CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No.

DOCUMENTO:

identificar hongos en

objetos de uso comn.

MATERIA:

aplicar las tcnicas micolgicas. Xochitl Arzate Rivera.

PROFESOR:

SEMESTRE:

tercero BVLC

ALUMNA:

Luisa Jareth Jimnez Antonio.

Vo. Bo. :

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INDICE:
Pag. Presentacin..01 ndice...02 Introduccin..03 Tinciones..04 Tincin zhiel-neelsen06 Tincion azul de metileno.10 Tincion de gran...11 Anlisis de resultados..14

INTRODUCCION
Por increble que parezca, en el material informtico pueden acumularse 34 veces ms grmenes que en el retrete, segn demostr el microbilogo Charles Gerba, de la Universidad de Arizona. Para evitar la acumulacin de microorganismos indeseados es necesario:

Lavarse las manos con frecuencia. Limpiar de manera regular su teclado y su mouse. Voltee el teclado y sacdalo para eliminar las partculas que se acumulan en el interior de este aparato

Cuntas personas limpian correctamente su ordenador?

Segn una encuesta aplicada a 4 000 persons: El 10% nunca limpian el mouse de su ordenador. Entre el 10% y el 11% nunca desinfectan el teclado. Slo el 46% limpian su teclado una vez por mes o menos

OBTUVE LOS HONGOS DE: APAGADORES DE LUZ (aproximadamente 5 apagadores) DE CONTROLES DE TELEVISION (de 2 controles) TECLADOS DE COMPUTADORA (de 2 teclados de computadora) TELEFONOS CELULARES (1 celular)

TINCIONES
En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeos para observarse a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus. Estos microorganismos difieren en caractersticas tales como forma de nutricin, estructura, tamao, composicin entre otros aspectos; es por ello que se emplea el estudio microscpico el facilita notablemente la observacin; principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los cuales facilitan tambin la observacin de ciertas estructuras celulares. En este informe vamos a distinguir la estructura intracelular de algunos microorganismos, tal es el caso de la sarcina, Klecciela, Bacilo Serium entre otros. Desarrollamos los mtodos de tincin y damos a conocer un anlisis de los resultados obtenidos en la prctica.

DESARROLLO:
Mecanismos de Coloracin: La coloracin celular y tejidos son una combinacin de fenmenos fsicos y qumicos de absorcin: los fenmenos fsicos de absorcin, capilaridad y smosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes bsicos por los tejidos cidos y viceversa indican que hay reaccin qumica. Los Colorantes: Son compuestos, orgnicos que contienen radicales cromforos esto es que producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos. Los cromforos imparten la propiedadcromgena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido. Tinciones: Es un mtodo utilizado para estudiar microorganismos. (no vivos); en estas tinciones se observa morfologa, estructura y agrupamientos de microorganismos. Tipos de Tincin: Tincin Simple: utiliza un solo colorante. Tincin de Gram: Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg) Tincin cido Resistente:

Una vez teidos, conservan su color resistiendo al lavado con cido mineral reducido. En esta tincin las bacterias cido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los dems microorganismos son decolorados por el cido y toman el color azul. Tincin de Giensa: El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias ncleos de la clulas. Tincin de Esporas: Se usa verde de malaquita en contraste con safranina. Tincin de Cpsula: Colorante nigrosuna, aqu se observa microorganismos encapsulados creando resistencias. Tincin de Flagelos: Se usa mordiente el cual aumenta el tamao del microorganismo. Endsporas: Son unos cuerpos resistentes que se producen en el interior de la clula los cuales contienen los componentes necesarios para conservar la vida. Las esporas pueden situarse en el centro de la clula o en situaciones excntricas cerca de un extremo de la misma. Levaduras: Son esfricas, elpticas y cilndricos, su tamao vara notablemente. Son hongos cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular. Las Cpsulas: Son estructuras grueso viscosas gelatinosas que rodean las clulas de algunas especies. Sarcina: Son anaerobios obligados y son extremadamente cido tolerantes que pueden fermentar azcares y crecer a pH inferior a 2. Este gnero comprende 2 especies de bacterias que se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes de 8 en una clula.

ZHIEL NEELSEN
PREPARACION DE SOLUCIONES PARA TINCION DE ZHIEL NEELSEN Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tincin cido-alcohol resistente.

Fucsina bsica......................................................................................1 g Etanol 95%........................................................................................10 ml Fenol 5% en solucin acuosa............................................................100 ml

Acido-Alcohol: (decolorante para tincin Ziehl-Neelsen)

cido clorhdrico concentrado ..........................................................3 ml Etanol 95% ....................................................................................97 ml

Azul de metileno: Colorante de contraste para tincin de flagelos.

Azul de metileno................................................................................1 g Agua destilada...............................................................................100 ml

Tincin de Ziehl Neelsen La t i n c i n d e Z i e h l - N e e l s e n (B A A R ) es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, para la identificacin de microorganismos patgenos, por ejemplo M. tuberculosis. Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un bacterilogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patlogo. 1.- Fundamento Este mtodo se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cido graso|cidos grasos (por ejemplo, el cido miclico) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistencia|bacilos cido-alcohol resistentes o BAAR. Las Mycobacterium|micobacterias comoMycobacterium 6

tuberculosis|M. tuberculosisy Mycobacterium marinum|M. marinum y los parsitos coco (bacteria)|coccdeos comoCryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de ZiehlNeelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras 2.3 - Variante clsica o "en caliente" sta y la siguiente variantes son para preparaciones citolgicas. 1)Hacer un frotis de la muestra. I.La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tincin.

II.Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tincin con los extendidos hacia arriba. Coloque todos los portaobjetos orientados uniformemente, con el frotis hacia arriba. Nunca tia ms de 12 portaobjetos a la vez. 2)Dejar el frotis sobre el puente de tincin. 3) Aplicar fucsina-fenicada. III.Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este perodo. 4)Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).

I.Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el colorante. II.Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua. 5) Decolorar con alcohol-cido. III.Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal como alcohol cido y mantngalo sobre el portaobjetos durante 3 minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teido. Enjuague con agua una vez ms los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos an estn rosa, aplique una cantidad adicional de la solucin decolorante de 1 a 3 minutos.

6)Aplicar azul de metileno (1 minuto). I.Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto. 7)Enjuagar con agua I.Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire

. II.Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y haga la observacin al microscopio con 10 x 100 En "fro" Hacer un frotis. Dejarlo en el puente de tincin. Aplicar fucsina-fenicada (solucin con fenol y mayor concentracin de

fucsina).

Dejar en vasos coplin durante 20 minutos. Decolorar con alcohol acido. Lavar con agua del grifo. Contrastar con azul de metileno Algunos microorganismos cido-alcohol resistentes Mycobacterium: fuertemente cido-alcohol resistente. Nocardiay Actinomices: dbilmente cido-alcohol resistente. Parsitos coccdeos (Cryptosporidium) de muestras [fecales

AZUL DE METILENO
El azul de metileno (CI 52015) es un heterociclo aromtico compuesto qumico con la frmula molecular C 16 H 18 N 3 S Cl . Tiene muchos usos en una amplia gama de diferentes campos, tales como la biologa y la qumica . A temperatura ambiente se presenta como un slido, inodoro, de color verde oscuro, que produce una solucin de color azul cuando se disuelve en agua . La forma hidratada cuenta con 3 molculas de agua por cada molcula de azul de metileno PREPARACION DE SUSTANCIAS PARA TINCION DE AZUL DE METILENO Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples.

Solucin de hidrxido potsico al 1%.................................................1 ml Azul de metileno, sol. saturada en etanol al 95%...............................30 ml Agua destilada...............................................................................100 m

Procedimiento: 1. Los frotis se fija con calor y se deja enfriar.

2. Tincin con azul de metileno (homlogo de azul de toluidina O) solucin de dos a siete minutos.

3. Lavar y secar la diapositiva 10

TINCION DE GRAM
PREPARACION DE SUSTANCIAS PARA TINCION DE GRAM Cristal violeta: Para tincin Gram y tincin simple.

Cristal violeta (violeta de genciana)....................................................0,5 g Agua destilada.................................................................................100 ml

Safranina: Colorante de contraste para tincin Gram (preferible a la fucsina) y esporas.

o o

Safranina.................................................................................0,25 g Agua destilada........................................................................100 m

FUNDAMENTO Las bacterias ms comunes son Gram-positivas o Gram-negativos (sobre la base de la pared celular estructura). Recuerde que a partir de conferencias, Gram-positivas paredes de las clulas constan de varias capas de peptidoglicano (reticulado por el cido y el cido teicoicos lipoteicoico). Gramnegativas celular las paredes tienen una capa de peptidoglicano rodeadas por una membrana exterior a base de lpidos. En la dcada de 1880, Hans Gram desarroll el mtodo de tincin diferencial que lleva su nombre. A pesar de que todava no sabemos exactamente por qu las bacterias Gram positivas terminan buscando diferentes de bacterias Gram-negativas, la tincin de Gram sigue siendo una forma importante para caracterizar las bacterias. La tincin de Gram empieza por conseguir que las clulas a pegarse en un portaobjetos limpio. Tal preparacin es llamado frotis bacteriano. A un frotis bacteriano los siguientes productos qumicos se aplican a hacer una tincin de Gram:

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PROCEDIMIENTO: 1.Violeta Gram Cristal de manchas En condiciones de esterilidad elaborar un frotis y fijar al fuego. La extensin se inunda con cristal violeta durante 60 segundos. Cristal violeta es un color prpuraqumicos que se adhiere a la capa de peptidoglicano de la pared celular bacteriana. Despus de 60 segundos, el cristal violeta se enjuaga con agua destilada.

2.Yodo La citologa es el siguiente inundado de yodo durante 60 segundos. El yodo se llama mordiente, que hace que el cristal violeta al palo de peptidoglicano como causas de mortero ladrillos se peguen. Despus de 60 segundos, el yodo se enjuagan con agua destilada.

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3.Acetona / etanol Wash La citologa es el siguiente inundado con Acetona / Alcohol por tan slo 5 segundos. Despus de 5 segundos, la acetona / alcohol se enjuaga con agua destilada. La acetona / alcohol de lavado es el paso diferencial en el proceso de tincin de Gram.

4.Safranina manchas La extensin se inunda con safranina durante 90 segundos a dos minutos. La safranina es una mancha rosada que se pega a los componentes citoplasmticos de la clula. Todas las clulas se vuelven teidas con safranina. Gram-positivas las clulas son de color rosa en el interior, pero no se puede ver esto debido a que son de color prpura oscuro en el exterior (como una especie de bon-bon). Gramclulas negativas, que fueron absueltos en el paso anterior, terminan buscando rosa. Despus de 90 segundos a dos minutos (cuanto ms tiempo mejor), safranina se enjuaga conagua destilada.

5.Secado de la diapositiva

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ANLISIS DE RESULTADOS:
Existe varios tipos de tinciones de loas cuales estudiamos:

Tincin de Gram Tincin simple Tincin de esporas

Tincin de Gram: Dividida en gram positivo y gram negativo, en el caso de los gram (+) la muestra fue sarcina, puesto que una tonalidad violeta fijada en su estructura determina la presencia de la misma puesto que fij en su estructura el cristal violeta. Y en el gran (-) utilizamos salmonella identificada por la presencia de muchas estructura un poco triangulares de color rojo. En la muestra de la prctica anterior 3 eran gran positivo por su coloracin morada.

DE AZUL DE METILENO: Con este mtodo, los grnulos intracelulares metacromtica se tien de un color rojo rub de color negro, con el resto de la tincin de clulas de color azul plido

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TINCION DE GRAM: La acetona / alcohol se lava el cristal violeta de la pared celular de bacterias Gram-negativas. La pared celular de las Gram-positivas conserva cristal violeta, siempre y cuando el lavado de acetona / alcohol no dura ms de unos pocos segundos. La acetona / alcohol de lavado es el paso diferencial en el proceso de tincin de Gram. la acetona / alcohol que crea la diferencia observable: Gram-positivas las clulas buscar prpura , Gram-negativos clulas se ven claras. La safranina es una mancha rosada que se pega a los componentes citoplasmticos de la clula. Gram-positivas las clulas son de color rosa en el interior, pero no se puede ver esto debido a que son de color prpura oscuro en el exterior (como una especie de bon-bon). Las clulas Gram- negativas, que fueron absueltos , terminan buscando rosa.

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