UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS DIVISION DE ESTUDIOS DE POSGRADO

ANALISIS DEL EFECTO ANTIFUNGIC O DE 20 EXTRACTOS DL PLANTAS TESIS PRESENTADA C O M O REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRO EN CIENCIAS CON ESPECIALIDAD EN MICROBIOLOGIA

POR MARIA D E LOS ANGELES VERASTEGUI M O N T E M A Y O R

MONTERREY, N. L. MEXICO

MARZO DE 1995

rn Z 5 3iO FCB 1 9 95 V4

1020091523

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS DIVISION DE ESTUDIOS DE POSGRADO

ANALISIS DEL EFECTO ANTIFLNGK O DE 20 EXTRACTOS DE PLANTAS TESIS PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRO EN CIENCIAS CON ESPECIALIDAD EN MICROBIOLOGIA

POR MARIA DE LOS ANGELES VERASTEGUI M O N T E M A Y O R

MONTERREY, N. L. MEXICO

MARZO DE 1995

UNIVERSIDAD A U T O N O M A DE NUEVO LEON FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS DIVISION DE ESTUDIOS DE POSTGRADO

ANALISIS D E L E F E C T O A N T I F U N G I C O D E 20 E X T R A C T O S D E P L A N T A S

TESIS P R E S E N T A D A C O M O R E Q U I S I T O P A R C I A L PARA O B T E N E R DEL G R A D O DE M A E S T R O EN C I E N C I A S CON E S P E C I A L I D A D EN M I C R O B I O L O G I A

POR

MARIA DE LOS ANGELES VERASTEGUI M O N T E M A Y O R

APROBADA

COMISION DE

TESIS

DR.

SANTOS GARCIA AL VARADO PRESIDENTE

DRA. M A R I A JULIA V E R D E STAR SECRETARIO

/ M.C. LICET V I L L A R R E A L T R E V I N O VOCAL

r e e ,

fondo tesis 16787

ANALISIS DEL EFECTO ANTIFUNGICO DE 20 EXTRACTOS DE PLANTAS

EL PRESENTE T R A B A J O SE R E A L I Z O B A J O LA D I R E C C I O N DEL DR. JOSE S A N T O S GARCIA A L V A R A D O Y LA A S E S O R I A D E LA M.C. N O R M A L A U R A H E R E D I A ROJAS Y DE LA M.C. G R A C I E L A GARCIA DIAZ. EN EL L A B O R A T O R I O DE B I O Q U I M I C A Y GENETICA DE M I C R O O R G A N I S M O S DEL D E P A R T A M E N T O DE M I C R O B I O L O G I A DL LA FACULTAD D E C I E N C I A S B I O L O G I C A S DE LA U.A.N.L

DEDICATORIA

A MI E S P O S O E N R I Q U E . M I S HIJAS V A N E S S A Y M A R I A N A CON T O D O MI A M O R P O R SU A P O Y O E N MI S U P E R A C I O N P E R S O N A L

A MI M A D R E LILA M O N T E M A Y O R D E V E R A S T E G U I Y H E R M A N O S . E S P E C I A L M E N T E A M Y R N A C O N M U C H O C A R I N O P O R A Y U D A R M E EN MIS M O M E N T O S DIFICILES.

A MIS A S E S O R E S DR. JOS S A N T O S G A R C A Y M.C. N O R M A L. H E R E D I A POR SU P A C I E N C I A . ENTREGA Y AMISTAD.

A MIS A M I G O S POR P R O P O R C I O N A R M E EL E S T I M U L O N E C E S A R I O PARA L O G R A R MI META.

AGRADECIMIENTOS

Mi eterno agradecimiento , mis asesores Sr. Jos Santos G a r d a y M.C. Norma I, Heredia por demostrarme que con diciplina, tenacidad y buena voluntad se puede lograr todo. '

Agradezo sinceramente a la M.C. Graciela G a r d a Daz por su excelente asesora v a mis compaeros de labora,ono: L.cet Villareal, Cesar Snchez, Susan Garca. Luis Rodrigue, Melv

A la Facultad de Ciencias B.olgicas de la Universidad Autnoma de Nuevo Len por a b n m t e sus

IT

INDICE DE CONTENIDO
Pgina

Dedicatoria Agradecimientos Indice de Contenido Lista de Figuras Lista de Tablas Lista de Abreviaturas Resumen Introduccin Hiptesis Objetivo Antecedentes Material y M t o d o s Resultados Discusin Conclusiones Literatura Citada

j II Ili IV V VI 1 2 4 4 5 16 22 36 38 39

LISTA DE FIGURAS
Pgina 1.- Efecto De Agave lechuguilla levaduriformes. 2.- Efecto de Agave lechuguilla filamentosos y actinomicetos 3.- Efecto d e s o v e lechuguilla levaduriformes TOIT. (raz) sobre el crecimiento de hongos Torr. (raz) sobre e! crecimiento hongos 25 T o n . (hojas) sobre el crecimiento de hongos -

25 *

26

4.- Efecto de Agave lechuguilla Torr. (hojas) sobre el crecimiento de hongos filamentosos y actinomicetos 5.- Efecto de Baccharis glutinosa filamentosos y actinomicetos 6.- Efecto de Larrea tridentata filamentosos y actiuomicetos Pers. sobre el crecimiento de h o n g o s -

26

27

D.C. sobre el crecimiento de h o n g o s (hojas) observada con

27

7.- Cromatograma del extracto de Agave lechuguilla luz ultravioleta 8.- Cromatograma del extracto de Baccharis ultravioleta glutinosa

30 observadas con luz - observada con luz 32 3]

9.- Cromatograma del extracto de Larrea tridentata ultravioleta

LISTA DE TABLAS

Pgina 1.- Plantas analizadas 2.- Efecto de extractos de plantas sobre el crecimiento de levaduras 3.- Efecto de extractos de plantas sobre el crecimiento de hongos filamentosos y actinomicetos 24 28 17 23

4.- CMI de los extractos de plantas sobre los microorganismos probados 5.- Separacin preliminar mediante cromatografa en capa fina con extractos de plaas 6.- Separacin por cromatografa en capa fina del extracto de Agave lechuguilla (raz) usando como eluente una mezcla de cloroformo y metanol 9:1 7.- Separacin por cromatografa en capa fina del extracto de Agave lechuguilla (hojas) usando como eluente una mezcla de cloroformo y metanol 9:1 8.- Separacin p o r cromatografa en capa fina del extracto de Baccharis glutinosa usando como eluente una mezcla de cloroformo y metanol 9:1 9.- Separacin p o r cromatografa en capa fina del extracto de Larrea tridentata usando como eluente una mezcla de cloroformo y metanol

29

33

33

34

35

ABREVIATURAS

Am CMI C h m mg min mi mm

Absorbancia a 600 nm. Concentracin mnima inhibitoria Grados centrgrados Hora Metro Miligramos Minutos Mililitros Milmetros Microlitros

l^ni P/V % Rf T01

Micrmetros Peso por volumen Porciento Relacin de frentes Revoluciones p o r minuto

RESUMEN

Muchos de los medicamentos antifngicos actuales aunque efectivos han

mostrado

toxicidad, registrado alrgias y adems han provocado resistencia en los organismos blanco, i o que reduce las alternativas existentes. El objetivo de este trabajo fu analizar la actividad antifungica de 20 extractos de plantas utilizadas tradicionalmente en enfermedades que pueden ser causadas por hongos. Se determin por varios mtodos el efecto inhibitorio de los extractos sobre especies de hongos levaduriformes. 5 especies de hongos filamentosos y 2 actinomicetos.

Adems se estableci la concentracin mnima inhibitoria (CMI) de los extractos con actividad antifungica. De los 20 extractos examinados, los de Agave lechuguilla, Baccharis glutinosa y Larrea

tridentata mostraron tener efecto inhibitorio contra varios de los microorganismos estudiados en las concentraciones analizadas. El de mayor efecto fue el de la raz de A. lechuguilla todos los organismos estudiados excepto C. krasei que inhibi a

y mostr un promedio de las CMI de

4.5mg/ml m 1.0. Con efecto menor pero con el mismo espectro de organismos fue e! de las hojas de la misma planta que mostr un promedio de CMI de 9.7 mg/ml 1.4. El de B. glutinosa

inhibi a todos los microorganismos con excepcin de las levaduras y present un promedio de CMI de 14.0 mg/ml 2.0. Un espectro similar mostr el extracto de L. tridentata con un

promedio de CMI de 17.1 mg/ml 2.6. Por cromatografa en capa fina se aislaron las fracciones con actividad antifungica de los 3 extractos. Consideramos que este trabajo y estudios posteriores propoudrn ms opciones para que en un futuro cercano sean utilizados ms frmacos de origen vegetal, extraidos de plantas regionales, con accin eficaz y menor toxicidad y efectos secundarios que los actualmente conocidos.

INTRODUCCION.
A partir de 1980 la incidencia de las infecciones fngicas se ha incrementado

paralelamente al desarrollo de la medicina moderna.

Esta tendencia se atribuye en parte, a las

nuevas estrategias teraputicas que se aplican en diferentes situaciones clnicas; por ejemplo los tratamientos inmunosupresores previos a trasplantes, la quimioterapia en cncer y los tratamientos con medicamentos como antibiticos, corticosteroides y citotxicos (45). Aadiendo a lo anterior, el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) que se proyecta en forma logaritmica n o i

revela un panorama preocupante que exige nuevas y mejores demandas teraputicas ( 12). Los actuales medicamentos antifungicos aunque efectivos, presentan problemas o desventajas tales como el que algunos son muy txicos, otros producen alergias y algunos ms lian provocado resistencia en los organismos blanco (33). Esto reduce el nmero de alternativas teraputicas existentes, lo que nos motiva a buscar nuevas opciones en el campo micolgico. La raza humana ha dependido de las plantas ya que desde hace mucho tiempo han servido como fuente de agentes medicinales debido a que contienen una gran cantidad de diversos metabolitos que vanan en complejidad qumica y actividad biolgica. Actualmente los productos naturales incluyendo sus derivados y anlogos representan ms del 50% de todas las drogas de uso clnico (). En numerosas ocasiones los registros folklricos de muchas culturas han proporcionado gran ayuda en la bsqueda de plantas con propiedades medicinales (27,54.56). Nuestros

antepasados nativos usaron plantas como venenos, medicinas etc., y actualmente esos extractos se utilizan para producir numerosos compuestos purificados que son indispensables en la

medicina moderna. Un ejemplo son los alcaloides del "curare" obtenidos de parras sudamericanas que eran usados por los nativos para fabricar flechas envenenadas. Una utilidad similar se obtena de la especie de Srophantus africans, sin embargo esta planta posteriormente serpentina, proporcion

glucsidos cardacos que se usan en medicina. Las raices de Rawofia

una planta de la

india, se usaron por siglos como planta medicinal por los nativos y su principal principio activo el reserpina es actualmente empleado en medicna como tranquilizador y antihipertensivo.

Similarmente otras plantas bioactivas y venenosas con historia folklrica han proporcionado una

gran diversidad de medicamentos por ejemplo: codena, morfina, quinina, atropina, escopolamina. efedrina, cocaina, teofilina, viucristina, etc. Las plantas continan siendo importante fuente de nuevas drogas y como evidencia reciente tenemos el metabolito secundario "taxol", un derivado diteipenoide anticanceroso

extrado del casi extinto rbol Taxus brevifoha.

Este compuesto ha sido aprobado recientemente

en E.U. A. para el tratamiento del cncer ovrico. Tambin recientemente, en E. U. A., se aprob el uso de varios derivados de la marihuana (Cannabis sativa) para el tratamiento de la nusea provocada por la terapia cancerosa. Los

canabinoides tambin se usan en el tratamiento de glaucomas y desrdenes neurolgicos como la epilepsia, adems como antihipertensivos. antiasmticos (broncodilatadores) y analgsicos (31).

El 85% de las especies de plantas en el mundo han sido pobremente estudiadas en cuanto a su actividad biolgica, dando margen a un enorme campo p o r investigar (56). La flora de Mxico es una de las ms variadas de la Tierra, pues en su territorio estn representados todos los grandes biomas que se han descrito de la superficie de nuestro planeta, desde los desiertos hasta las densas y frondosas selvas pasando por pramos de altas montaas, pastizales, bosques de coniferas, etc. La ubicacin y la forma del territorio de Mxico tienen caractersticas notables, sus dos millones de kilmetros cuadrados de extensin se hallan distribuidos en ambos lados del trpico de Cncer. Sin ser una isla, el mar baa sus costas por el oeste, sur, este y en algunos sitios tambin en el norte. Su relieve se encuentra entre los ms accidentados del planeta, donde ms del 50% altitudes mayores de 1000 m sobre el nivel del mar (43). El resurgimiento de la terapia a base de plantas constituye una va alternativa para evitar los efectos adversos de los compuestos sintticos tanto en plano mdico como en el econmico, ya que la ventaja de la medicina natural nos proporciona una sustancia qumica activa que presenta un equilibrio fisiolgico ms asimilable por el organismo que aquellos obtenidos por tiene

quiin o sntesis (23). La diversidad de flora en Mxico ofrece un gran campo de investigacin de la actividad antimicrobiana de plantas que debe ser aprovechado.

HIPOTESIS
Los extractos de 20 plantas de diferentes especies muestran actividad amimicrobiana

OBJETIVOS

1) Analizar el efecto antimicrobiano de 20 extractos de plantas, usadas tradicin al mente como tratamiento contra enfermedades causadas por hongos.

2) Determinar la concentracin mnima inhibitoria de los extractos con potencial antimicrobiano.

3) Separar los principales compuestos de los extractos y determinar su efecto antimicrobiano.

ANTECEDENTES
Se puede afirmar que el uso general de las plantas se remonta a 60.000 aos y de esto hay evidencia en restos arqueolgicos en la cueva del hombre de Neanderthal, donde se encontraron fsiles de 8 especies de plantas. Tambin hay pruebas de que hace mucho tiempo los chinos, sumerios, asirios, griegos y egipcios entre otros, usaban plantas medicinales. Nuestros antepasados n o s legaron libros con informacin recabada por m u c h o s aos sobre las propiedades medicinales de las plantas, entre ellos tenemos: La Biblia que describe 200 plantas medicinales, el papiro de Eber incluye 3,500 plantas, Teofrasto nos hered "La historia de las plantas", Discrides escribi "De materia Mdica". Plinio public "Historia Natural" con 47 volmenes cubriendo la descripcin de ms de 1000 plantas y Galeno escribi "Medicina y Farmacia" que consiste en 20 libros (18). Los aztecas mantenan sus jardines botnicos donde cultivaban plantas no solo con fines ornamentales sino teraputicos, ellos crean poseer una planta para el tratamiento de cada

enfermedad que exista en aquellos tiempos. Durante muchos aos, las plantas se usaron empricamente contra muchos padecimientos y a medida que se implementaron tcnicas microbiolgicas y fitoqumicas su estudio se volvi mas profundo y serio. Una de las plantas ms estudiadas es el ajo (AUivm sativum ) que tiene una larga historia

en el uso medicinal, ya que desde hace 2.000 aos apareca en la literatura china. Varios siglos despus, en Egipto se us contra muchos padecimientos. Aristteles e Hipcrates lo mencionaban como altamente potente contra varios padecimientos. Moore y Atkins en 1977 analizaron el efecto antifngico Criptococcns, Rhodotorula, de esta planta contra cepas v Trichosporutu. Las

ievaduriformes del gnero Candida,

Ton/losis

tcnicas analticas utilizadas fueron las de dilucin y difusin y se comprobaron las propiedades ftingistticas y fungicidas del compuesto (39). Mas recientemente Davis y su equipo estudiaron el efecto traputico antifngico del ajo

en pacientes con meningitis.. Ellos demostraron una actividad positiva del compuesto en 4 de las 5 muestras de lquido cefalorraqudeo provenientes de los pacientes . Sin embargo, los efectos

adversos que se observaron fueron dolor e incomodidad abdominal, nusea y tromboflebitis en 25% de los pacientes (17). Daniels en 1965 estudi plantas de la familia de las Compuestas confirm su accin antibitica contra Candida albicans debido a la presencia de poliacetilenos y sus derivados

tiofenos. Se determin que la accin antibitica del primero aument al aplicarse luz ultravioleta ya que ese era convertido en el correspondiente tiofeno (15). En un estudio de compuestos activos con actividad antibacteriana. El-Gammal y Mansour estudiaron 6 flavonoides (sustancias producidas p o r plantas en respuesta a un estrs o infeccin), a los cuales se les detennin su estructura qumica y su actividad antimicrobiana. Estos fueron probados en 14 organismos bacterianos y fungicos. Fue evidente que todos los hongos

examinados fueron sensibles, no as las bacterias ya que algunas demostraron resistencia hacia alguno de los compuestos p r o b a d o s (20). Por otro lado Martillo (1988) estudi compuestos polifenlicos de Achyrocline

tomentosa; el aisl flavonoides y derivados del cido cafeico a partir de extractos metanlicos y cetnicos, utilizando tcnicas de espectroscopia y cromatografa (36). As tambin se han reali/ado estudios mediante mtodos analticos y espectrometricos de los componentes de Artemisia arborescens. Estos han originado el aislamiento de 40 fracciones,

de los cuales 4 son lignanos y uno es un flavonoide (aitemetina). Se demostr que la planta tena actividad biolgica por sus lactonas sesquiterpnicas con actividad citotxica y antitumoral (8). Tambin se ha demostrado que las fitoalexinas de la zanahoria alteran la permeabilidad de la membrana de C. albicans y de liposomas multilaminares. Mediante la incorporacin de timidina

y leucina radioactiva, se observaron los efectos txicos sobre las clulas susceptibles debido a la inhibicin del transporte electrnico en la mitocondria (2). Recientemente Heder helix,. a Elias (1991) aisl 4 nuevas saponinas triterpenoides de las hojas de actividad estn

esos compuestos se les prob su efecto microbicida y mostraron Se estableci

antifungica, antihelmnticas y antileishmnica.

que estos compuestos

relacionados a la hederagenina y acido oleanlico (21). Se ha establecido la metodologa para la deteccin directa de compuestos antibacterianos en placas de cromatografa de capa fina, lo cual fue demostrado por Hamburger y Cordel! en

1987. Eu este caso, la placa con los productos naturales separados, fu cubierta con una

suspensin de microorganismos. Esta se incub en ambiente h m e d o permitiendo el desarrollo del microbio. Las zonas de inhibicin fueron visualizadas detectando la actividad antimicrobiana mediante el uso de un reactivo (26 ). Ros y su equipo en 1988 efectuaron una revisin de la literatura para determinar los mtodos usados para probar la actividad antimicrobiana de productos naturales. El resultado indic, que los m t o d o s bsicamente son tres: difusin, dilucin y autobiogrficos. Cada uno tiene vanantes o modificaciones que (os hace adecuados dependiendo de las caractersticas de la sustancia o microorganismo a analizar (46). Morris y colaboradores (1978) determinaron la actividad antimicrobiana de fragancias de jabn demostrando que actun de una manera similar o aun mejor que los agentes bacteriostticos conocidos. Este estudio se hizo iti vivo utilizando cepas bacterianas y fung cas. y se utiliz el

mtodo de difusin con discos impregnados de la fragancia. De 521 fragancias probadas el 4 4 % de ellas presentaron efecto inhibitorio contra uno de los organismos probados. (40) Por otro lado en 1980 Van H o o f y su equipo investigaron la actividad antibacteriana, antifmgica y antiviral del extracto de las hojas probados fueron; Tnchophyton Candida albicans, rubrum, de lamos del gnero Populas. mentagrophyfes, Los hongos ca?us y

Tnchophyton

Microspontm

los cuales se inhibieron en diferentes grados de acuerdo a las hbridizaciones

sufridas por el extracto. En estos experimentos se utilizaron mtodos de dilucin y difusin con orificios en el agar (55). En 1982 Azzouz y Bullernan publicaron los resultados de un anlisis antimicrobiano de 16 hierbas y especias, usadas comunmente en los alimentos. Su actividad fu comparada con el de agentes antifngicos comerciales. Las especies que han mostrado actividad antimicrobiaiia fueron el clavo y la canela entre otros (3). Tambin Conner y Beucliat en 1984 determinaron el efecto de 32 aceites de hierbas y especias sobre el crecimiento de 13 levaduras de uso industrial. Ellos utilizaron mtodos de difusin con discos impregnados de las muestras. De entre los productos que mostraron un efecto inhibitorio ms fuerte fueron el ajo y el organo. Se lleg a la conclusin, que algunos aceites

esenciales pueden inhibir el crecimiento, sin embargo otros lo pueden estimular (14). Por otro lado en una revisin de la literatura realizada sobre la actividad antimicrobiana de aceites esenciales. Janssen determin que la volatilidad, solubilidad y complejidad son factores

que dificultan su utilizacin. E! afirm que existen 4 factores especialmente importantes, deben tomar en cuenta para el anlisis con aceites: la tcnica

que se

de ensayo, el medio de cultivo, el

microorganismo y el aceite esencial. En forma particular, suguiere que la tcnica no debe requerir dispersin homognea, el medio de cultivo no debe tener componentes que reaccionen con el aceite y se debe tomar en cuenta la influencia que tiene la solubilidad de la muestra, ya que pueden producir zonas de inhibicin pequeas (30). Recientemente Briozzo en 1988 determin la actividad antimicrobiana del aceite de clavo en soluciones concentradas de azcares. Encontr que cuando las clulas de C. albicans eran

colocadas en caldo suplementado con 63% (p/v) de azcar y 0.4 % (p/v) del aceite ecencial. estas moran en un perodo de 2 a 7 min. Se estableci obtener dispersin del aceite (11). As tambin se ha demostrado que la mostaza negra (Brassica jncea) presenta actividad que el azcar se agreg como vehculo para

antimicrobiana contra 9 bacterias y 16 hongos (6 levaduras y 10 mohos). El compuesto activo fu aislado por destilacin y cromatografa de gases y fu identificado como isotiocianato de alilo

Esta sustancia actualmente se produce sintticamente en Japn y es utilizado como aditivo en alimentos (29). Recientemente Davidson (1993) realiz una revisin de las especies y saborizantes de alimentos con actividad antimicrobiana. De entre las que demostraron actividad antifngica estn la canela, el clavo, el organo, el ajo y la cebolla. Se estudi su mecanismo de accin encontr que produce respiracin y la celular (16). Otro grupo de investigadores herba-albn), ha trabajado con el arbusto enano del desierto (Artemisa y probaron el extracto de las p a n e s alteraciones en el metabolismo microbiano particularmente en y se la

esporulacin y se estableci que esto es debido a la disminucin de la energa

ellos usaron mtodos de dilucin y difusin

areas de la planta contra 5 bacterias gram positivas. El principio activo fu separado por cromatografa en columna y fu identificado como alcohol santolina (47).

Los liqenes han sido evaluados in vitro para determinar la actividad antimicrobiana de sus metabolitos contra bacterias y hongos (Staphylococcus aureus, Bacillus subtihs. aeruginosa, Escherichia coh y Candida albicans). Pseudomona

En este trabajo se usaron los mtodos

dilucin y difusin con disco. Se demostr un efecto inhibitorio para los microorganismos gram positivos, sin embargo no t o d o s los liqenes inhibieron los gram negativos y los hongos (28). Polacheck y su equipo aislaron un compuesto (Medicago sativa. llamado G2 de las raices de )a alfalfa

Gilboa) con propiedades fungicidas, ellos determinaron su actividad utilizando conteo en hematocitmetro y espectofotometra. El compuesto se aisl

mtodos de dilucin,

mediante cromatografa en columna y se demostr la carencia de toxicidad en un modelo animal (42). Posteriormente este compuesto, se aplic tpicamente en cobayos infectados

experimentalmeute con el dermatofito T. mentagrophytes

var. granulare.

Despus de 12 a 15

aplicaciones, el 80% de las lesiones fueron curadas mientras que de las no tratadas solo el 20% se curaron espontneamente. El compuesto activo es un derivado del cido medicagnico

(saponina), esta sustancia es fuertemente afn al ergosterol y su efecto fungicida es probablemente porque altera la permeabilidad de la pared celular (22). En un estudio 115 especies de plantas fotosintetizadoras o con actividad pertenecientes a zonas ridas y semiridas de Norteamrica. La Subtribu Pectuudae mayor frecuencia una accin biocida fototxica mostr con

que era activada por la luz. Entre las plantas que en cuyas hojas se detect

demostraron este mecanismo de accin se encuentra Larrea tndentata,

la accin antimicrobiana. En ese trabajo las muestras se analizaron en la oscuridad as como en la luz para hacer comparaciones de la actividad antimicrobiana en ambas condiciones (19). Por otra parte, Ros y su equipo (1987) analizaron 81 plantas del rea espaola

mediterrnea, las cuales se usan en la medicina popular como agentes antimicrobianos. Para el estudio ellos usaron 6 especies microbianas entre las cuales se encontraba C. albicans. Se

detect que 30 extractos tenan actividad contra alguno de los microorganismos p r o b a d o s (46). Continuando con el anlisis de las plantas de esta regin, March especies y determin sua actividad contra en 1991 estudi 22

9 hongos y 6 bacterias contaminadoras de alimentos

almacenados. Se estableci que los extractos pudieron inhibir un total de 7 hongos y 3 bacterias (37). Se estudiaron tambin otras plantas, tal fil el caso de Nicoletti quien trabajo con una

gramnea (Echinolinea inflexa}

colectada en el estado de Peniambuco, Brazil. Se demostr su

actividad antimicrobiana y antineoplsica. As mismo se report un nuevo diterpeno aislado del

extracto etanlico de las races de la planta, e! cual es el responsable de la actividad antes mencionada (41). Lopes en 1988 estudi arbustos trepadores de la familia Anstolochiaceae de regiones tropicales y subtropicales. De ellos fueron analizados que son nativos

11 gneros (600 especies) para

determinar su actividad antitumoral, antifngica, antibacteriana e insecticida. Estos arbustos son reconocidos por su produccin de lignanos y neolignanos, en este caso fueron aislados 6 lignanos (34). Carson en 1992 estudi el efecto antimicrobiano del extracto de Maleleuca cdternifolia (t

de rbol,), el cual ha sido utilizado en Australia con propsitos mdicos desde 1788. En este estudio se determin su actividad Aspergil/us mger, bactericida y fungicida. Los hongos estudiados fueron los cuales fueron inhibidos por el extracto.

C. cilbiccms y 7. meniagrophyies

La toxicidad del extracto se determin en conejos, mostrando ser nula. La barreta (Helietta parvifolia) es una planta que forma parte del m a t n al submontano

del semidesierto del noreste de Mxico, sta es de utilidad foirajera silvestre para ganado bovino y caprino sin toxicidad reportada. Basndose en su resistencia a la putrefaccin por hongos, se sospech de su accin fungicida as como de su potencial insecticida. As se demostr potencial fungicida sobre hongos de importancia agricola ( 47 ). como PemciUium, su

Rhizopus,

Fusarium, Asperg flus niger, A. flavas y A.ochraceus

En la Repblica Mexicana se han utilizado en forma emprica muchas plantas para el tratamiento de diferentes micosis. Entre estas principales plantas tenemos las siguientes: Agave lechuguilla Torr.- Pertenece a la famillia Amarihdaceae. Esta planta es nombrada a

nivel popular como lechuguilla, maguey de cerro, pita, izeth y tzuta. Es una de las plantas mejor conocidas en el norte de la Repblica Mexicana por su uso a nivel textil. Crece en las zonas desrticas del pas como Coahuila, Chihuahua, Durango, Nuevo Len. Quertaro. San Luis Potosi, Tamaulipas y Zacatecas. Esta planta mide de 60 a 70 cm de altura. Las hojas estn de color verde claro a verde

dispuestas en rosetas en forma ascendente, son p o c o numerosas, azuloso. adems presentan

una faja plida en la cara superior y lneas obscuras en el dorso y

miden de 40 a 60 cin. de largo por 3 a 4 cm de ancho, tiene una espina terminal acanalada de 4 a 5 cm de largo y en la base presenta dientes marginales longitudinales de 5 a 6 mm de largo que se desprenden con la edad. Esta planta contiene sustancias tales como saponinas esteroidales.

glucsidos, etc. El hombre le ha dado diversos usos a las diferentes p a n e s de la planta; de las hojas se extrae una fibra usada en la industria textil. El tallo se utiliza para disminuir los dolores de costado, como tratamiento de toda clase de golpes y para combatir la diabetes. La raz es

utilizada para combatir dermatitis causada p o r algunos hongos. Del cogollo se fabrican bebidas alcohlicas. Actualmente tambin se usa como agente de control biolgico contra (38,48,50,52,53,54). Aloe vulgaris L..- Es una planta de la familia Lihaceae\ como sbila, zabila o aloe. Esta la cual se conoce popularmente insectos

es originaria de las zonas ridas de Africa pero fue trada a se cultiv con facilidad en las zonas

Mxico por los espaoles en la poca de la conquista y desrticas y semidesrti cas del pas. Esta planta

presenta hojas largas, carnosas y con bordes

espinosos: por lo regular produce flores de color banco, rojizo o amarillento de forma tubular. El fruto de la planta es de forma capsular y en el interior de las hojas se encuentra un jugo

mucilaginoso de sabor amargo. Algunos estudios han mostrado que la planta contiene cido oleico, cido crismico y aloina. Esta planta se recomienda en la medicina tradicional como un purgante ligero, estimulador del flujo mestruai, asi como aperitivo, digestivo y colagogo (54). Artemisia absinthmm L.- Pertenece a la familia Compositae, es tambin conocida como

ajenjo o absenta. Esta planta es originaria de Europa, Asia y Africa; crece en lugares secos y entre malezas. La planta presenta un tallo erguido, herbceo. Las hojas son alternas, pinadas y estn cubiertas de una pelusilla plateada o griscea. Las flores se presentan en cabezuelas de color

amarillo en agrupaciones de 30 a 40 cm. Algunos estudios han revelado q u e presenta un aceite esencial llamado tuyona, un jugo amargo, ab sentina, cidos orgnicos y taninos. La medicina la eliminacin de parsitos

tradicional marca su uso contra t r a n s t o m o s estomacales, para intestinales, como estimulador del apetito, de los

jugos gstricos de la bilis y adems se

recomienda para eliminar clicos (27). Artemisia mexicana.Planta perteneciente a la familia Compositae conocida por los como

nombres comunes de altemisa o artemisa. Crece en la zonas templadas de Mexico adventicia de los jardines y como

mala hierba en las superficies sembradas con csped. Es una

planta vivaz de porte crespitoso, posee un tallo anguloso de color rojizo recubierto de hojas alternas muy recortadas grises y muy tomentosas en la cara inferior. Sus flores son de color amarillo. Al parecer, esta planta contiene un aceite esencial, as como taninos y j u g o s amargos. La

medicina tradicional la usa contra el insomnio, los transtornos nerviosos y el tratamiento de las enfermedades de la mujer. Esta planta tambin es usada como desinfectante del tracto digestivo y antiparastica (54). Artemisia ludoviciana.Conocida comnmente como istafiate o estafiate. pertenece a la

familia Cornpositae.

crece en climas hmedos de la Repblica Mexicana incluyendo a los estados planta es de tipo herbceo, mide hasta 1 ni de

de Mxico, Veracruz y San Luis Potos. Esta

altura, es de color gris, presenta hojas de color verde en posicin alternada. Las florea se disponen en cabezuelas y a su vez en racimos. Se ha encontrado que esta planta presenta un aceite esencial de olor penetrante, una resina neutra, sales de potasio, abstinita y vitaminas B y C. La medicina tradicional la recomienda como vermfugo y contra toda clase de parsitos intestinales, ayuda en casos de dispepsia, estimula la produccin de jugos gstricos y de bilis; y se utiliza en casos de amenorrea y problemas de irritacin vaginal (56), Baccharis glutinosa .D.C.- Es un arbusto que pertenece a la familia Cornpositae. es

conocido popularmente como jarilla mide 1.5 a 2.0 m. de altura, tiene tallo ramificado, presenta hojas ssiles lanceoladas de 3 a 12 cm de largo, enteras o denticuladas . Crece en r k e r a s de n o s . arroyos, canales . acequias etc. En medicina popular se utiliza dolores reumticos, como contraceptivo afecciones en la piel (48,50,56). Buddelia scordioides HBK.pertenece a la familia de las Longaruaceae. conocida como contra fiebres intermitentes,

y para detener las hemorragias en los partos y contra

escobilla, crece en los estados de Durango. Coahuila y San Luis Potos. Es un arbusto que mide hasta 1 m de alto, muy ramificado con hojas ssiles oblongas y rugosas de 1 a 3 cm. Sus flores en forma de cabezuelas son amarillas. Se usa contra diarreas y como antiparasitario (27). Cedronella Labiatae. mexicana Benth.Su nombre comn es toronjil y pertenece a la familia

Esta planta es originaria las zonas fras, templadas y hmedas de Mxico como

Xochimilco. Iztapalapa, Chalco y el valle de Mxico. El vegetal presenta un tallo erguido, hojas opuestas en forma de corazn. Las flores de la planta crecen en grupo y son de color

inorado-rojizo. Algunos estudios han demostrado que esta planta contiene aceite voltil, taninos. una resina amarga y sustancias mucilaginosas. La literatura de medicina floklotica nos indica que esta planta es usada para aumentar la funcin digestiva, ayuda a sanar golpes, granos y dolores reumticos (54).

Chenopodium

ambrosioides

L. .- Conocida popularmente como epazote y esta incluida lista es una

en la familia Chenopodiaceae,

es originaria de las regiones tropicales americanas,

planta anual de tallo rojizo ramificado, con hojas alternas alargadas lanceoladas y las flores se agrupan en glommlos. Contiene un aceite esencial cuyos principales componentes son el

ascaridol, las sapoiiinas, taninos y j u g o s amargos. Se utiliza en medicina popular para estimular las funciones digestivas, es eficaz contra parsitos intestinales, dismenorrea, asma y transtornos nerviosos (50). Flouremia cernua DC..- Conocida comnmente como hojasen. hoja de s. hoja-s-e u hoja crece principalmente en el norte de Mxico;

de sen. Esta planta pertenece a la familia Composnae,

es un arbusto de tallos erectos, que alcanza de 1 a 2 m de altura, piesenta abundante follaje, sus hojas son ovales de bordes enteros de 1.7 a 2.5 cin de largo por 6.5 a I 1.5 mm de ancho. Las flores se dan en agrupaciones discoideas colgantes y solitarias entre las hojas. La planta en si presenta un olor caracterstico parecido a lpulo y tiene un sabor amargo. La medicina tradicional nos indica que sta es usada contra lceras de la piel, dolor de estmago, diarrea, clicos y otros desarreglos estomacales (56). Jatropha dioica H.B.K. Me Vaugh.Esta planta pertenece a la familia Euforbtaceae, su

nombre comn es sangre de drago, sangredrago, sangre de draco, sangregrado, etc. El vegetal crece en los estados del norte y centro de la Repblica Mexicana. Es un arbusto de tallos lisos, obscuro rojizos, gruesos, suculentos, correosos, duros y flexibles que pueden medir desde 0.5 a 5 m de altura. Las hojas son fasiculadas lineales o espatuladas, enteras o rriboladas con una

longitud de hasta 7 era, las flores son pequeas ssiles o pedunculadas. Produce un fruto de color negro que contiene un lquido rojizo en el interior. Presenta taninos y la literatura tradicional nos indica que sirve contra la cada del cabello, erupciones en la piel, disenteria, enfermedades venreas e irritaciones de ia garganta (48). Juliana Cuachalal, adstringens Sch .- Es conocida popularmente por el nombre de cua chai al ate o Este es un rbol de 6 m o mas de altura, de hemorroides,

pertenece a la familia Julianaceae.

corteza astringente y hojas dentadas, alternas, amontonadas, compuestas > abovadas. Presenta flores unisexuales; el pednculo del fruto tiene forma de ala con una sola semilla. Esta planta se utiliza en casos de cncer de estmago y de intestinos, adems en casos de tifoidea (27).

Larrea

tridentata

(DC.)

Cov..-

Su nombre comn

es gobernadora,

es una

planta

perteneciente a la familia ZygophyIIaceae.

Esta se encuentra en el norte de la Repblica Mexicana Se

teniendo variantes en su cantidad cromosmica, siendo diploides, tetraploides y bexaploides.

encuentra en los desiertos de Chihuahua y Sonora en Mxico y en el desierto de Mojave en los Estados Unidos de Amrica. Esta planta requiere de climas desrticos para su desarrollo. Varios estudios han revelado que el vegetal contiene una de las mayores diversidades qumicas se han encontrado ceras complejas, cientos de compuestos

encontradas en alguna especie,

voltiles, saponinas y otros triterpenos, acido nordihidroguaireico, as como un gran nmero de compuestos fenlicos y glicsidos. La literatura folklrica nos dice que esta planta se usa en el tratamiento de diversos padecimientos como: reumatismo, problemas renales, dolor de cabeza, gastritis, diarrea, parsitos, enfermedades venreas, calosfro, tos, indigestin, tuberculosis,

calambres intestinales, resfriados, caries, mal olor, problemas hepticos y de la piel, hinchazones, dolor de garganta y como vasodepresiva (17). Malva silvestris L. Tambin conocida como malva, es una planta herbcea bianual o

perenne, ornamental, hojas palmeadas alternas con largos pecolos, sus flores son de color rojo-violeta. Toda la planta es rica en muclagos, taninos, aceites esenciales y pigmentos entre otros productos. Las hojas se utilizan como tizanas contra catarros, como expectorante, contra transtornos gstricos, en heridas purulentas y en gaigarismos para enjuagues de la boca (56). Prosopis julijlora (Swartz) DC.- Cuyo nombre comn es mezquite, es un rbol que crece

en las regiones ridas y semiridas de la Repblica Mexicana, presenta ramas espinosas, hojas bipinadas de color amarillo-verdoso colocadas en espigas. El fruto es una vaina de 10 a 12 cm de largo por I de ancho. Estudios de la planta han demostrado que contiene materia mucilaginosa. cido arbigo (arabina) y sales de calcio, potasio y magnesio. Esta planta se usa para bajar la inflamacin del tubo digestivo, contra infecciones y diarreas (54 ). Rosmarinas offcinalis L.- Conocida por el nombre comn de romero: es una planta

perteneciente a la familia Labiatae.

Es originaria de Europa y se cultiva fcilmente en jardines y

huertos. El vegetal presenta un tallo semileoso de hasta 2 m de altura. Las hojas son opuestas gruesas, de olor agradable, plateada. Las flores son de color verde por encima y en el revs presenta una pelucilla contiene un aceite

de color lila-azulado. Se ha demostrado que esta

escencial. pineno. canfeno, cineol, borreol, un principio balsmico amargo, taninos y una resina

escencial. La literatura folklrica la recomienda c o m o digestivo, colagogo, v e r m f u g o y e m e n a g o g o (56). Schinvs Anacardiaceae. mol le LEsta

estimulante, antidepresivo, antirreumtico,

planta tambin llamada pirul. es perteneciente a la familia

Es originaria de Sudamerica p e r o est aclimatada a Mxico desde la poca de la es comn en la p a r t e central y en los lugares secos del pas. Presenta un sexos separados y

colonia. Su presencia

tronco tortuoso de ramillas colgantes, flores p e q u e a s de color amarillento,

un fruto de color rosado-rojizo seco con semilla sabor a pimienta. Es usada en contra de las lceras, llagas, tuberculosis, sangrado de las encias y nubes en los o j o s (27 ). Senecio candiddissimum GreenmEs una planta conocida p o r el n o m b r e comn de t herbcea con hojas afelpadas

milagro o hierba del f u e g o , que p e r t e n e c e a la familia Compositae;

de 7 a 8 cm. Las flores se disponen en cabezuelas a b o m b a d a s colocadas en c o r i m b o s amarillos \ con vilanto blanco sedoso. EIs utilizado empricamente contra infecciones de la piel y

enfermedades del rion ( 5 4 ) Tagetes fil folia Lag..La planta tambin conocida c o m o hierbanis o yerbanis Esta se localiza en los Estados de Jalisco. es

perteneciente a la familia Compositae. Chihuahua, Mxico y Puebla. El vegetal

Sonora.

es h e r b c e o de 10 a 30 cm de altura. Las hojas estn

partidas con s e g m e n t o s lineales de 10 m m ; las flores se presentan en cabezuelas con el involucro alargado, adems presenta un olor a ans al flotarse. La planta segn literatura de medicina

tradicional nos dice que es usada para casos de irritacin de los intestinos y de las vas urinarias (27). Verbena Carolina L..- Conocida c o m o verbena es una planta que pertenece a la familia

Vebenaceae. Esta es originaria de Mxico y p u e d e ser encontrada con facilidad en los E s t a d o s de Mxico, Oaxaca, Morelia, Jalisco, Sonora y N u e v o Len; presenta una altura de 60 a 80 cm con hojas opuestas, aserradas y elpticas de 4 cm. En su paite superior presenta flores m o n o p t a l a s en espigas. Esta planta se usa en contra de la cada del cabello (posible infeccin p o r hongos), y contra las p a p e r a s (54).

1020091523

MATERIAL Y METODOS
MICROORGANISMOS ANALIZADOS: En este trabajo se incluyeron 13 microorganismos. 6 hongos levaduriformes: Candida Candida Candida krusei albicans rugosa neoformans laurentu albidus

Criptococcus Criptococcus Criptococcus

5 hongos filamentosos

: Microsporum Microsporun Trichophyton Epidermophyton Sporothrix

canis gypseum tonsurans floccosum

schenckii

2 actinomicetos:

Nocardia Nocardia

asteroides raisliensis

Las cepas fueron proporcionadas por Ma. Blanca

Ortz Saldvar de la Facultad de Ciencias

Qumicas de la Universidad de San Luis Potosi. Estas se conservaron a 5 C en medio de cultivo de Papa-Dextrosa-Agar y se hicieron resiembras cada 2 meses (9).

PLANTAS A N A L I Z A D A S Se analizaron 20 extractos los cuales se obtuvieron de plantas que forman parte de la flora de nuestro pas, la mayora de las cuales se utilizan en mediciua popular desde hace mucho tiempo contra diversas enfermedades tales como dermatomicosis, vaginitis, granos, tinas etc. Estas

fueron clasificadas y se agrupan a continuacin (tabla I):

TABLA 1
PLANTAS NOMBRE CIENTIFICO ANALIZADAS COMUN PARTE UTILIZADA NOMBRE

1 .-Agave

lechuguilla L.

DC.

lechugilla y amol sbila

hoja y raz hoja hoja y tallo 1 1 J hoja y tallo hoja y tallo hoja y ra/Jo hoja hoja y tallo hoja y tallo hoja tallo hoja hoja y tallo hoja hoja y tallo hoja, tallo y flores hoja y tallo hoja y tallo hoja hoja ,

2.- Aloe vulgaris 3.- Atemissia 4.- Artemisia 5.- Artemisia 6.- Baccharis 7.- Buddelia 8.- Cedronella 9.- Chenopodium 10.- Fluorencia 11.- Jatropha 12.- Juliana

absinthium mexicana ludovician glutinosa

L. L. Willd Pers.

ajenjo artemisa estafiate jarilla escobilla toronjil epazote hoja sen sangre grado cuachalalate gobernadora malva

scordioidesHBK. mexicanaBen\\\ graveolensL cernva dioica astrmgens D.C.

HBK. Sch. DC. L. Zwartz L.

13.- Larrea tridentata 14.- Malva silvestris 15.- Prosopis juhflora 16.- Rosmarinus

mezquite romero pirul

officinalis

17.- Schinus molle L. 18.- Senecio candidissimum \9- Tageteslifolia 20.- Verbena carolina Lag. L. Gr

te milagro yerbanis verbena

OBTENCION DE

LOS

EXTRACTOS

La planta fresca se fragment en licuadora y posteriormente se tritur en mortero por 15 min utilizando como solvente etanol al 80%. La suspencin se macer 2 a 3 h y

posteriormente se centrifug a 3.000 rpm por Wliatman No. 1 y

10 min. El sobrenadante se filtr en papel

se sec a 50C por una semana. Este se almacen en lugar fresco, seco y su estudio el extracto fu rehidratado con agua

oscuro hasta su anlisis posterior. Para

destilada para dar una solucin al 10%. y se esteriliz por filtracin utilizando una membrana de

nitrocelulosa con un p o r o de 0.45 pm. El extracto estril se recolect en tubos ependorff y fu almacenado a 5C.

A N A L I S I S D E L A A C T I V I D A D ANTEV11CROBIANA Los m t o d o s usados en los bioensayos fueron de difusin y dilucin (45.51), los cuales se describen a continuacin. a) Mtodo de difusin: Se utilizaron 2 variantes de este mtodo: 1) Para el estudio de hongos

levaduriformes los cultivos de reserva se activaron exponindolos 24 h a temperatura ambiente, se inocularon por estra en cajas de petri las cuales contenan PDA. posteriormente se hicieron

orificios en la capa de agar y en ellos se agregaron lOOpl de los extractos a probar. L o s cultivos se incubaron a temperatura ambiente por 24 h al cabo del cual se determin, el radio de

inhibicin desde el b o r d e del pozo hasta el lmite del crecimiento (Fig.No. I). 2)- Pava el anlisis de la actividad antimicrobiana sobre hongos filamentosos, se us el mtodo

de microcultivo con la tcnica de Ridell (4,9,33) modificada de la manera siguiente: Se colocaron una o dos portaobjetos de vidrio sobre un tubo de vidrio en forma de V de U dentro de una caja de Petri. En los extremos de la laminillas, se colocaron cuadros de P D A de 1 cm de lado mas o menos por 5 mm de alto. Con ayuda de una asa bacteriolgica, se inocul p o r picadura el hongo filamentoso en las 4 esquinas de cada cuadro de agar. En uno de dichos cuadros se hizo un

orificio en la parte central donde se coloc el extracto, en tanto que otro funcion como control (sin extracto). Se coloc una porcin deshidratacin de algodon hmedo en la caja de Petri para evitar la

del agar. Se incub 5 a 8 das a temperatura ambiente. La inhibicin se midi

comparando con el crecimernto del cuadro control. b) M t o d o de dilucin: tambin se utiliz con dos variantes.Para cepas levaduriformes: Debido a la facilidad de dispersarse homogneamente se colocaron 5 mi. de caldo nutritivo en tubos de vidrio. El extracto a probar se agreg en un volmen de 100 pl quedando una concentracin de 2mg/ m i , posteriormente se inocul una suspensin de levaduras la cual estaba ajustada a una absorbancia (A
00 )

de 0.150. Los cultivos fueron incubados a temperatura ambiente durante 24

h, posteriormente se midi la absorbancia utilizando un espectro fot metro Coleman Jnior mod. 340.

2)- Para los hongos esterilizado y se coloc en

filamentosos dos

el extracto

se mezcl con el agar ( P D A ) pieviamente

compartimentos de una caja petri con 3 divisiones. El otro

compartimento fungi como control al agregarse medio sin extracto. El medio se inocul por picadura con los hongos a probar. Se incubaron a temperatura ambiente durante 10 das, despus dlo cual, se midi el rea de crecimiento, tomndose como 100% al crecimiento del control.

CONCENTRACION M I N I M A INHIBITORIA (CMI) Esto se determin por 2 mtodos: 1) Se utiliz el mtodo de dilucin en agar solidificado (30). Se utilizaron cajas de Petri con 3 compartimentos (iniciando con 1 mg/ml) en los cuales se agreg concentraciones ascendentes del extracto mezclado con el agar. Se dej solidificar el medio de cultivo y se

procedi a sembrar por estria o picadura dependiendo del hongo a estudiar. Se utiliz tambin la tcnica de microcultivo en donde se mezcl el extracto con el agar a diferentes concentraciones. La incubacin vari de acuerdo a las tcnicas utilizadas y a las especies fngicas en estudio. Cada siembra se llev a cabo con su respectivo control. La CMI se defini como la concentracin del extracto ms baja que inhibi el crecimiento de los microorganismos.

CROMATOGRAFIA

PRELIMINAR

Se utilizaron los extractos alcohlicos separacin por cromatografa en capa fina.

al 10%

para llevar a cabo las tcnicas de sensibilidad,

Esta ltima fu escogida por su

versatilidad y rapidez para separar los componentes qumicos de (25,49,51).

muchos extractos de plantas

La separacin y aislamiento cromatogrfico de las mezclas, se llev a cabo usando como soporte slido e inerte placas de 5 x 10 cm de vidrio las cuales fueron cubiertas con una capa adsorbente de Kieselgel 60 G ( M e r c k ) como fase estacionaria. Se realiz una cromatografa

preliminar a fin de determinar los eluentes ideales. Los eluentes p r o b a d o s fueron de diferente polaridad y son los siguientes:

N o polares: Hexauo, ter de pertleo, di el oro et ano, tetracloruro de carbono y benceno. Intermedios: Diclorometano, cloroformo y acetato de etilo. Polares: Acetona, metanol, cido actico y agua.

La muestra fil aplicada en la placa con un tubo capilar y se corri la cromatografa utilizando diferentes eluentes, despus la placa se dej secar y fu observada bajo luz

ultravioleta. Se registr la cantidad de manchas desarrolladas y se midi la distancia de migracin a fin de determinar su Rf (relacin de frentes) caracterstico. Sabemos que el efecto de la elucin depende de la constante dielctrica o polaridad de el o los eluentes y que el cloroformo tiene una constante dielctrica de 4.81 y el metanol de 32.80. El Rf fii calculado en porciento. considerando como 100% el mximo corrimiento

posible (solo el eluente). Este valor est en funcin de la adsorcin del soporte, la polaridad del elueivte y la solubilidad de los compuestos por separar. Se sabe que este proceso puede ser

modificado por: a) la presin de vapor ejercido por el eluente, b) la humedad relativa, c) la temperatura del medio ambiente y d) cantidad de la muestra aplicada. Este valor se obtuvo

aplicando la siguiente frmula.

Distancia recorrida por la mancha Rf= -----

Distancia recorrida por el eluente

CROMATOGRAFIA

PREPARATIVA.

Para el anlisis se utiliz como fase estacionaria Kieselgel 60 G (Merck): y corno soporte se usaron hojas de vidrio de 20 x 20 cm de lado y 6 a 8 mm de espesor. Para la preparacin de las placas se pesaron 10 g de Kieselgel y se mezclaron con 25 mi de agua destilada. La hoja de vidrio

se cubii con esta mezcla mediante un aplicador de compuerta intercambiable. La placa se sec a temperatura ambiente y se obtuvo una placa uniforme con un espesor de fase estacionaria de 0.3 a 0.4 mm. Antes de usarse, la placa se activ colocndola en un h o m o a 120*C por 1 h. posteriormente se coloc la muestra en la parte inferior de la placa utilizando un tubo capilar y

procediendo en dos formas: I) En linea continua para obtener mayor cantidad de los compuestos separados, y 2) en una pequea regin a fin de medir el rea desarrollada por la mancha

(Fig.No.4) y determinar su Rf. Los eluentes se depositaron en la cmara de desarrollo 15 min antes del corrirnieuto para saturarla con los vapores (24). Despus del corrimiento la placa se escurri y sec, y se determin: a) el nmero de

manchas formadas b) la distancia recorrida por cada una, c) el color desarrollado por cada banda con exposicin a luz U V y luz visible, d) el rea de la mancha y e) el Rf (en porciento). Para aislar los componentes del extracto, se delimitaron todas las fracciones visibles con luz UV y fueron raspadas y depositadas en tubos de ensayo. Se agregaron 2 mi de alcohol

etlico para disolver el o los compuestos y se centrifug a 2,500 rpm por 5 min. El sobrenadante se deposit en viales previamente pesados y se secaron en una estufa. Ya secos fueron pesados nuevamente a fin de calcular el peso real del compuesto aislado. Las muestras se rehidrataron en agua a un concentracin de 20 mg/ml y fueron probadas contra las cepas estudiadas a fin de determinar si tenan efectos antifungicos. mediante los m t o d o s anteriormente descritos.

b 7 U8 /

21

RESULTADOS

ACTIVIDAD A N T I F U N G I C A DE LOS

EXTRACTOS

De las 20 plantas analizadas tres demostraron tener efecto inhibitorio sobre una o varias especies de hongos. La de mayor efecto antimicrobiano fue A. lechuguilla (Tablas 2 y 3) de la que

cual se analizaron los extractos de las hojas (lechuguilla) y de la raz (amol), observndose este ltimo tiene una mayor actividad txica sobre levaduriformes, y filamento sosos as como con los extracto de B. glutinosa fu hecho utilizando

la mayora de los hongos analizados tanto actinomicetos p r o b a d o s (Tablas 2 y 3). 1 un efecto sobre los

las hojas y tallos y mostr

hongos filamentosos y los actinomicetos, pero no contra los hongos levaduriformes (Tabla 3). Las hojas y tallos de L. tridentata actinomicetos estudiados (Tabla 3). presentaron un efecto solo contra hongos filamentosos y los

DETERMINACION DE LA

CMI

Aunque los organismos estudiados mostraron diferente susceptibilidades a los extractos probados (Fig. 1-6), nuestros resultados indican que los extractos de A. lechuguilla mostraron

serlos ms potentes (raz: 3.3 a 7.6 mg/ml, hojas: 8.0 a 12.0 mg/ml), y fueron seguidos de B. glutinosa (10 a 14.6 mg/ml) y L. tridentata resumidos en la Tabla 4. (14 a 16.6 mg/ml). Estos resultados se encuentran

CROMATOGRAFIA.

a) Cromatografa preliminar. Los resultados de la cromatografa en capa fina preliminar nos permiti elegir los mejores eluentes para separar los componentes de los extractos. Probamos tres grupos de sol\ entes con diferentes polaridades (no polares, intermedios y polares) contra los 4 extractos que mostraron actividad antimicrobiana (Tabla 5). Los eluentes que dieron mejores resultados fueron el cloroformo y el metan ol en una proporcin de 9:1.

T A B L A 2. E F E C T O D E E X T R A C T O S D E P L A N T A S S O B R E E L C R E C I M I E N T O LEVADURAS

DE

HALO DE

INHIBICION

EXTRACTO A. lechuguilla A. lechugilla A. A. A. A. B. BC. C. vulgaris absinthium mexicana ludovicma glutinosa scordioides mexicana graveolens (raz) (hoja)

C. krusei 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

C. albican 19 2 14 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

C. rugosa 17 1 15 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

C. aurenu 17 2 12 3 0 0 0 0 0
1

C. a! b idus 15 2 14 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

C ne of or 16 = 3 13 = 2 0 0 0 0 o 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 (T 0 0 1 1

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

F. cernva J. dioica J. L. astringens tridentafa

vi. silvestris P. R. juhflora officinalis

S. moUe S. candidissimum

T. filifolia
V. Carolina

* Radio de inhibicin en mm.

TABLA

EFECTO

DE

EXTRACTOS

DE P L A N T A S

SOBRE

EL

CRECIMIENTO

DE H O N G O S

FILAMENTOSOS Y

ACTINOMICETOS

INHIBICION

EXTRACTO

M. can i s

M. gypseum

T. tonsurans

E. floccosuin

s. schenckn

N asteroides

N brasihensvs

.i lechug. (raiz) 1. lechugihoja) !. vuigarts 4. absmlhium 4. mexicana .}. ludoviciana B. glutinosa B.scordioitles C. mexicana C. graveolens F. cernva /. dioica l aslnngens !.. inclentaia i\'L mvestris l'.juh flora R. oj'ficmaiis S. ntoHc S. candidissim. T.fi folia 1' Carolina

+++ H-++ 0 0 0 0 +++ 0 0 0 0 0 0

+

+++
++

+++ + -T + 0 0 0 0
++

+++

+++
++

H1 h 0 0 0 0
++

ih-r o 0 0

1-+ 0 0 0 0
++

0 0 0 0
++

0 0 0 0
+

;
i 0 o 0 0 0 0 n

0 0 0 0 0 0
++

0 0 0 0 0 0
++

0 0 0 0 0 0 -r 0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0
+

0 0 0 0 0 1 0
+

"

0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 .

* Porcentaje de la inhibicin micelial comparada con el control. 100% = 60-40% = ++, 4 0 - 2 5 % = +. 0 = Efecto inhibitorio ausente.

90-60% ~

Absofbancia (600nm.) 0.6 C laisentC albi/lu neo'ct m 0.5?

0.4-

Absofbancia (600nm.)

1.4
1 2-

C a^jca/ijs o^ss

A
0.8

0.30.6 * 0.2 i

0.4 |
0.2

0.1

2 3 9 * Extracto m gim I

Extracte mg/ml

Fig. 1. E F E C T O DE A g a v e l e c h u g u i l l a T o r r . (RAIZ) S O B R E EL CRECIMIENTO DE HONGOS L E V A D U R I F O R M E S

Crecimiento (%)

Crecimiento(%)

1201 S schenckiN asteroide fJ brasinensis

A 100,^
1 80

120 M canisM gypseurrf lonswan floccosum

100 .

\ i\ A V *

80 -

1 eo
40 20

60

40

20
C
2 3 4

0 -

Extracto mg/ml

.5

1 2 Extracto mg/ml

Fig. 2. EFECTO DE Agave lechuguilla Torr. (RAIZ) SOBRE EL CRECIMIENTO DE HONGOS FILAMENTOSOS Y ACTINOMICETOS

Absorbencia
0.6

Absorbancia

C lauentiC albidusC. noofcrmani 0.5 0.4, 0.3

0.2

C. krussiC albicaniC rugosa * 1.5

V ,\

*
\

0.5
0.1 -

10

12

'

Concentracin mg/ml

T O

Concentracin mg/ml

Fig. 3. EFECTO DE Agave l e c h u g u i l l a (HOJAS) S O B R E EL CRECIMIENTO DE HONGOS LEVADURIFORMES.

Crecfrniento (%) Crecimiento (%) 1201201 M cantjd gypseufiT ion$ui ai)E fiocco$urr\ $ chenkiN.a; taroiOofJ. ira: ilion: : A 100^ 100 I

80'
60 A

40 L
20 -

Exiracto rngml

10 Extracto mg/ml

12

Fig. 4. EFECTO DE Agave lechuguilla Torr. (HOJAS) SOBRE EL CRECIMIENTO DE HONGOS FILAMENTOSOS Y ACTINOMICETOS

C r e c i m i e n t o (%)

C r e c i m i e n m t o (%)

120

120 [M.c a nM. gyps eurrf tonstran. Hocco i un m a

100

S schenckN. a siero OeY. tres iliemis

100

\
1

80
60

40'

20

10

12

14

Extracto mg/ml

Extracto mg/ml.

Fig. 5. EFECTO DE B a c c h a r i s g l u t i n o s a Pers. SOBRE EL C R E C I M I E N T O DE HONGOS F I L A M E N T O S O S V A C T I N O M I C E T O S

Crecimiento {%)
120

Crecimiento (%} 1 20 r

100

M.canisM.gypseuriT torisumn. floccosum A <1

1001 \\

S SGhenckiN asieroiaetJ.brasiliensis

801 Cj60

80' R
60,

>

40

401 20L
C

20

.
6

"

I
14

*
16

8 10 12 Extracto mg/ml

8 10 12 Extracto mg/ml

14

16

Fig. 6. EFECTO DE Larrea tridentata D.C. SOBRE EL CRECIMIENTO DE HONGOS FILAMENTOSOS Y ACTINOMICETOS

TABLA

4.

CMI

DE

LOS

EXTRACTOS

DE

PLANTAS

SOBRE

LOS

MICROORGANISMOS

PROBADOS

MICROORGANISMO Candida Candida Candida krusei albicans rugosa neoformans laurenti albidus canis gypseum tonsurans floccosum

A. ! e chug, raz NI 4.0 1.0 4.0 0 . 7 6.0 0 . 7 5.3 1.1 4.0 1.0 3.3 1.2 6.0 1.2 4.5 1.1 4.6 1.2 5.0 2 . 3 7.3 * 0 . 5 7.6 0.7

A. echug. hoja NI 8.0 0 . 5 8.0 X 1.0 12.0 i 1.1 9.3 1.6 1 1.0 - 1.4 10.0 LO 8.0 1.5 9.3 * 2.3 12.0 i 1.4 10.3 * 1.2 10.6 3.1 1 0 . 0 1.7 1

B.

glutinosa NI NI NI NI NI NI 10.0 1.4 10,6 X 1.2 13.3 2.3 12.3 3.1 12.0 3,4 12.0 2 . 0 14.6 1.2 ,

L.

tridentata NI NI NI NI NI NI

Criptococcus Criptococcus Criptococcus Microsporum Microspore ni Trichophyton Epidermophyton Sporothrix Nocardia Nocardia

14.0 3.0 14,0 -= 1,2 14.3 = 2.5 16,6 * 2.3 16.0 X 2.0 16.3 = 3.0 16.6 ^ 4 . 3 J

schenckii asteroides brasihensis

MIC = Concentracin mnima inhibitoria en mg/ml. NI = No inhibicin b) Cromatografa preparativa. El extracto de la raz de A. lechugilla mostr 6 bandas de las cuales la primera (No. 0)fu

la que mostr tener efecto inhibitorio contra hongos y actinomicetos (Tabla 6 ). Se estableci que esta banda tiene un Rf de 0 % con los eluentes utilizados. De las hojas de esta misma planta se separaron 4 bandas (Fig. 7) y al igual que en el caso anterior la primera (No. 0) posea el efecto inhibitorio contra los organismos probados, esta fraccin tuvo un Rf de 0%. (Tabla 7). El extracto de B. glutinosa mostr 10 bandas (Fig. 8), de ellas la No. 9 fu la causante

de la accin antimicrobiana, esta banda tiene un Rf de 90 % (Tabla 8). En cuanto al extracto de L tridentata la separacin cromatogrfica que produjo fu de 11 bandas (Fig. 9). siendo la No.

2 la que mostr el efecto inhibitorio sobre hongos y actinomicetos. El Rf establecido paia esta banda fu de 42 % (Tabla 9).

T A B L A No.5 S E P A R A C I O N P R E L I M I N A R M E D I A N T E C R O M A T O G R A F I A DE CAPA FINA C O N E X T R A C T O S DE P L A N T A S Rf ( % ) D E M A N C H A S D E S A R R O L L A D A S SOLVENTES U S A D O S A. lechug. (raiz) NO P O L A R E S HEXANO ETER DE P E T R O L E O DCLORETANO T E T R A C L O R U R O DE CARBONO BENCENO INTERMEDIOS DICLOROMETANO CLOROFORMO 0 27.9 60.2 0 36.9 26.1 61.5 0 29.0 40.8 35.2 49,0 63.3 53.5 38.4 40,0 47.6 53,0 58.4 0 0 27.9 0 26.4 0 0 67. 24.6 0 21.1 74.6 0 63.3 71.8 0 28.1 A. lecliug (hojas) B. glutinosa L. tridentata j 0 0 27.6 36.9 13,8 1

1 3

_i__J

ACETATO D E E T I L O POLARES ACETONA METANOL ACIDO ACETICO AGUA 0 = N o hubo corrimiento

0 51.4 0 45.5

0 58.4 0 36.9

78.8 80.2 0 0

76.9 63,0 80.0 0

Fig 7. Cromatograma del extracto de Agave lechugilla

(hojas) observada con luz ultravioleta.

Fig. 8. Cromatograma del extracto de Baccahris

glutinosa

observada con luz ultravioleta.

Fig. 9. C r o m a t o g r a f a del extracto de Larrea tnclentata

obseivada con luz ultravioleta.

T A B L A 6. S E P A R A C I O N POR C R O M A T O G R A F I A EN C A P A FINA DEL EXTRACTO DE A. lechuguilla (RAIZ) U S A N D O C O M O E L U E N T E UNA M E Z C L A DE C L O R O F O R M O - M E T A N O L 9:1

FRACCION 0 I 2 j 4 5 blanco lila rojo

2 caf claro blanco blanco blanco blanco caf claro

Rf (0/o) 0 24 28 46 63 94

AREA (mnr)
12.0

INHIBICION*
-

6.0 7.0 8.0 7.0 6.0

0 0 0 0 0

caf claro verde claro anaranjado

I: Color observado con luz ultravioleta. 2 - Color observado con luz visible. *Ensayos de inhibicin contra los microorganismos en estudio

TABLA 7. S E P A R A C I O N P O R C R O M A T O G R A F I A EN C A P A FINA DE E X T R A C T O DE A. lechuguilla ( H O J A S ) U S A N D O C O M O E L U E N T E UNA M E Z C L A DE CLOROFORMO-METANOL 9: I FRACCION 0 1 2 3 1 blanco rojo verde anaranjado caf blanco amarillo claro amarillo 2 Rf (%) 0 24 77 96 J _ A R E A (mm 2 ) 7.0 8.0 7.0 9.0 INHIBICION*
-

0 0 0

1: Color observado con luz ultravioleta. 2: Color observado con luz visible * Ensayos de inhibicin contra los microorganismos en este estudio.

T A B L A 8. S E P A R A C I O N POR C R O M A T O G R A F I A EN C A P A FINA DEL E X T R A C T O DE B. glutinosa U S A N D O C O M O E L U E N T E UNA M E Z C L A DE CLOROFORMO - METANOL 9 : 1

RACCION 1 0 I 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 Verde oscuro amarillo rosa lila amarillo rojo caf oscuro amarillo caf oscuro azul anaranjado

2 caf claro crema crema rosa crema caf claro caf claro amarillo amarillo claro crema verde claro

Rf (%) 0 7 22 39 44 51 66 77 81 90 96

A R E A (mm 2 ) 7.0 8.0 7.0 6.0 5.0 5.0 6.0 7.0 5.0 8.0 9.0

INHIBICION* 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Cantidad de extracto = 0.5 mV placa 1: Color observado con luz ultravioleta. 2 : Color observado con luz visible * Ensayos de inhibicin contra los microorganismos en este estudio.

TABLA No.9 S E P A R A C I O N POR C R O M A T O G R A F I A EN C A P A FINA DEL EXTRACTO DE L. tridentata U S A N D O C O M O E L U E N T E I NA M E Z C L A DE C L O R O F O R M O - M E T A N O L 9:1

FRACCION 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

I verde oscuro rosa rojo caf oscuro caf claro caf verde claro caf oscuro amarillo caf oscuro azul anaranjado

2 verde crema amarillo mostaza caf amarollo caf claro rosa caf claro mostaza caf caf oscuro

Rf(%) 0 25 42 43 " 53 59 65 73 80 84 90 96

A R E A (mm 2 ) 7,0 7.0 5.0 8.0 9.0 7.0 6.0 9.0 7.0 10.0 8.0 8.0

INHIBICION* 0 0
-

0 0 0 0 0 0 0 0 0

1: Color observado con luz ultravioleta. 2 : Color observado con luz visible. * Ensayos de inhibicin contra los microorganismos en estudio.

DISCUSION
Las plantas han sido, son y continuarn siendo, una importante fuente de antimicrobianos. Podemos decir que las encontradas en el presente trabajo con actividad antifungica. se desarrollan o crecen en nuestro ambiente. Tal es el caso de A. lechuguilla cuyo extracto acuoso es

considerado txico por algunos autores. Sin embargo se ha podido establecer en modelos animales, que a ciertas dosis no producen efectos nefro o hepatotxico, como se confirm en el trabajo desarrollado p o r Velzquez (1093). Ella report que el extracto acuoso de la raz de esta planta en dosis hasta de 6 g/kg de peso administrado por va oral no ocasion efecto letal en ratas machos y hembras adultas del gnero Wistar. Existen informes publicados referentes a la composicin qumica de A. lechuguilla en

donde sugieren la posibilidad que las saponinas esferoidales sean tal vez las portadoras de la actividad antifungica (13). Otro punto valorable de esta planta es la alta solubilidad del extracto en agua, por lo que se considera que tal requerimiento es fundamental para el desarrollo de una posible aplicacin humana. En el presente estudio se observaron resultados similares al trabajo de Disalvo que y registr efectos inhibitorios sobre

tambin estudi la actividad antimicrobiana de R. glutinosa

dermatofitos, pero no con levaduras. A u n q u e por otro lado ellos reportaron resistencia en S. scheiifcii y nosotros pudimos observar sensibilidad en ese hongo. Tal vez el mtodo de extraccin o las partes de la planta utilizada trabajo con L. tridentata establecieron esta diferencia. Los resillados obtenidos en este

difieren de los de Campos, quien reporta mayor sensibilidad sobre

dermatofito. Los compuestos responsables de la actividad antifungica ya han caracterizados y la mayora son derivados fenlicos del cido nordihidroguayaretico (13). De las tres plantas, el extracto de A. lechuguilla fu el ms activo ya que por

comparacin de la CM1 como se observa en la Tabla 4. necesit menor concentracin \ adems present un espectro ms amplio; le sigue en orden decreciente el extracto de B. glutinosa present actividad solo con organismos filamentosos, por ltimo L. tridentata a concentraciones muy altas. que

present actividad

En la cromatografa desarrollada para cada extracto se detect mejor separacin con los extractos de B. glutinosa cambio con A. lechugilla y L. tridentata (Fig. 8 y 9) por contener compuestos no polares, en

la separacin fu muy pobre (Fig. 7) ya que la fraccin 0 fti donde se

encontraba el efecto antifungico. La separacin de extractos fue preliminar y no excluye que las bandas estn compuestas de dos o ms componentes. Sin embargo se ofrece una base para el anlisis preparativ o de los compuestos de donde se deber continuar con los anlisis apropiados hasta a caracterizacin de los compuestos activos. De acuerdo a los resultados obtenidos p o d e m o s afirmar que s existen posibles opciones o alternativas terpeuticas contra algunas de las enfermedades producidas por los microorganismos que probamos. Adems de que stas serian accesibles ya que las 3 plantas cuyos extractos demostraron tener efectos antifngicos, forman paite de nuestra flora regional. Consideramos que este trabajo y estudios posteriores abrirn ms opciones para que en un futuro cercano sean utilizados frmacos de origen vegetal, extrados de plantas regionales, con accin eficaz y menor toxicidad y efectos secundarios que los que actualmente existen.

CONCLUSIONES
En este trabajo se estudi el efecto antimicrobiano de 20 extractos de plantas comnmente usadas en la medicina tradicional para curar varias enfermedades causadas por hongos. De los 20 extractos analizados fueron 3 los que mostraron tener efecto inhibitorio a las concentraciones usadas contra varios de los microorganismos estudiados. El de mayor efecto fu el extracto de la raz de A. lechuguilla que produjo inhibicin de t o d o s los microorganismos

estudiados excepto C. krusei. De efecto menos potente pero con el mismo patrn, fu el que presentaron las hojas de la misma planta. B. glutinosa y L. tridentata presentaron un efecto

inhibitorio contra todos los organismos filamentosos, sin embargo las especies levaduriformes fueron resistentes. La cromatografa en este trabajo nos permiti la separacin de los compuestos que

integraban los extractos y que fueron probados nuevamente con los organismos antes mecionados detectando como a la fraccin responsable de la inhibicin. Se determin la actividad ie la

antimicrobiana de las fracciones de los extractos, en el caso del de la raz de A. lechuguilla No.0, la cual no emita coloracin con luz ultravioleta

y con luz visible se observ caf claro, su

Rf fue de 0%. Las fracciones de las hojas de la misma planta mostraron un resultado similar. En el caso de B. glutinosa la fraccin inhibidora fue la No. , que present un color azul al observarse En el extracto de L.

con luz ultravioleta y un color crema con luz visible, su Rf fue de 90%. tridentata

se observ que la fraccin No. 2 fue la inhibidora; el color desarrollado con luz

ultravioleta fue rojo (Fig. 9) y color amarillo con luz visible, con un Rf de 42%.

LITERATURA CITADA
1.Ahmed W. 1979. Classification o f solvents according to interaction mechanisms. Science. 56:795-798. 2.Amin M., Kurosaki F., Nishi A. 1988. Carrot phytoalexin alters the membrane permeability of Candida albicans and multilamellar liposomes. Journal of

Microbiology. 134:241-246. 3.Azzovz M., Bullerman L. 1982. Comparative antimycotic effects of selected herbs, spices, plant components and commercial antifungal agents. Journal of Food Protection. 4.45:1298-1302.

Arenas R. 1993. Micologia mdica. 1er. ed. Interamericana Mc. Graw-Hill . Mxico p. 128-250.

5.-

Babic I., Nguyen A. 1994. Antimicrobial activity of sheredded carrot extracts on food borne bacteria and yeast. Journal of Applied Bacteriology. 76:135-141.

6.-

Balandrin M., Klocke J., Wertele E. y Bollinger H. 1994, Natural plant chemicals: Sources o f industrial and medicinal materials. Science. 228:1154-1160.

7.-

Barton D.. Ollis W.D.. 1986. Metodology of research on medicinal plants. Ad\ anees in Medicinal Pliyt o chemistry.

8.-

Betto P., Casinova C.G. y Gabrielle R. 1988. Estudio sistemtico de los componentes menores de Artemisia arborescens L. ( C o m p o s i t a e ) de Calabria. Revista

Latinoamericana. Qumica. 19:40-42 9.10.B o n i f a z A . 1990. Micologia Mdica. 1er. ed. Mendez Cervantes.Mxico.p. 32-38. Boonchird C. y Flegel W. 1982 . Jn vitro antifungal activity of eugeno) and vainiJJin against Candida albicans Microbiology. 28:92-95 and Criptococcus neoformans. Canadian Journal of

Briozzo J., Golden D.. Chirife J. y Herszage L. 1988. Antimicrobial activity of clove dispersed in a concentrated sugar solution. Journal of Applied Bacteriology 66:69-75. 11.Bullock W., Kozel T.. Scherer S. y Dixon S. 1993. Medial Mycolog} in the 1990s: Involvement o f N f H and the Wider Community. A S M News. 59:182-185

12. 13.-

C a m p o s E., Marby T. y Fernandez T. 1979. Larrea. CIQA.Saltillo. Mx. p. 48-55. Conner D.E. y Beuchat L.R. 1984. Effects of essential oils from plants on growth of food spoliage yeast. Journal of Food Science'. 49:49-429.

14.-

Correll D y Johuston J. 1970 Manual of The Vascular Plants of Texas. Reseach Foundation.

15.16.-

Daniels F.J. 1965. Invest. Dermat. 44:259 Davidson M y Branen L. 1993. Antimicrobials in foods. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 35:441-468.

17.-

Davis L.E., Jin-K.un S. y Yan C. 1990. Antifungal activity in human cerebro espinal fluid and plasma after intravenous administration of Allium sativum. Agents and Chemotherapy. 34:651-653. Antimicrobial

18.-

Dominguez X.A. 1988. M t o d o s de investigacin Fotoqumica. 4a. cd. LIMUSA Mxico.

19.-

D o w n u m K.J., Villegas S., Rodriguez E. y Keil D R. 1987. Plant photosensitizes: A survey of their occurrence in a n d and semiarid plants fron North America. Journal of Chemical Ecology. 15:345-355.

20.-

El-Gammal A. y Mansouv R.M. 1986. Antimicrobial activities of some flavonoid compounds. Zemealbl. Mikrobiol. 141:561-565.

21.-

Elias R., Diaz A.M., Vidal E. y Balansard. 1991. Triterp e n c ncle saponins fron the leaves of Heder helix. Journal of "Natural Products. 54.83-103.

22.-

Evron R., Guizie M., Zehavi U. y Polacheck I. 1990. Activity of compound G2 isolated from alfalfa roots in experimental dermatophyte infection. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 34:1600-1601.

23.24.-

Fox J.L. 1993. Fungal infection rates are increasing. ASM News. 59:515-518. Garcia G. 1978. Determinacin deplagicidas organoclorados y organoflorados en cromatografa en capa fina en frutos de ctricos Tesis.UANL. Mxico.

25.-

Gunter Z.y Sherma G . 1993. Thin layer Chromatography Handbook. CRC Press, p.89-101

26-

Hamburger M , Cordell G. 1987. A direct biuautografic T L C assay for possessing antibacterial activity. Journal of Natural Products. 50:19-22

compounds

27.28.-

Hernandez. R. y Gaily M. 1991. Plantas Medicinales 5a. ed.. Arbol. Mxico Ingolfsdottir K., Bloomfield S, y Hylands P.J. 1985. In vitro evaluation of the antimicrobial activity of lichen metabolites as potential preservatives. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 28:289-292.

29.-

Isshiki K.. T o k u o k a K., Mori R. y Chiba S. 1992. Preliminary' examination of all>! isothiocyanate vapor for food preservation.Biosci. Biolech. Biochem. 56:14776-1477.

30.-

Janssen A.M., Scheffer J. J y Baerheim A. 1986. Antimicrobial activity of essential oils: a 1976- 1986. Literature review. Aspects of the test methods. Revieus.Plants Medical Nov. 395-398.

31.-

Kinghom A.D. y Balandrin MT. 1992. Human medicinal agents from plants. American Chemical Society, p. 5-10.

32.-

Kobashi G. and M e d o f f G. 1977. Antifungal agents recent. Ann. Rev. 31: 291-308.

Microbiology.

33.-

Larone D:H: 1987. Medically important fungi. 2a. ed. American Society for Microbiology. E.U.A.

34.-

Lopes L., Bolzani S. y Trevizan M:V: 1988. Lignans from Brazilian Revista Latinoamericana de Qumica. 19:1 13-1 17.

arisrolochiaceae.

35.-

Martinez M. 1979. Catlogo de nombres vulgares y cientficos de plantas mexicanas. Mx.

36.-

Maitino V., Villar S. 1988. C o m p u e s t o s polifenlicos aislados de tomentosa

Achyroeline

Rusby (Compuestas). Revista Latinoamericana de Qumica. 19:1) 1-113.

37.-

Marsh C., Sanz I., Primo E. 1991. Antimicrobial activities of Mediterranean! plants. Zentralbl Mikrobiol. 146:291-295.

38.-

M o n r o e E. Wall.. Barton. 1962. Steroidal sapogenins then ocurrence in Agave lechuguilla. Econ. Botany. 16:266-269.

39.-

M o o r e G.S., Atkins R. 1976. The fungicidal fungistatic effects of an aqueus garlic extract on medicallly important yeast-like fungi. Mycologia. 56:84-89.

40.-

M o n i s R., Khetry A., y Sitz E.F.. 1976. Antimicrobial activity of aroma chemical and essential oil. Journal of the American Oil Chemist Society. Journal of the American oil Chemists society 56:595-603.

41.-

Nicolatti M., Sarafini M., Alburquerque J. 1988. A new diterpene from inflexa. Revista Latino ameican a de Qumica. 19:13 -14.

Echmilena

42.-

Polachek I., Zehavi U., Nairn M. y Evron R. 1986. Activity of c o m p o u n d G 2 isolated from alfalfa r o o t s against medically important yeast. Antimicrobial A g e n t s and Chemotherapy. 30:290-294.

43.-

R z e d o w s k i J. 1988. Vegetacin de Mxico . Instituto Politcnico Nacional. Esc. Ciencias Biolgicas, Mexico.

44.-

Recio M.C. y Rios J.L. 1989. A review of some antimicrobial c o m p o u n d s isolates from medical plants reported in the literature 1978-1989. Phytotherapy Research. 3:117-125.

45.-

Rex J.. Pfaaller S.M. y R i n a l d i M . G . 1993. Antifungal susceptibility testing. Clinical Microbiology Reviews. 16:367-381.

46.-

Rios J.L., Recio M.C. y Villar A. 1987. Antimicrobial activity of selected plants employed in the spanish mediterranean area. Journal of Ethnophatmacology. 21:139-152

47.-

Rovalo M., G r o v e B. y Gonzlez. Ma. E. 1983. La Barreta o Barreto parvifolia.Instituto

Helietta

Nacional de Investigaciones sobre R e c u r s o s Biticos. Mxico..

48.49.-

Sanchez O. 1980. La flora de Mxico. 1er. ed. Mxico. Springer R y Verlag S. 1994. Preparative C h r o m a t o g r a p h y Techniques. Aplictions in natural p r o d u c t isolation. N e w Y o r k , E . L . A.

50.51.-

Stwart D. Coining M. 1970. Manual of the vascular plants of Texas. l e r . e d . E . U . A T o u c h o n e J. C. 1992. Practice of thin chromatography. 3a. ed. Wiley- Intercience E.U.A.

52.-

V a z q u e s C. 1962. Saponinas Esteroidales en Agave Mex. .

lechugi/la.

Tesis. UAP. SLP.

53.-

Velazquez C. 1993. Estudio de la Toxicidad Aguda del Agave lechuguilla en ratas Wistar. CIBN. Mty, Mx.

54.55.-

Villacis L. 1978. Plantas Medicinales de Mxico, la. ed. Mndez Cervantes. Mxico. Van H o o f L. : Van den D.A. y Ulietinck A.J. 1980. Screening of poplar trees for antibacterial antifungal an antiviral activity. Biology Plantarum. 22:265-273.

56.57.-

Volak J., Stodola J. 1990, Plantas Medicinales 3a. ed. Susaeta. S. A. Checoslovaquia. Yashpe J., Segal R., Brever A. 1979. Animicrobial activity of Artemisia Journal of Pharmaceutical Sciences. 68:924-925. herba-alba.

V. li. H':; . . . .i: .. . 'Mr -,1'.- : > . * ' t' :i

r. V ' ; ' m
;

I ; .< '
: : : -
;

. .,. . i . ; t ' . . 5L ., ;

IN

RI

.. l

; n ; . . i.vl. i ill ;; f : i ': ' I ; : : i. .

&

$,
if I
!

W H'l" '.. .,
' '

: .. - :

'

ifii
!" ! ,

k
:

I:-.'. .
;

.i.-. rt

at*i ii:-!
' :

v i -" 1
.

1 i :

li ' " ! V . ;P .

?T

|| i .i *t i y ';' ' i 1 } | | m U '4

;
'

il'

: :

i P f

.i

lilil |j;Ji

H 1

:'

'Su;

r; .

-. ',1 . .M- i !

13;,;; ! i,

,
.

.:

: : -i,''.

. .<1 s

i ;t

i l

: .i
hi .<?-.';

u-r' ' ^ -

N iiMi :

, ! :'

..

' .

: ; - 1 I 1

I 1 ' 1I
I'll J!': . V ! ': ' . : Ifii:, : . -}yV'! kii- .. . -1