los procesos de hipersensibilidad. Por ltimo estn los monocitos que formarn los macrfagos (glbulos blancos), eritroblastos que derivan en eritrocitos (glbulos rojos) y megacariocitos que producen plaquetas. An no se conocen los factores que determinan la transformacin de la clula madre en los progenitores linfoide y mieloide. Las clulas del sistema inmune se diferencian en: - Clulas reconocedoras de antgenos: linfocitos y clulas accesorias (monocitos macrfagos y clulas dendrticas). - Clulas efectoras: monocitos macrfagos, neutrfilos, eosinfilos y linfocitos activados. Estas clulas se localizan o slo en los rganos linfoides (linfocitos y clulas accesorias) o en los rganos linfoides, sangre y tejidos (linfocitos y clulas efectoras). Linfocitos: desarrollo y heterogenicidad.- Dentro de los linfocitos podemos diferenciar: linfocitos B, linfocitos T (Th y Tc) y clulas K. Los linfocitos B son las nicas clulas que sintetizan molculas de anticuerpos (Ac). Dentro de los linfocitos B, los anticuerpos se encuentran en el RE y en el complejo de Golgi. En la superficie de la membrana plasmtica de estos linfocitos se encuentran como protenas integrales de membrana. Su sntesis se produce en los ribosomas adheridos al RER.
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Todos los linfocitos T tienen CD3. Los Th son adems CD4+ y los Tc son CD8+. Los linfocitos T son los responsables de coordinar la respuesta inmune celular segregando protenas o citoquinas y constituyen el 70% del total de los linfocitos. Tambin se ocupan de realizar la cooperacin para desarrollar todas las formas de respuestas inmunes, como por ejemplo la produccin de anticuerpos por los linfocitos B. Se diferencian de los linfocitos B y de las clulas asesinas (NK) por poseer un receptor especial en la superficie de la membrana, el llamado receptor de linfocitos T (TCR). Sin embargo, no es posible distinguir uno del otro a simple vista en un frotis microscpico de sangre. CD: Cluster of Differentiation (marcador fenotpico). Son protenas de membrana que nos permiten reconocer una clula especfica. Los CD3 son antgenos tpicos del SI de mamferos. Las clulas atural Killer (NK) son clulas grandes, con ncleo excntrico y con una gran cantidad de grnulos en el citoplasma que llevan perforinas y granzimas. Son clulas citotxicas, que atacan principalmente a lneas tumorales y a clulas infectadas por virus. Poseen receptores KIR, KAR y receptores para la fraccin Fc de la IgG. La NK chequea todas las clulas que encuentra a su paso, si la clula es normal se suelta y sigue su camino, pero en el caso de que la NK reconozca un clula tumoral, se une fuertemente a ella, vierte los grnulos de perforinas y granzimas, y posteriormente se suelta. En este proceso, la clula pierde parte de su citoplasma e induce la apoptosis de la clula tumoral. Esta NK al perder parte de ella, es una clula debilitada, por lo que en el caso de tumores el paciente posee una poblacin de clulas NK muy debilitado debido al combate continuo con las clulas tumorales.
Linfocitos B Reconocen antgenos solubles. Responsables inmunidad humoral (Ac). Linfocitos Th Reconocen antgenos en CPA con MHC clase II. Secretan citoquinas que activan linfocitos B, macrfagos, Tc y NK. TCR: receptor de membrana. CD3+ CD4+ CD850-70% sangre perifrica. Linfocitos Tc Reconocen y lisan clulas infectadas por virus y clulas tumorales (MHC clase I). Activacin de macrfagos. TCR: receptor de membrana. CD3+ CD4CD8+ 20-25% sangre perifrica. Clulas K Reconocen y lisan clulas infectadas por virus y clulas tumorales. Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. KIR: receptor inhibidor. KAR: receptor activador. Receptor de Fc. CD16. CD2 CD56 ~ 10% sangre perifrica.
Funciones
Receptor del antgeno
Inmunoglobulinas de membrana. Receptores de Fc. CD19, CD20, CD21 y CD22. Molculas clase II del MHC. 10-15% sangre perifrica.
Marcadores fenotpicos
Distribucin
Fagocitos mononucleares (Monocitos): desarrollo, activacin y funcin.- Los macrfagos intervienen tanto en la inmunidad natural como en la adaptativa, y en esta ltima tanto en la inmunidad celular como en la humoral.
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En la inmunidad natural fagocitan y destruyen grmenes que han penetrado en los tejidos. Actan tambin como clulas basureras del organismo recogiendo y destruyendo tejidos lesionados, clulas viejas y clulas inservibles. Producen citoquinas (en concreto citoquinas proinflamatorias) que atraen al foco infeccioso a otras clulas inflamatorias, especialmente a los neutrfilos, siendo responsables de los efectos sistmicos de la inflamacin. Producen factores para los fibroblastos y el endotelio vascular que promueven la reparacin de los tejidos lesionados. Dentro de la inmunidad especifica o adquirida, en la inmunidad celular, actan como clulas presentadoras de antgeno al linfocito Th CD4+ activndolo, y son CPAs en la fase de reconocimiento de la respuesta inmunitaria. Cuando se activan por el linfocito T se aumenta su capacidad bactericida, aumentando su potencial fagoctico, degradativo y citoslico. Son por tanto clulas efectoras de la inmunidad celular. En la inmunidad humoral, fagocitan partculas opsonizadas con anticuerpos y actan como clulas efectoras de la inmunidad humoral. Los macrfagos tienen una serie de clusters de diferenciacin (protenas de membrana) que permiten reconocerlos en el laboratorio: CD14, es un receptor del lipopolisacrido bacteriano (LPS); CD64, CD32 y CD16, son receptores de la fraccin Fc de los anticuerpos; CD35, es el receptor para C3b (protena del complemento); y CD11a, b y c, son molculas de adhesin del macrfago. Clulas presentadoras de antgenos.- Los linfocitos B, los macrfagos y las clulas dendrticas son clulas presentadoras de antgenos (CPA). Las clulas dendrticas tienen un ncleo central y una forma estrellada con una gran cantidad de prolongaciones digitiformes. Existen dos tipo de clulas dendrticas: interdigitantes y foliculares. Si se habla en el sentido amplio de clula dendrtica, nos referimos a las interdigitantes. CLULAS DE DRTICAS Interdigitantes Foliculares Presentar Ag a clulas Th CD4+ - Atrapar Ag opsonizados - Mostrar Ag a linfocitos B Precursores de mdula sea - No derivan de precursores de mdula sea Intersticio de la mayora de los - Centros germinales de folculos rganos. linfoides secundarios en Ganglios linfticos y bazo ganglios linfticos Epidermis: clulas de Langer- - Bazo hans (Grnulos de Birbeck) - Tejidos linfoides asociados a mucosas
Tipos Funciones Origen Distribucin
Las clulas dendrticas interdigitantes que se localizan en la epidermis se llaman clulas de Langerhans, y tienen grnulos de Birbeck. Son clulas muy inmaduras y las primeras en llegar al foco de infeccin. Al atrapar un patgeno se activan y empiezan a madurar cambiando su morfologa externa y los receptores de membrana, de
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tal manera que se dirigen al ganglio linftico ms prximo y all presentan el antgeno a los linfocitos Th. Las clulas foliculares se encuentran en los folculos de los ganglios linfticos. No se sabe cul es su precursor. Estos folculos pueden ser primarios (tienen linfocitos B en reposo) o secundarios (tienen linfocitos B en proliferacin). Fagocitos polimorfos nucleares (PM ): neutrfilos, eosinfilos, basfilos y mastocitos.- Se denominan polimorfos nucleares, porque sus ncleos tienen distintas formas. Tambin son conocidos como granulocitos, porque en el interior de sus citoplasmas poseen grnulos de enzimas. Tambin toman el nombre de micrfagos. Derivan de la mdula sea, de la clula madre pluripotencial. - eutrfilos: Se encuentran en el torrente sanguneo y son las clulas ms comunes en el proceso inflamatorio. Son las primeras en llegar al foco de infeccin, dirigidas por interleuquinas (IL-8) y por el interfern INF en un proceso denominado quimiotaxis. Tienen una vida media muy corta y dan lugar al pus. Producen la fagocitosis y tienen un elevado poder bactericida. En su superficie, podemos encontrar receptores para la fraccin Fc de los anticuerpos y para C3b: CD16, CD32 y CD35. La presencia de estas protenas nos permiten identificar a los neutrfilos. - Eosinfilos: Estas clulas intervienen en la destruccin de parsitos helmintos (lombrices) recubiertos de anticuerpos. Se encuentran elevados en nios con lombrices, y tambin en procesos alrgicos como el asma. Sus grnulos poseen un pH cido. Se caracterizan por la presencia de receptores de alta y baja afinidad para la IgE (FcE RI y FcE RII, respectivamente) y adems el CD23. ota: I significa alta afinidad. II significa media afinidad. Ejemplo: FcE RI significa: receptor (R) de alta afinidad (I) de la fraccin c (Fc) del anticuerpo IgE (E). Cuando hay infeccin por lombrices, se transforman los linfocitos B en clulas plasmticas que liberan anticuerpos, y entre ellos las IgE. La IgE se pega a los receptores de los eosinfilos, y a los antgenos de la lombriz, lo que conlleva a la desgranulacin del PMN y la destruccin del parsito. - Basfilos: Poseen grnulos en su citoplasma con un pH bsico. Su precursor es desconocido, pero provienen de la mdula sea. Se caracterizan por poseer receptores de membrana de alta afinidad para la IgE (FcE RI). Actan de forma similar a los mastocitos. - Mastocitos: Intervienen cuando se necesita una respuesta inmune muy rpida. Se caracterizan por llevar receptores de alta afinidad para la IgE (FcE RI) e intervienen en los procesos de alergia y anafilaxis fundamentalmente. Cuando se activa el mastocito por IgE, es decir cuando penetra un patgeno en el organismo y es opsonizado con IgE, que son detectadas por los receptores del mastocito, se produce un entrecruzamiento entre las IgE mediado por los antgenos del patgeno. Este entrecruzamiento induce una seal que conlleva a la desgranulacin del mastocito, y la liberacin de histamina, dopamina, leucotrienos y citoquinas, de tal manera que estas sustancias provocan una vasodilatacin, un aumento de clulas
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inflamatorias y un aumento de secrecin, lo que explica la rojez, la inflamacin y la secrecin (el aumento de moco y lagrimeo) en un proceso alrgico. Las caractersticas de los diferentes polimorfos nucleares (y de los macrfagos) se recogen en la siguiente tabla: Clula Macrfago
Funcin activada
Fagocitosis y activacin de mecanismos bactericidas. Presentacin del antgeno.
CD CD14: receptor LPS CD64: receptor Fc de Ac. CD32: receptor Fc de Ac. CD16: receptor Fc de Ac. CD35: receptor C3b. CD11a, b y c. Receptores para Fc y C3b: CD16, CD32 y CD35
Neutrfilo Fagocitosis y activacin de mecanismos bactericidas Eosinfilo
CD23: Fc RII: receptor afinidad Destruccin de parsitos media IgE. recubiertos de Ac (sobre todo Fc RI: receptor de alta afinidad helmintos). IgE. Desconocida Fc RI: receptor de alta afinidad IgE.
Basfilo
Mastocito Liberacin de grnulos que contienen histamina y otros agentes vasoactivos. ota: Ac = anticuerpo Fc RI: receptor de alta afinidad IgE.
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TEMA 4. ANATOMA FUNCIONAL DE LOS RGANOS LINFOIDES El sistema linftico recoge todo el lquido intersticial en los diferentes tejidos del organismo, para terminar drenando en el sistema circulatorio sanguneo a travs de la vena cava superior. El sistema linftico es un sistema paralelo al circulatorio donde se filtran todos los patgenos que entran en la linfa. Los tejidos del sistema inmune se diferencian en rganos linfoides primarios o generadores (mdula sea y timo) y rganos linfoides secundarios o perifricos (ganglios linfticos, bazo y tejido linftico asociado a mucosas). rganos linfoides primarios: Mdula sea y Timo.- En la mdula sea hematopoytica, o mdula sea roja, se producen las clulas sanguneas mediante un proceso denominando hematopoyesis. Esta mdula sea roja se encuentra en el tejido trabecular o esponjoso del hueso. Durante el desarrollo embrionario, la hematopoyesis ocurre en el hgado. En los mamferos, la mdula roja se localiza en las cabezas de los huesos largos, como el fmur, y en los intersticios de los huesos esponjosos, como el esternn, cuerpos vertebrales o la pelvis. En ella se forman y diferencian la mayora de las clulas sanguneas a partir de una poblacin comn de clulas madre, indiferenciadas y pluripotenciales. Estas clulas se consideran: - Clulas madre, por ser el origen de todas las clulas sanguneas - Indiferenciadas, porque no se han especializado en funciones definidas - Pluripotenciales, por poseer el potencial de generar cualquier tipo de clula sangunea. La demanda del organismo, segn las necesidades, y la actuacin de los diferentes factores de crecimiento, permite la diferenciacin de las clulas sanguneas. Los leucocitos se originan (leucopoyesis) en la mdula sea roja, desde donde pasan a la sangre. Durante ms o menos tiempo, segn el tipo de clulas, se mantienen como leucocitos circulantes que recorren el cuerpo por el torrente circulatorio. Segn la forma del ncleo se clasifican en: Leucocitos con ncleo sin lbulos o mononucleares: Linfocitos Monocitos Leucocitos con ncleo lobulado o polimorfonucleares: Neutrfilos Basfilos Eosinfilos Los monocitos abandonan posteriormente la sangre para establecerse en diversos tejidos y cavidades del cuerpo, donde se convierten en macrfagos. Los linfocitos abandonan asimismo el torrente circulatorio para ubicarse en los distintos rganos linfoides secundarios. El timo es un rgano bilobulado, situado en el trax, bajo la parte superior del esternn. Est rodeado por una cpsula de tejido conjuntivo que forma invaginaciones
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denominadas trabculas. Estas trabculas dividen al timo en lobulillos. La vascularizacin y la inervacin discurren por las trabculas. En el timo encontramos en cada lobulillo una regin superficial denominada corteza y una regin ms profunda denominada mdula. Mientras que los linfocitos B maduran en la mdula sea, los linfocitos T lo hacen en el timo. El precursor linfoide de los linfocitos T da lugar a una estirpe de clulas que migran desde la mdula sea al timo (pretimocitos). Estas clulas, cuando se localizan en la corteza se denominan protimocitos y timocitos comunes. En el timo sern educadas o diferenciadas, destruyndose aquellas que sean autorreactivas, es decir, aquellas que reconocen antgenos propios. En la corteza tambin hay clulas epiteliales. Los pretimocitos deben atravesar la zona corticomedular, donde se efecta una seleccin positiva y negativa de los timocitos, de modo que slo el 5% la atraviesan. Los timocitos autorreactivos (los que atacan clulas propias) son destruidos, ya que si se dejaran llegar al torrente sanguneo, el individuo adulto sufrira enfermedades autoinmunes. Los que han conseguido superar esta seleccin se ponen en contacto con otras clulas de la mdula del timo (clulas dendrticas y epiteliales). En la mdula se encuentran los corpsculos de Hassall encargados de limpiar todos los restos celulares producidos en la seleccin de los timocitos. Cuando los timocitos pasan de la corteza a la mdula van diferencindose a linfocitos T, ello implica la existencia de un gradiente de diferenciacin desde la corteza hacia la mdula. Finalmente, los timocitos maduros, que se denominan linfocitos T maduros (CD4+ o CD8+), salen a la sangre perifrica. Pueden ser linfocitos T helper (CD4+) o T citotxicos (CD8+). Los linfocitos T maduros se dirigen hacia los ganglios linfticos, hacia el bazo, o hacia el MALT (tejido linfoide asociado a mucosas). rganos linfoides secundarios: Ganglios linfticos, bazo y otros tejidos linfoides perifricos.- Los ganglios linfticos son organizaciones de tejido linfoide encapsulado con forma globular o arrionada. Se encuentran a lo largo del sistema circulatorio linftico. Los ganglios linfticos constituyen centros de vigilancia local o regional, formando parte de una red donde las clulas fagocticas filtran la linfa, atrapando las partculas antignicas. Los antgenos son procesados y presentados a los linfocitos T, que cooperan con los linfocitos B para iniciar las respuestas especficas. Existen agrupaciones de ganglios linfticos estratgicamente situados en zonas como el cuello, las axilas, las ingles, el mediastino y la cavidad abdominal, que drenan diferentes regiones superficiales y profundas del organismo. Los ganglios linfticos poseen una cpsula que lo envuelve, y emite trabculas que dividen al ganglio en lbulos. Presentan una corteza que posee folculos linfoides primarios y secundarios. Los folculos primarios contienen linfocitos B en reposo que han penetrado por los vasos sanguneos, pero cuando entra un antgeno patgeno estos linfocitos comienzan a proliferar, originndose as los centros germinales. En esta situacin los folculos primarios se transforman en secundarios los cuales contienen linfocitos B proliferantes que darn lugar a linfocitos B activos.
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Tambin contienen los ganglios linfticos una zona paracortical, que es rica en linfocitos T maduros, los senos y cordones medulares, donde se encuentran clulas plasmticas, clulas dendrticas y macrfagos. Esta disposicin de las clulas favorece la presentacin del antgeno por la CPA tanto al linfocito B como al linfocito T. Los ganglios poseen vnulas de endotelio alto (HEV), que son capilares compuestos en su interior por clulas endoteliales planas, as como por molculas de adhesin o integrinas, las cuales hacen que unas clulas se peguen ms que otras a estos capilares, facilitando la migracin de las clulas a determinados tejidos y no a otros. Estas molculas de adhesin facilitan la llegada al ganglio de molculas que tienen su residencia en l, sobre todo cuando hay un agente patgeno que debe reconocerse. Los ganglios estn irrigados tanto por el sistema sanguneo como por el linftico. Los linfocitos B entran al ganglio linftico por la arteria ganglionar y van pasando por diferentes ramificaciones hasta llegar a los capilares, donde existen vnulas de endotelio alto para facilitar que los linfocitos lleguen a la corteza y a los folculos linfoides. Cuando estos linfocitos B se ponen en contacto con un antgeno, proliferan constituyendo un centro germinal y forman un folculo secundario. Transformadas en clulas plasmticas, salen del ganglio a travs del vaso linftico eferente y migran al sitio de la infeccin. Los microorganismos que, por sus factores de virulencia resisten frente a las defensas existentes en los ganglios, salen de ellos con la linfa y alcanzan la circulacin sangunea que los disemina por el organismo. Esta infeccin de la sangre por microorganismos se denomina septicemia. Segn sean los microorganismos infectantes, bacterias, virus u hongos, la septicemia puede denominarse bacteriemia, viremia o fungemia, respectivamente. Cuando esto ocurre (o cuando los microorganismos llegan directamente a la sangre), la mayor probabilidad de controlar inmunolgicamente la situacin correr a cargo del bazo. El bazo es un rgano que ejerce funciones de depuracin sangunea. Se encuentra dentro de la cavidad peritoneal, detrs del estmago y cercano al diafragma. Se encarga de la respuesta inmune a antgenos que penetran por va sangunea. Todo el bazo se encuentra irrigado por la arteria esplnica, que forma grandes redes que recubren al rgano, por lo que es un rgano que sangra con mucha facilidad. Est rodeado por una cpsula conjuntiva que emite trabculas hacia el interior y sirven de apoyo a las diferentes clulas que forman el parnquima del bazo. Este est constituido por dos tipos de tejidos:
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- La pulpa roja, es donde se destruyen los eritrocitos que han perdido funcionalidad (aclaramiento sanguneo). Es la zona encargada de destruir clulas viejas sanguneas (si no se destruyeran podran dar lugar a trombos). En definitiva, los individuos sin bazo poseen una mayor cantidad de clulas en el torrente circulatorio y por consiguiente una mayor viscosidad y un mayor riesgo de trombosis. Otro problema que se presenta es que hay una mayor dificultad para defenderse, sobre todo de agentes infecciosos capsulados. - La pulpa blanca. Es la encargada de filtrar los patgenos que penetran por va sangunea. En cada trabcula se encuentra una arteriola de la arteria esplnica rodeada por un seno marginal que posee una lmina linfoide periarteriolar (PALS) rica en linfocitos T, y folculos donde se encuentran los linfocitos B. Esta disposicin favorece la presentacin del antgeno y la cooperacin entre los linfocitos T y B. Tejido linfoide asociado a las mucosas (MALT).- Este tejido se localiza en la submucosa de los aparatos gastrointestinal, genitourinario y respiratorio. Es un tejido no encapsulado que se encarga de la respuesta inmune a antgenos de las mucosas. Forma agrupaciones de tejido linfoide no encapsulado que se asocia a las mucosas, y agrupa los siguientes tejidos: - BALT: Tejido linfoide asociado a la mucosa bronquial, filtra los patgenos que penetran por va respiratoria. - MALT: Tejido linfoide asociado a las mucosas, de forma genrica. - GALT: Tejido linfoide asociado al tubo digestivo, que incluye al adenoides, las amgdalas, el apndice y las placas de Peyer. Es el encargado de filtrar los agentes patgenos que penetran por va digestiva, junto con los alimentos. En este tejido existe un folculo con gran cantidad de linfocitos B, los cuales proliferan si entra un patgeno, originando un centro germinal prximo a reas ricas en linfocitos T. En las mucosas es donde hay una mayor cantidad de IgA para la defensa. Existen clulas M, que facilitan el paso de IgA, situadas en la parte superior de la pared del intestino, la ms cercana a la luz. Este trasiego de anticuerpos desde la pared intestinal a la luz se conoce como transcitosis. Esto permite la informacin al sistema inmune de la penetracin de un patgeno por va digestiva. Circulacin linfocitaria.- Los linfocitos B pasan al torrente sanguneo desde la mdula sea y se dirigen a los rganos linfoides secundarios. Desde estos rganos los linfocitos vuelven a la sangre. Los linfocitos T se dirigen hacia el timo, y
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los linfocitos B, en las aves se dirigen hacia la bolsa de Fabricio (donde maduran), pero en mamferos se retienen en la propia mdula sea. Por su parte, los linfocitos T parten del timo hacia la sangre y la linfa, y siguen el mismo ciclo que los linfocitos B. En resumen, desde los rganos linfoides primarios se dirigen hacia los rganos linfoides secundarios por va linftica los linfocitos T, y por va sangunea los linfocitos B y T. Un ciclo completo de recirculacin de un linfocito dura 24 horas, atravesando los ganglios linfticos 25 109 linfocitos cada da. El 2% de los linfocitos est en la sangre y el 98% en los rganos linfoides perifricos. Esta recirculacin es un sistema de continua vigilancia que permite estar en contacto con el medio externo. Se trata de una defensa sistmica, lo cual es ventajoso. El problema es que si enferma el sistema inmune se ve afectado todo el organismo, es decir, aparecen enfermedades sistmicas. En una electroforesis de las protenas plasmticas aparecen dos bandas: una correspondiente a la albmina (la protena ms abundante en la sangre) y la otra a las globulinas.
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TEMA 5. EL RECEPTOR ANTIGNICO DEL LINFOCITO B: LAS INMUNOGLOBULINAS. A finales del siglo XIX, Behring defini los anticuerpos. Aos despus, en 1937, Tiselius descubre la electroforesis y con esta tcnica se observ que los anticuerpos migraban junto con las gammaglobulinas, hacindose sinnimos ambos trminos. Sin embargo, en 1953 Grabar aplic la inmunoelectroforesis y vio que no todos los anticuerpos eran gammaglobulinas. Peter y Hebermans establecieron en 1959 la estructura bsica de los anticuerpos con una conformacin tetrapptica tal como se conoce actualmente y proponen el trmino de inmunoglobulinas. En 1964 la OMS acept el trmino pasando a denominarse las tres inmunoglobulinas hasta entonces conocidas como IgM, IgA e IgG. Posteriormente Rowe e Ishizaka descubrieron la IgD y la IgE, respectivamente. Los anticuerpos (tambin conocidos en la actualidad como inmunoglobulinas) son glucoprotenas del tipo gammaglobulina. Pueden encontrarse de forma soluble en la sangre u otros fluidos corporales de los vertebrados, pero adems disponen de una forma idntica asociada membrana que acta como receptor de los linfocitos B. Los anticuerpos son empleados por el sistema inmunitario para identificar y neutralizar elementos extraos tales como bacterias, virus, parsitos, etc. Los linfocitos B son las nicas clulas que sintetizan molculas de anticuerpos. Estructura bsica de las inmunoglobulinas.- Como se ha dicho, los anticuerpos pueden aparecer en la membrana del linfocito B como receptores de membrana, o en forma secretada, que en el caso de IgM y de IgA forman estructuras pentamricas y dimricas, respectivamente. Cuando el anticuerpo se encuentra en la membrana, su funcin es el reconocimiento de los antgenos patgenos por medio de la regin variable, pero cuando est en forma soluble tiene la funcin de reclutamiento de clulas y molculas, para destruir el patgeno, por medio de la regin constante. Los anticuerpos tienen una estructura en forma de Y, integrada por cuatro cadenas polipeptdicas: dos cadenas ligeras (L) y dos pesadas (H), y segn sean estas dos ltimas se tendr un tipo de anticuerpo u otro. Las cadenas ligeras pueden ser o dos cadenas o dos cadenas (nunca una y una ), pero no definen el tipo de anticuerpo. Las dos cadenas ligeras (L) son idnticas, de unos doscientos aminocidos cada una (24 KDa), y estn divididas en dos dominios globulares: uno variable (V) en el extremo N-terminal y otro constante (C) en el extremo C-terminal. En cada linfocito B slo se expresa uno de los dos tipos posibles de cadena ligera: kappa () o lambda (). Las dos cadenas pesadas (H), tambin son idnticas, de unos cuatrocientos aminocidos cada una (55-70 KDa). Estn divididas en cuatro dominios globulares: uno variable (V) en el extremo N-terminal y tres constantes (C) en el extremo C-terminal.
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Las cadenas pesadas determinan el isotipo del anticuerpo: - IgG, es de cadena pesada . Posee cuatro subtipos: IgG1 (1), IgG1 (2), IgG1 (3) e IgG4 (4). - IgA, es de cadena pesada . Posee dos subtipos: IgA1 (1) e IgA2 (2). - IgM, tiene la cadena pesada . - IgD, con cadena pesada . - IgE, es de cadena pesada . El dominio globular constante es denominado fraccin constante o cristalizable y se identifica con las letras Fc. El dominio globular variable se denomina fraccin variable y se identifica con la sigla Fab. La Fab se encarga del reconocimiento de los antgenos, mientras que la Fc es la que da mayor funcionalidad a los anticuerpos, y adems se encarga de destruir al patgeno mediante el reclutamiento de otras clulas y molculas. El conjunto de determinantes presentes en los dominios de la fraccin constante caracterizan la clase y tipo de inmunoglobulina (Ig) y constituyen el isotipo de un anticuerpo. El conjunto de determinantes singulares o idiotopos de los dominios variables constituyen el idiotipo del anticuerpo. Las cuatro cadenas estn unidas por puentes disulfuro intercatenarios formados entre residuos de cistena. Cada cadena tiene un extremo amino y otro carboxilo, siendo el extremo amino el que corresponde a la fraccin variable, que es la zona por la que los anticuerpos se unen al antgeno. El extremo carboxilo es donde reside la mayor cantidad de funciones del anticuerpo, le permite unirse a clulas y tejidos adquiriendo stos funcin inmune. Para estudiar la estructura de los anticuerpos se usan habitualmente dos enzimas proteolticas: papana y pepsina. La papana rompe los anticuerpos por delante del puente disulfuro que une las dos cadenas pesadas, de modo que se obtienen una Fc y dos Fab. Por su parte, la pepsina rompe por detrs del puente disulfuro que une las dos cadenas pesadas originando una fraccin grande con las dos Fab y una Fc que ser destruida por la propia pepsina. La zona en la que se encuentran los puentes disulfuro se conoce como zona bisagra. Esta zona da mayor flexibilidad a los brazos del anticuerpo para que puedan unirse a mayor cantidad de antgenos. Es la zona prxima a donde se unen las fracciones Fab y Fc. La zona de unin al antgeno est constituida por los extremos aminos de las cadenas Ly H. Aqu se forman unos bolsillos o bucles donde encaja aquel perfectamente. Tanto la fraccin variable como la constante se disponen en dominios. Estos dominios son secuencias de aminocidos (aproximadamente 110 residuos) que se disponen en forma globular o de bucles.
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Los bucles se forman debido a la existencia de puentes disulfuro intracatenarios entre los residuos de cistena, que aparecen en las cadenas ligeras y pesadas. Estos dominios han configurado la superfamilia de las inmunoglobulinas. Dentro del dominio variable de ambos tipos de cadenas, hay zonas an ms variables: las regiones hipervariables. Estn compuestas por las regiones CDR o regiones determinantes de complementariedad y de los marcos o frame. De las CDR hay tres: CDR1, CDR2 y CDR3, siendo CDR3 la ms variable. Estas regiones estn sujetas por las regiones marcos: FR1, FR2, FR3 y FR4. Los anticuerpos se encuentran glicosilados o carbonatados en los dominios constantes. La forma en que se disponen los dominios se debe a la existencia de una serie de hebras antiparalelas. En el caso de los dominios constantes llevan 3 y 4 hebras, mientras que las variables llevan 4 y 5. De modo que cuando se conforman para formar los dominios globulares lo hacen en hoja plegada , quedando un hueco en el interior mantenido por puentes disulfuro. Al plegarse las hojas las regiones hipervariables quedan al exterior participando as en el reconocimiento del antgeno. Es en las regiones hipervariables donde se da la mayor variabilidad dentro de las cadenas de las inmunoglobulinas. Esta gran variabilidad es lo que le da al anticuerpo la capacidad de reconocer una gran variedad de antgenos. Es lo que se conoce como diversidad combinatoria. Las funciones de las diferentes inmunoglobulinas segn su Fc son: Clase IgG IgA IgM IgD IgE Fijacin del Transferencia complemento placentaria + + + Presencia en LCR + + Sensibilizacin Secrecin cutnea seromucosas + + + -
La IgG es el anticuerpo ms abundante, de ah la gran cantidad de funciones que lleva a cabo. Adems de atravesar la barrera placentaria, puede atravesar la barrera
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hematoenceflica, por lo que tambin est presente en lquido cefalorraqudeo (LCR). La IgA es liberada por los linfocitos activos del tejido linfoide asociado a las mucosas, y se libera de forma dimrica. Por su parte la IgD aparece en una etapa muy temprana del desarrollo de los linfocitos B. Los calostros, que son las primeras secreciones de leche materna tras el parto, son muy ricos en IgA. Por esto se ha de potenciar la lactancia materna, ya que confiere inmunidad pasiva al lactante. En el caso de la IgM, si se encuentra en el recin nacido, es porque este ha sufrido una infeccin intrauterina y ha tenido que desarrollar una respuesta inmune por si mismo (va de urgencia), ya que estos anticuerpos no pueden cruzar la barrera placentaria desde la madre.
COROLARIO DE LA ESTRUCTURA BSICA DE LOS ANTICUERPOS - El extremo amnico, tanto de las cadenas pesadas como ligeras, es muy variable, y esta variabilidad condiciona la especificidad para el antgeno. Este extremo forma parte del fragmento Fab. - El extremo carboxlico de las cadenas ligeras kappa () o lambda () es constante. - El extremo carboxlico de las cadenas pesadas de cada una de las clases de Ig es constante, pero vara de una clase de Ig a otra. Una parte de este extremo corresponde al fragmento Fc que determina su funcin. Variaciones antignicas de las inmunoglobulinas: isotipos, alotipos e idiotipos.- Las Ig son protenas, por consiguiente tambin pueden actuar como antgenos. Esta caracterstica es la que ha permitido hacer las diferencias isotpicas, alotpicas e idiotpicas de los anticuerpos. En el estudio de los anticuerpos, se suelen utilizar estos como antgenos, sobre todo para conocer las diferencias entre los distintos tipos de inmunoglobulinas. Si se inyectan anticuerpos IgG de conejo a un ratn, se producirn anticuerpos anti-IgG de conejo por el SI del ratn. Los anticuerpos del ratn actan contra los dominios constantes de las cadenas pesadas de la IgG de conejos. Las diferencias isotpicas entre los anticuerpos se encuentran en los dominios constantes de las cadenas pesadas. De este modo se determinaron las cinco clases de Ig y las diferentes subclases. Las diferencias alotpicas se encuentran en algunos alelos de los dominios constantes de las cadenas pesadas. No tienen ninguna significacin fisiolgica, pero se pusieron de manifiesto cuando a un individuo (A) de una especie se inocularon anticuerpos de otro individuo (B) de la misma especie. El individuo A produca anticuerpos anti-anticuerpos del individuo B. Las diferencias idiotpicas se pusieron de manifiesto cuando a un individuo de una especie se le inocularon anticuerpos de un individuo de la misma especie genticamente
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idntico (gemelos). Entonces se observ que el primer individuo produca anticuerpos anti-anticuerpos de su gemelo (o clon). Pero segn este experimento tendramos anticuerpos contra nuestros propios anticuerpos. Se ha comprobado que estos anticuerpos existen y que suponen un mecanismo para la regulacin de la respuesta inmune, lo cual significa que un mismo individuo produce anticuerpos contra sus propios anticuerpos. Esta no es ms que la forma de frenar la respuesta inmune y ocurre cuando un individuo produce una respuesta inmune y anticuerpos ante la presencia de un antgeno. Cuando el patgeno ha sido destruido, llega un momento en el que la respuesta del SI se hace innecesaria. La forma de detener la produccin de anticuerpos es la formacin de anticuerpos contra los propios anticuerpos. La autotolerancia depende de la cantidad de anticuerpos generados, puesto que para que se formen los anticuerpos anti-idiotipos se necesita gran cantidad de Ig. Las diferencias idiotpicas de ambos tipos de anticuerpos se encuentran en las regiones variables tanto de las cadenas ligeras como de las pesadas. Cuando tenemos una respuesta inmune desmesurada (con unos niveles desmesurados de anticuerpos), el sistema inmune produce estos anticuerpos autorreactivos para frenar la respuesta inmune. Slo hay IgE en altos niveles en los alrgicos, los asmticos y en infecciones por helmintos. Caractersticas de los principales isotipos.- Las diferencias entre las distintas clases de Ig radican fundamentalmente en la presencia de la regin bisagra, ya que hay Ig que no poseen esta regin. Otras diferencias son la cantidad de dominios, o el nmero de los puntos de glicosilacin. Las formas monomricas aparecen en la membrana del linfocito B como receptores. Inmunoglobulina G. Posee una regin bisagra, un dominio constante en las cadenas L y tres en las cadenas H. Es el principal anticuerpo presente en sangre: supone el 80% de los anticuerpos que componen un suero normal y constituye el 20% de las protenas plasmticas totales. Se produce en gran cantidad durante la respuesta secundaria a un antgeno. Aparece entre 24 y 48 horas despus de que el antgeno estimule la diferenciacin de los linfocitos B, y contina la interaccin antgeno-anticuerpo iniciada por la IgM. Proporciona resistencia a largo plazo, por ser la inmunoglobulina producida por un alto porcentaje de las clulas B de memoria. Atraviesa la placenta, pasando de la madre al feto, lo que le proporciona inmunidad pasiva. Adems se secreta tambin en la leche materna, por lo que realiza la misma funcin sobre el neonato. Puede unir el complemento y facilitar la fagocitosis. Es el anticuerpo ms opsonizante.
Inmunoglobulina A. Presenta zona bisagra, un dominio constante en las cadenas L y tres en las cadenas H. Es la segunda inmunoglobulina en mayor concentracin en el suero (10-15% de los anticuerpos de un suero normal). Existen dos formas: IgA srica, presente en el suero y parecida a la IgG y la IgA secretada, que es un dmero formado por dos monmeros que se mantienen unidos por puentes disulfuro y estabilizado por una cadena J. Se acumula en las secreciones corporales proporcionando resistencia, al inhibir la adhesin de parsitos y microorganismos a los tejidos. Esta estructura
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dimrica es capaz de realizar la transcitosis (ver pg. 23), que permite la liberacin de la Ig A y el reconocimiento de los antgenos que han penetrado por el sistema digestivo (placas de Peyer). La forma dimrica se produce por la unin de las Fc de las cadenas H por puentes disulfuro. Inmunoglobulina M: no tiene regin bisagra, tiene un dominio constante en las cadenas L y cuatro en las cadenas H, los cuales se encuentran muy glicosilados (5 puntos de glicosilacin por cadena H). Esta inmunoglobulina al ser secretada forma estructuras pentamricas y hexamricas, que quedan estabilizadas por la cadena J (glicoprotena). Constituye el 5-10% de los anticuerpos que componen un suero normal. Se le denomina macroglobulina, por ser la molcula de anticuerpo ms grande. Forma un pentmero integrado por cinco monmeros conectados por las regiones Fc mediante puentes disulfuro intercatenarios y una cadena polipeptdica denominada cadena J. La presencia de cinco monmeros le proporciona diez sitios de unin al antgeno (valencia 10). La IgM es el primer anticuerpo presente en sangre en la respuesta primaria a un antgeno. Tambin en su forma monomrica, es el primero en aparecer en la membrana de los linfocitos B durante su desarrollo ontognico. Su mltiple valencia, que facilita la precipitacin, la aglutinacin y la fagocitosis, y sus capacidades para activar el complemento son cruciales en los primeros estadios de la respuesta especfica. Inmunoglobulina D. Presenta zona bisagra y se encuentra, desde las primeras etapas del desarrollo ontognico, en la membrana de los linfocitos B como receptor antignico BCR (B Cell Receptor). Su funcin es poco conocida y, al contrario que la IgM, raramente se encuentra en forma soluble.
IgG1 Cadena pesada Peso molecular (kDa) Nivel en suero (media en adultos mg/ml-1) Vida media en suero (das) 1 146 IgG2 2 146 IgG3 3 165 IgG4 4 146 Inmunoglobulina IgM IgA1 970 1 160 IgA2 2 160 IgD 184 IgE 188
0,5
1,5
0,5
0,03
5 10-5
21
20
21
10
Inmunoglobulina E. No presenta zona bisagra, tienen un dominio constante en las cadenas L y cuatro en las cadenas H. Se encuentra distribuida principalmente en la piel, y su porcentaje en sangre es muy bajo (menos de un 1%). Tiene especial afinidad por receptores de la membrana plasmtica de basfilos en sangre y de mastocitos o clulas cebadas en los tejidos. Cuando IgE une a los antgenos responsables de las alergias (alrgenos), se secretan sustancias como la histamina que produce sntomas de alergia.
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Parece que una de sus funciones fisiolgicas es la proteccin frente a los parsitos metazoos, ya que los individuos con parasitosis presentan valores altos de IgE. Distribucin y purificacin de los anticuerpos.- De forma natural los anticuerpos se encuentran distribuidos por los siguientes sitios: - En los linfocitos B en su membrana plasmtica, en el retculo endoplasmtico rugoso y en el aparato de Golgi. Cuando es el receptor de membrana se encuentra en forma monomrica. - En el plasma sanguneo y en los fluidos intersticiales. - En la superficie de ciertas clulas efectoras que poseen receptores para Fc de los anticuerpos como las NK, macrfagos, eosinfilos y basfilos. - En los fluidos secretados por el organismo: moco o leche. La purificacin de los anticuerpos de una mezcla de ellos se puede hacer por precipitacin o mediante tcnicas de cromatografa. Al aadir sulfato amnico a la mezcla de anticuerpos estos precipitan, por lo que con una centrifugacin posterior se obtiene un pellet con los anticuerpos. El precipitado anterior se puede disolver en un tampn (buffer) y separar los anticuerpos mediante cromatografa. La Cromatografa se puede hacer por filtracin en gel, intercambio inico, de afinidad, protena A de Staphylococcus, o HPLC. La separacin en gel, separa las protenas por tamao y la de intercambio inico mediante la carga elctrica. La cromatografa de afinidad y por protena A, separan las protenas mediante una determinada especificidad. El HPLC es una cromatografa que separa por tamao y carga, pero se le aade una presin para que fluya ms rpidamente. Como se ha dicho anteriormente, los anticuerpos pueden encontrarse insertos en la membrana formando el BCR (receptor de membrana de linfocitos B), siempre en forma monomrica, o en sangre en forma secretada. En este ltimo caso pueden ser formas monomricas, dimricas o pentamricas. Para estudiarlos generalmente se extrae sangre de la fisura anterior del codo y se centrfuga, originndose tres capas: la superior de plasma, la intermedia de plaquetas y leucocitos, y la inferior de eritrocitos. Si se somete a electroforesis el plasma, encontramos albminas y globulinas, habiendo en estas ltimas diferentes fracciones: , y . Dentro de la fraccin se encuentran los anticuerpos.
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TEMA 6. INTERACCIN DEL ANTICUERPO CON EL ANTGENO. Caractersticas estructurales de los antgenos biolgicos. Concepto de antgeno, de inmungeno y de hapteno.Antgeno: Es una sustancia extraa al organismo, capaz de unirse a un anticuerpo o a un TCR (T Cell Receptor). Anticuerpo: Son glucoprotenas del tipo gamma globulina. Pueden encontrarse de forma soluble en la sangre u otros fluidos corporales de los vertebrados, disponiendo de una forma idntica que acta como receptor de los linfocitos B. Los anticuerpos son empleados por el sistema inmunitario para identificar y neutralizar elementos extraos tales como bacterias, virus o parsitos. Inmungeno: Un inmungeno es una sustancia con capacidad para unirse a un BCR (B Cell Receptor) o a un TCR y es, por si solo, capaz de estimular una respuesta inmune y convertirse en diana de dicha respuesta. Todos los inmungenos son antgenos. Exposiciones secundarias al inmungeno conducen a respuestas ms enrgicas y rpidas (respuestas secundarias o de memoria). Hapteno: Son molculas pequeas de bajo peso molecular, incapaces de producir una repuesta inmunolgica por si mismas. Necesitan unirse a una protena transportadora, conocida como carrier o transportador, para provocar una respuesta inmunolgica. Se ha comprobado que se si produce la inmunizacin de un conejo con un conjugado hapteno-portador, el animal produce tres conjuntos distintos de anticuerpos. Un conjunto incluye anticuerpos de hapteno especficos que reaccionan con el mismo hapteno en cualquier portador, as como con haptenos libres (especfico de hapteno). El segundo conjunto de anticuerpos es especfico contra la protena portadora aislada. Finalmente, algunos anticuerpos slo reconocen el conjugado especfico de hapteno y portador empleado en la inmunizacin, ya que al parecer se une a sitios en la reaccin en que el hapteno se asocia a dicho portador, por esto se denomina especfico de conjugado. La mayor parte de los anticuerpos ser de este ltimo tipo, lo que demuestra que la verdadera respuesta inmune se da cuando el hapteno se une al portador. La suma de estos tres tipos de anticuerpos produce la respuesta inmune. Factores de los que depende la inmunogenicidad de un antgeno.Inmunogenicidad es la capacidad o propiedad que permite a una sustancia inducir una respuesta inmune detectable. Los factores de los que depende se pueden resumir en los siguientes: - La condicin de sustancia extraa. Mayor respuesta mientras ms extraa sea a la especie.
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- El peso molecular, ser mayor la respuesta a mayor tamao. - La composicin y complejidad qumica. Cuanta mayor complejidad posea la molcula, ms inmungena es. - La capacidad de ser degradado por enzimas macrofgicas. Una vez que es degradado, el macrfago tiene la capacidad de destruirlas y si no, las expone al exterior junto con molculas del MHC y las presenta al linfocito T. Concepto de adyuvante.- Adyuvante o coadyuvante son sustancias que cuando se mezclan con el antgeno aumentan la inmunogenicidad. Se caracterizan porque emulsionan con el antgeno y lo liberan lentamente, por lo tanto aumenta el tiempo de exposicin de ese antgeno al sistema inmune, y tambin por activar al macrfago mediante la precipitacin del antgeno, facilitando la fagocitosis. Muchos adyuvantes provocan un aumento de las seales coestimuladoras. Un ejemplo de adyuvante es la almina. Algunos de los componentes del adyuvante pueden ser potentes activadores de los macrfagos, como el muramil-dipptido (MDP), que suele ir en la pared de algunos patgenos bacterianos. Otros inducen una reaccin inflamatoria y la aparicin de granulomas (cuando el sistema inmune produce una inflamacin crnica o fibrosis alrededor de una sustancia extraa para evitar una respuesta inmune). Determinantes antignicos y sus tipos.- Epitopo o determinante antignico es la fraccin ms pequea del antgeno que se une a un anticuerpo. El paratopo es la fraccin del anticuerpo que se une al antgeno. El epitopo o determinante antignico es la unidad ms pequea de un antgeno que puede ser identificada por el sistema inmune. Es la parte del antgeno que se une al TCR o al BCR. En el caso del BCR el antgeno se une al bolsillo de la Fab, y en el caso del TCR el antgeno debe estar unido a una molcula de MHC propia que lo ha procesado para que sea reconocido. La mayora de los epitopos son protenas, con lo cual poseen una estructura tridimensional. En el caso de que sean protenas, la formacin de algunos determinantes depende nicamente de la estructura terciaria, por lo que podemos distinguir: - Determinante conformacional. El anticuerpo solo reconoce al epitopo en su conformacin tridimensional. Si el antgeno se desnaturaliza, el anticuerpo deja de reconocer al epitopo. - Determinante lineal. Puede ser accesible o inaccesible. En el primer caso, el epitopo es reconocido en su forma conformacional. En el segundo caso, solo es reconocido por el anticuerpo cuando se produce la desnaturalizacin del antgeno. - Determinante neoantignico. Puede que un antgeno en su forma conformacional no posea ningn epitopo, pero despus de una
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proteolisis puede producirse nuevos epitopos que son reconocidos por los anticuerpos. Mitgenos.- Son sustancias que inducen la divisin celular de los linfocitos T y B, indistintamente de la especificidad antignica de estos linfocitos. Un ejemplo de mitgeno seran las lectinas. De las principales lectinas se pueden destacar:
Concanavalina A (Con A) Estructura Ligando Clulas diana Tetrmero -D-manosa y -D-glucosa Linfocitos T Fitohemaglutinina (PHA) Tetrmero N-acetilgalactosamina Linfocitos T Mitgeno Pokeweed (PWM) Polmero di-N-acetilcitobiosa Linfocitos T y B
Superantgenos.- Son protenas (toxinas) que actan como mitgenos de los linfocitos T. Se caracterizan porque activan el linfocito T sin ser reconocidos por el TCR, es decir, los activan de forma inespecfica provocando una activacin rpida y potente. Slo reconocen reas del TCR y una parte de la molcula de MHC. Su importancia radica en su capacidad para activar a muchos linfocitos T, con la consiguiente sntesis de cantidades elevadas de citoquinas y anomalas clinicohistolgicas similares al shock sptico. Como ejemplo de superantgeno tenemos la enterotoxina de Staphylococcus, y la toxina del sndrome del shock txico (suele ocurrir con los tampones higinicos femeninos si se sobrepasan los tiempos de uso recomendados). Bases estructurales de la unin al antgeno.- Los antgenos pueden ser monovalentes o polivalentes. La superficie de un antgeno posee muchos determinantes antignicos potenciales o epitopos. El nmero de molculas de un anticuerpo que pueden unirse a una molcula de antgeno al mismo tiempo define la valencia del antgeno. Existen impedimentos estricos que pueden limitar el nmero de anticuerpos diferentes que pueden unirse a la superficie de un antgeno a la vez, de tal forma que el nmero de epitopos de un antgeno es siempre mayor o igual a su valencia. Por ejemplo, un antgeno con dos epitopos puede unirse a dos anticuerpos, y se dice que es un antgeno con dos valencias. Pero si un antgeno tiene 6 epitopos, pero por problemas de espacio slo es capaz de unirse a 4 anticuerpos, tendr slo 4 valencias. Por tanto, el nmero de epitopos no es siempre igual al nmero de valencias, puede ser mayor o igual, pero nunca menor.
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El tamao de los complejos inmunes tiene gran importancia, ya que dependiendo de su tamao pueden provocar ms o menos lesiones. Por ejemplo, los complejos antgeno-anticuerpo pueden producir vasculitis y glomerulonefritis, puesto que la circulacin de los complejos por los vasos puede producir la obstruccin de estos y desencadenar procesos inflamatorios. Los complejos de gran tamao slo se forman con grandes cantidades de antgeno y anticuerpo (zona de equivalencia). Estos pueden formar redes que al circular por el torrente circulatorio pueden producir la obstruccin de vasos, al mismo tiempo que procesos inflamatorios a distancia, debido a la propia circulacin sangunea. Cuando se unen antgenos y anticuerpos se forman complejos inmunes, siendo de pequeo tamao si hay un exceso de antgenos o de anticuerpos. Sin embargo, si hay niveles similares de antgenos y anticuerpos se da una zona de equivalencia, formndose complejos inmunes de gran tamao que pueden lesionar los tejidos y el bazo. Fuerzas implicadas en la unin antgeno anticuerpo.- La unin del anticuerpo y el antgeno es una unin no covalente, reversible, y se lleva a cabo por fuerzas de Van der Waals, electrostticas, hidrofbicas y puentes de hidrgeno. Recordatorio: Fuerzas electrostticas: Atraccin entre cargas opuestas. Puentes de hidrgeno: Se produce entre un tomo de hidrgeno (positivo) compartido entre dos tomos electronegativos como son el oxgeno o el nitrgeno. Fuerzas de van der Waals: Se producen por fluctuaciones en las nubes de electrones de las molculas que polarizan los tomos vecinos. Fuerzas hidrofbicas: Se producen entre grupos hidrofbicos que interaccionan desfavorablemente con el agua y tienden a agruparse para excluir las molculas de agua. Afinidad, avidez y especificidad.- La afinidad es la fuerza de unin de un nico punto entre un fraccin ab (Fab) de un anticuerpo monovalente y un antgeno monovalente. Cuanto mayor sea la afinidad del anticuerpo por su antgeno menos anticuerpo ser necesario para eliminar al antgeno a concentraciones ms reducidas. La avidez es la fuerza de unin de las dos Fab de un anticuerpo a un antgeno multivalente. Es por consiguiente mayor que la afinidad. Funciones biolgicas de los anticuerpos.- Como sabemos, la IgG es el
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anticuerpo ms abundante, encontrndose sus diferentes fracciones fundamentalmente en las zonas extravasculares. En el ser humano la proporcin : es 2:1 y en el ratn 20:1. La funcin y la distribucin de los diferentes isotipos (as como de los distintos subtipos) de inmuno-globulinas se recogen en las tablas:
Funciones de la Fab: Neutralizacin de antgenos: actuando como anticuerpo secretado esta fraccin se une a las toxinas bacterianas impidiendo que sean reconocidas y puedan penetrar en la clula husped. En el caso de los virus, se une a las protenas de la cpsula y evita que sean reconocidas por la clula husped, impidiendo su entrada. Receptores de antgeno de los linfocitos B: actuando como BCR presenta una regin intracelular, otra transmembrana y otra extracelular. La regin intracelular es tan pequea que no permite la transmisin de la seal al interior de la clula. Para resolver esta cuestin, el BCR se vale de cadenas laterales y que presentan dominios citoplasmticos tirosn quinasa. Funciones de la Fc: Activacin del complemento: los anticuerpos que con mayor certeza activan el complemento por la va clsica (ver Tema 7) son la IgG y la IgM. La fraccin Fc de los anticuerpos IgG e IgM activa a la fraccin C1q del complemento, que a su vez activa a C1r y C1s, inicindose la cascada proteoltica. Opsonizacin por IgG: la IgG recubre la porcin exterior de las bacterias para que puedan ser reconocidas por clulas del husped, en este caso son los monocitos/macrfagos los encargados de reconocerlas y degradarlas, en los cuales
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hay multitud de receptores de la Fc de la IgG. Estos receptores se denominan como Fc seguidos de la letra de la cadena pesada que reconocen. Tras esto se coloca una R de receptor junto a un indicativo del nivel de afinidad: I (alta afinidad), II (afinidad media) o III (baja afinidad). Por ejemplo un receptor de la Fc de la IgG de alta afinidad se
representara como: Fc RI. Estos receptores llevan colas intracitoplasmticas que pueden llevar motivos ITAM (motivos de activacin inmunolgica de tirosina) o ITIM (motivos de inactivacin inmunolgica de tirosina). Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos: esta funcin la realizan clulas K con receptores para IgG y eosinfilos con receptores para IgE. Las IgG reconocen protenas extraas en clulas infectadas. Los patgenos son reconocidos por la Fab de los anticuerpos y las clulas NK llevan receptores para la Fc de estos anticuerpos. Por tanto las clulas NK se unen a los anticuerpos y liberan los grnulos de perforinas y granzimas en el patgeno para destruirlo. Las perforinas producen poros y las granzimas destruyen a la clula. Los eosinfilos llevan receptores FcRI. Cuando hay un antgeno de helminto los anticuerpos IgE lo reconocen mediante su Fab y se unen a l. Cuando los receptores de los eosinfilos se unen a estos anticuerpos se provoca el entrecruzamiento (unin de dos o ms receptores a travs de un antgeno) de los receptores. La consecuencia de ello es que los eosinfilos se desgranulan y causan la muerte de los helmintos.
Hipersensibilidad inmediata mediada por IgE: La IgE posee receptores en eosinfilos, basfilos y mastocitos. Las alergias son reacciones de hipersensibilidad tipo I llevadas a cabo por los mastocitos, los cuales actan muy rpidamente. Son reacciones de defensa normal, el problema es cuando se dan contra alrgenos poco dainos. Si en el suero hay antgenos, la IgE activa a los mastocitos a travs de sus receptores, provocando la liberacin de los grnulos, que desencadenan procesos inflamatorios. Los mastocitos llevan
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receptores FcRI, de modo que recogen toda la IgE del medio. Si no penetra ningn alrgeno que pueda ser reconocido no pasa nada, pero si penetra un alrgeno que pueda ser reconocido se puede provocar el entrecruzamiento de los receptores de las IgE unidas a los mastocitos, lo que provoca la desgranulacin de los mastocitos. Esta desgranulacin induce la liberacin de sustancias de liberacin rpida (histamina), de liberacin media (leucotrienos, prostaglandinas y heparinas) y de liberacin lenta (citoquinas). Las citoquinas actan si se mantiene el contacto con el alrgeno, ya que no son sustancias preformadas, sino que se deben sintetizar. Las sustancias de liberacin rpida y las de liberacin media son vasodilatadores que provocan un aumento de la liberacin de clulas y lquidos al medio, es decir, provocan inflamacin. Tambin provocan constriccin del msculo liso de los bronquios y un incremento de la secrecin de las glndulas exocrinas (se da un incremento de moco). Si estos mediadores actan a nivel general se habla de asma, mientras que si actan a nivel local puede tratarse de conjuntivitis, etc. Inmunidad en la mucosa mediada por IgA: La mayor parte de los anticuerpos IgA se sintetiza en las clulas plasmticas que se encuentran justo debajo de las membranas basales epiteliales del intestino, epitelios respiratorios, glndulas lacrimales y salivales y la glndula mamaria lactante. La IgA es sintetizada y liberada en el tejido linfoide asociado a mucosas por linfocitos B. Las clulas plasmticas presentan un gran desarrollo del RER, ya que es en este donde se producen los anticuerpos. La IgA es liberada en forma dimrica en la zona basal de los epitelios, y se ve atrada por el polo basal de las clulas epiteliales, donde se encuentra su receptor (receptor poli-Ig). Cuando se une al receptor, ste se internaliza junto con la IgA y la transporta hasta el polo apical de la clula, donde ser liberada (proceso de transcitosis). En este polo se libera la IgA dimrica junto con una porcin de su transportador, la cual se denomina componente secretor. Una porcin menor del receptor-transportador se queda en la clula y sirve para regenerar el transportador. Por este proceso de transcitosis es liberada la IgA al interior del tubo digestivo. Inmunidad neonatal mediada por IgG e IgA maternas: La IgG posee la capacidad de atravesar la barrera placentaria, pero para ello necesita de un transportador de membrana conocido como FcRn. Este es un transportador de la IgG que interviene en el paso de defensas de la madre al feto. El transportador ayuda a la IgG a atravesar la barrera placentaria, de modo que un recin nacido est defendido durante los primeros 3-6 meses de vida. Sin embargo, la IgA se transfiere a los recin nacido a travs de la leche materna. En una mujer embarazada hay que tener muy en cuenta su grupo sanguneo Rhesus (Rh), ya que si la mujer es Rh- produce anticuerpos contra el Rh+ del feto y
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estos anticuerpos son IgG que tienen la capacidad de atravesar la barrera placentaria. En el primer embarazo, no hay problema pero en el segundo s, porque se producira la activacin de las clulas de memoria con la consiguiente destruccin de las clulas sanguneas del feto. Sin embargo, los anticuerpos anti-sistema AB0 son del tipo IgM, que son demasiado pesados para atravesar la barrera placentaria. Retroinhibicin de la respuesta inmune mediada por IgG: el sistema inmune tiene un autocontrol de la respuesta inmune. Los linfocitos B poseen en su membrana receptores de afinidad media-baja para la Fc de la IgG (Fc RII). Estos receptores se conocen como el cluster de diferenciacin CD32. Los receptores llevan motivos ITIM (motivos inhibidores de tirosina) en su cola citoplasmtica. Cuando en el medio hay un exceso de IgG, son reconocidos por estos receptores y se induce la inhibicin de la activacin de los linfocitos B. Son receptores de afinidad baja o media para dejar que tenga lugar la respuesta inmune.
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TEMA 7. EL SISTEMA DEL COMPLEMENTO Concepto, descubrimiento y generalidades.- Uno de los elementos ms potentes de la inmunidad innata es el complemento. Fue descubierto por Jules Bordet, quien lo llam alexina y recibi el premio Nobel por este descubrimiento en 1919. Bordet observ que al administrar suero fresco a un medio con bacterias y anticuerpos, las bacterias eran destruidas. Sin embargo, si no se administraba el suero, los anticuerpos precipitaban las bacterias pero no las destruan. Posteriormente Paul Erlich lo denomin complemento porque complementa la accin de los anticuerpos. Adems, se comprob que el complemento perda su poder ltico al calentar el suero a 56 C durante media hora, lo que indica que son molculas muy termolbiles. Caractersticas generales de la activacin del complemento.- Est formado el sistema del complemento por protenas sricas y de superficie celular que interactan entre ellas y con otras molculas del SI de una forma sumamente regulada. Estas protenas son sintetizadas principalmente en el hgado, pero tambin se pueden sintetizar en el rin, aunque en los tejidos inflamados pueden producirlas los propios macrfagos. El conjunto de protenas del complemento se denominan con la letra C, y un nmero del 1 al 9, sobre todo las que se activan por la va clsica. Cuando se activan, lo hacen unas a otras en cascada, es una proteolisis secuencial. Cuando nos vamos a referir a la protena C1 activa lo indicamos como: C 1 (el guin encima del uno), y para indicar que est inactiva o inhibida lo expresamos como: iC1. Todas las protenas del complemento son nicas salvo C1, la cual est formada por tres protenas: C1q, C1r y C1s. Las protenas del complemento al sufrir la proteolisis se dividen en dos fracciones: a (fraccin pequea) y b (fraccin grande). Como veremos ms adelante, las protenas del complemento pueden activarse por tres vas como se muestra en la figura: va clsica, va alternativa y va MB-lectina. En
el caso de la va alternativa, las protenas se denominan como Factor ms una letra.
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Estas protenas al romperse tambin originan una fraccin a y otra b. Por ejemplo, Factor Bb hace referencia a la fraccin b del Factor B. Las protenas del complemento tienen distintas funciones o capacidades, como la capacidad de lisar a las bacterias, produciendo poros en la membrana a travs del complejo de ataque, la capacidad de atraer (quimiotaxis) a los fagocitos al foco de infeccin por medio de las fracciones C5a y C3a, y la capacidad de opsonizacin (proceso de fijacin de las opsoninas, como la IgG o fragmentos del complemento, a la superficie de los microorganismos) de la fraccin C3b para facilitar la fagocitosis. Las bacterias opsonizadas pueden ser reconocidas por los macrfagos y ser engullidas por fagosomas, los cuales se fusionan con los lisosomas de la clula linfocitaria formando un fagolisosoma que destruye el patgeno por acidificacin, o por la generacin de radicales de oxgeno u otros compuestos perjudiciales para bacteria. El complemento es un conjunto de protenas que van en el torrente sanguneo de forma no activada (zimgenos), activndose en cadena por las enzimas convertasas cuando se da un proceso infeccioso. Como se ha dicho, estas protenas tienen diversas funciones: pueden actuar como opsoninas, provocar la lisis de la bacteria, o pueden actuar como molculas quimiotcticas (atraen clulas hacia el foco infeccioso). Los genes que codifican las protenas del complemento se encuentran en el brazo corto del cromosoma 6. Los zimgenos ms comunes son los C2, C3 y C4, siendo sus formas activas ms representativas las C2a, C2b, C3a, C3b, C4a y C4b respectivamente. El complemento discrimina entre lo propio y lo extrao. Las clulas del husped poseen una serie de protenas de membranas reguladoras de la accin del complemento que bloquean su activacin sobre clulas propias. Las primeras clulas que se activan cuando un patgeno entra en el organismo son los monocitos macrfagos. Los macrfagos al activarse liberan una serie de citoquinas, entre ellas IL-6, IL-1, TNF, INF e INF. La IL-6 acta sobre el hgado induciendo la liberacin de las protenas de fase aguda. Entre estas protenas destacan la protena C reactiva, la protena de unin a manosa (MBP o MBL), la fibronectina, el fibringeno y la protena A amiloide (SAP). La presencia de estas protenas indica que hay un proceso infeccioso-inflamatorio. En la mayora de los casos estas protenas actan como opsoninas, recubriendo las paredes bacterianas, haciendo de esta forma a las bacterias ms apetecibles para la fagocitosis por los macrfagos activados. Una vez que el macrfago ha reconocido a la bacteria por estas opsoninas, la introduce en su interior fagocitndola y adems libera protenas del complemento.
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El acontecimiento central de la activacin del complemento es la proteolisis de la protena C3 para generar productos bilgicamente activos y la posterior unin covalente de C3b a la superficie del patgeno o a los anticuerpos unidos a antgenos. Los productos de activacin del complemento se unen de forma covalente a la superficie de las clulas microbianas o a los anticuerpos fijados a los microorganismos y otros antgenos. La activacin del complemento se inhibe mediante protenas reguladoras que estn presentes en las clulas propias normales del husped y ausentes en los microorganismos. La va alternativa es ms antigua filogenticamente que la clsica, pero esta ltima fue la primera en descubrirse, de ah la nomenclatura. Como decamos anteriormente, el reconocimiento de los microorganismos por el complemento y su activacin tiene lugar de tres formas: -Activacin por la va clsica. Se denomina as porque se descubri en primer lugar. Esta va se activa por la presencia de IgG o IgM unidos a la superficie de un microorganismo. Cuando estos anticuerpos se unen a las protenas de membrana del patgeno se forma el complejo antgeno-anticuerpo y se provoca la activacin de C1q, la cual tiene una estructura similar a las varillas de un paraguas invertido. La unin se produce por la fraccin Fc. Al activarse C1q activa a C1r, la cual activa a su vez a C1s. A partir de aqu se van a ir activando el resto de protenas del complemento hasta dar lugar a una serie de convertasas: C3 convertasa y C5 convertasa, que son protenas muy
activas en la lisis de las bacterias. C1s provoca la activacin de C4, que se rompe en C4a y C4b, unindose C4b a la superficie del agente patgeno. C4b se une a C2 activndola, y C2 es entonces fragmentada por C1s en C2a y C2b. C2a se une a C4b y forman una C3 convertasa en la superficie del patgeno. Esta convertasa rompe gran multitud de protenas C3 en C3a
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y C3b. C3b se une a la superficie del patgeno y puede o actuar como opsonina o lisar esta clula. Si todo esto no es suficiente para provocar la lisis de la bacteria, C3b se une a la C3 convertasa (C4b y C2a) y se forma una convertasa C5. Esta convertasa tiene capacidad para la activacin secuencial de C6, C7 y C8, las cuales se unen en la membrana del patgeno. Este complejo causa un dao moderado a la membrana, y tambin sirve para inducir la polimerizacin de C9 y su unin al complejo anterior. En consecuencia, C9 forma poros en varias zonas del patgeno provocando la lisis osmtica de ste. Este complejo se conoce como MAC (complejo de ataque a la membrana). Adems de llevar a cabo la lisis de ciertos patgenos, el complemento posee otras dos funciones: la opsonizacin y la regulacin de la inflamacin. En cuanto a la opsonizacin, determinadas fracciones del complemento (C3b) tienen la capacidad de actuar como opsoninas, permitiendo as a macrfagos y neutrfilos realizar mejor la fagocitosis. En el caso de la regulacin de la inflamacin, hay fracciones del complemento que son proinflamatorias (C3a y C5a) y quimioatrayentes. Por esta va el complemento ayuda a que la inmunidad especfica humoral sea ms efectiva.
- La va alternativa. Esta va fue descubierta posteriormente, pero filogenticamente es ms antigua que la clsica. Esta va se activa de forma espontnea en ausencia de anticuerpos. Se activa por el reconocimiento directo de ciertas estructuras de la superficie de los microorganismos y por ello forma parte de la inmunidad innata. El componente C3 se fragmenta espontneamente y se une al Factor B, provocando su fragmentacin en Bb y Ba. El conjunto formado por la C3 fragmentada y Bb forma una C3 convertasa, que acta sobre multitud de molculas de C3 rompindolas en C3a y C3b. Esta C3b se une a la membrana del patgeno y a la de las clulas del husped. Entonces el Factor B se une a esta C3b unida a la membrana de las clulas y es roto en Bb, que permanece unido a C3b, y Ba,
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que es liberada. Otros elementos que podran activarla son la presencia de LPS, algunos vegetales, inmunoglobulinas (IgG, IgA, IgE), veneno de cobra, algunas enzimas como la tripsina. Cuando esto ocurre en la superficie de un patgeno, el Factor P se une al dmero C3b,Bb, estabilizando la actividad de esta convertasa, la cual es equivalente a la C3 convertasa (C2a,C4b) de la va clsica. Si a esta convertasa se le unen ms molcula de C3b se obtendr una C5 convertasa equivalente a la de la va clsica. Si la convertasa C3b,Bb se forma en la superficie de las clulas del husped es rpidamente inactivada, ya que las clulas del husped poseen protenas reguladoras que se unen a estas C3 convertasas e inactivan C3b, de modo que no pueden destruir las membranas del husped. Estas protenas reguladoras son: DAF, CR1, MCP y protena H. - La va de la lectina. Se desencadena la activacin en ausencia de anticuerpos por la unin de polisacridos microbianos a lectinas circulantes. Se activa por una protena plasmtica denominada lectina fijadora de manosa (MBL), que reconoce los residuos de manosa terminales situados en la glucoprotenas y los glucolpidos microbianos. Para que esta va se active debe haber lectina en el suero. En condiciones normales esta va va a estar inactiva, pero al penetrar un patgeno con manosa en su membrana se va a activar. La lectina activa provoca la activacin de la C3 convertasa, dndose la respuesta amplificadora que rompe gran cantidad de C3. El resto de la va es igual a la va clsica.
Mecanismos de regulacin del complemento.- Los mecanismos de regulacin del complemento se recogen en la siguiente tabla:
Mecanismos de regulacin del complemento PROTE AS SRICAS REGULADORAS ACCI C1 inhibidor Se une a C1s activado inhibindolo. Bloquea la va clsica. Su dficit: Edema angioneurtico o edema de Quinke Bloque la va clsica y alternativa inhibiendo la activacin de C3 convertasa. Bloquea la C3 convertasa de la va alternativa y potencia al factor I. Su dficit: Glomerulonefritis membranosa. Bloquea la C3 convertasa de la va clsica y alternativa. Su dficit: Hemoglobinuria paroxstica nocturna. Necesaria para la unin protena-lpido. Protena reguladora de membrana que impide la unin de C8 y C9 para formar MAC y que esta se una a membranas propias.
Factor I Protena H
DAF
CD59 o Pronectina
La protena C1 inhibidor impide que las clulas del husped sufran edema angioneurtico o de Quinke, provocado por la va clsica activa que incluso acta contra clulas del husped, lo que ocasiona una fuerte inflamacin a nivel de las mucosas. El dficit de esta protena ocasiona este edema. En cuanto a la protena DAF, se trata de una protena de los eritrocitos. Cuando se activan determinadas fracciones del
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complemento como la C3 convertasa, destruyen los eritrocitos, lo que es impedido por esta protena. Un dficit de DAF provoca una disminucin de la poblacin de glbulos rojos, por lo que no llegara suficiente O2 a los tejidos. Adems, se excretara hemoglobina en la orina, ya que habra mucha en sangre. Esto es lo que se conoce como hemoglobinuria paroxstica nocturna, enfermedad que es por brotes (se da cuando se activan la va clsica o la alternativa). Como los patgenos no presentan estas protenas, el complemento slo los ataca a ellos y no a las clulas del husped. Existen cinco receptores diferentes para protenas del complemento:
PRI CIPALES RECEPTORES DEL COMPLEME TO E LA SUPERFICIE CELULAR RECEPTOR ESPECIFICIDAD FU CIO ES TIPOSCELULARES CR1 (CD35) C3b, C4b, C1q Transporte de Todas las cls sangre inmunocomplejos para menos plaquetas su eliminacin CR2 (CD21) C3d, C3b, C3dg virus Activacin de linf B por Clulas B, dendrticas y de Epstein Barr inmunocomplejos foliculares CR3 (CD11c/CD18) LPS, fibringeno Estimula fagocitosis Macrfagos/mono y PMN. CR4 (CD11c/CD18) iC3b Estimula fagocitosis Fagocitos Receptor C1q C1q Estimula fagocitosis y Macrfagos/mono, eliminacin de plaquetas y inmunocomplejos clsendoteliales
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TEMA 8. EL DESARROLLO DE LOS LINFOCITOS B Y LA GENERACIN DE LA DIVERSIDAD DE LOS ANTICUERPOS.
Caractersticas generales de la maduracin de los linfocitos B.- Como hemos visto en el Tema 3 (pg. 15), las clulas del sistema inmune provienen de clulas madre pluripotenciales de la mdula sea. Esta se encuentra en el tejido seo trabecular o esponjoso en el interior de los huesos largos, cortos y planos. No se sabe con exactitud cuales son los factores que actan sobre la clula madre hematopoytica para que se diferencie hacia un precursor linfoide o hacia un precursor mieloide. El precursor linfoide da lugar a linfocitos T (que migran al timo, donde se educan y maduran), a linfocitos B (que se quedan en la mdula sea) y NK.
Los linfocitos B pasan por cuatro fases de maduracin. El precursor linfoide se diferencia a prolinfocito B, estadio en el que comienzan a reordenarse los genes de las inmunoglobulinas. Una vez se han reordenado los genes y se expresan las inmunoglobulinas, tiene lugar la educacin de estas clulas. Aquellos linfocitos B que produzcan inmunoglobulinas con una alta afinidad por antgenos propios sern destruidos para evitar enfermedades autoinmunes. Slo madurarn aquellos linfocitos B que produzcan inmunoglobulinas que reconozcan antgenos extraos. Entonces se habla de linfocitos B maduros (en aves maduran en la bolsa de Fabricio), los cuales migran hacia los rganos linfoides perifricos.
El precursor linfoide se pone en contacto con las clulas estromales de la mdula sea a travs de molculas de adhesin celular. Estas interacciones promueven la unin del receptor tirosin quinasa Kit, en la superficie de las clulas pro-B, al factor
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estimulante de crecimiento de clulas madre (stem-cell factor o SCF), as activan la quinasa e inducen la proliferacin de los progenitores B. Los estadios posteriores necesitan IL-7 para la proliferacin y progresin en el desarrollo. La clula estromal libera IL-7, la cul acta sobre el prolinfocito B tardo que muestra receptores para esta interleuquina. La unin de la IL-7 al receptor permite la maduracin de esta clula hasta linfocito pre-B, el cual comienza a expresar en el exterior su receptor: la inmunoglobulina. La inmunoglobulina expresada es todava muy inmadura, ya que las cadenas L que presenta son unas cadenas sustitutas que se cambiarn por las definitivas en el proceso de maduracin. Esta cadena presenta un dominio V y otro 5. Las cadenas sustitutas producen la inhibicin de la recombinacin gnica en las cadenas pesadas, inducen la proliferacin de clulas pre-B y estimulan la recombinacin en las cadenas ligeras
Estas clulas pre-B se transforman en un linfocito B inmaduro, el cual saldr de la mdula como linfocito B maduro, que ya presenta sus cadenas L definitivas. Los anticuerpos que lleva un linfocito maduro recin salido de la mdula sea son IgM y/o IgD, producindose ms tarde el cambio de isotipo. Estas inmunoglobulinas se cambiarn por aquel isotipo que de una mejor respuesta al antgeno al que se unan estos anticuerpos. El linfocito B maduro es capaz de abandonar la mdula sea para dirigirse a los rganos linfoides perifricos. Si aqu conecta con antgenos extraos, el linfocito B se activa, y se transforma en clula plasmtica liberadora de anticuerpos. Cuando el linfocito B se encuentra con un antgeno en los rganos linfoides perifricos, se activa y prolifera, dando lugar a un clula plasmtica. Si pasado un tiempo el linfocito no ha reconocido ningn antgeno, se degrada.
Organizacin de los genes de las inmunoglobulinas en clulas de la lnea germinal.- En 1950 se vio que las inmunoglobulinas presentaban regiones V (variables) y regiones C (constantes), y que ambas regiones constituan una sola cadena polipeptdica. Segn la hiptesis un gen una protena, se pens que ambas regiones estaban codificadas por un solo gen, por lo que para explicar el gran nmero de especificidades de un organismo seran necesarios un gran nmero de genes. En 1965,
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Dreyer y Bennet concluyeron que cada cadena de inmunoglobulina estaba codificada por dos genes, de modo que las regiones V y C se unan en el ADN o en el ARNm y daban las inmunoglobulinas funcionales. En 1985, Sumusu Tonegawa observ, mediante la tcnica Southern Blot, que existan diferencias entre los genes de las inmunoglobulinas de una clula embrionaria o no linfoide y los genes de los linfocitos B. Al realizar esta tcnica, en las clulas embrionarias o no linfoides se observaba slo una banda de 6 kb, mientras que en los linfocitos B se observaba esta banda junto con otra, la cual poda ser de 2,5 o de 1,5 kb. Esto permiti observar que cuando tiene lugar la sntesis de las inmunoglobulinas, sucede un reordenamiento gnico. Cada locus germinal de Ig consta de mltiples copias de al menos tres tipos diferentes de segmentos gnicos, los segmentos V, J y C. Adems, el locus de la cadena pesada tiene un segmento de diversidad (D). Dentro de cada locus, cada grupo de segmentos gnicos est separado de los otros por fragmentos de ADN no codificante. El reordenamiento gnico ocurre de una forma determinada, y as se genera el repertorio inmunolgico de los organismos. En lnea germinal, la cadena H est en el cromosoma 14, la cadena L en el 2, y la cadena L en el 22, de tal manera que de la posicin 5 a 3 en cada cromosoma encontramos ordenados los genes de variabilidad V (van franqueados por una secuencia lder o seal cada uno), los genes de diversidad D (en las cadenas pesadas), los genes de unin J y los genes de los dominios constantes C. La cadena H presentan 200 genes V, 27 genes D, 6 genes J funcionales y 3 pseudogenes, y 6 genes C. De los genes C, 4 son similares y 2 son ms pequeos. Los
dos ms pequeos son los que conforman el dominio transmembrana y el extremo carboxilo. En cuanto a la cadena L, tienen unos 100 genes V, 5 genes J, y un solo gen
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C. La cadena L tiene una organizacin algo diferente: 100 genes V, y genes J y C alternos (6 genes de cada tipo).
Secuencia y mecanismos de reordenacin de los genes de las inmunoglobulinas.- Al producirse el reordenamiento gnico, se van a obtener dos pptidos diferentes: las cadenas H (pesadas) y las cadenas L (ligeras), cada una con una regin constante y una regin variable. Estos pptidos presentan puentes disulfuro intracatenarios, responsables de los dominios globulares, y puentes disulfuro intercatenarios, responsables de que las diferentes cadenas permanezcan unidas.
La reorganizacin ocurre en etapas muy tempranas de la maduracin de los linfocitos B, y en la mdula sea. El primer reordenamiento tiene lugar en la cadena pesada entre los genes D y J a nivel del ADN (recombinacin somtica), y se forma un ADN reordenado con los genes D y J pegados, lo que facilita el segundo reordenamiento. Este segundo reordenamiento tambin tiene lugar en el ADN, es decir, sucede una nueva recombinacin somtica, y ocurre entre los genes V y D-J reordenados, obtenindose un nuevo ADN reordenado. A continuacin, este ADN se
transcribe y se obtiene un transcrito primario. Al procesarse (splicing) el ARNm tendr lugar el tercer reordenamiento: genes C con genes V-D-J. Finalmente este ARNm se traduce y se glicosila, pudiendo ya expresarse la cadena peptdica.
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El reordenamiento de la cadena H estimula y potencia el reordenamiento de la cadena L. La primera cadena L en reordenarse es la kappa. El primer reordenamiento tiene lugar a nivel del ADN entre los genes V y J, obtenindose un ADN reordenado, el cual se transcribe y se obtiene un trascrito primario. En este transcrito tiene lugar el segundo reordenamiento entre los genes V-J y C, el cual lleva la cola poli-A. Este ARNm se traduce y sufre un proceso de glicosilacin, pudiendo expresarse entonces esta cadena. Ambas cadenas sufren una exclusin allica, de modo que de forma azarosa se reordena primero uno de los dos cromosomas del par de homlogos, permaneciendo el otro en espera. En el caso de la cadena H, si el reordenamiento del primer cromosoma n 14 es fructfero, sigue hasta el final y se obtiene una cadena H. Pero si no es fructfero, comienza la reordenacin en el segundo cromosoma. Esto se denomina exclusin allica o exclusin de la cadena pesada.
En el caso de la cadena ligera, el reordenamiento comienza de forma azarosa, al igual que en las cadenas pesadas, en los cromosomas n 2. Si el reordenamiento va bien con el primer cromosoma, se termina dando una cadena kappa. Si no va bien, esta cadena kappa se queda con un reordenamiento aberrante y comienza el otro cromosoma a reordenarse. Si el reordenamiento en este cromosoma tambin es anmalo, comienza uno de los cromosomas 22 y se produce el reordenamiento de la cadena lambda. Si este reordenamiento va mal, salta el otro cromosoma 22. Esto es lo que se conoce como exclusin de la cadena ligera o exclusin de isotipo. Si ninguno de los cuatro cromosomas consigue reordenar correctamente la cadena L, la clula muere, al igual que si no se puede reordenar la cadena H, ya que la clula carecer de receptor linfocitario. La reordenacin comienza en las regiones variables. Una vez reordenados los segmentos de las regiones variables, tiene lugar el reordenamiento de la regin constante La supervivencia de una clula B depende de un reordenamiento productivo y secuencial de sus genes de inmunoglobulina. Si la primera reordenacin no va bien, se
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intentan reordenamientos alternativos. Se hacen tantos como permita el nmero de genes.
Para demostrar la existencia de la exclusin allica, se tomaron dos conejos homocigotos para la cadena H de las inmunoglobulinas: uno aa y otro bb. Se observ que sus linfocitos llevaban inmunoglobulinas de un solo tipo. Al cruzar ambos conejos, en la descendencia se observ que aunque los linfocitos eran heterocigotos (ab), slo presentaban un tipo de inmunoglobulina: A o B. Con este experimento se demostr la exclusin de las cadenas pesadas. En las cadenas L, entre los genes V y J hay ADN no codificante, pero muy importante. Son secuencias muy conservadas conocidas como secuencias seal de recombinacin (RSS). Estas secuencias son intrones, es decir no se expresan, pero son
fundamentales para que se inicie la recombinacin de los genes puesto que activan el inicio del reordenamiento gnico. Estn compuestas por heptmeros, secuencias espaciadoras de 12 o 23 pares de bases y nonmeros, y se conoce como la regla 12-23 o 23-12. En las cadenas H se pueden encontrar genes V y J que no cumplen esta regla 1223. Pero los genes D aparecen aportando diversidad a la porcin variable de la cadena H puesto que aportan los nonmeros, heptmeros y espaciadores necesarios para que se pueda dar la recombinacin.
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En el 5% de los casos aparecen dos genes D seguidos, lo que aporta mayor variabilidad a esta regin. En organismos con dos genes D, el bucle CDR3 (regin determinante de complementariedad ms hipervariable) ser ms alargado.
Delecin Inversin Durante el reordenamiento de los genes V y J pueden darse inversiones o deleciones. Las enzimas implicadas en el reordenamiento de los genes de las inmunoglobulinas son: Recombinasas. Exonucleasas. Endonucleasas. Ligasas. Enzimas de reparacin del ADN: ADN-pk, Ku-70 y Ku-80. Las recombinasas actan cuando aparece la regla 12-23, es decir, cuando aparecen secuencias seal de recombinacin. Reconocen estas seales y acercan los exones V y J, dando lugar a un ADN intermedio. Son especficas del tipo celular, de modo que el reordenamiento de los genes de las inmunoglobulinas slo se da en los linfocitos B. Adems, slo actan en fases precoces del desarrollo de las clulas (cuando todava son inmaduras), evitando as alterar la especificidad de los anticuerpos. Los genes RAG1 y RAG2 codifican las enzimas recombinasas y protenas reguladoras de su funcin. El dficit de estas protenas provoca la ausencia de linfocitos B y T. Los linfocitos B no poseern sus receptores de membrana y el linfocito T carecer de su TCR, por lo tanto el individuo con este dficit ser un individuo con una inmunodeficiencia. Para que se produzca la reorganizacin de las Ig, se necesita que la cromatina est accesible. En condiciones normales, el material gentico se encuentra en el ncleo protegido por histonas y otras protenas. En el caso de los linfocitos B en desarrollo, estos poseen unas protenas especficas denominadas BSAP que actan sobre el ncleo abriendo la cromatina, una vez que el ADN est accesible actan las recombinasas.
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Cuando se abre la cromatina se inicia la transcripcin del ADN. Delante de los genes V aparecen secuencias promotoras, y delante de los genes C hay secuencias
aumentadoras, que incrementan la transcripcin. Al comienzo, la transcripcin es baja, pero a medida que van teniendo lugar los reordenamientos, los promotores y los aumentadores se van acercando, por lo que se incrementa la velocidad de la transcripcin, aumentando as la produccin de ARNm. Otro proceso que se produce durante el reordenamiento gnico es la adicin y sustraccin de nucletidos al azar, de modo que se incrementa an ms la diversidad de las Fab de los anticuerpos. Esto se conoce como diversidad de unin. Durante el reordenamiento, los genes D-J, V-D o V-J son sometidos a la accin de las recombinasas, que cortan el ADN en los extremos de los heptmeros. Las dos secuencias heptmero se ligan formando la seal de unin, mientras que una endonucleasa corta la horquilla de ADN por un sitio al azar, dando lugar a ADN de cadena sencilla en los extremos que se van a unir posteriormente. Dependiendo del punto de corte, este ADN de cadena sencilla puede contener nucletidos que eran originalmente complementarios en el ADN bicatenario y que por tanto forman pequeos palndromos. Estas tiras de nucletidos que se originan a partir de la hebra complementaria se conocen como nucletidos P. A continuacin acta la desoxinucleotidil transferasa terminal (TdT), que aade nucletidos al azar en los extremos de los segmentos de cadena simple: nucletidos N (carecen de molde). Entonces los dos extremos de cadena sencilla se emparejan. Una exonucleasa corta los nucletidos no emparejados, y la unin codificante se repara por sntesis y ligacin de ADN, dejando en la secuencia final nucletidos P y N.
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Procesos implicados en la generacin del repertorio de anticuerpos.- El repertorio inmunolgico de un individuo es de 109 a 1011 especificidades diferentes. Esta alta variabilidad se debe a diferentes mecanismos:
- Multitud de genes germinales para las cadenas de Igs humanas: V 100 30 40 D 27 0 0 J 6 4 5
H - Diversidad combinatoria: H: 100 (V) x 27(D) x 6(J) = 16.200 : 30(V) x 4(J) = 120 : 40(V) x 5(J) = 200
- Combinacin de las cadenas pesadas y ligeras H y L. 16.200 x 320 = 5 106 - Diversidad de unin: Imprecisin de las uniones entre los segmentos gnicos: deleciones y adiciones (nucletidos P y N). - Hipermutacin somtica: Cuando la clula est madura se produce hipermutacin somtica (cambios puntuales para incrementar la respuesta al antgeno) en los rganos perifricos. Esta hipermutacin tambin incrementa la variabilidad de los anticuerpos. La diversidad combinatoria se debe a: Recombinacin de diferentes segmentos gnicos (V-D-J). Emparejamiento de diferentes cadenas pesadas y ligeras. Fusiones de dos segmentos D (5%). La diversidad de unin ocurre durante el reordenamiento de los segmentos V(D)J y consiste en la eliminacin de nucletidos o en la adicin de nucletidos P y N. Afecta al CDR3 de los dominios V. Las regiones hipervariables CDR1 y CDR2 son codificadas por los segmentos gnicos V. La regin CDR3 lo es por la unin V(D)J. En la mdula sea se produce la primera seleccin de los linfocitos B, ya que si no se diera se podra llegar al estado adulto con linfocitos B autorreactivos, los cuales provocaran enfermedades autoinmunes. Esto es lo que se conoce como autotolerancia. En cuanto a los mecanismos de tolerancia a los antgenos propios, el proceso es el siguiente: la clula madre se diferencia a precursor linfoide, el cual dar gran cantidad de linfocitos B, cada uno con una especificidad diferente. Las clulas del estroma de la mdula sea presentan antgenos a estos linfocitos, inducindose la apoptosis de aquellos que reconozcan antgenos propios. Las clulas que no reconozcan los antgenos propios llegaran hasta linfocitos B maduros.
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En el esquema se muestran los cambios en la estructura del anticuerpo durante la respuesta inmunitaria humoral. Los linfocitos B maduros salen de la mdula y llegan a los rganos linfoides perifricos. En estos rganos, los linfocitos que reconozcan antgenos extraos proliferarn y darn una respuesta contra estos antgenos. Los linfocitos que no reconozcan antgenos extraos morirn por apoptosis o se transformarn en linfocitos B anrgicos (linfocitos poco respondedores), mantenindose de esta forma la autotolerancia. Existe por consiguiente una seleccin de linfocitos a nivel central y otra a nivel perifrico. A este respecto se han realizado diferentes experimentos. Uno de ellos consisti en tomar dos cepas de ratones transgnicos, una productora de la protena Hel y otra productora de Ac anti-Hel. Al cruzar ambas cepas se obtenan individuos que producan tanto la protena Hel, como el Ac anti-Hel. En estos individuos los linfocitos que reconocan la protena Hel unida a las clulas del estroma de la mdula sea moran por apoptosis. Haba otros linfocitos que reconocan la protena Hel disuelta en el medio, es decir, la reconocan una vez haban salido de la mdula. Algunos de estos linfocitos moran por apoptosis, pero otros o perdan receptores de superficie o cambiaban la especificidad del receptor para mantener la autotolerancia. No se conocen los mecanismos responsables de estos cambios. Otro experimento consisti en introducir a un ratn productor de la protena Kb, los genes de anticuerpos contra esta protena. En este caso se observ que cuando los linfocitos reconocan la protena Kb activaban sus genes RAG1 y RAG2, de modo que se realizaban reordenamientos adicionales en los genes de las inmunoglobulinas. An as, muchas clulas B moran, pero otras conseguan modificar las cadenas L, por lo que modificaban la especificidad de estos linfocitos. Se cree que es as como los linfocitos B modifican la especificidad de su receptor para evitar la muerte del individuo al quedarse sin linfocitos. Tambin se han realizado experimentos sobre la tolerancia perifrica. Si un ratn trasgnico expresa protenas Hel y se le aaden linfocitos B maduros que reconocen esta protena, se produce un bloqueo de estos linfocitos a la entrada del
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rgano linfoide secundario: no se deja que penetren a los folculos linfoides. Tambin se da un bloqueo de los receptores de estos linfocitos, volvindose linfocitos B anrgicos. Los mecanismos de este proceso no se conocen. El siguiente grfico muestra la expresin temporal de algunas protenas importantes en el desarrollo de los linfocitos B.
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TEMA 9. LA EXPRESIN DE LAS DISTINTAS CLASES Y TIPOS DE INMUNOGLOBULINAS.
Introduccin.- Adems del repertorio inmunolgico primario, tambin existe un repertorio inmunolgico secundario.
Como hemos visto en temas anteriores, cuando la clula pro-B pasa a linfocio B inmaduro ocurren una serie de acontecimientos: la reorganizacin de los genes de las cadenas pesadas (exclusin allica), expresin del pre-receptor, la clula entra en mitosis y se produce el reordenamiento de los genes de las cadenas ligeras (exclusin de isotipo), y por ltimo la expresin del receptor IgM o/y IgD. Con todo ello, se produce la generacin del repertorio primario del linfocito, que es el que presenta normalmente el embrin momentos antes de nacer. Pero tras la maduracin del linfocito B, ocurren unos eventos que alteran el repertorio primario y producen el repertorio secundario. La suma de ambos repertorios supone el repertorio inmunolgico del linfocito y del individuo. El repertorio secundario se da una vez el linfocito B ha madurado y llega a los rganos linfoides perifricos. Aqu la inmunoglobulina puede expresarse como receptor de membrana o como forma secretada, se da por tanto un cambio de isotipo de la inmunoglobulina producida, y se produce una maduracin de la afinidad, tambin denominada hipermutacin somtica. Lo que intenta el SI es producir el tipo de inmunoglobulina que de la mejor respuesta frente al antgeno reconocido por ese linfocito. Una vez se han producido estos cambios, el individuo presenta un repertorio inmunolgico secundario, fruto del contacto que ha tenido a lo largo de su vida con diferentes patgenos. Por tanto, el repertorio de un individuo depende de su gentica y del ambiente que lo rodea.
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En las diferentes fases de maduracin, los linfocitos B son responsables del reconocimiento del antgeno y de la funcin efectora de la inmunoglobulina humoral. En el dibujo se aprecia la evolucin del linfocito maduro hasta el estado de clula de memoria o la secrecin de los distintos anticuerpos.
Inmunoglobulinas de superficie y secretadas.- Cuando la inmunoglobulina se encuentra inserta en la membrana de los linfocitos B, estas clulas tienen funcin de reconocimiento. Sin embargo, cuando los linfocitos B se activan, se transforman en clulas plasmticas y secretan la inmunoglobulina al medio, adquiriendo esta una funcin efectora.
En la forma de membrana, cuando se produce el reordenamiento entre los genes VDJ, que forma la regin variable de los anticuerpos, y C, el corte para el religamiento se realiza a nivel del dominio intracitoslico, tras el segundo sitio de poliadenilacin (pAm). Sin embargo, en las formas secretadas, el corte sucede a nivel del primer sitio de poliadenilacin (pAs), el cual es anterior al dominio transmembrana. La formacin de una u otra forma va a depender de la activacin del linfocito por el patgeno, con lo cual hay patgenos que producen la formacin de Ig secretadas, y otros que producen Ig de membrana.
Todas las inmunoglobulinas en forma de membrana son monomricas, por el contrario, la IgM y la IgA en forma secretada son pentamrica (o hexamrica) y dimrica, respectivamente.
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Cambio de clase de las inmunoglobulinas.- El cambio de clase es una modificacin de una Ig de membrana, para hacerse ms activa frente a un determinado patgeno. Este proceso ocurre en los rganos linfoides perifricos. La presencia de un antgeno en un rgano perifrico puede hacer que el soporte de la defensa inmunolgica cambie con el objetivo de producir un anticuerpo ms efectivo contra el patgeno.
Los linfocitos B activados que expresan IgM e IgD sufren un proceso de cambio de isotipo (clase) de la cadena pesada, lo que provoca la sntesis de anticuerpos con diferentes clases de cadenas pesadas como , y . Estos cambios se dan en la Fc, por lo que la especificidad del anticuerpo no vara. El cambio de isotipo se produce en los tejidos linfticos perifricos, en los linfocitos B que se activan en los bordes de los folculos y en los centros germinales. La capacidad de los linfocitos B para producir diferentes isotipos de anticuerpos aporta una enorme plasticidad a la respuesta inmunitaria humoral, ya que permite generar anticuerpos con diferentes funciones efectoras que intervienen en la defensa frente a distintos tipos de agentes infecciosos. El mecanismo molecular ms importante de cambio de isotipo es un proceso conocido como recombinacin de cambio, en el que el segmento VDJ reordenado en un linfocito B se recombina con una regin C y se elimina el ADN intermedio. En el ARN transcrito primario puede darse una recombinacin entre los genes VDJ y C (ms prximo) o C (como muestra la figura). Al contactar con el antgeno, tambin se produce una maduracin en la regin variable de ambas cadenas provocada por mutaciones en la misma. De esta forma el isotipo inicial puede cambiar para potenciar la respuesta frente a dicho antgeno.
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Los genes C presentan por delante seales de corte, de modo que cuando se da el reordenamiento pueden formarse bucles ms o menos complejos que dan lugar a los
diferentes isotipos de las inmunoglobulinas. Estos reordenamientos ocurren a nivel del ADN, por lo que son cambios irreversibles. Todas las recombinaciones para el cambio de isotipo son productivas. En el cambio de isotipo se utilizan diferentes seales de recombinacin (seales de cambio GAGCT, GGGGGT) y diferentes enzimas. Adems, ocurre despus de la estimulacin antignica de los linfocitos B y no durante el desarrollo de stos en la mdula sea. El proceso de cambio de isotipo no es aleatorio, sino que est regulado por clulas T, las cuales liberan citoquinas que actan sobre el linfocito B virgen haciendo que se modifique el isotipo. Diferentes citoquinas inducen o inhiben distintos cambios de isotipo.
Citoquinas
IL-4 IL-5 IFN- TGF-
IgM
Inhibe
IgG1
Induce
IgG2a
Inhibe
IgG2b
IgG3
Inhibe
IgE
Induce
IgA
Aumenta la produccin Inhibe Inhibe Inhibe Induce Induce Induce Inhibe Inhibe Induce
Mutaciones somticas y maduracin de la afinidad.- La maduracin de la afinidad es un proceso por el cual los linfocitos aumentan su repertorio inmunolgico. Este proceso se produce en los rganos perifricos, una vez que el antgeno ha sido presentado al linfocito. Se denomina hipermutacin somtica a los cambios puntuales que se producen en las regiones variables de ambas cadenas (ligera y pesada) para unirse y reconocer mejor al antgeno. Estas mutaciones no son al azar, sino en puntos calientes localizados en las regiones hipervariables de la Fab.
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Son mutaciones que afectan a la secuencia final de aminocidos y se localizan en CDR1, CDR2 y, fundamentalmente en CDR3. Sin embargo, aquellas mutaciones que no afectan a la secuencia final de aminocidos estn repartidas por toda la Fab, ya que no afectan a la especificidad del anticuerpo. Este mecanismo se conoce como maduracin de la afinidad. Para la constatacin de los cambios mencionados, se realiz un experimento con tres cepas de ratones, a las que se inmuniz con oxazolona (una protena). En la primera semana del experimento se sacrific una de las cepas, y se vio que los cambios en las cadenas H y L eran pocos y se concentraban en CDR3 y CDR2. A la segunda semana del experimento se sacrific otra cepa, observndose que el nmero de mutaciones era
mayor y que comenzaban a aparecer en CDR1 tambin, comprobndose al mismo tiempo un cambio de isotipo (IgM a IgG). La tercera cepa sufri una segunda inmunizacin a las dos semanas del experimento, y se sacrific una semana despus. En estos ratones se observ que todos sus BCR eran IgG y que las mutaciones se daban en CDR1, CDR2 y CDR3. Esto confirma que la hipermutacin somtica realmente se produce.
Otras molculas de superficie de los linfocitos B.- Existen otras molculas en la superficie de los linfocitos B, las cuales son indicadoras del estado de maduracin del linfocito B, lo que es til para el diagnstico y tratamiento de tumores.
Las molculas de superficie que caben destacar son: - MHC II, CD40, CD22 y CD72. Estas molculas indican la cooperacin de linfocitos T y B, por lo que aparecen en linfocitos B maduros.
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- CD19, CD20, CD23 y CD40: son receptores del complemento, por lo que aparecen en clulas B maduras. - CD35 y CD21: regulan la activacin de clulas B, por lo que se dan en linfocitos maduros. - Receptor Fc RII: participa en la retroalimentacin negativa de la activacin del linfocito B. Por tanto, tambin se dan en linfocitos B maduros. - CD9 y CD10: aparecen en etapas precoces. Su presencia en sangre indica que probablemente se est ante un tumor, ya que hay linfocitos inmaduros en el torrente sanguneo. Todo lo que se ha visto hasta ahora es vlido para los linfocitos B convencionales, que se denominan linfocitos B2. Estos linfocitos constituyen la poblacin mayoritaria y van en sangre perifrica. Sin embargo, hay una poblacin minoritaria que precede a stos: los linfocitos B1. Las diferencias entre ambos tipos de clulas B se recogen en la siguiente tabla.
Clulas B1 Cuando se producen por primera vez Modo de renovacin Produccin espontnea de Ig Especificidad Isotipos secretados Hipermutacin somtica Respuesta a Ag carbohidratados Respuesta a antgenos proteicos Feto Autorrenovacin Alta Multirreactividad IgM >> IgG Baja o ninguna Si Posible Clulas B2 Despus de nacimiento Se renuevan en mdula sea Baja Monoespecificidad IgG > IgM Alta Posible Si
Se caracterizan los linfocitos B1 porque son CD5+ y no llevan la enzima TdT, por lo que ni aaden ni delecionan nucletidos, de ah que sean menos diversos que los linfocitos B2. Son una fuente de tumores y de enfermedades autoinmunes, se producen por primera vez en el feto y sufren autorrenovacin (no se reemplazan). Tienen una gran capacidad de producir Ig de manera espontnea y multirreactividad. Las propiedades
sealadas hacen que sean clulas capaces de producir enfermedades autoinmunes.
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Estos linfocitos se localizan en epiplones (proteccin grasa del abdomen), grasa pleural, hgado y mdula sea. Suelen ser fuente de tumores, dando la mayora lugar a leucemias linfocticas crnicas.
Tumores de clulas B.- Los tumores de linfocitos B pueden aparecer en los distintos estadios de maduracin de este. Los tumores son ms frecuentes en aquellos estadios en donde la clula tiene un mayor nmero de transformaciones, puesto que la rotura del ADN durante el reordenamiento de los genes de las inmunoglobulinas puede provocar mutaciones o translocaciones cromosmicas, pudindose producir la activacin de un protooncogen. Una translocacin bastante frecuente es la que sucede entre los cromosomas 8 y 14, de modo que el proto-oncogen c-myc pasa al cromosoma 14, colocndose junto a los genes de las inmunoglobulinas. La expresin masiva de c-myc bajo el control de las secuencias reguladoras de los genes de las inmunoglobulinas provoca un tumor. En otras ocasiones se da un incremento de la expresin de la protena Bcl-2, la cual inhibe la apoptosis.
Es importante saber, cuando se ha producido un tumor, en qu fase de maduracin de los linfocitos B ha ocurrido, para aplicar el tratamiento ms adecuado. La siguiente tabla muestra las caractersticas de diferentes tumores de clulas B.
Tumor Leucemia linfoctica crnica Leucemia linfoblstica aguda Leucemia de clulas pre-B Leucemia de clulas de centro folicular Linfoma de Burkitt Macroglobulinemia de Waldenstrm Mieloma mltiple Clula B secretora de IgM Clula plasmtica. Varios isotipos Clula normal equivalente Clula B1 CD5 Progenitor linfoide Clula pre-B Localizacin Sangre Mdula sea y sangre Estado de los genes V de Ig No mutado No mutado No mutado Mutado, variabilidad intraclonal Periferia Mutado, sin variabilidad intraclonal Mdula sea Mutado, sin variabilidad intraclonal
Clula B inmadura
El anlisis del ADN de los linfocitos de la sangre usando la tcnica de Southern
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puede utilizarse para detectar tumores linfoides. Los tumores de clulas B maduras, como los linfomas de Burkitt, expresan genes V mutados en los que se encuentran pequeas variaciones entre las lneas diferentes del linfoma de Burkitt del mismo paciente, debido a que la hipermutacin somtica es un proceso activo en estas clulas tumorales. Sin embargo, los tumores B de estadios posteriores, como los mielomas mltiples, contienen genes V mutados pero no presentan variacin intraclonal porque en ese estadio del desarrollo la hipermutacin somtica ya ha cesado.
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TEMA 10. EL COMPLEJO MAYOR DE HISTOCOMPATIBILIDAD.
Concepto, papel e importancia.- La tarea de presentar antgenos asociados a clulas para que sean reconocidos por los linfocitos T corre a cargo de un complejo de protenas especializadas que son codificadas por genes presentes en un locus. Este conjunto de protenas es denominado complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) y se encuentra en la membrana de la mayora de las clulas del organismo.
Se caracteriza el MHC porque es polimrfico (puede presentar muchas formas) y polignico (muchos genes participan en su expresin). Ambos rasgos hacen que tenga una gran variabilidad, lo que le permite reconocer a gran cantidad de antgenos. Raramente se da que un antgeno escape al reconocimiento y control del MHC, aunque hay organismos ms susceptibles que otros a unas determinadas infecciones en base a la gentica de su MHC. A diferencia de las inmunoglobulinas, se expresan los genes del MHC de los dos progenitores, es decir, se da codominancia. En el caso de humanos el MHC se denomina HLA (antgeno humano leucoctico), y en el caso de ratones de H-2. El TCR no reconoce al antgeno a menos que se lo presente el MHC; a este hecho se le conoce como restriccin por MHC. El reconocimiento por las clulas T viene dado por la especificidad del antgeno por el TCR y porque adems el MHC debe ser propio. Las molculas del MHC son importantes porque participan en mltiples procesos: - Participan en el rechazo de injertos y transplantes. - Participan en la presentacin y reconocimiento antignico. - Estimulan la produccin de anticuerpos, ya que existe cooperacin entre los linfocitos T y los B: al activarse los linfocitos T, pueden activar a los linfocitos B. - Participan en la citolisis mediada por linfocitos. - Intervienen en la restriccin de las respuestas inmunitarias.
Estructura de las molculas de clase I y II.- Hay dos tipos de MHC, de clase I y de clase II. Los MHC clase I estn presentes en todas las clulas nucleadas del organismo y se hallan implicadas en la presentacin de los pptidos o antgenos citoslicos a las clulas T citotxicas (CD8). Estas clulas responden a antgenos endgenos.
Las molculas del MHC de clase I presentan dos cadenas: una cadena y otra (o 2 microglobulina). La cadena presenta tres dominios globulares de 90 aminocidos cada uno: 1, 2 y 3, mantenidos por puentes disulfuro intracatenarios, por lo que pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas. La cadena presenta adems un dominio transmembrana de 25 aminocidos y otro intracitoplasmtico de 30 aminocidos. Este ltimo dominio al fosforilarse activa a protein quinasas que transmiten la informacin al
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interior celular. Por su parte, la cadena forma un dominio globular de 100 aminocidos mantenido por puentes disulfuro intracatenarios. Entre los dominios 1 y 2 se forma el bolsillo de unin al pptido, el cual se considera cerrado porque no admite pptidos mayores de su tamao. Las molculas del MHC de clase II, normalmente se expresan slo en las clulas dendrticas, los linfocitos B, los macrfagos y algunos otros tipos celulares. Todas ellas estn implicadas en el procesamiento de antgenos exgenos y la posterior presentacin antignica a las clulas Th (CD4). Tambin presentan dos cadenas: una cadena y otra , pero en este caso ambas tienen la misma conformacin: tienen dos dominios globulares de 90 aminocidos cada uno mantenidos por puentes disulfuro intracatenarios (1 y 2 en la cadena , y 1 y 2 en la cadena ), un dominio transmembrana de 25 aminocidos, y un dominio intracitoplasmtico, el cual transmite la seal al interior celular. En este caso, el bolsillo de unin al pptido lo forman 1 y 1, y es abierto porque admite la unin de pptidos superiores a su tamao. Los MHC clase II se expresan constitutivamente en clulas presentadoras de antgeno (CPA) del sistema inmunitario.
La unin de los pptidos a las molculas de clase I y II.- Las molculas del MHC clase I y II llevan a cabo diferentes funciones entre las que destaca la presentancin del antgeno a linfocitos T distintos. En ambas molculas los dominios globulares estn formados por fibras antiparalelas, quedando en los bolsillos las fibras al fondo (unidas en el caso del MHC de clase I) y hlices a los bordes para facilitar la unin al antgeno.
Los pptidos que se unen a las molculas de MHC de clase I son pequeos (8 o 9 aminocidos) y lineales, ya que deben quedar encastrados en el bolsillo. Los extremos carboxilo y amino de estos pptidos se unen a los extremos carboxilo y amino de las hlices que forman el bolsillo. Adems, hay residuos de anclaje, por los cuales se unen los pptidos a las zonas cntricas del bolsillo. Las molculas de MHC slo pueden unir un pptido, aunque en tiempos diferentes pueden unir pptidos distintos. Los pptidos deben cumplir otra caracterstica para ser reconocidos: deben tener los residuos de anclaje en una determinada posicin. Estos aminocidos no tienen por qu ser idnticos, pero s ser siempre del mismo tipo, es decir, deben ser hidrofbicos, aromticos, etc. Al conjunto de estos aminocidos se les denomina motivos de secuencia. En el caso de las molculas del MHC clase II, al ser abierto el bolsillo pueden unir pptidos ms largos, los cuales pueden sobresalir del bolsillo. Por tanto, reconocen antgenos de mayor longitud. Estos pptidos tambin van a compartir residuos de anclaje, de modo que un MHC de clase II determinado reconocer todos los pptidos que presenten unos residuos de anclaje concretos, es decir, todos los pptidos con los mismos motivos de secuencia. La asociacin de pptidos antignicos con las molculas MHC es una interaccin no covalente, saturable de baja afinidad, con una velocidad de asociacin lenta y un velocidad de disociacin muy lenta. Las molculas de MHC de un individuo no discriminan entre pptidos propios (derivados de antgenos propios) y pptidos extraos (derivados de antgenos extraos), por lo que cuando reconocen un antgeno
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para presentrselo al linfocito T, el reconocimiento que hacen es burdo. El reconocimiento fino, y la distincin entre pptidos propios y extraos, lo hacen los receptores del linfocito T, de forma que, cuando el MHC carga un pptido propio, el linfocito T al reconocerlo se despega del complejo pptido-MHC.
Organizacin y polimorfismo de los genes del MHC.- Como hemos dicho, este complejo es polignico y polimrfico por lo que cada gen presenta muchas formas allicas distintas entre los individuos de la especie. El elevado nmero de genes y su gran variabilidad (elevado polimorfismo en la poblacin) hace muy improbable que existan dos individuos con el mismo conjunto de protenas de histocompatibilidad. En el caso del MHC de clase I los genes que lo codifican son B, C y A (con este orden en el cromosoma). En cuanto al MHC de clase II, est codificado por los genes DP, DP, DQ, DQ y DR. A este ltimo gen se asocia el gen DR, lo que incrementa la diversidad. Cada uno de estos genes presenta varios alelos. Este polimorfismo, unido a la poligenia, contribuye a la diversidad de las molculas MHC.
La codominancia tambin aade diversidad. Por ejemplo, un individuo que expresa 6 alelos de la clase I, le corresponden 3 del padre y 3 de la madre, y si expresa 12 alelos de la clase II, 6 son del padre y 6 de la madre. Se dice que un individuo est tipado cuando se conocen sus molculas de MHC. El tipaje del MHC se utiliza tambin en los test de paternidad, en los estudios migratorios y en otros estudios poblacionales. La variacin entre las molculas de MHC debida al polimorfismo est restringida a los dominios que forman el bolsillo de unin al pptido, es decir, a los dominios 1 y 2 en la clase I, y a los dominios 1 y 1 en la clase II. El reconocimiento de antgenos por los linfocitos T se halla restringido por el MHC, de ah que se hable de la restriccin del MHC. Si el linfocito T reconoce el MHC propio unido al antgeno que reconoce especficamente, se activar. Sin embargo, si reconoce al antgeno, pero este no es presentado por un MHC propio, no habr reconocimiento. Lo mismo ocurrir, si un MHC propio le presenta un antgeno que no es especfico para ese linfocito T. Una vez que se ha producido el reconocimiento del antgeno, se produce una seal intracelular que conduce a la activacin y proliferacin del linfocito T. En resumen, las condiciones que deben darse para que exista reconocimiento del antgeno por parte del linfocito T son: - Que sea presentado por un MHC propio. - Que el antgeno sea especfico del TCR del linfocito T. La gran variabilidad de molculas MHC tiene la ventaja de poseer una gran capacidad para reconocer multitud de antgenos, pero al mismo tiempo tiene la desventaja de que es muy difcil encontrar un individuo que tenga el MHC compatible con otro y puedan intercambiar tejidos en operaciones de transplantes.
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Organizacin genmica del MHC.- Los genes del MHC se encuentran en el brazo corto del cromosoma 6. Del centrmero al telmero la localizacin de estos genes es la siguiente: en primer lugar los genes de la clase II: DP, DQ y DR (algunos autores tambin hablan del tipaje DZ); a continuacin los de la clase III, donde hay genes que codifican protenas del complemento, linfotoxinas y TNF; y finalmente los genes de la clase I: B, C y A. Tras los genes del MHC de clase I aparecen los genes X, E, G y F, los cuales segn algunos autores codifican el MHC de clase IB.
Entre los genes DP y DQ aparecen genes que codifican protenas que participan en el procesamiento del antgeno para expresarlo al exterior: TAP (transportador), DM y DO (intervienen en el procesamiento del antgeno).
Expresin y regulacin de las molculas del MHC.- Las molculas de MHC no se expresan siempre de forma constitutiva en todas las clulas, sino a demanda. Cuando un individuo sufre una infeccin necesita presentar mucho antgeno, por lo que se expresan ms molculas de MHC. Por ejemplo, ante una infeccin vrica se producen interferones (activadores del sistema inmune), los cuales incrementan la expresin de los genes del MHC.
La expresin de las molculas MHC aumenta por las citoquinas producidas durante las respuestas inmunitarias innatas y adaptativas. Cada citoquina produce la activacin de un determinado factor de transcripcin, por tanto pueden modular la tasa de transcripcin de los genes de clase I y II en una amplia variedad de tipos celulares. Los genes del MHC de clase I presentan delante de las secuencias lder, unas secuencias reguladoras o promotoras: A, B y la secuencia consenso de interferon (ICS). Cuando hay una infeccin por virus, se produce interfern (INF-), el cual activa proten quinasas. Estas proten quinasas, mediante una cascada de reacciones, van a conducir a la produccin de factores de transcripcin, los cuales penetran al ncleo y se unen al promotor A, produciendo ms molculas de MHC de clase I. En lugar de interferones pueden actuar TNF o linfotoxinas, los cuales activan a promotores diferentes. En el caso de los genes del MHC de clase II, para que se activen los promotores se requiere un transactivador, el cual activa de forma secuencial a los diferentes promotores, pero debe hacerlo al unsono, es decir, debe activarlos a todos. Este transactivador se llama CIITA y se activa por el interfern . Como consecuencia de la activacin de los promotores se producen molculas de MHC. La ausencia del transactivador hace que el individuo presente una baja respuesta inmune.
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En cuanto a la localizacin de las molculas de MHC, es diferente para la clase I y para la clase II, como se aprecia en la siguiente tabla:
MHC de clase I
Tejidos linfoides
MHC de clase II
+ +++ ++ +++ +++
Clulas T Clulas B Macrfagos Otras clulas presentadoras de antgeno (por ejemplo, clulas de Langerhans) Clulas epiteliales del timo
Otras clulas nucleadas
+++ +++ +++ +++ + +++ + + +
Neutrfilos Hepatocitos Rion Cerebro

Clulas no nucleadas
Eritrocitos
Como se observa en la tabla, la clase I se da en todas las clulas del organismo menos en las no nucleadas, y la clase II fundamentalmente en el sistema inmune. La clase II aparece en los linfocitos T slo cuando stos estn activos. La expresin de las molculas de clase I es diferente a la expresin de las de clase II: las molculas de clase I estn presentes en la mayora de las clulas nucleadas mientras que las de clase II estn en linfocitos B, macrfagos, clulas dendrticas y endoteliales entre otras. La tasa de transcripcin es el principal determinante de la expresin de las molculas del MHC en la superficie celular. La transcripcin y la expresin de varios genes y molculas de clase I se regulan de forma coordinada; de manera similar, la transcripcin y expresin de los genes de clase II y sus productos tambin se regulan de forma coordinada. As la 2-microglobulina se regula junto con las cadenas de clase I, a pesar de que su gen no se localiza en el MHC. Las citoquinas pueden modular la tasa de transcripcin de los genes de clase I y II en una amplia variedad de tipos celulares.
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Factores de transcripcin.- Los factores de transcripcin estn ampliamente distribuidos entre los diferentes tipos celulares y no son especficos para un gen particular. Sus actividades pueden ser inducidas mediante estmulos externos y pueden relacionarse con el estado de maduracin de la clula. Tienen efectos positivos y negativos cuya interaccin determina en nivel neto de la transcripcin gnica.
Algunos factores de transcripcin tienen efectos que son especficos del tipo celular o se regulan en funcin del estadio de desarrollo. Esto puede deberse a que los lugares de unin sobre promotores o potenciadores son nicos y estn regulados, o a inhibidores endgenos cuya actividad est alterada de forma especfica por la maduracin o estimulacin celular. Para saber cmo actan los factores de transcripcin en la respuesta inmune vamos a tomar como ejemplo la familia de factores NF-B. Los miembros de esta familia son: p50/ NF-B1, p52/ NF-B2, p65/RelA, c-Rel y RelB. Estos factores pueden activarse por la unin antgeno-anticuerpo o por la accin de citoquinas (TNF), virus o bacterias (LPS). Estos elementos pueden activar a la protena IB quinasa, la cual se fosforila y sufre ubiquitinacin. Como consecuencia, esta protena se disocia: la parte unida a ubiquitina ser destruida, y la otra forma el factor de transcripcin, el cual penetra en el ncleo y cumple su funcin.
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TEMA 11. EL RECONOCIMIENTO DEL ANTGENO Y PRESENTACIN A LOS LINFOCITOS T.
Caractersticas del reconocimiento y procesamiento antignico.Dependiendo del tipo de antgeno a reconocer, ste ser presentado por un MHC de clase I o por un MHC de clase II. El MHC de clase I presenta antgenos a los linfocitos Tc CD8+ (linfocitos citotxicos), y se trata de antgenos intracitoslicos, como los virus, antgenos tumorales y algunas bacterias de metabolismo intracelular. Por su parte, el MHC de clase II presenta antgenos al linfocito Th CD4+ (linfocito helper), pero se trata de antgenos de metabolismo extracelular, como bacterias, parsitos y helmintos.
Para que se d el reconocimiento, es necesario que se den las siguientes condiciones: que el TCR se encuentre en el linfocito y sea funcional, que los MHC propios presenten los antgenos correspondientes, y que se den seales internas de activacin de ese linfocito T. Una vez que se ha producido el reconocimiento del antgeno, se produce una seal intracelular que conduce a la activacin y proliferacin del linfocito T. La siguiente tabla muestra las diferencias en el reconocimiento de antgenos entre los linfocitos T y los B.
Linfocitos T
Slo reconocen antgenos proteicos.
Linfocitos B
Pueden reconocer protenas, cidos nucleicos, polisacridos, lpidos, etc. Pueden reconocer epitopos Slo reconocen epitopos lineales de pptidos conformacionales (plegados) y cortos. desnaturalizados. Slo reconocen antgenos que estn unidos a la superficie de clulas presentadoras de No es necesario antgenos y restringidos por el MHC propio. - Linfocitos T CD4+: reconocen antgenos unidos al MHC II. Reconocen pptidos derivados de protenas extracelulares. No tienen restriccin por MHC - Linfocitos T CD8+: reconocen antgenos unidos al MHC I. Reconocen pptidos derivados de protenas citoslicas.
Restriccin de linfocitos T por MHC propios.- En 1974, R.M. Zinkernagel y P.C. Doherty descubrieron que la activacin de las clulas T dependa de un reconocimiento doble: el de determinantes del antgeno y el de determinantes de las protenas de histocompatibilidad. Es decir, para poderse activar, las clulas T deben reconocer el eptopo extrao presentado por una molcula MHC propia.
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Este requisito de doble reconocimiento se denomin restriccin por el complejo mayor de histocompatibilidad. Para demostrar la restriccin por el MHC se tom una cepa de ratn y dos clulas diana: una perteneciente a la misma cepa que el ratn anterior (clula A), y otra perteneciente a otra cepa diferente (clula B). Tanto el ratn, como las dos clulas diana, se infectaron con el virus de la coriomeningitis linftica (LCMV). Las clulas diana procesaron los virus y mostraron sus antgenos al exterior, junto con antgenos propios. A continuacin se pusieron en cultivo linfocitos T del ratn y las clulas diana. Los linfocitos T slo reconocen un antgeno extrao y dan una respuesta inmune (en este caso la lisis celular, ya que se tratan de linfocitos T CD8+) cuando el antgeno vrico est unido a un MHC propio. Esto ocurra cuando se cultivaban juntos los linfocitos T con las clulas A. Cuando estas clulas presentaban antgenos propios, el linfocito T no provocaba la lisis de dichas clulas.
Si se cultivaban juntos los linfocitos T con clulas B, tampoco se produca la lisis celular, ya que el linfocito T no era capaz de reconocer el antgeno del virus porque no estaba unido a un MHC propio. De esta forma, Zinkernagel y Doherty demostraron la restriccin por el MHC.
Mecanismos de presentacin del antgeno a las clulas CD4 y CD8.- Los linfocitos T son incapaces de reconocer antgenos solubles, slo reconocen antgenos unidos a MHC propios, y es en este ltimo caso cuando son capaces de activarse y dar una respuesta inmune.
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La naturaleza del pptido va a determinar que sea presentado por el MHC de clase I o por el de clase II. Si se toma un antgeno extracelular (por ejemplo la ovoalbmina) y se incuba con clulas presentadoras de antgenos, stas lo fagocitan y lo procesan, mostrndolo al exterior unido a un MHC de clase II, provocando respuesta frente a este antgeno los linfocitos T CD4+, pero no los linfocitos T CD8+.
Si se inserta el gen de la ovoalbmina en un plsmido y se transforma una clula presentadora de antgeno con ste plsmido, aquella mostrar el pptido al exterior unido a un MHC de clase I, por lo que en este caso slo darn respuesta los linfocitos T CD8+. Si se inyecta el pptido del antgeno extracelular por choque osmtico en una clula presentadora de antgenos, sta lo procesar como si fuera un antgeno citoslico, por lo que lo mostrar unido a un MHC de clase I. Por tanto, slo darn respuesta los linfocitos T CD8+.
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El procesamiento de los antgenos fagocitados es diferente segn el MHC que lo muestre. Si lo muestra el MHC de clase II, el proceso es el siguiente: la clula presentadora de antgeno al encontrarse un agente patgeno en el exterior lo fagocita, formndose un fagosoma. Este fagosoma se fusiona con los lisosomas de la clula, los cuales llevan captesinas S y L. El fagolisosoma resultante de esta fusin tiene como objetivo fraccionar el antgeno en fragmentos ms pequeos que puedan ser montados en el bolsillo del MHC de clase II. Por otra parte, en el retculo endoplsmico de las clulas presentadoras de antgeno se encuentran las molculas de MHC II en una fase muy inestable, por lo que el bolsillo puede ser ocupado por cualquier pptido. Para evitar esto la cadena invariante li (molcula trimrica que puede unirse a 3 molculas de MHC de clase II) ocupa los bolsillos de estas molculas, estabilizndolas.
La molcula de MHC de clase II estabilizada entra en una vescula junto a un pequeo fragmento de li, ya que esta se fracciona antes de entrar en las vesculas. La
vescula se fusiona con el fagolisosoma que contiene los pptidos degradados del antgeno. Entonces li se degrada totalmente y el MHC de clase II puede unirse a los
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fragmentos del pptido y expresarlos al exterior. La cadena invariante li al fragmentarse deja dentro del bolsillo del MHC II el pptido CLIP, el cual no permite que se una a este bolsillo cualquier pptido, sino que facilita que se una slo el ms inmunognico. En esta situacin, una molcula llamada HLA-DM, penetra en la vescula y se une al MHC clase II, facilitando que suelte el pptido CLIP y por tanto se pueda unir el pptido que va a mostrar al exterior. Cuando la vescula llega a la superficie celular se muestra el MHC clase II unido al pptido del patgeno fagocitado. La protena DM, que se encuentra codificada en el cromosoma 6 junto a los genes del MHC, cataliza la carga de los pptidos en las molculas de MHC clase II. Junto a la molcula HLA-DM (en humanos), existe HLA-DO, la cual tiene un efecto inhibidor sobre la anterior. La molcula HLA-DO acta cuando ya se ha unido el MHC de clase II al antgeno que va a mostrar, para que HLA-DM se suelte de la molcula de MHC y sta pueda mostrarse al exterior sola junto con el antgeno. En el caso de que el antgeno sea mostrado por un MHC de clase I, el procesamiento es el siguiente: las molculas de MHC de clase I tambin se encuentran en el retculo endoplsmico de forma inestable. Primero se forma la cadena , la cual es bastante inestable, por lo que debe unirse a ella la calnexina para darle estabilidad. A continuacin se une la 2 microglobulina a la cadena , quedando as estabilizada la molcula de MHC. Entonces la calnexina se retira y llegan dos chaperonas (calreticulina y tapasina), las cuales custodian a la molcula de MHC de clase I para que no se le una ningn pptido al bolsillo. Las protenas vricas sintetizadas son demasiado grandes para cargarse en el MHC de clase I, por lo que estas protenas son conducidas al proteosoma, donde las enzimas proteolticas las fragmentan en trozos lineales y ms pequeos, los cuales s pueden ser cargados en el bolsillo cerrado de las molculas de MHC de clase I. Existe un transportador en la membrana del retculo endoplsmico formado por dos protenas: TAP-1 y TAP-2. Este transportador facilita la captacin de los fragmentos proteicos y su transferencia al lumen del retculo, de modo que, siempre custodiados por chaperonas, puedan ser cargados en el MHC de clase I. Una vez cargados los pptidos, el complejo MHC-pptido penetra en una vescula ascendente, llega a la superficie celular, y se expresa en el exterior. Las protenas TAP son esenciales, de modo que individuos TAP son inmunodeficientes. En estos individuos, las protenas de virus no pueden cargarse en los MHC de clase I, por lo que no se muestran al exterior y el sistema inmune no es capaz de hacer frente a infecciones vricas. Sin embargo, si se les transfectan los genes de estas protenas al individuo inmunodeficiente se soluciona el problema. Existen virus, como el del herpes simple, que pueden convivir con el ser humano. El virus del herpes simple se encuentra normalmente acantonado en el ganglio de Gasser (en el cerebro) y es mantenido a raya por el sistema inmune, pero a veces
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ponen en marcha mecanismos de supervivencia bloqueando TAP-1 y TAP-2. Normalmente la activacin del virus del herpes simple se produce en situaciones de estrs, tras tomar el sol o durante la menstruacin, ya que las defensas bajan. Otros virus lo que hacen es bloquear la funcin del MHC manteniendo las molculas del MHC de clase I continuamente en el retculo endoplsmico.
Significado fisiolgico de la presentacin antignica asociada a MHC.- Los significados fisiolgicos de la presentacin de antgenos asociada a las molculas de MHC son:
- Existe una vigilancia continua por parte de las clulas T para el reconocimiento de antgenos extraos. - La naturaleza de los pptidos va a determinar el tipo de respuesta mediada por los linfocitos T. Los MHC de clase II pueden participar en la presentacin de antgenos por macrfagos o por linfocitos B, de modo que los linfocitos T activan a ambos tipos celulares, incrementando la capacidad bactericida en el caso de los macrfagos, o provocando la transformacin a clula plasmtica en el caso de los linfocitos B. a. Si un macrfago fagocita un antgeno extracelular y activa mediante el MHC tipo II al linfocito T CD4, se liberan citoquinas que actuarn sobre el macrfago aumentando su capacidad bactericida. b. El linfocito B puede reconocer a un antgeno extracelular, lo procesa y lo expone al exterior junto a la molcula del MHC tipo II. El linfocito T lo reconoce, se activa y libera citoquinas que actan sobre el linfocito B haciendo que este se diferencie a clula plasmtica liberadora de anticuerpos. Estas inmunoglobulinas actan sobre el patgeno lisndolo. c. Si una clula husped presenta antgenos extraos, lo presenta al linfocito T citotxico a travs del MHC tipo I. Cuando el linfocito T se activa, produce la muerte de la clula infectada. - Determinacin de la inmunogenicidad de antgenos proteicos. Los antgenos con mltiples epitopos se pueden descomponer, y todos son cargados al exterior. Los linfocitos T que reconocen los epitopos ms inmunognicos darn una respuesta inmune ms potente.
Superantgenos.- Los superantgenos provocan una activacin muy rpida de los linfocitos T, liberando gran cantidad de citoquinas. Estos superantgenos no necesitan unirse al MHC, sino que se unen directamente al TCR, concretamente al dominio variable (no a la hendidura sinptica). No producen inmunidad adaptativa, y por tanto tampoco memoria inmunolgica. Los superantgenos producen cuadros muy rpidos y muy graves. Algunos ejemplos de superantgenos son las enterotoxinas de estafilococos, las cuales provocan intoxicacin alimentaria, o el shock txico femenino (tampn menstrual).
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TEMA 12. EL RECEPTOR ANTIGNICO DE LAS CLULAS T (TCR).
Estructura, caractersticas y tipos de TCR.- En la superficie de las membranas de los linfocitos T existen receptores capaces de distinguir millones de estructuras antignicas diferentes. Estos receptores se denominan TCR (T Cell Receptor).
El TCR est formado por dos cadenas peptdicas heterodimricas, (49 kD) y (42 kD), cuyos genes se encuentran situados en los cromosomas 14 y 7 respectivamente. Ambas cadenas peptdicas se encuentran unidas por puentes disulfuros en la regin denominada bisagra. Son glicoprotenas de membrana que pertenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas (cada cadena presenta dos dominios globulares). Cada una de estas cadenas presenta una configuracin formada por un dominio intracitoslico, un dominio transmembrana y un dominio extracelular, el cual presenta un dominio globular variable (1 y 1), un dominio globular constante (2 y 2) y una zona bisagra. El dominio intracitoslico es corto, por lo que por s slo no puede transmitir la seal al interior celular. Ambas cadenas se unen por puentes disulfuro intercatenarios que se encuentran en la zona bisagra. Esta es una zona maleable con cierta movilidad, lo que permite unirse a mayor variabilidad de antgenos. Cuando un linfocito T reconoce a un antgeno, en la unin con este intervienen tres molculas: MHC, pptido y TCR. El TCR se une tanto al MHC como al pptido. Los dominios variables, al igual que los anticuerpos, tienen regiones determinantes de complementariedad, CDR, implicadas en la interaccin con el antgeno. Son tres regiones hipervariables en la cadena y cuatro en la cadena . Algunos autores sostienen que en la cadena solo hay tres CDR, ya que el CDR4 es ms interno que los otros tres. El TCR se parece a la Fab del BCR. La diferencia es que el BCR tiene dos zonas de unin al antgeno, mientras que el TCR slo presenta una. Las diferencias entre el BCR y el TCR se recogen en la siguiente tabla.
TCR Receptor monovalente (una sola rea de reconocimiento). Reconoce al antgeno en combinacin con MHC. Su papel consiste en enviar seales que activan funciones efectoras de la clula T. No se secretan. No sufren cambio de clase. No tienen maduracin de la afinidad. BCR Receptor bivalente (dos reas de reconocimiento) Reconocen antgenos libres. Son efectores. Se secretan. Sufren cambio de clase. Tienen maduracin de la afinidad.
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La diversidad del TCR se genera por mecanismos similares a los de los genes de las Igs, pero existen diferencias. Una vez que se reordena funcionalmente un gen del TCR no se producen ms cambios genticos que alteren la especificad o la afinidad del TCR. Por tanto, al contrario que en los genes de las Igs, no hay hipermutacin somtica en su proceso de formacin. No se observa, pues, maduracin de la afinidad del TCR en las respuestas secundarias de las clulas T, como ocurre en las respuestas secundarias de los anticuerpos. Al igual que ocurre en los anticuerpos, la diversidad en el TCR est concentrada principalmente en la regin determinante de la complementariedad 3 (CD3) de los dominios 1 y 1. Las CD3 interaccionan con el pptido antignico que presentan las protenas del MHC. Del mismo modo que el BCR, el TCR tambin experimenta un reordenamiento gnico que le da una gran variabilidad. En la figura se muestran los procesos de reordenamiento de las cadenas y .
Papel del TCR y en el reconocimiento antignico junto a MHC.- Como ya hemos visto en el tema 10, el TCR no reconoce al antgeno a menos que se lo presente el MHC, a este hecho se le conoce como restriccin por MHC.
La restriccin del MHC depende de las cadenas que forman el TCR, lo que se demostr con el siguiente experimento: si un linfocito T se pone en contacto con una clula presentadora de antgeno con un antgeno especfico para su TCR, se produce respuesta inmune. Si se transfecta la cadena de este TCR a otro linfocito T, ste expresar un TCR hbrido que no da respuesta ante el antgeno anterior. Si la que se transfecta es la cadena ocurre lo mismo, ya que el TCR no es capaz de reconocer el antgeno. Sin embargo, si se transfectan tanto la cadena como la , s se da respuesta
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inmune, puesto que el segundo linfocito T reproduce fielmente el TCR propio del primer linfocito. Esto demuestra que es el TCR el que establece la restriccin.
Componentes del complejo TCR.- El TCR posee una cadena citoplasmtica de corta longitud que no le permite transmitir la seal al interior celular. Debido a esto, la porcin del TCR fija a la membrana se asocia con otras protenas de membrana, que se denominan en conjunto complejo CD3, que s le permiten transmitir la sealizacin celular.
Cuando reconoce a un antgeno, el linfocito T se vale de cadenas colaterales que pertenecen al CD3 para transmitir la seal al interior celular. El CD3 aporta un heterodmero , un heterodmero , y un homodmero , los cuales se sitan muy cerca del TCR. Al conjunto de estos tres dmeros y el TCR se le denomina complejo TCR. Los aminocidos electronegativos de las cadenas CD3 se ven atrados por los aminocidos electropositivos del TCR, de ah que el CD3 y el TCR se encuentren tan prximos. Estas cadenas llevan internamente motivos ITAM, los cuales activan proten quinasas, lo que permite transmitir la seal al interior celular. La secuencia de aminocidos de los motivos ITAM es: tyr-x-x-leu-x-x-x-x-x-x-(x-x-)tyr-x-x-leu. Estas cadenas laterales son muy importantes, puesto que la falta de una de ellas hace que el complejo TCR no se exprese. Para demostrar esto se tomaron linfocitos T
de una cepa defectuosa para la expresin de la cadena , y se observ que no expresaban el complejo TCR. A estas clulas se les transfect los genes de la cadena , y la expresin del complejo TCR se recuper. Esto demuestra, que basta que no se exprese una cadena del complejo CD3 para que no se exprese el TCR.
Linfocitos T gamma delta.- Todo lo visto hasta ahora se refiere a los linfocitos T , pero existe otro tipo de linfocito T denominado . Estos linfocitos son importantes, aunque representan slo el 5-10% de la poblacin de linfocitos T, ya que son una fuente de tumores. No expresan CD4 ni CD8, por lo tanto no son linfocitos helper ni citotxicos.
Encontramos a estos linfocitos en los rganos linfoides perifricos y tejidos epiteliales, en concreto en la epidermis e intestino delgado de ratn. Sus funciones no son muy bien conocidas aunque se sabe que intervienen en le reconocimiento del antgeno directamente (sin restriccin por MHC), y adems reconocen antgenos no proteicos y muy genricos y son receptores de poca diversidad. El TCR de estos
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linfocitos es similar al anterior, pero est formado por una cadena y otra , de conformacin similar a las cadenas y . Superfamilia de las Ig.- La superfamilia Ig engloba a un conjunto de protenas con plegamiento globular similar al de las inmunoglobulinas. Las protenas de esta familia presentan entre un 15 y un 18% de homologa entre ellas. El mximo representante de esta superfamilia es la IgG. Otros miembros son: TCR, MHC clase I, MHC clase II, CD2 (integrina), CD3, CD4, CD8 (correceptores), B7-1, B7-2, Thy-1, CD28 (molculas coestimuladoras), ICAM-1, ICAM-2, VCAM-1 (molculas de adhesin) y algunos receptores de inmunoglobulinas (por ejemplo el receptor Fc RII). Estas protenas aparecen en el sistema inmune, en el sistema nervioso y en el sistema endocrino. Cuando el dominio globular se parece a los dominios variables de las inmunoglobulinas, se le pone la letra V, y cuando se parece al dominio constante se le coloca la letra C. Cuando el dominio globular es una mezcla de los dos, se le coloca una letra H.
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TEMA 13. MOLCULAS ACCESORIAS DE LAS CLULAS T.
Concepto y caractersticas de dichas molculas.- Un linfocito T para estimularse requiere dos seales. La primera debe venir de la unin del TCR a un complejo MHC-pptido, y la segunda de las molculas coestimuladoras y correceptoras. Al conjunto de ambas seales se le conoce como sinapsis inmunolgica. La falta de alguna de estas dos seales puede hacer que el linfocito T no se active correctamente o que quede como clula anrgica.
Las molculas accesorias en la superficie de las clulas T se unen especficamente a otras molculas (sus ligandos) en la superficie de otras clulas. Estas molculas accesorias son no-polimrficas e invariantes. Muchas de ellas transmiten seales bioqumicas al interior de las clulas T que son importantes para regular las respuestas funcionales. La unin de muchas molculas accesorias a sus ligandos en la superficie de otra clula, aumenta la fuerza de adhesin entre ambas clulas. La unin de molculas accesorias a clulas endoteliales o a protenas de la matriz extracelular es responsable de la recirculacin de linfocitos y de su residencia en los tejidos. Estas molculas accesorias son tiles marcadores de superficie que facilitan la identificacin de linfocitos en tejidos normales y en lesiones patolgicas, tales como tumores o enfermedades inflamatorias. Los linfocitos Th (CD4+) pueden ser Th1 o Th2, ambos son morfolgicamente iguales, aunque se diferencian en las citoquinas que liberan. La primera seal de la activacin de estos linfocitos es el reconocimiento por parte del TCR de una molcula de MHC de clase II unida a un antgeno. El CD4 es un receptor que ayuda a la transmisin de esta seal y hace ms potente la unin entre ambas clulas.
En el caso de los linfocitos Tc CD8+, el TCR reconoce a complejos MHC Iantgeno, y este reconocimiento supone la primera seal de activacin. El CD8 es un receptor que ayuda a la transmisin de esta seal y hace ms potente la unin entre ambas clulas. En ambos linfocitos, las molculas encargadas de la segunda seal son las molculas coestimuladoras junto con las de adhesin celular, las cuales intensifican la unin y le dan estabilidad. La molcula coestimuladora CD28, se puede unir o a B7-1 (CD80) o a B7-2 (CD86). En esta sinapsis inmunolgica tambin participan molculas
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de adhesin celular como son las CD2 y LFA-1, que se unen a LFA-3 (CD58) y a ICAM-1 (CD54), respectivamente.
Correceptores CD4 y CD8, estructura y funcin.- El correceptor CD4 se caracteriza por estar formado por 4 dominios globulares extracelulares, los cuales forman una varilla rgida, y un dominio intracitoslico, el cual presenta un dominio ITAM. Su misin no es reconocer al antgeno, sino unirse a una porcin lateral del MHC (al igual que el CD8), concretamente se une a esta molcula por los dominios D1 y D2 .
Por su parte, CD8 est formado por dos cadenas ( y ), cada una con un dominio globular. Ambas cadenas estn unidas por puentes disulfuro, y presentan motivos ITAM intracitoslicos. Este correceptor se une a la molcula de MHC de clase I por la zona lateral del dominio globular de la cadena . Ambos correceptores se dice que pertenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas. Si se aade un anticuerpo anti-CD4 que bloquee este correceptor a un medio con linfocitos Th, estos linfocitos no responde ante una clula presentadora de antgenos y no son capaces de activarse. Lo mismo ocurre con un linfocito Th defectuoso en CD4. Pero si se le transfecta el gen codificante para esta protena, el linfocito Th lo incorpora y expresa este correceptor, pudiendo reconocer el MHC de la clula presentadora de antgeno, por lo que se activar.
Si se tienen linfocitos T normales y clulas presentadoras de antgeno defectuosas en el MHC, tampoco habr respuesta. Sin embargo, si se transfectan los genes del MHC a las clulas presentadoras de antgeno, estas comenzarn a expresarlos, de modo que el linfocito T podr reconocer el antgeno que expresen y activarse. Si el gen del MHC que se transfecta codifica para un MHC defectuoso en la cadena lateral
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por donde se une CD4, no se dar respuesta, ya que el CD4 no ser capaz de unirse a la molcula de MHC expresada por la clula presentadora de antgenos. Todo lo anterior es tambin vlido para el correceptor CD8.
Coestimuladores CD28/CTLA-4 y B7, estructura y funcin.- Estas molculas constituyen la segunda seal necesaria para la activacin de los linfocitos T. La primera seal activa a la clula presentadora de antgenos, la cual emite la segunda seal, que hace que aparezca el CD28 unindose a su ligando: B7-1 o B7-2, de modo que la seal se transmite al interior del linfocito T.
Si slo se produce la seal 2, no hay respuesta, al igual que si slo se produce la seal 1. Adems, la clula se volver anrgica. Este es un mecanismo de tolerancia a lo propio, controlando as el organismo a las posibles clulas T autorreactivas. Muchas bacterias inducen la expresin de molculas coestimuladoras en las clulas presentadoras de antgeno. Los macrfagos que presentan pptidos derivados de tales bacterias son capaces de activar a los linfocitos T. Si los macrfagos capturan un antgeno y presentan protenas antignicas en ausencia de componentes bacterianos que inducen actividad coestimuladora, las clulas T especficas para el antgeno se vuelven anrgicas, ya que slo se produce la seal 1. Cuando las bacterias se mezclan con protenas antignicas no bacterianas, stas se vuelven inmunognicas porque las bacterias inducen la expresin de las molculas coestimuladoras B7 en la clula presentadora de antgeno, por lo que los linfocitos T se activarn al reconocer estas protenas.
Primero se pone en marcha la seal 1: el MHC es reconocido por el TCR y el correceptor. Entonces, el CD28 se une a B7-1 o a B7-2. Esto provoca la activacin y proliferacin de los linfocitos T. Una vez llevada a cabo su funcin, aparecen en sus
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membranas molculas de CTLA-4 (CD152), la cual presenta motivos ITIM (inhibidores). Esta molcula tiene los mismos ligandos que CD28, pero con veinte veces ms afinidad. La consecuencia es que CTLA-4 desplaza a CD28 de B7 y lo ocupa ella, quedando reducidas las seales de activacin y aumentando las de inhibicin, frenndose as la activacin de los linfocitos T. De esta forma el organismo controla la activacin de los linfocitos T y frena el gran consumo energtico que supone la activacin de estas clulas cuando ya no es necesario.
T naive es una clula de reciente produccin en la mdula sea para enfrentar a antgenos con los que el sistema inmune no ha tenido contacto previo.
Para ver la funcin de CD28 y B7 en clulas Th, se pusieron clulas Th normales con clulas presentadoras de antgenos deficientes en coestimuladores, por lo que no se produca respuestas o las clulas T se volvan anrgicas. Si se transfectaban las clulas presentadoras de antgeno con el gen de B7 se daba respuesta, ya que se producan las dos seales. Tambin se produca respuesta cuando se mantienan las clulas presentadoras de antgeno deficientes en B7, pero se aada al medio un anticuerpo que mimetizaba la accin de esta molcula, ya que este anticuerpo se una a
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CD28 y se daban las dos seales en el linfocito Th, por lo que se activaba de forma normal. Si a un linfocito T se le aade un anticuerpo anti TCR, de modo que se mimetice la primera seal en ausencia de clula presentadora de antgeno, el linfocito T no responde, ya que slo se da la primera seal. Sin embargo, si tambin se utilizan anticuerpos que mimeticen a B7, se produce respuesta.
Molculas de adhesin: selectinas, integrinas, adresinas y superfamilia de las Ig.- Las molculas de adhesin son especialmente importantes, ya que intervienen en muchos procesos de la respuesta inmune: intercambio de informacin entre clulas, organognesis, recirculacin linfoctica a travs del rbol circulatorio (linftico y sanguneo), efectan los procesos inflamatorios y estn presentes en las vnulas de endotelio alto.
Las clulas endoteliales tienen diferentes molculas superficiales entre las que destacan las molculas de adhesin, pero estas se expresan con un carcter bajo, por lo que permiten el libre flujo de los linfocitos. Sin embargo, en procesos infecciosos se
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expresan en mayor grado para dirigir las clulas a un punto concreto del organismo. Las molculas de adhesin se dividen en cuatro familias: selectinas, adresinas vasculares, integrinas y superfamilia de las inmunoglobulinas. Selectinas: se encuentran en linfocitos, plaquetas y endotelio. Se puede destacar la Lselectina (leucocitos y otras clulas), la P-selectina (plaquetas y endotelio) y la Eselectina (endotelio). Posee tres dominios extracelulares, un dominio transmembrana y una cola citoplasmtica. Intervienen en la unin del leucocito a la pared del endotelio. Los ligandos de las selectinas son las adresinas vasculares. Adresinas vasculares: aparecen en el endotelio y en las vnulas del endotelio alto. Facilitan que las clulas se dirijan a un sitio especfico. Son ligandos de las L-selectinas (CD62L). Cabe destacar CD34 (endotelio), GlyCAM-1 (vnulas de endotelio alto) y MadCAM-1 (vnulas de tejido linfoide de mucosas). Integrinas: provocan un tipo de unin ms fuerte que las anteriores. Suelen tener una cadena y otra . Hay que destacar CD11a, CD11b, CD11c y VLA. Aparecen en linfocitos y polimorfos nucleares, y facilitan que estas clulas se dirijan a los focos inflamatorios. Sus ligandos son en la mayora de los casos las molculas de adhesin de la superfamilia de las inmunoglobulinas. Superfamilia de las inmunoglobulinas: se dan en las clulas presentadoras de antgeno y en los vasos activados. Destacan CD2, CD50, CD54, CD58, CD102 y CD106. Al pertenecer a esta superfamilia tienen el plegamiento globular mantenido por puentes disulfuro. CD2 aparece en los linfocitos T y ayuda a que se dirijan a los sitios donde deben ejercer su funcin. En condiciones normales las molculas de adhesin se expresan en baja cantidad y con baja afinidad. Pero cuando la clula se activa o debe ir a un lugar concreto, la afinidad entre estas molculas y su grado de expresin aumenta. Inicialmente el nmero y expresin de las molculas de adhesin es bajo, lo que permite que una clula presentadora de antgenos y un linfocito se aproximen. Tambin permite que se suelten con facilidad. Si durante esta leve aproximacin el linfocito T detecta que la clula presentadora de antgeno est alterada o presenta antgenos virales, la clula presentadora de antgeno libera sustancias que incrementan la expresin de las molculas de adhesin, haciendo la unin ms fuerte.
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Cuando se inicia la aproximacin independiente de antgeno, las clulas se chequean. Si el TCR no es especfico del MHC-pptido, no hay seal 1 y ambas clulas se separan, por lo que no se dar respuesta. Si el MHC-pptido s es especfico, la unin ser ms fuerte, al igual que la afinidad entre las molculas de adhesin. Como consecuencia de ello, las clulas se diferencian y proliferan para dar una respuesta adecuada. Las protenas de adhesin llevan a cabo interacciones protena-protena. Si estas interacciones son entre dominios similares se habla de protenas homoflicas, y si son entre dominios diferentes se denominan protenas heteroflicas. Estas ltimas son las ms frecuentes. Las molculas de adhesin juegan un papel muy importante en la circulacin de los linfocitos en el vaso, para dirigir su camino. En el sitio de infeccin se produce la expresin de las molculas de adhesin, dirigiendo al linfocito hacia el foco. Tienen un papel fundamental en el desarrollo embriolgico. Tienen un papel en las conexiones intercelulares, mediante interacciones homoflicas o heteroflicas. Las molculas de adhesin dirigen al linfocito hasta la zona donde tiene que actuar. Pero tienen una gran importancia en los individuos politraumatizados y quemados, ya que se produce una sobre-expresin de estas molculas que provoca la fijacin de los linfocitos al endotelio del vaso impidiendo que lleguen al lugar traumatizado, lo que ocasiona una inmunodeficiencia que hace al individuo sensible a infecciones oportunistas. Las molculas que modulan la expresin de las molculas de adhesin, en condiciones normales, son las interleuquinas. Las molculas de adhesin se expresan dbilmente en el linfocito, pero cuando se produce una respuesta inmune se expresan las molculas en la zona de la infeccin dirigiendo la migracin del linfocito.
Otras molculas accesorias implicadas en la adhesin clula a clula.- CD45 (T200 o antgeno comn leucocitario) se encuentra en los linfocitos T (siendo mayor la expresin en los maduros), linfocitos B, timocitos, macrfagos y polimorfos nucleares. Participa en la maduracin y activacin de los linfocitos T y en la transmisin de la seal al interior celular. Est codificada por un gen del cromosoma 1, el cual presenta 34 exones. Se producen religaciones alternativas que originan ocho isoformas diferentes, entre ellas CD45A (linfocitos T en reposo) y CD45RO (linfocitos T activados y de memoria). CD45RO hace ms sensible a la clula T cuando la estimulacin se produce con concentraciones bajas de complejos MHC-pptido.
La molcula accesoria CD44 aparece en eritrocitos, linfocitos T y B maduros, granulocitos, macrfagos y fibroblastos. Aunque tambin aparece en los linfocitos T en reposo, su expresin es mayor en los activados. Sus ligandos son la fibronectina, la colgena y el hialuronato. Esta molcula se une a hialurnico favoreciendo la unin de la clula T al endotelio en los lugares de la inflamacin. Tambin se une a las vnulas de endotelio alto de las placas de Peyer. Otras molculas accesorias son CD5 y CD72
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TEMA 14. ACTIVACION DE LAS CELULAS T Del torrente circulatorio los linfocitos T salen del vaso por diapdesis hacia los rganos linfoides perifricos donde el macrfago le presenta el pptido. Las clulas de Langerhans (clulas dendrticas) capturan antgenos en la piel, los transportan a los rganos linfoides y los presentan a los linfocitos T. El linfocito T necesita de la presentacin del antgeno por parte del MHC y la cooperacin de las molculas accesorias para activarse, es decir, necesita las dos seales que hemos visto en el tema anterior.
Cuando el linfocito Th se ha activado libera IL-2, que acta de forma autocrina, produciendo la proliferacin del cln. Una vez los linfocitos han proliferado y se han diferenciado, se dirigen a los vasos como clulas efectoras. Entonces migran desde el interior de los vasos al foco de la lesin, infeccin, etc., gracias a las molculas de adhesin. Aqu se ponen en contacto con macrfagos tisulares, provocando un incremento de la actividad bactericida de stos. El linfocito Th puede permanecer en reposo en el rgano linfoide durante mucho tiempo, pero cuando es estimulado por un antgeno entra en el ciclo de divisin celular. El receptor de IL-2 est formado por tres cadenas (, y ), pero cuando la clula T se encuentra en reposo, el receptor expresado slo est formado por las cadenas y . Este receptor puede reconocer la IL-2, pero requiere altas cantidades de esta citoquina. Cuando el linfocito T se activa por un antgeno, se produce la cadena y el receptor es capaz de reconocer a la IL-2 aunque se encuentre a baja concentracin. Como resultado de la unin de la IL-2 a su receptor se induce la proliferacin celular y se forma una gran poblacin de linfocitos T especficos del antgeno que ha provocado la entrada en el ciclo celular G0. Cuando un linfocito Th se activa slo por la seal 1, el linfocito no da una respuesta suficiente ya que hay poca IL-2 y no se sintetiza la cadena . En consecuencia la clula se vuelve anrgica. Esto es importante para la autotolerancia perifrica, puesto que los linfocitos T slo se van a activar ante antgenos extraos, y no ante antgenos propios.
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La respuesta del linfocito Th depende del patgeno y de la puerta de entrada que este haya utilizado. Las clulas efectoras pueden actuar de varias formas: - Unirse a macrfagos y liberar citoquinas que aumenten la capacidad bactericida de los macrfagos. - Unirse a los linfocitos B que les presenten el antgeno y liberar citoquinas que transformen estos linfocitos en clulas plasmticas liberadoras de anticuerpos. - Liberar citoquinas sobre PMN (polimorfos nucleares) para desarrollar un proceso inflamatorio. - Transformarse en linfocitos T de memoria. - Ponerse en contacto a travs de citoquinas con linfocitos Tc, los cuales se activan y se unen con ms fuerza a las clulas husped infectadas por virus, de modo que las destruyen. A la vez destruye al agente patgeno.
Transmisin de la seal por el complejo TCR.- En la activacin de los linfocitos T hay eventos que ocurren a nivel de la membrana, otros a nivel del citoplasma, y otros a nivel del ncleo.
A nivel de membrana ocurre la activacin de proten tirosn quinasas (PTKs) y de protenas adaptadoras. Cuando el TCR es activado por la presentacin de un complejo MHC-pptido, se activan los dominios intracitoslicos de las molculas correceptoras. Asociada a estos dominios se encuentra la tirosin quinasa Lck, que tambin se activa. Esta tirosin quinasa fosforila los motivos ITAM de las cadenas intracelulares de CD3, entre ellas las cadenas . Las cadenas activan una Syk quinasa (ZAP-70), la cual se fosforila y se activa. ZAP-70 puede fosforilar otras protenas adaptadoras de membrana como Grb2, la cual activa las rutas de Ras-MAPKs y Rac-SAPKs. ZAP-70 desempea un papel crtico en el mantenimiento de la cascada de seales que se pone en marcha tras el reconocimiento del antgeno por el TCR. En este
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sentido, esta enzima es un acoplador de seales desde la superficie celular al ncleo por fosforilacin de protenas adaptadoras, mediante una cascada de seales. En esta cadena participa Grb-2, que activa a dos rutas: la va de las Ras-MAP quinasas y la va de las Rac-SAP-quinasas. A nivel de membrana tambin ocurre el metabolismo de fosfolpidos-inositol. Despus del reconocimiento antignico por parte del TCR, la ZAP-70 activa a la PLC1, mediante fosforilacin en un residuo de tirosina. Una vez activada la PLC1 induce la hidrlisis del fosfatidilinositol bifosfato (PIP2), generndose inositol trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG). El IP3 se une a un receptor especfico (IP3R) localizado
en unas estructuras especficas del retculo endoplsmico, facilitando con ello la liberacin del calcio intracelular de sus compartimentos y aumentando la concentracin de estos iones en el espacio libre intracelular. El calcio intracelular puede estimular la
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enzima calmodulina, que es una serina/treonina quinasa que puede activar a su vez a la fosfatasa calcineurina, que activa al factor de transcripcin NFAT. Adems de la activacin del sistema calmodulina/calcineurina, los niveles altos de calcio intracelular tambin ayudan a la activacin de otras quinasas como la proten quiinasa C (PKC) y posiblemente algunas quinasas activadas por mitgenos (MAPKs). El otro metabolito de la hidrlisis del PIP2, el diacilglicerol es el principal responsable de la activacin de las enzimas proten quinasa C, que activa al factor de transcripcin NF-kb. Estos factores de transcripcin actan en el ncleo activando la transcripcin de los genes de la IL-2. Los diferentes factores de transcripcin activados, se estabilizan entre si y provocan la expresin de los genes de la IL-2 y de su receptor, promoviendo la activacin y expansin de los linfocitos T.
Activacin de vas citoplsmicas de transmisin de seal.- A nivel de citoplasma se producen los siguientes procesos: Va de Ras-Map quinasas: Se activa por la accin de las protenas adaptadoras Grb-2 que producen un cambio de GTP/GDP en las protenas a travs de la protena SOS. Se produce una cascada de seales que termina en la activacin de protenas como ERK y JNK. Estas activan al factor de transcripcin AP-1, que interviene en la transcripcin de genes de la IL-2. Va de Rac-SAP-quinasas: Se activa por accin del CD28, es una molcula coestimulatoria que se activa por CD7. Es una va desconocida. Esta ruta a diferencia de la anterior se activa por las molculas coestimuladoras, en concreto por CD28. Activacin de proten quinasa C (PKC) (apartado anterior): El DAG procedente del PIP2 activa a la PKC, la cual acta sobre la protena IB, que se suelta del NF-B, por lo que ste puede entrar en el ncleo. Activacin de la calcineurina (apartado anterior): El Ca2+ liberado del RE por accin del IP3 se une a la calmodulina, la cual se une a su vez a la calcineurina. La calcineurina activa al factor de transcripcin NFAT, el cual entra en el ncleo. Activacin de factores de transcripcin que inducirn la transcripcin de nuevos genes: c-fos, IL-2, IL-2ra.- A nivel de ncleo ocurre lo siguiente:
Todos los factores de transcripcin activados (NF-B, AP-1 y NFAT) penetran en el ncleo y se estabilizan. Estos factores de trancripcin promueven la expresin de los genes de la IL-2. La cintica de la expresin de los genes tras la activacin de las clulas T es la siguiente: primero se expresa la protena Fos, de la ruta de las Ras-MAPK; despus se expresa el ligando de CD40, y tras ste la IL-2. Finalmente se expresa el receptor de la IL-2. Todo esto tarda de uno a dos das. La inmunidad adaptativa tarda ms tiempo, ya que se necesitan varios das para la sntesis de clulas.
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La IL-2 activa a los linfocitos T, existiendo tras esta activacin un periodo de sntesis de ADN y finalmente la sntesis de molculas de la inmunidad especfica (VLA-4, VLA-5 y VLA-6). Los factores de trancripcin se dividen en inmediatos, precoces y tardos. Los inmediatos y precoces se encuentran preformados y son de liberacin premittica, mientras que los tardos son de liberacin postmittica y se sintetizan de novo. Entre los genes precoces se encuentran los genes de las citoquinas y de los receptores de las citoquinas. Los proto-oncogenes y los genes de los factores de transcripcin (c-fos, c-myc) son inmediatos.
Estimulacin por CD28.- Las consecuencias de la estimulacin por CD28 son: - Activa la fosfoinositol 3 quinasa. - Facilita el intercambio de GTP en Ras. - Activa la va Vav-Rac. - Activa una forma de NF-B que se une a CD28RE. - Aumenta la estabilidad del ARNm de la IL-2. - Impide la prdida de la capacidad para activar Erk y Jnk (modelo de anergia).
Hay medicamentos inmunosupresores como la ciclosporina A y el FK506, que se usan en pacientes trasplantados, ya que evitan que los linfocitos T se activen y se d la respuesta inmune celular. El FK506 o tacrolimus se une a la molcula de NFAT, y ambos se unen a la calcineurina, ocupando el lugar por el que esta protena se une al Ca2+. Por lo que no se produce la activacin del linfocito. Cuando se realiza un trasplante, para evitar el rechazo se suministra ciclosporina A. Este frmaco se une a la ciclofilina del citoplasma y ambas se unen a la calcineurina, evitando que el Ca2+ se pueda unir a sta y por consiguiente que se pueda activar la clula T. 5.- IL2
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TEMA 15. GENERACIN DEL REPERTORIO DE LINFOCITOS T Y DE LA AUTOTOLERANCIA.
Desarrollo de las clulas T en el timo.- La autotolerancia consiste en el respeto de lo propio y la capacidad de atacar a lo extrao. Esta capacidad de los linfocitos T se fragua en el timo.
Como ya hemos visto, en el proceso de desarrollo de los linfocitos T se diferencian varios pasos: 1. Migracin. 2. Maduracin. 3. Seleccin. Todo ello ocurre a nivel del timo. Cuando las clulas madre de la mdula sea se comprometen con la lnea T, migran al timo. El timo es un rgano que est a nivel retroesternal, por encima del corazn, es bilobulado y blanquecino y est dividido en lobulillos por trabculas. La parte ms externa es la corteza, mientras que la ms profunda es la mdula (ver pg. 20).
En este rgano puede ser que los linfocitos T: - No expresen el TCR porque no se hayan reordenado los genes de ste. Estos linfocitos no tienen ninguna especificidad y mueren. - Reordenen los genes del TCR y tengan una especificidad alta por antgenos propios junto con molculas de MHC propios. Estas clulas mueren por apoptosis debido a que se produce una seleccin negativa. - Reordenen los genes del TCR y tengan especificidad por el MHC propio (seleccin positiva) junto con antgenos extraos. Estos linfocitos superan la seleccin positiva, consiguen activarse y proliferan.
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- Generen un TCR que reconozca un MHC que no sea el propio. Estas clulas mueren tambin por apoptosis. Toda esta mortandad de clulas T no genera daos en el timo, ya que es una muerte programada. Si la muerte fuera por necrosis habra un proceso inflamatorio.
Los linfocitos T inmaduros cuando penetran en el timo son CD4 y CD8 negativos. Estos pretimocitos tienen la capacidad de transformarse en los timocitos T y linfocitos T (CD4- y CD8-), dependiendo de las cadenas de su TCR. Los linfocitos T low son CD4+ y CD8+, y poseen un TCR inmaduro. Estos linfocitos doblemente positivos, se encuentran en el torrente circulatorio en individuos quemados, que liberan los linfocitos para producir una respuesta a la desesperada. Los linfocitos doblemente positivos, que poseen una cadena sustituta (TCR inmaduro), sufren un proceso de seleccin negativa y mueren por apoptosis el 95%. Las clulas muertas son eliminadas por los corpsculos de Hassal. El 5% que consigue sobrevivir y son CD4+ o CD8+, en
la mdula sufren el proceso de maduracin hacia linfocitos CD4+ o CD8+ vrgenes, ya que no se han expuesto a antgenos externos. Estos linfocitos salen del timo hacia los rganos linfoides secundarios.
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Subpoblaciones de linfocitos y marcadores segn los diferentes estadios de maduracin.- Los precursores linfoides que llegan al timo no presentan ningn marcador, son CD3 CD4 CD8 . Al llegar al timo, se pueden diferenciar en dos subpoblaciones: CD3+ pT:+ CD4+ CD8+ (estos linfocitos suponen el 95% de la poblacin total) y CD3+ :+ CD4 CD8 .
En el proceso de maduracin, slo un 5% de los linfocitos consigue atravesar la regin corticomedular. Estos linfocitos son todos CD4+ CD8+. En la mdula del timo se diferencian por un lado linfocitos T CD4+ y por otro lado linfocitos T CD8+. Ambos tipos de linfocitos maduran y se exportan a la periferia. Estos marcadores son interesantes en el pronstico de tumores de linfocitos T, ya que nos permiten conocer en qu estado de la maduracin de estas clulas se ha producido el tumor. Las consecuencias de la expresin de los pretimocitos pT: son las siguientes: 1. Inhibicin de reordenamientos posteriores en el locus del mismo o del otro cromosoma (exclusin allica). 2. Proliferacin de los linfocitos, lo que da lugar a descendientes con igual cadena pero con potencial para expresar diferentes cadenas (aumento del repertorio). 3. El receptor del pT: induce la expresin de CD4 y CD8, necesarios para los procesos de seleccin. 4. Se inicia el reordenamiento de los segmentos gnicos del locus . En cada estadio de diferenciacin, el linfocito T expresa en su membrana unos Cluster de Diferenciacin (CD) diferentes. Los precursores linfoides proliferan y se convierten en timocitos comprometidos al linaje T mediante interacciones con el estroma del timo. Estas clulas expresan CD44, y en un estadio ms tardo CD25 (la cadena del receptor de IL-2). Despus, las clulas CD44+ y CD25+ comienzan el reordenamiento de la cadena , y a medida que ocurre esto se convierten en CD44low. Las clulas son retenidas en el estadio CD44low CD25+ hasta que reordenan de forma productiva el locus de la cadena . La cadena del marco de lectura se empareja con la cadena sustituta pT y
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se expresa en la superficie celular, lo que dispara la entrada en el ciclo celular. La expresin de pT: en la superficie celular est asociada con pequeas cantidades de CD3 y causa la prdida de CD25, el cese del reordenamiento de los genes de la cadena , proliferacin celular y la expresin de CD4 y CD8. Cuando estas clulas dejan de proliferar y revierten a clulas CD4+ y CD8+ dobles positivas, comienza el reordenamiento en el locus de la cadena . Entonces las clulas expresan niveles bajos del receptor : y el complejo asociado CD3, y estn listas para ser seleccionadas. La mayora de clulas mueren, pero algunas son seleccionadas a madurar a clulas CD4 o CD8 positivas sencillas y, finalmente, a abandonar el timo. Los porcentajes aproximados de las diferentes fases de maduracin de los linfocitos T en el timo son los siguientes: CD4- CD85% CD4+ CD8+ 80% CD4+ CD8- 12% CD4- CD8+ 3% En resumen, los timocitos inmaduros entran en el timo por la zona subcapsular, y se ponen en contacto con clulas dendrticas y epiteliales de la corteza tmica que permiten el reordenamiento del TCR en el linfocito. A medida que estas clulas proliferan y maduran a timocitos dobles positivos, migran hacia zonas ms profundas de la corteza. Por ltimo, la mdula slo contiene linfocitos T maduros positivos sencillos, que eventualmente abandonan el timo y penetran en el torrente circulatorio. Los timocitos en diferentes estados de maduracin se localizan en distintas partes del timo. Los procesos de seleccin tmica tienen como finalidad obtener clulas T con TCRs que reconozcan pptidos extraos asociados a MHC propios. Para ello, la seleccin positiva selecciona los TCR que se combinen con MHC propios y la seleccin negativa elimina los TCR que se combinan con antgenos propios.
Genes del receptor de las clulas T.- El linfocito T necesita el TCR para madurar, porque este es el que le da la especificidad y la capacidad de pasar a clula efectora. Organizacin en lnea germinal.- Para la sntesis de las cadenas y se necesita el reordenamiento de los genes de estas cadenas. En lnea germinal, los genes de la cadena se encuentran en el cromosoma 7 y con el siguiente orden: genes de variabilidad (V), genes de diversidad (D), genes de unin (J) y genes constantes (C).
Los genes de la cadena se encuentran en el cromosoma 14 y su orden es: genes de variabilidad (V), genes de unin (J) y genes constantes (C). Adems, entre los genes V y los J se encuentran los genes que
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codifican la cadena del TCR: genes V, genes D, genes J y genes C. No se conoce por qu se produce el reordenamiento de la cadena o de la . En la etapa embrionaria, predominan los linfocitos : sobre los :, los cuales predominan en el adulto. En cuanto a la cadena , tambin se encuentra en el cromosoma 7 y la posicin de los genes es: genes V, y genes J y C alternos
Reordenamiento y generacin de la diversidad.- El primer reordenamiento que se produce es el de la cadena del TCR. Primero se produce una recombinacin somtica entre los genes D y J, y posteriormente otra entre los genes D-J reordenados y V. Tras este reordenamiento se produce la transcripcin.
El ARNm producido es procesado y se obtienen la cadena del TCR. A nivel de esta cadena se da exclusin allica. El reordenamiento de la cadena promueve y activa el reordenamiento de la cadena . Esta cadena slo presenta un gen C. En este caso se produce una recombinacin somtica entre los genes V y J, y comienza la transcripcin. Las secuencias lder o seal son las que comienzan la transcripcin, pero no al azar, sino en las secuencias nonmeros heptmeros, al igual que ocurra en el reordenamiento de las inmunoglobulinas. El ARNm inmaduro sufre un procesamiento, obtenindose tras ste la cadena , la cual se ensambla junto a la en la membrana del linfocito. La cadena no sufre exclusin allica, sino que se reordenan tanto la del padre como la de la madre. Entonces la cadena se podr unir a cualquiera de las dos, lo que da mayor diversidad al repertorio inmunolgico. La diversidad del repertorio inmunolgico de los linfocitos T es muy grande, ya que si se produce un reordenamiento aberrante saltan reordenamientos alternativos. Si estos nuevos reordenamientos tampoco son correctos la clula morir. El reordenamiento de los genes y del TCR en ratn avanza en oleadas de clulas que expresan diferentes segmentos gnicos V. A las dos semanas de gestacin, el gen C se expresa
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con el gen V ms cercano (V5). Despus de unos das, estas clulas desaparecen y son reemplazadas por clulas que expresan el siguiente gen ms prximo, V6. Estos dos reordenamientos de las cadenas se expresan con la misma cadena reordenada. En consecuencia, todas las clulas T producidas en cada una de estas oleadas tempranas tienen la misma especificidad, aunque no se conoce la naturaleza del antgeno que reconocen. Las clulas V5 migran selectivamente a la epidermis, mientras que las V6 lo hacen al epitelio del tracto reproductor. Despus del nacimiento, los linfocitos T se convierten en dominantes y, aunque las clulas T siguen producindose, las son una poblacin mucho ms heterognea con ms diversidad de unin. En el organismo adulto, algunas clulas T (que pueden tener reordenado diversos genes V: 1, 2, 4 o 7) migran al epitelio intestinal, mientras otras se localizan en rganos linfoides.
Ontogenia de la expresin del TCR y molculas accesorias.- El linfocito T muestra distintos marcadores fenotpicos en sus estadios de desarrollo que son importantes para el diagnstico de tumores.
El repertorio final del TCR es de 1016 especificidades. Esto se debe a tres motivos: - Diversidad de unin. La capacidad de recombinacin debido a la existencia de distintos genes.
Cadena Segmentos V Segmentos D Segmentos J 75 0 50 Cadena 25 2 12 Cadena 7 0 2 Cadena 10 2 2
- Diversidad combinatorial. Debido a que se expresan los dos haplotipos de las cadenas y se combinan con la cadena ; la cadena puede unirse a la cadena paterna o a la materna. - Asociacin de nucletidos N y P por la TdT. La enzima deoxinucleotidil transferasa terminal (TdT) aade nucletidos N y P en el reordenamiento de las cadenas del TCR Los linfocitos T a diferencia de los linfocitos B no sufren maduracin de la afinidad ni cambio de isotipo.
ESPACIO EN BLANCO
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Cuando los genes del TCR estn sin reordenar, el timocito no presenta marcadores. Cuando comienza el reordenamiento, aparece CD25 y CD44, molculas de adhesin que permiten unirse a las clulas del timo. Cuando se reordenan VDJ,
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permanece bajo CD44, mientras que aumenta la expresin de CD25. Al finalizar el reordenamiento de la cadena aparece en la membrana del linfocito una cadena sustituta (pT), junto con CD4 y CD8. Al reordenarse la cadena , sta aparece en la membrana, y los linfocitos se decantan hacia ser CD4+ o CD8+. Estos linfocitos salen como clulas efectoras hacia los rganos linfoides.
La seleccin positiva y negativa de los linfocitos T en el timo.- La seleccin positiva/negativa de los linfocitos T es segn algunos autores simultnea, y segn otros ocurre primero la positiva y luego la negativa. Una clula doblemente positiva forma su TCR y molculas coestimuladoras y correceptoras, pero si no reconoce su propio MHC, muere por apoptosis.
La seleccin positiva rescata de la apoptosis a los linfocitos T cuyo TCR tiene capacidad para reconocer el MHC propio con antgenos propios o extraos. Por su parte, la seleccin negativa induce la apoptosis de todas las clulas T que reconocen el MHC propio con antgenos propios con una alta afinidad. Esta es una de las principales hiptesis para explicar la tolerancia a lo propio. De lo contrario, en la etapa adulta tendramos linfocitos T reactivos a los antgenos propios. La seleccin positiva se produce mediante interacciones entre timocitos CD4+CD8+ y clulas epiteliales que tienen lugar en la corteza tmica. Slo sobreviven los timocitos que se unen con baja afinidad a los complejos formados entre MHC propios y pptidos propios o extraos. La seal del reconocimiento positivo previene su muerte e impide nuevos reordenamientos de genes del TCR. Al final de esta fase, los timocitos CD4+CD8+ dejan de expresar uno de los dos co-receptores. En esta seleccin slo sobreviven los timocitos capaces de reconocer molculas MHC propias. Si se trata de MHC-I, el timocito deja de expresar CD4 y se convierte en CD8+, y viceversa La seleccin negativa se produce mediante interacciones entre los timocitos que han sobrevivido a la seleccin positiva y CPAs que presentan pptidos propios. Los timocitos que reaccionan fuertemente frente a los complejos MHC-pptidos propios sufren apoptosis. El proceso elimina los timocitos autorreactivos y es la base de la tolerancia central. La seleccin negativa funciona provocando la muerte celular de las clulas cuyos receptores reconocen complejos MHC-pptido propio con alta afinidad. Cuando se produce esta seleccin negativa, la muerte es por apoptosis: mecanismo de muerte
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fundamental para que en los rganos donde hay recambio de clulas no se produzcan daos. Un elemento importante es el repertorio de pptidos. La cadena invariante li tiene forma de pulpo con tres brazos, los cuales se unen cada uno a una molcula de MHC y luego deja que se unan los pptidos procesados por la clula presentadora de antgeno. Cuando hay un dficit de HLA-DM (o H-2M en ratones), el pptido li se queda anclado (realmente se queda unido al MHC un fragmento de li denominado pptido CLIP) y no deja que se coloquen los pptidos procesados. Entonces en la membrana se expone el complejo MHC-pptido CLIP, lo que es reconocido como un antgeno propio. Los linfocitos T no se educan correctamente y se vuelven clulas autorreactivas. En el timo hay pptidos propios, y los linfocitos que reconocen a estos con alta afinidad se destruyen para que no lleguen a ser linfocitos T maduros autorreactivos. Los linfocitos que superan esta seleccin son aquellos que reconocen los antgenos extraos o los propios con baja afinidad.
Hiptesis de la avidez y de la transmisin diferencial de la seal.- La teora de la avidez o de la afinidad sostiene que las seales que determinan que se lleve a cabo la seleccin positiva o la negativa deben ser diferentes. Tumores de clulas T.- La mayora de los tumores de los linfocitos T aparecen en las etapas tempranas y tardas. Esto se debe a que las etapas intermedias son transitorias y duran poco tiempo, por lo que las clulas T tienen menos probabilidad de malignizarse en estos periodos que en aquellos en los que pasan un mayor tiempo como son las etapas tempranas y tardas.
Podemos encontrar tumores de linfocitos T en la mdula sea, debido a la proliferacin incontrolada de las clulas madre pluripotenciales, que darn lugar a los progenitores linfoides. Se puede visualizar el CD34 en su membrana, mediante tcnicas de inmunofluorescencia. Los tumores ms conocidos son: - Progenitores linfoides: Leucemia linfoblstica aguda comn, que se da en los nios. Puede ser debido a los linfocitos B o T. Los marcadores de superficie son el CD10, CD19 y CD20, y se encuentran en el timo. - Clulas estromales del timo o clulas epiteliales: Timoma. Se encuentran en el timo. Presentan citoqueratinas en su superficie. - Timocito: Leucemia linfoblstica aguda. Es muy frecuente en los nios. Se encuentra en el timo. El marcador de superficie es el CD1. - Clula T: Leucemia linfoctica crnica, que se da en adultos. Tambin es conocida como el sndrome de Szary o micosis fungoide. Se caracteriza porque afecta a la piel y rganos internos (incluyendo los rganos linfoides perifricos). Presentan en su superficie CD3, CD4 y CD8. - Enfermedad de Hodgkin. Es un tumor de las CPA y afecta a los rganos linfoides perifricos, aunque tambin afecta a otros. El marcador es el CD30.
Apoptosis en linfocitos.- Las caractersticas del proceso de apoptosis son: - Daos en el ADN. - Condensacin y fragmentacin nuclear.
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- Alteraciones en la membrana plasmtica. - Cambios en la distribucin de los lpidos de membrana. - Separacin de las clulas de la matriz extracelular. - Fagocitosis: los corpsculos de Hassall fagocitan las clulas que mueren en el timo por apoptosis. La muerte por apoptosis puede deberse a que la clula deje de recibir estmulos o a que est sobreestimulada. Una vez los linfocitos T destruyen el antgeno, cesa la estimulacin y mueren por apoptosis (se da una salida de citocromo c de las mitocondrias debido a que aumenta la permeabilidad de la membrana de este orgnulo. El citocromo c se una a la protena Apaf-1, y ambos inducen la activacin de la caspasa 9, la cual conduce a la apoptosis). En la membrana mitocondrial existe un equilibrio entre protenas proapoptticas (Bad, Bax y Bak) y antiapoptticas (Bcl2 y Bcl-X). Puede darse un incremento de unas frente a otras, lo que va a provocar una alteracin de la permeabilidad de la membrana mitocondrial. Por ejemplo, si se produce un incremento de las protenas proapoptticas con respecto a las antiapoptticas, se produce un aumento de la permeabilidad de la membrana, permitiendo con ello que salga citocromo c al citoplasma, y por consiguiente la clula entra en el proceso de apoptosis. La muerte celular pasiva (por falta de seales de supervivencia) se da en los siguientes casos: - Seleccin positiva de los linfocitos inmaduros. - Falta de estimulacin antignica a linfocitos en reposo. - Eliminacin de linfocitos activados tras la eliminacin del antgeno. - Falta de seleccin tras la hipermutacin somtica.
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TEMA 16. ACTIVACIN DE LAS CLULAS B Y PRODUCCIN DE ANTICUERPOS.
Respuesta inmune humoral primaria y secundaria.- Una vez activados, los linfocitos B se diferencian en clulas plasmticas y en clulas de memoria, que pueden producir una respuesta humoral primaria y otra secundaria, ambas respuestas inmunes son del tipo adaptativa o adquirida. Cuando contactamos con un antgeno por primera vez, pasan unas dos semanas hasta que se forman las clulas efectoras, y es la inmunidad innata la que controla al patgeno mientras tanto.
La respuesta primaria es la que se desencadena en la primera infeccin y la secundaria se lleva a cabo por las clulas memoria frente a una segunda infeccin. Ambas respuestas se pueden resumir en los siguientes procesos: - En la respuesta primaria, los linfocitos B vrgenes reconocen a un patgeno que ha entrado en el organismo, estos linfocitos se activan y se produce una proliferacin clonal, hasta que a los 8-10 das se han diferenciado en clulas plasmticas. Una parte de estas clulas quedan como clulas memoria en la mdula sea y en la sangre, con una vida media larga. - En el caso de un segundo contacto con ese antgeno, la respuesta ser ms rpida (unos 5 das) y ms contundente. Este es el fundamento de la manipulacin del SI por las vacunas. Las vacunas inmunizan al sujeto con antgenos atenuados que mimetizan una infeccin primaria, para que una vez que el individuo tiene contacto con ese antgeno, el SI haya generado clulas plasmticas y de memoria que producen una respuesta secundaria mucho ms rpida. La respuesta inmune humoral previene la propagacin de infecciones intracelulares y es capaz de destruir microorganismos extracelulares. Se lleva a cabo esta respuesta mediante los anticuerpos secretados por linfocitos B. Las clulas B se localizan y circulan a travs de los folculos hasta que encuentran el antgeno reconocido por su Igs. En el bazo, los linfocitos B pueden encontrar antgenos que hayan alcanzado la corriente sangunea. El reconocimiento de antgenos se hace a travs de las inmunoglobulinas de superficie de los linfocitos B. Las consecuencias del encuentro del antgeno por un linfocito B son, por una parte la activacin celular y si es un antgeno proteico, su procesamiento y presentacin por el MHC de clase II. El linfocito B necesita recibir dos seales para ser activado, tal como se puede
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ver en la figura adjunta. Una seal es procedente de la Ig y la otra del complejo CR2. Este complejo est compuesto por CR2, CD19 y CD81, y necesita la seal de la protena Cd3 del complemento para transmitir la seal. El proceso de activacin de los linfocitos B consta de una serie de fases secuenciales. Pero adems, la respuesta humoral frente a antgenos proteicos requiere de la colaboracin de linfocitos T. Las clulas B vrgenes (IgM o IgD al principio) al contactar con el patgeno proliferan y se convierten en clulas plasmticas productoras de anticuerpos, lo que las convierte en molculas efectoras. Esta accin se considera como la respuesta humoral primaria. Producida la respuesta primaria, se dirigen a la mdula sea clulas plasmticas sensibilizadas, que quedan como clulas de memoria, pero tambin quedan clulas de memoria en la sangre, aunque en este caso son linfocitos B. Tras un segundo contacto con el agente patgeno, la respuesta humoral ser ms rpida y contundente. Y tras esta respuesta secundaria tambin quedarn clulas de memoria en la sangre (linfocitos B) y en la mdula sea (clulas plasmticas). La respuesta inmune humoral se inicia en los rganos linfoides, y es diferente para antgenos proteicos y no proteicos. La respuesta humoral a antgenos no proteicos no requiere de linfocitos T. La respuesta humoral a antgenos proteicos requiere tanto linfocitos B como linfocitos T. Esta respuesta es altamente especializada, generando anticuerpos de isotipos diferentes, cada uno de los cuales media funciones efectoras distintas. Adems, produce anticuerpos de alta afinidad. El reconocimiento del antgeno por el linfocito B conduce a su interiorizacin o endocitosis, procesamiento y presentacin ligado a MHC-II
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La respuesta inmune humoral presenta tres fases: Fase de reconocimiento: el linfocito B se activa al reconocer al antgeno y por otros estmulos. Fase de procesamiento del antgeno y activacin: una vez activados, los linfocitos B sufren expansin clonal, procediendo a dar una respuesta efectora. Fase efectora o de respuesta: en esta fase pueden ocurrir varias cosas: - Produccin de anticuerpos. - Cambio de isotipo (hacia el ms efectivo para destruir al agente patgeno). - Maduracin de la afinidad y produccin de clulas B productoras de anticuerpos de alta afinidad. -Transformacin a clula de memoria (quedan en el torrente sanguneo y tienen una vida media muy larga).
Transmisin de la seal por el complejo-receptor de antgeno de las clulas B.- El BCR (B cell receptor), como ya hemos visto, es una inmunoglobulina. Su dominio citoslico no permite la transmisin adecuada de la seal al interior celular debido a su pequeo tamao, por lo que este receptor se vale de cadenas laterales y para esta transmisin. Estas cadenas laterales tienen motivos intracitoslicos ms largos, concretamente motivos ITAM.
Cuando un BCR reconoce un antgeno y se da el entrecruzamiento, se produce un acercamiento de las cadenas laterales al anticuerpo, y los motivos ITAM de estas cadenas laterales se fosforilan por quinasas intracelulares. Estos motivos ITAM van a activar a una Syk quinasa, que va a tener dos efectos: por un lado activa a la PLC-1, la cual provoca un incremento de los niveles de Ca2+ (va IP3) y de DAG. El Ca2+ va a activar a diferentes enzimas, las cuales activan a los factores de transcripcin NFAT y Myc. Por su parte, el DAG va a activar a la PKC, enzima que activa a dos factores de transcripcin: NFAT y NF-B.
El otro efecto de la Syk quinasa es el reclutamiento de protenas adaptadoras de la membrana, como Grb2. Estas protenas adaptadoras provocan el cambio de GDP por GTP, por lo que activan las vas de las Ras-MAPKs y de las Rac-SAPKs. Mediante
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estas vas se van a activar diferentes protenas citoslicas (ERK y JNK), las cuales activan a los factores de transcripcin NF-B y AP-1. Las consecuencias funcionales de la transmisin de la seal desde el BCR al interior celular son: - Entrada de la clula B en el ciclo celular: entrada en mitosis, incremento del tamao celular y de los orgnulos. - Incremento de la expresin de molculas coestimuladoras (B7-1 y B7-2). - Incremento en la expresin de receptores de citoquinas (por ejemplo de IL-2 e IL-4). - Incremento de la supervivencia debido a la expresin de protenas antiapoptticas (por ejemplo Bcl-X).
Presentacin del antgeno por clulas B a las T.- Cuando un linfocito B se activa por accin de las clulas T, la activacin es ms intensa. Cuando un linfocito B reconoce un virus, lo fagocita y lo procesa, y lo muestra al exterior con la molcula del MHC y con molculas coestimuladoras. Entonces, los linfocitos T pueden reconocer el antgeno vrico y activarse, lo cual produce citoquinas que hacen que el linfocito B se active an ms y que produzca anticuerpos que van a neutralizar el antgeno. En este caso los linfocitos B actuaran como clulas presentadoras de antgeno.
Cuando un linfocito B reconoce un polisacrido unido a una protena bacteriana, fagocita el conjunto y lo procesa. A continuacin este linfocito muestra al exterior los antgenos proteicos, de forma que puedan ser reconocidos por los linfocitos T, los cuales no pueden reconocer antgenos no proteicos. Al activarse el linfocito B por accin de las citoquinas liberadas por la clula T, producir anticuerpos capaces de reconocer el polisacrido. El entrecruzamiento del BCR debido a la unin al antgeno provoca un incremento de la expresin de las molculas del MHC y de molculas coestimuladoras (B7-1 y B7-2). Al ponerse en contacto el linfocito T y el B, el primero se activa e incrementa la expresin de molculas coestimuladoras (CD40 ligando (CD40L)) y libera citoquinas que actan sobre el segundo. Estas molculas provocan la activacin del linfocito B, el cual prolifera y se diferencia a clula plasmtica. La activacin de los linfocitos B por linfocitos T requiere del contacto fsico entre las membranas de ambas clulas. Si
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se fijan linfocitos T a una columna y se hace pasar por sta a los linfocitos B, estos se van a activar tambin, pero la activacin ser menor que si los linfocitos T se encuentran libre. Adems, la funcin de las clulas T no puede ser reemplazada in vitro por sus productos secretados, pero s por membranas plasmticas aisladas a partir de clulas T activadas, ya que en este ltimo caso s se dara el contacto entre las membranas de ambas clulas. Por otro lado, si se ponen en contacto linfocitos B con linfocitos T que lleven anticuerpos que bloquean sus molculas coestimuladoras (CD40L), se inhibe la activacin de las clulas B, ya que tan slo se produce una de las dos seales. Por ltimo, fibroblastos que expresan CD40L pueden activar a las clulas B, aunque en menor medida ya que slo se produce una de las dos seales. Ratones nulos para CD40 o CD40L muestran defectos muy graves en el cambio de clase, tanto en la maduracin de la afinidad como en el establecimiento de la memoria de los linfocitos B.
Citoquinas que regulan la respuesta mediada por anticuerpos.- Las citoquinas son protenas implicadas en la comunicacin entre clulas. Si un linfocito B maduro y virgen se activa al contactar con un antgeno, entra en proliferacin gracias a las citoquinas IL-2, la IL-4 y la IL-5. Las citoquinas permiten el cambio de isotipo, la maduracin de la afinidad y el nmero de clulas memoria.
Para saber cual es el mejor anticuerpo que debe producir el linfocito B para combatir ese antgeno se vale de las citoquinas que genera: - La produccin de IL-2, IL-4 e IL-5 conduce a la produccin de IgM. - La produccin de IL-2, IL-4, IL-6 e IFN- conduce a la produccin de IgG. - La produccin de IL-5 y TGF- conduce a la produccin de IgA. - La produccin de IL-4 conduce a la produccin de IgE.
Desarrollo del centro germinal.- Un vez que han contactado el linfocito Th y el linfocito B en el borde del folculo linfoide primario del ganglio linftico, el linfocito B se separa del linfocito T, y entra en este folculo. Entonces, el linfocito B comienza a proliferar y forma el centro germinal (ver pg. 22). En este centro, las clulas B contactan con las clulas dendrticas, y slo sobreviven aquellos linfocitos B que reconocen al antgeno con una alta afinidad, algunos de los cuales pasarn a clulas B de memoria, mientras el resto se transformarn en clulas plasmticas productoras de anticuerpos. Los linfocitos B que, o no reconocen el antgeno o lo hacen con baja afinidad mueren por apoptosis
Cuando se ha dado la respuesta humoral inmune suficiente, hay elementos que actan sobre el linfocito B provocando que la respuesta inmune se frene. Cuando esta seal de activacin es suficiente, aparecen receptores de la Fc de los anticuerpos en la membrana de los linfocitos B, siendo en este caso los anticuerpos reconocidos por el propio linfocito B activo. Esto hace que se libere una seal que bloquea la fosforilacin mediante la activacin de fosfatasas que eliminan los fosfatos de los dominios de los motivos ITAM y por tanto, se bloquee la liberacin de anticuerpos. De esta forma se frena y controla la respuesta humoral.
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Antgenos timo independientes.- En cuanto a la cooperacin entre clulas T y B se habla de antgenos timo-dependientes y antgenos timo-independientes. Los antgenos timo-dependientes son aquellos que necesitan de la cooperacin del linfocito T para poder producir una respuesta inmune humoral. En cuanto a los antgenos timoindependiente pueden ser de dos tipos: tipo 1 o tipo 2. Los de tipo 1 pueden producir una respuesta inmune humoral por si mismos, y destacan en LPS bacteriano y Brucella. Por su parte, los de tipo 2 pueden producir una respuesta humoral por si mismos, pero para generar el cambio de isotipo requieren de los linfocitos T.
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TEMA 17. Mecanismos efectores de la respuesta inmune celular.
Las citoquinas: concepto y caractersticas generales.- Las citoquinas son protenas que se encargan de la comunicacin entre clulas. Antiguamente se denominaban segn la clula que las liberaba: linfoquinas (liberadas por los linfocitos), monoquinas (liberadas por los monocitos macrfagos), etc.; pero se decidi denominarlas a todas como interleuquinas (IL).
Son protenas que median muchas de las funciones en la inmunidad innata y adaptativa. En las fases efectoras de las R.I. innata y adaptativa activan a las clulas efectoras. En la fase de activacin de la R.I. adaptativa, estimulan el crecimiento y la diferenciacin de los linfocitos. En medicina clnica, son importantes como agentes teraputicos y dianas de antagonistas especficos en muchas enfermedades. Las citoquinas inician sus acciones al unirse a receptores especficos de membrana en las clulas diana. Para ello, las seales externas regulan la expresin de los receptores de citoquinas y, por consiguiente, la respuesta de las clulas a las citoquinas. Las respuestas celulares a la mayora de las citoquinas consisten en cambios en la expresin de genes en las clulas diana, lo que da lugar a la expresin de nuevas funciones y a veces, a la proliferacin de las clulas diana. Las propiedades generales de las citoquinas las podemos resumir en las siguientes: - La secrecin de citoquinas es un acontecimiento breve y autolimitado. Su ARNm es inestable. - Las acciones de las citoquinas suelen ir dirigidas a diferentes tipos celulares (pleiotropismo) y suelen ser redundantes.
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- Las citoquinas influyen a menudo en la sntesis y las acciones de otras citoquinas a modo de cascadas. Dos citoquinas pueden antagonizarse entre s, provocar efectos aditivos o, en ocasiones, producir un efecto mayor del previsto. - Las acciones de las citocinas pueden ser locales o sistmicas. Sus efectos pueden ser de tipo autocrino, pararacrino o endocrino. - Las citocinas inician sus acciones al unirse a receptores especficos de membrana en las clulas diana. - La expresin de los receptores de citocinas se regula por seales externas, lo que potencia la especificidad de las respuestas inmunitarias. - Las respuestas celulares a la mayora de las citocinas consisten en cambios en la expresin de genes en las clulas diana, lo que da lugar a la expresin de nuevas funciones en dichas clulas. Las citoquinas no se sintetizan de forma constitutiva, sino slo cuando son necesarias. A la hora de liberarse, se liberan por seales de otras clulas. Para poder llevar a cabo su funcin, las citoquinas necesitan unirse a receptores concretos: los ligandos de las citoquinas. Otras propiedades de las citoquinas son: Pleiotropismo: una interleuquina puede ser liberada por una sola clula y actuar en clulas diferentes, llevando a cabo una accin distinta en cada una.
Redundancia: diferentes citoquinas van a tener la misma diana y la misma accin, de modo que si falla una interleuquina la accin se mantiene.
Sinergia: interleuquinas diferentes y producidas por clulas distintas pueden tener el mismo efecto sobre una clula diana. Se dice que estas citoquinas actan de forma sinrgica.
Antagonismo: citoquinas diferentes actan sobre una misma clula con funciones diferentes.
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Las citoquinas se clasifican en tres grupos: - Mediadores y reguladores de la inmunidad innata: TNF, IL-1, IL-12, IFNs, IL-10, IL15, IL-18 y quimioquinas. - Mediadores y reguladores de la inmunidad adaptativa: IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, IFN, TGF- y linfotoxina. - Estimuladores de la hematopoyesis: SCF, IL-7, IL-3, IL-9, IL-11, GM-CSF, M-CSF y G-CSF. La actuacin de las citoquinas en la inmunidad innata es la siguiente: cuando penetra un microorganismo en nuestro cuerpo, se activa el sistema monocito macrofgico. Los macrfagos activados aumentan de tamao, aumentan su capacidad bactericida y producen interleuquinas proinflamatorias (TNF e IL-1) y quimoquinas, producindose un proceso inflamatorio. Tambin liberan IL-12, la cual acta sobre las clulas NK. Esta interleuquina hace que estas clulas liberen INF, el cual incrementa an ms la capacidad bactericida de los macrfagos.
En cuanto a la participacin de estas protenas en la inmunidad adaptativa, cuando una clula presentadora de antgeno presenta un antgeno a los linfocitos T, stos se activan y liberan IL-2. La IL-2 acta con carcter auto, para y endocrino. La IL-2 provoca la proliferacin y diferenciacin de los linfocitos T, los cuales liberan IFN que acta sobre los macrfagos. Tambin liberan IL-2, IL-4 e IL-5, que junto con el IFN, actan sobre los linfocitos B, los cuales se transforman en clulas plasmticas y sufren el cambio de isotipo. La IL-2 y el IFN actan sobre los linfocitos T citolticos, haciendo que se diferencien y liberen sus grnulos para matar a la clulas infectadas.
Familia de receptores de citoquinas y transmisin de la seal.- Los receptores de citoquinas se clasifican en 5 grupos:
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Receptores de citoquinas de tipo I (hematopoyetina): presentan dominios extracelulares con cistenas conservadas y otros dominios con la secuencia trp-ser-X-trp-ser (WSXWS). Incluyen la familia del receptor de IL-2 (cadena comn), la familia del
receptor de GM-CSF (cadena comn) y la familia del receptor de IL-6 (subunidad gp130 comn). Receptores de citoquinas de tipo II. Receptores de TNF. Receptores de la superfamilia de las inmunoglobulinas. Receptores de 7 hlices transmembrana. Existen diferentes rutas de sealizacin interna usadas por las citoquinas: Sealizacin por protenas G. Sealizacin por tirosin-quinasas asociadas a receptores. Ruta Jak-STAT: tipo I y II. La unin de las citoquinas a sus ligandos provoca un cambio conformacional, lo que conduce al acercamiento de los factores de transcripcin STAT inactivos al receptor de las citoquinas. Las protenas STAT son fosforiladas por los dominios intracitoslicos de los ligandos. Las protenas STAT fosforiladas dimerizan y migran al ncleo, donde se promueven la expresin de diferentes genes. Va de las TRAFS: TNF-RII y CD40. Cuando el TNF se une a su ligando, se une a este complejo la protena adaptadora TRADD. A esta ltima se puede unir la protena TRAF, lo que provoca la expresin gnica de mediadores de la inflamacin y de protenas antiapoptticas. Sealizacin por receptores Toll. Cuando la IL-1 se une a TLR, se activan protenas citoslicas en cascada: TRAF6 activa a la protena NIK, la cual fosforila a IB, activndose el NF-B. Este ltimo penetra en el ncleo y provoca la expresin de algunos genes.
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Citoquinas de la inmunidad natural.- Las citoquinas que participan en la inmunidad innata se recogen en la siguiente tabla:
T F: cuando el TNF se produce en pequeas cantidades, provoca la activacin de los polimorfos nucleares (entre ellos los neutrfilos) y la expresin de molculas de adhesin celular en las clulas endoteliales para reclutar clulas a nivel del foco infeccioso. Coley observ que los pacientes oncolgicos al adquirir una infeccin, mejoraban del cncer reducindose el tamao de este.
Si se libera en cantidades moderadas, como ocurre en la neumona, el TNF acta sobre el hipotlamo (provocando fiebre), sobre el hgado (estimulando la produccin de las protenas de fase aguda), y sobre la mdula sea (estimulando el reclutamiento de las clulas necesarias para la inflamacin). Si empeora el estado del organismo, se libera TNF en mayores cantidades, y comienza a haber fallos a nivel de diferentes rganos: corazn (gasto cardaco bajo), hgado (hipoglucemia) y vasos sanguneos (vasodilatacin intensa, lo que provoca la formacin de trombos). El individuo acaba muriendo debido a un shock sptico.
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El TNF es producido por los macrfagos activados, es el mediador principal frente a bacterias gramnegativas. Es un homotrmero de 51 kD (3 x 17 kD) que puede unirse a dos receptores: TNF-RI y TNF-RII. Sus acciones fisiolgicas varan dependiendo de la cantidad producida; cuando se producen cantidades pequeas, acta sobre las clulas endoteliales y leucocitos neutrfilos para facilitar la migracin de stos a los focos inflamatorios y potenciar su accin bactericida.
IL-1: Las acciones de esta interleuquina son similares a la del TNF, pero ms leves. A bajas concentraciones aumenta la expresin de molculas de superficie que median la adhesin de los leucocitos. Y a altas concentraciones provoca fiebre, induce la sntesis de protenas de fase aguda e inicia la caquexia (acta sobre la masa grasa del msculo, fomentando su catabolismo). Esta citoquina no provoca apoptosis ni causa shock sptico.
Es producida por el fagocito mononuclear como respuesta a productos bacterianos y sus acciones son muy similares a las del TNF, aunque no produce dao tisular ni es letal a dosis elevadas. A concentraciones bajas es mediadora de la inflamacin. A concentraciones altas, acta sistmicamente, produciendo fiebre, induciendo la sntesis de protenas de fase aguda e iniciando el desgaste metablico.
Quimioquinas: reclutan a los leucocitos para que se dirijan a los focos de infeccin (CXC en el caso de neutrfilos, y CC en el de monocitos, linfocitos y eosinfilos). Estas citoquinas regulan el trfico de linfocitos y otros leucocitos a travs de los tejidos linfoides perifricos (BCL/BCA1 y CXCR5) y estn implicadas en el desarrollo de distintos rganos (CXCR4). IL-12: esta interleuquina tiene gran cantidad de funciones. Los macrfagos y las clulas presentadoras de antgeno al activarse liberan esta citoquina, la cual acta sobre varias clulas: - Linfocitos T CD4+: la IL-12 hace que se transformen en linfocitos Th1, los cuales liberan IFN que acta sobre los macrfagos, incrementando su capacidad bactericida. - Clulas NK: las activa y provoca que liberen IFN que acta sobre los macrfagos, incrementando su capacidad bactericida. Tambin aumenta la actividad citoltica de estas clulas, lo que provoca la muerte de las clulas infectadas. - Linfocitos T CD8+: estimula a estas clulas para que liberen IFN que acta sobre los macrfagos, incrementando su capacidad bactericida. Tambin aumenta la actividad citoltica de estos linfocitos, lo que provoca la muerte de las clulas infectadas. IF de tipo I: cuando una clula husped es infectada por un virus, esta clula libera interfern de tipo I, el cual acta sobre las clulas colindantes no infectadas
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incrementado su resistencia a virus. Por otro lado, esta citoquina incrementa la expresin de molculas del MHC en la clula infectada, permitiendo el reconocimiento del virus por parte de los linfocitos T citolticos y, por tanto, la muerte de la clula infectada. Las caractersticas principales interfern tipo I son las siguientes: del
1. IFN- es producido por los fagotitos mononucleares e IFN-, por los fibroblastos. 2. Inhiben la replicacin viral. 3. Aumentan el potencial ltico de las clulas NK. 4. Aumentan la expresin de molculas MHC-I. 5. Estimula el desarrollo de los linfocitos Th1.
IL-10: esta citoquina inhibe la produccin de IL-12 y TNF por macrfagos activados, as como la expresin de coestimuladores y molculas MHC de clase II en macrfagos. IL-15: esta interleuquina promueve la proliferacin de las clulas NK y es un factor de crecimiento de las clulas T. IL-18: estimula la produccin de IFN por clulas T y NK, por lo que tiene una accin sinrgica con la IL-12.
Las interleuquinas ms importantes que participan en la inmunidad innata son las proinflamatorias: IL-1, IL-6 y TNF. En la inmunidad innata, el TNF es el primero en secretarse y actuar, y tras l se secreta y acta la IL-1. Ambas citoquinas promueven la inflamacin. Tras estas citoquinas se produce la IL-12, la cual estimula la activacin de los macrfagos.
Citoquinas de la inmunidad especfica.- Las principales citoquinas en la

inmunidad especfica son las siguientes: Linfocitos CD8 Tc: IFN-. Linfocitos CD4 Th0: IL-2, IL-4, IFN-. Linfocitos CD4 Th1: IFN-, TNF-. Linfocitos CD4 Th2: IL-4, IL-5, IL-10. Las citoquinas que participan en la inmunidad especfica se recogen en la siguiente tabla:
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IL-2: Es la principal citocina responsable de la proliferacin de linfocitos T. Acta como citocina autocrina y paracrina y la intensidad de la respuesta inmune celular est en relacin directa con la cantidad de IL-2 secretada. Por otra parte, estimula tambin la proliferacin de clulas NK.
Esta citoquina es liberada por los linfocitos T, y acta con carcter autocrino y paracrino, como hemos dicho ms arriba. Los linfocitos T virgen expresan de forma parcial el receptor de la IL-2 (cadenas y ) de manera constitutiva. Este receptor es de baja afinidad. Cuando una clula presentadora de antgeno muestra un antgeno unido al MHC a un linfocito T virgen junto con molculas coestimuladoras, el linfocito T produce IL-2, la cual estimula la sntesis de la cadena del receptor de la IL-2. Este receptor (CD25) es de alta afinidad. Los mecanismos de accin de la IL-2 unida a CD25 son: - Activa a los linfocitos T y hace que proliferen. Estos linfocitos activos liberan IL-4 e IFN. - Estimulan la activacin y la proliferacin de los linfocitos B, los cuales se transforman en clulas plasmticas liberadoras de anticuerpos. - Activa a las clulas NK, las cuales proliferan e incrementan el contenido de sus grnulos, lo que aumenta su actividad celuloltica. Es la principal citoquina responsable de la proliferacin de linfocitos T. Acta como citocina autocrina y paracrina y la intensidad de la respuesta inmune celular est en relacin directa con la cantidad de IL-2 secretada. Estimula tambin la proliferacin de clulas NK.
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IL-4: es producida por los linfocitos Th2. Esta interleuquina tiene diferentes acciones:
- Activa los linfocitos B, los cuales se transforman en clulas plasmticas, y promueve el cambio de isotipo hacia IgG1 en ratones y hacia IgG4 en humanos. Pero tambin estimula el cambio de isotipo hacia IgE. - Inhibe la activacin de los macrfagos. - Acta sobre los linfocitos T CD4+ haciendo que se diferencien a linfocitos Th2, los cuales proliferan y actan como clulas efectoras en la defensa. Es decir, estimula la aparicin de linfocitos Th2 a partir de linfocitos CD4 vrgenes. - Es la mediadora fundamental en las reacciones alrgicas o de hipersensibilidad inmediata.
IL-5: estimula el crecimiento y diferenciacin de los eosinfilos, y activa a los eosinfilos maduros. Los eosinfilos tienen un papel fundamental en la defensa frente a helmintos. Esta interleuquina es producida por los linfocitos CD4 Th2 y estimulan el crecimiento y la diferenciacin de los eosinfilos para que puedan destruir a helmintos. IF : es producido y liberado por los linfocitos T activos y las clulas NK, y llevan a cabo varias acciones: - Actan sobre las clulas presentadoras de antigeno, haciendo que stas incrementen la expresin de molculas del MHC. - Acta sobre los linfocitos B haciendo que se transformen a clulas plasmticas y que sufran un cambio de isotipo hacia inmunoglobulinas opsonizantes (IgG). - Aumenta la capacidad bactericida de los macrfagos. - Acta sobre los linfocitos T CD4+ favoreciendo su diferenciacin a Th1. - Potente activador de los fagocitos mononucleares. - Fundamental en la respuesta contra microorganismos intracelulares. - Induce respuestas de anticuerpos opsonizantes. - Aumenta el metabolismo oxidativo de los neutrfilos. - Estimula la actividad citoltica de las clulas NK. Factor de crecimiento transformante beta (TGF-): esta citoquina realiza varias acciones: - Inhibe la proliferacin y diferenciacin de las clulas T. - Inhibe la activacin de los macrfagos. - Facilita el cambio de isotipo hacia IgA. Linfotoxina: activa a las clulas endoteliales y a los neutrfilos. Adems, interviene en el desarrollo normal de los rganos linfoides. IL-13: inhibe la activacin de los macrfagos y antagoniza con el IFN.
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Citoquinas hematopoyticas.- Estas citoquinas intervienen en la sntesis y maduracin de las clulas que componen la sangre: PMN, linfocitos, monocitos/macrfagos, plaquetas y eritrocitos.
En la mdula sea encontramos las clulas madre pluripotentes, las cuales por determinados factores no bien conocidos se diferencian o en precursores linfoides o en precursores mieloides. Estos precursores van dar lugar a las diferentes clulas sanguneas por la accin de distintas citoquinas.
Clulas Th1 y Th2. Diferenciacin y funciones.- La diferenciacin de los linfocitos CD4 en efectores Th1 o Th2 depende de las citoquinas producidas en respuesta a los patgenos. Las citoquinas pueden favorecer la diferenciacin de los linfocitos T CD4+ hacia linfocitos Th1 o hacia linfocitos Th2. La IL-12, sintetizada por los macrfagos y las clulas dendrticas activadas, induce el desarrollo de linfocitos Th1 a travs de una va dependiente de STAT4. Sin embargo, la IL-4, que puede producirse principalmente por los propios linfocitos T, favorece la diferenciacin de linfocitos Th2 a travs de una va dependiente de STAT6. Cada uno de estos subtipos de linfocitos Th va a producir unas citoquinas determinadas:
Los linfocitos Th1 producen las siguientes citoquinas: - IFN: promueve la activacin de los macrfagos y la liberacin de anticuerpos por parte de los linfocitos B, concretamente IgG (la inmunoglobulina ms opsonizante). - IL-2: junto con el IFN promueve la conversin de los linfocitos T CD8+ en linfocitos T citolticos. - Linfotoxina y TNF: intervienen en la atraccin de los neutrfilos al foco de infeccin. Los linfocitos Th2 producen las siguientes citoquinas: - IL-10: junto con la IL-4 acta sobre macrfagos activados suprimiendo esta activacin. - IL-4: acta sobre los linfocitos B, estimulando la sntesis de anticuerpos neutralizantes (IgG4 e IgG1) y de IgE, inmunoglobulina que provoca la desgranulacin de los mastocitos. - IL-5: activa a los eosinfilos.
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TEMA 18. CITOTOXICIDAD MEDIADA POR CLULAS T.
Tipos de respuestas inmunes mediadas por clulas T.- El linfocito T produce respuesta inmune frente a bacterias (intracelulares o extracelulares) y frente a virus. En el caso de infeccin por virus, los antgenos son detectados por linfocitos T CD8 mediante MHC tipo I, inducindose la muerte de la clula por apoptosis.
Hay tres clases de linfocitos T efectores: CD8, CD4 Th1 y CD4 Th2. Los tipos de reacciones inmunitarias celulares son las siguientes: 1. La respuesta frente a microorganismos que residen dentro de los fagosomas de los fagocitos esta mediada por linfocitos Th1, que reconocen antigenos microbianos y activan a los fagotitos para que destruyan los microorganismos ingeridos. Pueden volverse patologicas y dar reacciones de hipersensibilidad tipo IV o retardadas. 2. La respuesta frente a los microorganismos que infectan y se replican en el citoplasma esta mediada por linfocitos Tc CD8+ que destruyen las celulas infectadas. Las reacciones de hipersensibilidad fueron clasificadas por Gell y Coombs como: - Reacciones de hipersensibilidad tipo I: alergias (por ejemplo la fiebre del heno). - Reacciones de hipersensibilidad tipo II (citotxicas). - Reacciones de hipersensibilidad tipo III (por complejos inmunes): enfermedad del suero. - Reacciones de hipersensibilidad tipo IV o retardadas: lepra, difteria, etc.
Funciones de las citoquinas en la inmunidad mediada por clulas.Diferentes citoquinas estimulan distintas respuestas de clulas que participan en la inmunidad y en la inflamacin. En la fase de activacin de las respuestas inmunitarias adaptativas, las citoquinas estimulan el crecimiento y la diferenciacin de los linfocitos, mientras que en las fases efectoras de la inmunidad innata y adaptativa, activan a diferentes clulas efectoras para eliminar los microorganismos y otros antgenos. Las citoquinas tambin estimulan las clulas hematopoyticas.
Las respuestas inmunes mediadas por las clulas T pueden ser de diferentes tipos. Las clulas presentadoras de antgeno presentan los antgenos a los linfocitos Th y Tc, y segn el linfocito que reconozca el antgeno se va a producir unas citoquinas u otras. Si el antgeno es reconocido por los Th, estos secretarn TNF e IFN; mientras que si son los Tc los que reconocen el antgeno, slo producirn IFN. El TNF acta sobre los PMN, activndolos y facilitando la inflamacin. Cuando una clula husped es infectada por microbios intracelulares, los linfocitos Tc CD8+ reconocen el antgeno expuesto por la clula infectada y liberan sus grnulos citolticos, con lo que se consigue la lisis de la clula infectada.
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Las molculas efectoras producidas por las clulas Tc CD8 son las citotoxinas (almacenadas) y citocinas (sintetizadas de novo). Las citotoxinas no son especficas y pueden producir la muerte por apoptosis de cualquier celula diana. Las citocinas solo actuan sobre celulas especializadas, tras su union a receptores especificos presentes en la superficie de las mismas.
Hipersensibilidad retardada, concepto y fases de la respuesta.- Las reacciones de hipersensibilidad retardada se llaman as porque tardan entre 24 y 48 horas en ponerse en marcha. Estas reacciones tienen varias fases:
- Fase de reconocimiento y activacin. Cuando se administra una pequea dosis del agente infeccioso a un organismo que no ha tenido ningn contacto previo con este patgeno, a las pocas horas va a aparecer un habn (inflamacin), el cual a las 24-48 horas aumentar de tamao. - Fase efectora: inflamacin y activacin del macrfago. Los linfocitos T sensibilizados liberan citoquinas que provocan: - Citotoxicidad indirecta. - Aumento de la permeabilidad del vaso, de modo que se produce un proceso inflamatorio. - Reclutamiento de PMN al foco de infeccin, perpetundose la inflamacin. Este proceso inflamatorio puede destruir al patgeno. Pero si esto no se consigue, se crea un proceso fibrtico alrededor del patgeno generndose un granuloma para aislarlo. Este granuloma puede obstruir la luz de determinados vasos, lo que puede provocar, por ejemplo, dificultades respiratorias. Cuando el patgeno penetra a travs de la piel, sern las clulas presentadoras de antgeno quienes lo fagociten y muestren al exterior. Al captar un patgeno, las clulas dendrticas migran hacia el ganglio linftico ms prximo. Una vez all, presentan el antgeno a los linfocitos Th, los cuales se activan y proliferan. Las clulas dendrticas liberan IL-12, que magnifica la respuesta de los linfocitos Th transformndose en clulas efectoras. Entonces, los linfocitos activos salen al torrente sanguneo y se dirigen al foco de infeccin. En el foco de infeccin, los linfocitos se ponen en contacto con los fagocitos y liberan IFN para incrementar la capacidad bactericida del macrfago y destruir al patgeno. Tambin liberan TNF- y TNF-, que sinergizan con el IFN- en la activacin de macrfagos, y quimioquinas, citoquinas implicadas en el reclutamiento de leucocitos al foco de infeccin.
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Un linfocito Th al reconocer el antgeno presentado por una clula presentadora de antgeno, se activa y se transforma en Th1 por accin de la IL-12. El linfocito Th1 entonces libera IFN que incrementa la capacidad bactericida de los macrfagos. Las clulas Th1 coordinan la respuesta inmunitaria contra bacterias intracelulares: - Mediante IFN y CD40L activan macrofagos para que estos destruyan bacterias capturadas. - Matan por apoptosis a las celulas cronicamente infectadas por medio de Fas-L. - Producen IL-3 y GM-CSF, los cuales inducen la produccion de macrofagos en la mdula osea. - Mediante TNF y activan el endotelio vascular para guiar a los macrofagos hacia el foco de infeccion. - Dirigen la migracion de celulas fagociticas por medio del MCF (factor quimiotactico de macrofagos). La principal accion efectora de las celulas CD4 Th1 es la activacion de los macrofagos. Cuando el macrfago se activa libera citoquinas (IL12, TNF) que sealizan que existe un foco infeccioso. Las clulas del endotelio producen molculas de adhesin. Las primeras en expresarse son las E-selectinas que atraen a los neutrfilos; despus se expresan las ICAM-1 que atraen a los monocitos y por ltimo las VCAM-1 que atraen a las clulas T. En condiciones normales, las clulas endoteliales presentan receptores de baja afinidad por las molculas de adhesin. Cuando se produce un proceso infeccioso, los receptores y los ligandos de baja afinidad son sustituidos por unos de alta afinidad, con lo cual las clulas son atradas hacia el vaso produciendo deformaciones, y son conducidas hacia la lesin. Las clulas al llegar al foco salen del vaso debido a la inflamacin, que produce un aumento local de la permeabilidad. Las molculas de adhesin celular del interior de los vasos son las responsables de dirigir a los leucocitos y los linfocitos hasta el foco inflamatorio. En condiciones normales, los neutrfilos llevan en su superficie integrinas en estado de baja afinidad, por lo que pueden circular libremente por el interior de los vasos. Los linfocitos no activos tambin pueden circular
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libremente. Sin embargo, cuando se activan las clulas endoteliales debido a un proceso infeccioso, las molculas de adhesin de los PMN y de las clulas endoteliales pasan a ser de alta afinidad. Entonces las clulas se deforman y van circulando ms lentamente. En el foco de la infeccin se produce un incremento de la permeabilidad del endotelio, y las clulas endoteliales se separan, lo que permite la salida de los vasos de los PMN y linfocitos por diapdesis. Tambin sale lquido y protenas como el fibringeno. Las clulas se van a ir uniendo para llegar al foco de infeccin. Las clulas no especficas del antgeno no salen del torrente sanguneo. El incremento de la capacidad bactericida de los macrfagos consiste en: - Aumento de la expresin de molculas de MHC, de modo que se puede expresar ms antgeno al exterior. - Aumento de la expresin de molculas coestimuladoras. - Aumento de la liberacin de citoquinas, sobre todo de las proinflamatorias (IL-1, IL12 y TNF). - Activacin del sistema que forma radicales libres de O2, los cuales destruyen al patgeno. Los macrfagos fagocitan a los patgenos y se forma un fagosoma, el cual se fusiona con un lisosoma, formndose un fagolisosoma. La formacin de ste activa enzimas implicadas en la formacin de radicales libres, que se vierten al fagolisosoma y al exterior para destruir a los patgenos extracelulares.
Activacin de linfocitos T CD8 y diferenciacin de CTLs.- Los linfocitos T CD8 vrgenes se diferencian en LTC, que son los linfocitos efectores que reconocen y destruyen las clulas diana que expresan antgenos peptdicos extraos asociados amolculas del MCH I. La diferenciacin del linfocito T CD8 a linfocito T citotxico puede ocurrir de tres maneras diferentes:
1. Activacin directa. Un patgeno penetra en el organismo, y el macrfago se lo presenta al linfocito T CD8. Este se activa y libera citoquinas, y prolifera transformndose a LTCs 2. Cooperacin con el linfocito CD4. Un macrfago activado presenta el antgeno a un linfocito CD4 y a otro CD8. El linfocito CD4 se activa y libera citoquinas, que activa al linfocito CD8. 3. Puede ocurrir con la cooperacin del CD4 en dos pasos. El macrfago es activado por el CD4 y una vez activado el macrfago activa al CD8. El linfocito T citotxico produce la lisis de las clulas infectadas mediante varios pasos: - La clula diana expone los eptopos antignicos del virus y los muestra al linfocito T citotxico, que se activa. - El linfocito T citotxico al activarse, libera los grnulos de granzimas y perforinas. Una vez, liberados los grnulos el linfocito T se suelta, ya que las sustancias liberadas pueden daar su propia membrana. - Las perforinas producen poros en la membrana por donde penetra agua y calcio, produciendo una hipoosmosis en la clula, que finaliza hacindole estallar.
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- A travs de los poros, las granzimas penetran en la clula activando a las caspasas (caspasa 8) que inducen la apoptosis. Escinden y activan a la enzima CPP-32, miembro de la familia de las caspasas. La CPP-32 activada activa a la nucleasa CAD (deoxirribonucleasa activada por caspasa). CAD degrada el ADN celular (apoptosis). Esta accion tambien puede afectar al ADN virico, degradandolo. - La aparicin de Fas y Fas-ligando, que llevan dominios de muerte citoplasmaticos que al unirse se activan y producen la muerte de la clula por apoptosis.
Papel de las clulas Th2 en la regulacin de la inmunidad mediada por clulas.- Las clulas Th2 liberan IL-4, IL-10 e IL-13, las cuales actan sobre las citoquinas que liberan las clulas Th1, impidiendo su actuacin.
Los linfocitos CD4 o helper puede ser de dos tipos: Th1 o Th2, que son iguales y solo se diferencian en la interleuquinas que liberan. Estas interleuquinas hacen que cada uno tenga funciones distintas. Los patgenos en el interior de los fagolisosomas de los macrfagos estn protegidos de los efectos de los anticuerpos y clulas citotxicas. Se eliminan aumentando la capacidad bactericida de los macrfagos por INF 1. El Th1 libera TNF que aumenta los procesos inflamatorios, e IFN que aumenta la capacidad bactericida del macrfago (reacciones de hipersensibilidad retardada). 2. El Th2 libera citoquinas (IL10, IL4 IL5 e IL13) que inhiben los efectos del TNF (procesos inflamatorios) e inhiben los efectos del IFN. En definitiva inhibe la activacin del macrfago y los procesos inflamatorios. Por otro lado, los parsitos helmnticos estimulan a las clulas Th2 que sintetizan IL-4 e IL-5. La sntesis de anticuerpos IgE, especficos frente al helminto que lo recubren, se favorece por IL-4. A su vez IL-5 activa a los eosinfilos, que se unen a los parsitos recubiertos por IgE y los destruyen.
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TEMA 19. MECANISMOS EFECTORES DE LAS REACCIONES ALRGICAS.
Reacciones de hipersensibilidad tipo I, concepto, caractersticas y fases.- Las reacciones de hipersensibilidad tipo I, o alergias, tambin se llaman reacciones inmediatas, ya que se ponen en marcha media hora despus del contacto con el antgeno. Los mecanismos normalmente defensivos se vuelven patognicos. La reaccin alrgica tiene un carcter defensivo, pero el problema radica en que el contacto con antgenos inocuos provoca cuadros locales de sinusitis, renitis, conjuntivitis, asma, fiebre del heno, etc. y un shock sptico, que afecta a todo el organismo, por ejemplo en el caso de una picadura de un insecto. En este caso hay que administrar los frmacos que frenen el cuadro.
Son respuestas defensivas, el problema se presenta cuando se producen ante alrgenos inocuos. Las personas que tienen este tipo de reaccin se denominan atpicas. Normalmente no se produce respuesta de este tipo ante el primer contacto con el antgeno. La reexposicin es la que provoca las reacciones alrgicas. El tipo de reaccin depende de la clase de respuesta inmune puesta en accin y de la naturaleza y localizacin del alergeno. Caractersticas de la reaccin de hipersensibilidad inmediata (Tipo I): - Presenta una secuencia tpica de acontecimientos. - Las personas sensibles presentan una importante predisposicin gentica (atpicos). - Los alrgenos son sustancias habituales. - Depende de la activacin de linfocitos Th2. - Las manifestaciones clnicas consisten en una reaccin inmediata y otra tarda. - Estas manifestaciones son muy diversas. La secuencia de eventos en la hipersensibilidad inmediata es la siguiente: 1. Exposicin a un alrgeno 2. Activacin de linfocitos Th2 especficos 3. Sntesis de anticuerpos de clase IgE 4. Unin de la IgE a los mastocitos 5. Activacin de mastocitos por alrgenos 6. Liberacin de mediadores 7. Reaccin alrgica
Biologa de la IgE.- Como ya hemos visto en temas anteriores, para que se produzcan las IgE es necesario un cambio de isotipo en el linfocito B, por accin del linfocito Th2, que libera IL-4.
Las reacciones de hipersensibilidad son llevadas a cabo por los mastocitos. Estos llevan receptores para la fraccin Fc de los anticuerpos IgE (FcR) que tambin se conocen con el nombre de reaginas. Esta IgE se une a los Fc RI de la superficie de los mastocitos, de modo que cuando en los organismos atpicos penetra un alrgeno multivalente se produce un entrecruzamiento de la IgE unidas a la superficie de los mastocitos. La consecuencia de
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este entrecruzamiento es la desgranulacin de los mastocitos, liberndose al medio extracelular diferentes sustancias, entre ellas histamina.
Biologa de los mastocitos.- Los mastocitos reconocen a los IgE, se activan y se desgranulan, liberando mediadores rpidos (histamina y mediadores lipdicos) contenidos en los grnulos y mediadores tardos (citoquinas), que tardan 24 h en ser sintetizados.
Los mediadores liberados provocan varias respuestas: vasodilatacin, producindose la salida de lquido y clulas (edema), broncoconstriccin debido a la constriccin del msculo liso, y aumento de la secrecin de moco de las glndulas exocrinas. Esto explica el asma provocado por polen u otros antgenos inhalados por va respiratoria. Otras sustancias se liberan ms tardamente, ya que no se encuentran almacenadas, sino que deben sintetizarse. Estas sustancias no preformadas son citoquinas (TNF, IL-1, IL-6, IL-3 e IL-8) y mediadores lipdicos. Las citoquinas liberadas por los mastocitos perpetan el cuadro inflamatorio. Los individuos no alrgicos montan la respuesta a base de IgG o IgM, por lo que no tiene lugar la desgranulacin de los mastocitos. El FcRI est formado por cuatro cadenas transmembrana: una cadena , una y dos . La fraccin Fc de la IgE es reconocida por la cadena , y este reconocimiento provoca la fosforilacin de los motivos ITAM de las otras cadenas. Los mastocitos suelen estar en tejidos conectivos, mientras que los basfilos y los eosinfilos se encuentran en la sangre y son atrados al foco infeccioso cuando se les requiere. Estos tres tipos de clulas poseen receptores de alta afinidad para IgE, con lo cual pueden dar reacciones de alergias. Los mediadores lipdicos contenidos en los grnulos de nueva sntesis se pueden sintetizar por diferentes vas: va de la lipooxigenasa y va de la ciclooxigenasa.
Mediadores lipdicos
Va lipooxigenasa Va ciclooxigenasa SRS-A (Leucotrienos C4, D4). Leucotrieno B4. Prostaglandinas Tromboxanos PAF Citoquinas
Accin
Vasodilatacin, broncoconstriccin. Quimiotaxis. Vasodilatacin, broncoconstriccin Agregacin plaquetaria. Factor activador de plaquetas. Regulan la reaccin de fase tarda.
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Tambin se liberan citoquinas y PAF. Estos mediadores qumicos se recogen en la tabla anterior. Los mediadores preformados que se liberan en los mastocitos se recogen en la siguiente tabla:
Mediadores
Aminas bigenas: la histamina es la ms importante. Factores quimiotcticos de eosinfilos (ECF) y de neutrfilos (NCF). Enzimas proteasas: Triptasa. Quimasa. Proteoglicanos: Condrotn sulfato. Heparina. Citoquinas: TNF de mastocitos drmicos.
Accin
Vasodilatacin, aumento de la permeabilidad de los capilares, quimiocinesia, broncoconstriccin, etc. Quimiotaxis de eosinfilos y de neutrfilos, respectivamente. Remodelacin de tejidos y sntesis de colagenasas. Degrada la membrana basal del vaso.
Crea la matriz de almacenamiento y soporte de aminas bigenas hasta que se liberan. Anticoagulante.
A un individuo con alergia no se le debe dar aspirinas, ya que stas inhiben la va de la ciclooxigenasa, potencindose la de la lipooxigenasa, siendo los leucotrienos ms potentes que las prostaglandinas y tromboxanos.
Rutas se sealizacin.- La fosforilacin de los motivos ITAM del Fc RI, provocada por el entrecruzamiento de las IgE de la superficie de los mastocitos, induce la activacin de la PLC-1, la cual degrada el PIP2 originando IP3 y DAG. El IP3 acta sobre el RE promoviendo la liberacin de Ca2+, el cual junto al DAG provoca la activacin de la PKC. La PKC fosforila la miosina, lo que conduce a la liberacin de los grnulos de histamina.
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Biologa de eosinfilos.- Este tipo de reaccin tambin se monta sobre los eosinfilos, los cuales tambin presentan FcRI en su superficie. Cuando penetran parsitos de tipo helmintos son reconocidos por la IgE, producindose el entrecruzamiento de estos anticuerpos, lo que provoca la desgranulacin de los eosinfilos. Estas clulas liberan protenas catinicas que provocan la muerte de los parsitos y de clulas del husped. Tambin liberan enzimas implicadas en la remodelacin de los tejidos daados. Mecanismos y tratamientos de algunos cuadros alrgicos.- El cromoglicato sdico es un frmaco que va bien contra los cuadros alrgicos, pero que no se puede dar en el periodo agudo, sino en el interagudo. Este frmaco impermeabiliza las clulas para evitar la liberacin de sus grnulos. Evita la broncoconstriccin.
La epinefrina y la teofilina son frmacos que evitan la broncoconstriccin, ya que actan sobre el msculo liso evitando que se contraiga, por consiguiente los bronquios no se estrechan y el alrgico puede respirar con normalidad. Los corticoides frenan en la fase tarda la liberacin de citoquinas, evitando que el proceso inflamatorio se mantenga. Existen vacunas que provocan una desensibilizacin automtica del individuo alrgico. Con estas vacunas se pretende que el individuo monte la respuesta con IgG en lugar de con IgE. Se administra en cantidades nfimas el antgeno, y segn la respuesta del paciente se va incrementando la dosis. La inmunoterapia (desensibilizacin sistemtica) en las enfermedades alrgicas trata de conseguir respuestas del sistema inmune que no produzcan IgE. Mediante las vacunas de desensibilizacin se inyectan pequeas cantidades de antgenos para provocar un cambio de isotipo de IgE a IgG, porque la IgG no produce una desgranulacin tan intensa.
-- FIN --
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APU TES DE I MU OLOGIA leonalcon@hotmail.com Profra.: Da. Mara Dolores Maldonado TEMA 1. INTRODUCCIN AL ESTUDIO DE LA INMUNOLOGA (I) 18.02.

Receptor del antgeno

Tipos Funciones Origen Distribucin

Neutrfilo Fagocitosis y activacin de mecanismos bactericidas Eosinfilo

el caso de la va alternativa, las protenas se denominan como Factor ms una letra.

TEMA 8. EL DESARROLLO DE LOS LINFOCITOS B Y LA GENERACIN DE LA DIVERSIDAD DE LOS ANTICUERPOS.

intentan reordenamientos alternativos. Se hacen tantos como permita el nmero de genes.

TEMA 9. LA EXPRESIN DE LAS DISTINTAS CLASES Y TIPOS DE INMUNOGLOBULINAS.

sealadas hacen que sean clulas capaces de producir enfermedades autoinmunes.

El anlisis del ADN de los linfocitos de la sangre usando la tcnica de Southern

TEMA 10. EL COMPLEJO MAYOR DE HISTOCOMPATIBILIDAD.

+++ +++ +++ +++ + +++ + + +

Neutrfilos Hepatocitos Rion Cerebro

TEMA 11. EL RECONOCIMIENTO DEL ANTGENO Y PRESENTACIN A LOS LINFOCITOS T.

TEMA 12. EL RECEPTOR ANTIGNICO DE LAS CLULAS T (TCR).

TEMA 13. MOLCULAS ACCESORIAS DE LAS CLULAS T.

TEMA 15. GENERACIN DEL REPERTORIO DE LINFOCITOS T Y DE LA AUTOTOLERANCIA.

TEMA 16. ACTIVACIN DE LAS CLULAS B Y PRODUCCIN DE ANTICUERPOS.

TEMA 17. Mecanismos efectores de la respuesta inmune celular.

Citoquinas de la inmunidad especfica.- Las principales citoquinas en la

TEMA 18. CITOTOXICIDAD MEDIADA POR CLULAS T.

TEMA 19. MECANISMOS EFECTORES DE LAS REACCIONES ALRGICAS.

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