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MANUAL DE PRCTICAS DE FARMACOLOGA GENERAL

Dr. Francisco Javier Alarcn Aguilar

Universidad Autnoma Metropolitana Iztapalapa Trimestre 12-I

NDICE Introduccin Prctica No. 1. Formas Farmacuticas. Prctica No. 2. Manejo de animales de laboratorio y vas de administracin. Prctica No. 3. Vas de absorcin. Prctica No. 4. Absorcin. Influencia de la va de administracin en la concentracin plasmtica de un frmaco. Prctica No. 5. Distribucin. Prctica No. 6. Excrecin. Cuantificacin de la eliminacin renal del cido acetilsaliclico. Prctica No. 7. Efectos de las drogas sobre el ojo del conejo. Prctica No. 8. Efecto de algunas drogas sobre el corazn aislado de rana. Prctica No. 9. Bioensayo de la histamina sobre el leon de cobayo. Prctica No. 10. Efecto de frmacos sobre la motilidad ciliar en el esfago de rana. 24 30 35 40 43 46 49 3 7 11 19

Agradecimientos Apndice 1. Curva de calibracin del sulfatiazol sdico. Apndice 2. Prueba de t de Student para muestras independientes.

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Introduccin Para poder entender los procesos farmacocinticos y farmacodinmicos que tienen lugar cuando un frmaco ingresa al organismo, es importante analizarlos tanto desde el punto de vista terico, en el saln de clase, como desde el punto de vista experimental, en el laboratorio. En este ltimo sentido, los manuales de prcticas de farmacologa existentes, as como los experimentos sugeridos en la literatura, estn dirigidos principalmente a estudiantes de medicina, odontologa y de ciencias qumico-farmacuticas, de manera que, en la mayora de los casos, no cumplen con las exigencias requeridas por la Licenciatura en Biologa Experimental. De aqu surge la necesidad de elaborar un manual que satisfaga las necesidades y exigencias propias de dicha Licenciatura y, al mismo tiempo, se ajuste a los periodos trimestrales y a la infraestructura con que contamos en la Universidad Autnoma Metropolitana Unidad Iztapalapa. Este Manual de Prcticas de Farmacologa se elabor de acuerdo con las necesidades del programa terico de la Unidad de Enseanza Aprendizaje de Farmacologa General y tiene un enfoque esencialmente experimental. Se compone de 10 prcticas, las cuales son: Prctica No. 1. Formas Farmacuticas. Prctica No. 2. Manejo de animales de laboratorio y vas de administracin. Prctica No. 3. Vas de absorcin.

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Prctica No. 4. Influencia de la va de administracin en la concentracin plasmtica de un frmaco. Prctica No. 5. Distribucin. Prctica No. 6. Cuantificacin de la eliminacin renal del cido acetilsaliclico. Prctica No. 7. Efectos de frmacos sobre el ojo del conejo. Prctica No. 8. Efecto de frmacos sobre el corazn aislado de rana. Prctica No. 9. Bioensayo de la histamina sobre el leon de cobayo. Prctica No. 10. Efecto de frmacos sobre la motilidad ciliar en el esfago de rana. Cada prctica consta de: 1) Introduccin, cuya finalidad es servir de marco terico al trabajo que va a realizar el estudiante. 2) Objetivos. 3) Material y mtodos, en donde se describen de manera clara y sencilla los procedimientos a seguir. 4) Cuestionario, con el propsito de que el estudiante investigue y se adentre en el tema y los fundamentos de la metodologa utilizada, complementando de manera importante el conocimiento y logrando el cumplimiento de los objetivos planteados en cada prctica. Adems, se agreg una breve explicacin, a manera de gua, para la elaboracin del reporte de las prcticas por parte de los alumnos, acerca de la informacin que deben contener las secciones de Resutados y Discusin. Al final de cada prctica se anexa tambin literatura de consulta (bibliografa). Por ltimo, en el Manual podemos encontrar apndices con frmulas e informacin de utilidad para la obtencin y manejo estadstico

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sencillo de los datos surgidos de los experimentos realizados en las prcticas, as como el instructivo para la instalacin del programa Expharm, con cuatro prcticas virtuales (Prcticas 7-10). Tomando en cuenta que el trimestre consta de 11 semanas, el Manual incluye 10 prcticas, incluyendo las cuatro prcticas virtuales. Si por alguna razn una de estas prcticas no puede llevarse a cabo, se sugiere complementar el curso con pelculas de drogas de abuso, de acuerdo con la disponibilidad de tiempo. En lo que respecta a las prcticas virtuales, stas se basan en un paquete de aprendizaje asistido por computadora (Expharm), el cual puede descargarse fcil y gratuitamente de internet.. Contiene 4 programas, los cuales simulan experimentos farmacolgicos en animales: 1. Efectos de las drogas sobre el ojo del conejo. 2. Efectos de las drogas sobre el corazn de rana. 3. Efectos de las drogas sobre el esfago de rana. 4. Bioensayo de histamina usando leon de cobayo. Estos programas estn diseados para estudiar las acciones de varios frmacos en diferentes sistemas animales. El paquete es amigable, altamente interactivo y lleno de secuencias animadas que hacen que la simulacin parezca real. Es especialmente til en los casos en los que el uso de animales para el aprendizaje no es esencial o est restringido por varias razones ticas. Los programas de Expharm se recomiendan especialmente para estudiantes de licenciatura. Su principal aporte es ayudar a entender, recordar y nombrar las acciones de las drogas. Cabe sealar que los detalles tcnicos de los experimentos se ignoran

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en gran medida. Ciertos procedimientos estn simplificados. Slo se da informacin esencial y se hacen algunas observaciones adicionales con la finalidad de no confundir a los estudiantes. Debido a que el paquete simula experimentos de laboratorio, el autoaprendizaje por parte de los estudiantes puede resultar difcil. Por lo tanto, se sugiere que el estudiante tenga un conocimiento previo del marco terico para que tenga una idea clara de lo que se est simulando. Aunque se da informacin suficiente en los archivos de ayuda Instruction, se sugiere que el profesor demuestre y explique cada experimento a los estudiantes al menos una vez. Despus, los estudiantes debern repetir los experimentos por s solos cuantas veces sea necesario.

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Prctica No.1. Formas farmacuticas Introduccin Antes de que los frmacos puedan ser administrados a los pacientes deben ser sometidos a una serie de procesos de manufactura, dando lugar a lo que conocemos como formas farmacuticas, las cuales, en su multiplicidad de formas y presentaciones, son de importancia capital para el cuidado y preservacin de la salud. La introduccin de las formas farmacuticas en la teraputica permite controlar la dosificacin racional y, por lo tanto, la velocidad y la cantidad de absorcin del frmaco, todo lo cual es determinante para lograr el efecto farmacolgico deseado. Para lograr lo anterior, se deben analizar en detalle las caractersticas fisicoqumicas del frmaco y las posibles vas de administracin, as como validar la o las presentaciones que ofrezcan mayores ventajas para su administracin. Las formas farmacuticas se pueden clasificar en: slidas (grageas, tabletas, cpsulas, etc.), semislidas (pomadas, cremas, ungentos, etc.), lquidas (soluciones, suspensiones, etc.) y gaseosas (aerosoles, entre otros). Objetivos
1) Establecer la relacin entre las formas farmacuticas y sus vas de administracin. 2) Conocer el manejo de la bibliografa relacionada con los medicamentos y frmacos

en general. Material y mtodos Material: medicamentos en varias presentaciones farmacuticas y libro de especialidades farmacuticas.

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Metodologa Seleccione 5 formas farmacuticas diferentes y realice lo siguiente:
1) Identifquelas en el libro de especialidades farmacuticas (PLM). 2) Complete la Tabla 1 con los datos que se piden:

Resultados Tabla 1. Caractersticas principales de las formas farmacuticas seleccionadas.


Forma Farmacutica Nombre genrico Va de administracin Efecto Nombre Monofrmaco/ farmacolgico comercial Polifrmaco

Grageas Tabletas

Butilhioscina Paracetamol

Oral Oral

Espasmoltico Espacil Analgsico Tempra

Monofrmaco Monofrmaco

Discusin Indique el o los criterios seguidos para la seleccin de sus 5 formas farmacuticas. Cul es la importancia en farmacologa de las formas farmacuticas y cmo se relacionan stas con la va de administracin? Asocie esta informacin con los datos de la Tabla 1 de resultados. Cul es la importancia de conocer la bibliografa relacionada con la farmacologa? Cuestionario 1. De acuerdo con el PLM mencione los principales efectos secundarios y contraindicaciones de los 5 medicamentos seleccionados. 2. Mencione cinco ejemplos de formas farmacuticas de administracin tpica. 3. Cul es el objetivo de los ndices del diccionario de especialidades farmacuticas?

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4. Cul es la diferencia entre la informacin que proporciona el P.L.M. con respecto a la que proporciona el Index-Merck? 5. Cul es la diferencia entre la informacin que proporciona el P.L.M. con respecto a la que proporcionan los libros de farmacologa citados en la bibliografa del curso? 6. Defina el trmino Farmacopea. Bibliografa Litter, M. Farmacologa Experimental y Clnica. 7 ed. Ed. El Ateneo. Buenos Aires. 1988. Cejudo, V.B.L., Hernndez, L.A., Soria, A.O., Vzquez, R.M.L. Metodologa para el desarrollo de un medicamento con calidad biofarmacutica. Universidad Autnoma Metropolitana-Xochimilco. Mxico. 1994. MacVan, B. Referencias Farmacuticas. 1 ed. El Manual Moderno. Mxico, 1995. Rosenstein, E. Diccionario de Especialidades Farmacuticas (PLM). 47 ed. Mxico, 2001.

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Prctica No. 2. Manejo de animales de laboratorio y vas de administracin Introduccin La farmacologa es una ciencia experimental que obtiene gran parte de la informacin de sus dos diferentes reas de trabajo (Farmacocintica y

Farmacodinamia) a partir del momento en que se administran los frmacos a diferentes animales de laboratorio. Por ello es importante recordar algunas de las normas internacionales que nos obligan a tratar adecuadamente a los animales empleados en el laboratorio: razonamiento y propsito del uso que se dar a los animales; justificacin de la especie y nmero de animales requeridos, disponibilidad y conveniencia del uso de procedimientos menos invasivos; calidad de entrenamiento y experiencia del personal en los procedimientos usados; sedacin, analgesia y anestesia apropiados, as como mtodos de eutanasia adecuados. Las especies que ms se utilizan con fines experimentales en el laboratorio son el ratn albino, la rata albina, el cobayo, el hmster y el conejo. De estas especies, quienes ofrecen mayor dificultad en su manejo son las dos primeras, las cuales, al sentirse capturadas, con frecuencia muerden. Sin embargo, si dichas especies se manejan adecuadamente no representan ningn problema, a menos que se les lastime o estrese.

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Por otro lado, la variabilidad es una caracterstica intrnseca de los seres vivos. Entre los caracteres variables se encuentran las respuestas a ciertos estmulos (ambientales, farmacolgicos, etc.). Desde el punto de vista farmacolgico, si pensamos que estas respuestas son el resultado de una serie de procesos tales como absorcin, distribucin, interaccin a nivel de receptores, metabolismo, etc., se entender que las mismas pueden variar, no slo de individuo a individuo, sino tambin dentro de un mismo organismo en diferentes momentos de su ciclo vital. La variabilidad de las

respuestas biolgicas introduce imprecisin en los resultados que se obtienen. Por esta razn, para obtener respuestas homogneas, los animales deben mantenerse en condiciones ambientales especiales y deben manipularse cuidadosamente a travs de una tcnica adecuada. Es importante considerar tambin que las acciones farmacolgicas en ltima instancia son el resultado de reacciones qumicas entre una droga y sus receptores celulares. Sin embargo, el nmero de reacciones qumicas depende de la concentracin de las sustancias reaccionantes, por lo tanto, los efectos farmacolgicos dependern de la relacin entre el peso de la droga y el peso corporal (dosis), pues dicha relacin condiciona la concentracin que la droga alcanza en el organismo. En farmacologa, consecuentemente, debe considerarse la dosis en mg de principio activo/kg de peso corporal, aunque en ocasiones tambin se usa la superficie corporal (rea superficial). Por otro lado, se denominan vas de administracin de las drogas los lugares del organismo donde son aplicadas, ya sea para ejercer una accin local en el sitio de aplicacin o bien una accin general o sistmica despus de su absorcin. Las vas de administracin se pueden clasificar de la siguiente manera:

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1. Enterales. Involucran tracto digestivo o sistema gastrointestinal: bucal u oral, sublingual y rectal. 2. Parenterales. No involucran tracto digestivo: a. Con efraccin de epitelios (inyeccin): i. Sistmicas: intramuscular, intravenosa, subcutnea, intrasea, intraperitoneal. ii. Locales: intradrmica, intraarterial, intracardiaca, intraraqudea o subaracnidea. b. Sin efraccin de epitelios: i) Local y/o sistmica: Va inhalatoria ii) Local o tpica. Va cutnea iii) Local. Mucosas: ocular, uretral, nasal, bucal, vaginal, tica. Cuando el frmaco administrado ejerce su accin directamente en el lugar donde fue depositado se habla de vas de administracin locales. El trmino tpico se aplica para indicar uso externo y local. Objetivos generales 1. Conocer los principios elementales para el manejo adecuado de uno de los animales de laboratorio ms frecuentemente utilizados (ratn). 2. Practicar las diferentes vas de administracin. Objetivo particular Determinar el tiempo del efecto sedante o anestsico y el tiempo de recuperacin del pentobarbital sdico administrado por diferentes vas (subcutnea, intramuscular, intraperitoneal, intragstrica e intravenosa) a

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ratones. Material y mtodos 1) Material biolgico: 6 ratones adultos por equipo (cepa CD-1). 2) Material necesario: i) Solicitar por equipo 1 jeringa de 1 ml con aguja y pliegos de papel en rollo. ii) Proporcionado por el profesor: cnula metlica para administracin intragstrica. iii) Por estudiante: marcador, guantes y tapabocas.

3) Soluciones: pentobarbital sdico. Desarrollo de la prctica: A. Marcar a los animales. Administre pentobarbital sdico a razn de 27.5 mg/kg de peso corporal por las vas de administracin indicadas en la siguiente tabla.

No. de animal 1 2 3 4 5

Va de administracin Intragstrica Intramuscular Intraperitoneal Intravenosa Subcutnea

Volumen a administrar (ml) 0.12 0.06 x 2 0.12 0.12 0.12

B. Tomar el tiempo que tarda en manifestarse el efecto (sedacin), as como el tiempo que tarda en recuperarse. Adems, indique si se presenta estado de somnolencia y

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en qu grado se presenta (anote como + si el animal presenta pesadez o torpeza; ++ si permanece inmvil y parece dormido; +++ si ya no responde a estmulos externos; ++++ muerte). El ratn nmero 6 servir como control. C. Recopile los datos de todo el grupo en la Tabla 1 de Resultados. Resultados Reportar los resultados en forma de tablas y grficas correspondientes: va de administracin con respecto al tiempo de inicio del efecto; va de administracin con respecto al tiempo de recuperacin (duracin del efecto); y va de administracin con respecto a la intensidad del efecto (grado de somnolencia).

Tabla 1. Efectos producidos por la administracin de pentobarbital sdico por diferentes vas de administracin (n= 6).
Ratn No./Va de administracin Tiempo de inicio (seg) Duracin del efecto (min) Grado de somnolencia (+)

1. Intragstrica 2. Intramuscular 3. Intraperitoneal 4. Intravenosa 5. Subcutnea

Discusin Corresponden los resultados obtenidos en la prctica con los reportados en la bibliografa? Explique ampliamente. Cuestionario 1. Qu son los barbitricos y cmo se suelen clasificar?

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2. Mencione las ventajas y desventajas de las vas de administracin enterales y parenterales. Bibliografa Borchard, R.E., Barnes, C.D. Drug Dosage in Laboratory Animals. A Handbook. 3th ed. Ed. Telford Press, Inc. New Jersey. 1991. Goodman-Gilman. Las Bases Farmacolgicas de la Teraputica. IX ed. Ed. McGraw-Hill Interamericana. Mxico. 1996. Gua para el cuidado y uso de animales de laboratorio. Prepared by the Comit on Care and Use of Laboratory Animals of the Institute of Laboratory Animal Resources Comisin Life Sciences. Public Health Service National Institutes of Health Nit Publication. Levine, D.R. Pharmacology: Drug actions and reactions. IV ed. Little Brown and Company. Boston. 1991. Norma Oficial Mexicana. PROY-NOM-062ZOO-1999. Reyes-Snchez, J.C. y Jaramillo-Jurez, F. Manual de ejercicios experimentales de farmacologa. I ed. Sociedad Mexicana de Ciencias Fisiolgicas. Programa Nacional de Formacin de Profesores en el rea Biomdica (PRONFOPAB). 2000. Litter, M. Farmacologa Experimental y Clnica. VII ed. Ed. El Ateneo. Buenos Aires. 1988.

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Prctica No. 3. Vas de absorcin Introduccin Con el nombre de vas de absorcin se entienden los lugares de penetracin de las drogas, que no deben confundirse con las vas de administracin de los medicamentos, pues no siempre se absorben los mismos en el lugar por donde se les administra. Por ejemplo, si se suministra una droga por la boca (va bucal de administracin), la absorcin se realiza mayormente en la mucosa del intestino delgado (va de absorcin). La va de absorcin es importante porque de ella depende la va de administracin, la rapidez de la accin y la dosis de la droga, ya que la dosis puede variar con las distintas vas por diferencias de absorcin. Las vas de absorcin se clasifican como sigue: 1. Indirectas o mediatas: la penetracin de la droga en el organismo se realiza a travs de los epitelios de las mucosas y de la piel, sin efraccin o ruptura de los mismos. Pueden ser de dos tipos: a) Mucosas: digestiva, respiratoria, genitourinaria y conjuntival. b) Cutnea (piel). Esta va es muy utilizada para obtener un efecto tpico. 2. Directas, inmediatas o parenterales: se introduce el medicamento por efraccin de los epitelios de la mucosa o de la piel para colocarlo en el sitio de absorcin. Pueden designarse de la siguiente manera: subcutnea, muscular, peritoneal, sea, cardiaca, etc. Objetivo general

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Determinar las diferentes vas de absorcin y practicar las vas de administracin. Objetivo particular Observar y esquematizar la distribucin de un colorante (azul de metileno al 1%) administrado por las siguientes vas: subcutnea, intramuscular, intraperitoneal, intragstrica e intravenosa en ratones. Material y mtodos 1. Material biolgico: 5 ratones adultos por equipo (cepa CD-1). 2. Material de laboratorio: i) Solicitar por equipo: microscopio de diseccin, estuche y charola de diseccin, 1 jeringa de 1 ml con su respectiva aguja. ii) Proporcionado por el profesor: cnula metlica para administracin intragstrica. iii) Por estudiante: marcador, cinta adhesiva, guantes y tapabocas.

Soluciones : azul de metileno al 1% y pentobarbital sdico. Desarrollo de la prctica 1. Administre azul de metileno al 1% a los ratones por las vas de administracin y a los volmenes indicados a continuacin:

No. de ratn 1 2

Va de administracin Intraperitoneal Intramuscular

Volumen (ml) 0.12 0.06

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3 4 5 Intragstrica Subcutnea Intravenosa 0.12 0.12 0.12

2. Espere 30 minutos. 3. Sacrifique a los animales por inyeccin intraperitoneal de pentobarbital sdico y disectarlos para observar las regiones en donde se absorbi el azul de metileno, segn las diferentes vas. NOTA: La diseccin del ratn nmero 5 (va intravenosa) se recomienda realizarla inmediatamente despus de la administracin del colorante. Resultados Indique y esquematice la localizacin anatmica del colorante describiendo brevemente los tejidos epiteliales involucrados en cada una de las vas de absorcin Discusin Comente ampliamente si la localizacin del colorante corresponde con el sitio de absorcin de cada una de las vas de administracin, de acuerdo con lo esperado y con lo reportado en la literatura, indicando las caractersticas morfolgicas del tejido o tejidos involucrados en cada va de absorcin. Cuestionario 1. Cules son las propiedades fsicas y qumicas del azul de metileno y cules son sus efectos farmacolgicos principales? 2. Explique los mecanismos de absorcin de los frmacos a travs de las membranas celulares. Bibliografa

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Borchard, R.E., Barnes, C.D. Drug Dosage in Laboratory Animals. A Handbook. 3th ed. Ed. Telford Press, Inc. New Jersey. 1991. Goodman-Gilman. Las Bases Farmacolgicas de la Teraputica. IX ed. Ed. McGraw-Hill Interamericana. Mxico. 1996. Graham, R., Robert, Z., Harris, D. Medicinal Research Reviews 21 (5): Sept. 2001. Litter, M. Farmacologa Experimental y Clnica. VII ed. Ed. El Ateneo. Buenos Aires. 1988. Manual del Ingeniero Qumico. VI ed. Ed. McGraw Hill. Mxico. 1992. Merck Index. XII ed. Ed. Merck and Co. Inc., U.S.A. 1996. Mycek, M.J., Harvey, R. A. Lippincotts illustrated reviews: Pharmacology. II ed. Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA. 1997.

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Prctica No. 4. Absorcin. Influencia de la va de administracin en la concentracin plasmtica de un frmaco. Introduccin El proceso por el cual un frmaco alcanza los lquidos de distribucin se denomina absorcin. La velocidad de este proceso depende de la va de administracin, de la solubilidad y de las propiedades fisicoqumicas del frmaco. Dicha velocidad determina el comienzo de su accin. Adems, son varios los factores que modifican el paso de las molculas del frmaco desde su sitio de entrada hasta que alcanza el torrente sanguneo, incluyendo la permeabilidad de la membrana al agente (mecanismos de transporte a travs de las membranas biolgicas), la cual estar determinada por la solubilidad del mismo y el tamao de sus partculas. Por otro lado, debido a que los frmacos en solucin por lo general son electrolitos dbiles, que se disocian en proporcin variable, es necesario mencionar tambin los factores que alteran dicha disociacin, pues de ella depende si los frmacos se absorben o no. Estos factores dependen bsicamente de las caractersticas bioqumicas del organismo receptor y estn relacionadas principalmente con los procesos de absorcin a travs del tubo digestivo. Dichos factores son el pH y la concentracin del frmaco en su sitio de administracin (mientras ms elevada sea, ms rpido se absorber el compuesto). Otros factores son la circulacin sangunea en el rea y la magnitud de la superficie de absorcin. En esta prctica se har nfasis en la influencia de la va de administracin en la concentracin plasmtica de un frmaco.

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Objetivos
1. Determinar la cantidad de sulfatiazol sdico presente en el plasma de ratas a

diferentes intervalos de tiempo.


2. Comparar las cinticas de absorcin del sulfatiazol sdico suministrado por

diferentes vas de administracin (intragstrica y subcutnea). Material y Mtodos 1. Material biolgico: 2 ratas adultas por equipo (cepa Wistar). 2. Material y equipo necesario: i) Solicitar por equipo: 8 tubos de ensayo, una gradilla para tubos de ensayo, 2 embudos de vidrio, una piceta, 3 pipetas de 10 ml y 3 pipetas de 1 ml, Un vaso de precipitados de 50 ml, equipo y charola de diseccin, 1 jeringa de 2-5 ml y aguja, papel filtro, algodn. Equipo necesario: fotocolormetro y celdas. Proporcionado por el profesor: cnula metlica para administracin intragstrica. ii) Por estudiante: marcador, guantes, tapabocas, cinta adhesiva.

3. Substancias necesarias: sulfatiazol sdico, agua destilada, cido tricloroactico al 15%, nitrito de sodio al 0.1%, sulfamato de amonio al 0.5%, Nnaftiletilendiamina al 0.1%. Pentobarbital sdico. 4. Otros: curva de calibracin de sulfatiazol sdico. Desarrollo de la prctica 1. Cada equipo trabajar con 2 ratas. Despus de pesarlas y marcarlas, administre 200 mg/kg de sulfatiazol sdico a las ratas por las siguientes vas de administracin:

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No. de rata 1 2 Peso (kg) Va de administracin Intragstrica Subcutnea Volumen administrado 2 ml 2 ml

2. Una vez administrado el sulfatiazol sdico, obtenga muestras sanguneas por puncin del seno orbital del ojo o puncin cardiaca (previa anestesia con pentobarbital por va intraperitoneal) de cada una de las ratas en los siguientes tiempos: No. de equipo 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 15 30 45 60 90

3. Despus de tomar la muestra sacrifique al animal con una sobredosis de

pentobarbital por va intraperitoneal.


4. Las muestras sanguneas sern procesadas de acuerdo con la tcnica modificada de

Bratton-Marshall, como se indica a continuacin:

Mezclar 1 ml de sangre con 9 ml de agua destilada en un tubo de ensayo para constituir lo que ser nuestra muestra.

Tomar 1 ml de la muestra anterior y mezclar con 15 ml de agua destilada y 4 ml de cido tricloroactico.

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Filtrar y proceder a realizar la tcnica para desarrollar color (Nota: procesar junto con el blanco, el cual contendr 4 ml de agua destilada y 1 ml de cido tricloroactico): a. Tome 5 ml del filtrado y agregue 1 ml de nitrito de sodio. b. Despus de 3 minutos adicione 1 ml de sulfamato de amonio y deje reposar tres minutos ms. c. Por ltimo, adicione 1 ml de N-Naftiletilendiamina, filtre y lea a 545 nm contra el blanco.

4. Recopile los datos de todo el grupo. Resultados Utilizando la curva de calibracin para sulfatiazol sdico, determine la concentracin plasmtica del sulfatiazol sdico administrado en g/5ml de acuerdo con el siguiente cuadro: Tabla 1. Concentracin plasmtica de sulfatiazol sdico (g/ml) a diferentes tiempos Va de administracin intragstrica/subcutnea Tiempo 15 30 45 60 Absorbancia g/5 ml Factor de dilucin 40 40 40 40 g/ml

Discusin

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Cul es el objetivo de que se empleen dos vas de administracin en la prctica? Concuerdan los resultados obtenidos con los esperados tericamente? Cuestionario
1. Cul es la causa por la que se eligi tomar la muestra de sangre por puncin

cardiaca?
2. Qu objetivo tiene adicionar a la muestra problema cido tricloroactico al 15 %? 3. Investigue cul es el fundamento de la tcnica de Bratton-Marshall para

sulfonamidas.
4. Investigue cmo se determina el factor de dilucin para este mtodo analtico.

Bibliografa Borchard, R.E., Barnes, C.D. Drug Dosage in Laboratory Animals. A Handbook. 3th ed. Ed. Telford Press, Inc. New Jersey. 1991. Connors, A. Curso de Anlisis Farmacutico. Ed. Revert, S.A. Mxico, D.F. 1981. Graham, R., Robert, Z., Harris, D. Medicinal Research Reviews 21 (5): Sept. 2001. Harvey, R., Champe, P. Lippincotts illustrated reviews: Pharmacology. II ed. Lippincott-Raven Publishers, New York. 1997. Katzung, B.G. Farmacologa Bsica y Clnica. VIII ed. Ed. El Manual Moderno. 2002.

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Prctica No. 5. Distribucin El proceso de distribucin consiste en el paso de un frmaco hacia los diferentes tejidos y lquidos intersticiales. Los frmacos se distribuyen en funcin de sus propiedades fisicoqumicas, del gasto cardiaco, del flujo sanguneo regional y de su unin a protenas plasmticas. En el plasma, el frmaco puede encontrarse en forma libre o puede fijarse inespecficamente a diversas protenas, principalmente a la albmina. Esta posibilidad de fijacin adquiere importancia fundamental si se tiene en cuenta que slo las molculas libres del frmaco son las que pueden alcanzar los receptores en los sitios de accin, de llegar a los sitios de biotransformacin y de ser eliminadas a nivel del glomrulo renal. La distribucin de un frmaco se divide en tres fases: en la primera el frmaco se acumula en los rganos que tienen mejor irrigacin. En la segunda fase el frmaco alcanza una distribucin ms general y en la tercera la distribucin es lenta debido a que la irrigacin de ciertas zonas es mnima. Otro factor que puede afectar la distribucin del frmaco es el tamao del rgano. El volumen de distribucin es un parmetro farmacocintico importante en el cual se relaciona la cantidad de frmaco en el cuerpo con su concentracin en el plasma. Objetivo Determinar la concentracin plasmtica y en diferentes rganos del sulfatiazol sdico administrado por va intragstrica a ratas normales. Material y mtodos 1. Material biolgico. 1 rata adulta por equipo (cepa Wistar).

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2. Material necesario i) Solicitar por equipo: 4 portaobjetos, Equipo de diseccin, 16 tubos de ensayo, papel filtro, 4 embudos de vidrio, piceta con agua destilada, gradilla para tubos de ensayo, 4 pipetas de 10 ml y 4 de 1 ml. Equipo fotocolormetro y celdas. ii) Por alumno: navajas, marcador, guantes y tapabocas. necesario:

3. Substancias necesarias. sulfatiazol sdico, NaOH 0.25 N, cido tricloroactico al 15%, nitrito de sodio al 0.1%, sulfamato de amonio al 0.5% y Nnaftiletilendiamina al 0.1%. Pentobarbital sdico. 4. Otros. Curva de calibracin de sulfatiazol sdico. Desarrollo de la prctica. 1. Pese y marque a los animales. 2. Administre 200 mg/kg de peso de sulfatiazol sdico por va intragstrica (2 ml/animal). 3. Sacrifique a los animales con pentobarbital sdico en los siguientes tiempos: No. de equipo 1 2 3 4 5 Tiempo (min) 0 15 30 45 60

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4. Haga las disecciones necesarias para obtener un gramo de cada uno de los siguientes rganos: hgado, rin, cerebro y corazn. 5. Coloque las muestras por separado en un portaobjetos y desmencelas con una navaja o bistur para procesarlas como se indica a continuacin: Obtenga un gramo y mzclelo con 10 ml de NaOH 0.25 N. Agite 3 veces durante el curso de 10 minutos y deje reposar 15 minutos. Tome 2 ml del sobrenadante y agregue 2 ml de cido tricloroactico y 6 ml de agua destilada. Filtre y proceda a realizar la tcnica para desarrollar color, junto con un blanco que contenga 4 ml de agua destilada y 1 ml de cido tricloroactico: a. Tome 5 ml del filtrado y agregue 1 ml de nitrito de sodio. b. Despus de 3 minutos adicione 1 ml de sulfamato de amonio y deje reposar tres minutos ms. c. Por ltimo, adicione 1 ml de N-Naftiletilendiamina, filtre y lea a 545 nm contra el blanco 6. Recopile los resultados de todo el grupo. Resultados 1. Utilizando la curva de calibracin de sulfatiazol sdico determine la concentracin de sulfatiazol en g/5 ml de acuerdo con la Tabla 1. 2. Calcule el factor de dilucin y determine la concentracin del sulfatiazol sdico en g/ml.

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3. En una tabla recopile los resultados de todo el grupo y grafique la concentracin de frmaco contra tiempo para cada uno de los rganos (en una sola grfica). 4. Con los datos obtenidos calcule el volumen de distribucin para este frmaco.

Tabla 1. Concentracin de sulfatizol sdico (g/ml) en diferentes rganos. Concentracin de sulfatiazol sdico a los _________ minutos Va de administracin subcutnea Muestra (peso) Absorbancia g/5 ml factor de g/ml dilucin Hgado (1 g) Rin (1 g) Cerebro (1 g) Corazn (1 g)

Discusin Explique extensamente si los resultados obtenidos concuerdan con los datos de la bibliografa. Cuestionario 1. Indique las caractersticas qumicas y farmacolgicas principales de las

sulfonamidas. 2. Cules son las causas por las que en esta prctica se eligieron estos cuatro rganos? Bibliografa

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Goodman-Gilman. Las Bases Farmacolgicas de la Teraputica. IX ed. Ed. McGraw-Hill Interamericana. Mxico. 1996. Graham, R., Robert, Z., Harris, D. Medicinal Research Reviews 21 (5): Sept. 2001. Katzung, B.G. Farmacologa Bsica y Clnica. VIII ed. Ed. El Manual Moderno. 2002. Mycek, M.J., Harvey, R. A. Lippincotts illustrated reviews: Pharmacology. II ed. Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA. 1997.

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Prctica No. 6. Excrecin. Cuantificacin de la eliminacin renal del cido acetilsaliclico Introduccin La excrecin se puede definir como el paso de los frmacos del interior al exterior de los organismos. Los frmacos son eliminados del organismo como compuestos no alterados o bien como metabolitos, siendo el rin la va de excrecin de frmacos ms importante. La excrecin de frmacos y sus metabolitos por la orina comprende tres procesos: filtracin glomerular, secrecin tubular activa y reabsorcin tubular pasiva. As, la cantidad de frmaco que llega a los tbulos depende de su unin a las protenas plasmticas y del grado de filtracin glomerular. Por otro lado, puesto que la orina es normalmente cida, los frmacos dbilmente cidos requeriran mucho ms tiempo para ser eliminados exclusivamente por el rin. Afortunadamente, el metabolismo de los frmacos tiende a transformarlos en cidos ms fuertes, con lo cual aumenta la proporcin de formas inicas y disminuye la reabsorcin tubular. Por lo tanto, la influencia de la modificacin del pH urinario sobre la eliminacin de los frmacos depende del grado y la persistencia de esa modificacin. Este efecto es mayor para los cidos y las bases dbiles con valores de pK en el intervalo del pH urinario. Objetivos

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1) Cuantificar

la eliminacin renal del cido acetilsaliclico empleando la orina de

sujetos voluntarios.
2) Determinar si las caractersticas de diferentes formulaciones influyen sobre la

eliminacin del analgsico Material y mtodos Se requiere de un voluntario por equipo que no haya recibido ninguna medicacin por lo menos 48 horas antes del ensayo, que no sean hipersensibles al frmaco, que no tengan problemas de sangrado gastrointestinal y que no se encuentren en periodo menstrual. De preferencia con ayuno mnimo de 8 horas. 1. Material necesario: 1. Solicitar por equipo: 15 tubos de ensayo, 5 pipetas de 2 ml, 5 pipetas de 5 ml, 2

pipetas de 1 ml, 1 pipeta de 10 ml, 1 probeta de 200 ml, 1 vaso desechable, una gradilla para tubos de ensayo, papel filtro, piceta con agua destilada, 2 embudos de vidrio y 1 propipeta. Equipo necesario: potencimetro, fotocolormetro y celdas. 2. Reactivos: cido acetilsaliclico en diferentes presentaciones farmacuticas, bicarbonato de sodio, HCl 0.1 N (200 ml), reactivo de Trinder. 3. Proporcionado por los alumnos: por equipo traer 5 frascos pequeos de vidrio limpios (estriles) y un vaso desechable de 250 ml. Desarrollo de la prctica.
1) Determine y registre la talla, sexo y peso para cada voluntario. 2) Cada voluntario colectar su muestra basal de orina en un recipiente limpio (antes de

ingerir el medicamento)
3) La administracin del frmaco se realizar de la siguiente manera:

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Voluntario 1 2 3 4 5

Presentacin farmacutica Tableta de 500 mg de Aspirina con 500 ml de agua Tableta efervescente de 500 mg de Aspirina con 500 ml de agua Tableta de 500 mg de Aspirina con 250 ml de agua y 1 g de bicarbonato de sodio con otros 250 ml de agua Tableta de 500 mg de Aspirina con 250 ml de agua y 20 minutos despus ingerir 1 g de bicarbonato de sodio con otros 250 ml de agua Disprina efervescente con 500 ml de agua

NOTA: en todos los casos anote la hora de ingestin del frmaco


4) Colectar muestras de orina a los 20, 40, 80 y 120 minutos posteriores a la

administracin del frmaco.


5) Determine la concentracin del cido acetilsaliclico en cada una de las muestras

(incluyendo la basal) de acuerdo con la siguiente tcnica: Para cada muestra mida el pH y el volumen de orina. Tome una alcuota de 2 ml de orina, adicione 8 ml de HCl 0.1 N y filtre. Tome 5 ml de filtrado y adicione 1 ml de reactivo de Trinder (reactivo altamente txico). Calibre el fotocolormetro con la muestra procesada de la orina basal y lea a 540 nm. Registre los datos de todo el grupo en la Tabla 1 de resultados.

Resultados

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1. Efecte las correcciones para las diluciones realizadas y exprese los resultados del contenido de salicilato en g/ml de orina. 2. Para encontrar la concentracin de salicilatos, trace la curva de calibracin para el cido acetilsaliclico obtenida en el fotocolormetro Spectronic 20 que se muestra a continuacin: Concentracin (g/2 ml) 12.4 25.0 50.0 100.0 Absorbancia 0.123 0.210 0.413 0.820

3. Grafique concentracin en g/ml de cido acetilsaliclico contra tiempo para cada voluntario (5 curvas en una grfica). 4. Calcule la velocidad de excrecin urinaria (cantidad de frmaco que se excreta por minuto) en cada individuo. Discusin De acuerdo con los resultados que obtuvo relacione el pH urinario con la concentracin del frmaco en orina para cada voluntario. Relacione las propiedades farmacocinticas de cada una de las formas farmacuticas administradas con respecto a la eliminacin de las mismas. Cuestionario Calcule la depuracin renal del cido acetilsaliclico. Si esto no es posible, indique por qu.

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Tabla No. 1. Volumen excretado de orina y pH para cada voluntario antes y despus de la administracin de cido acetilsaliclico. T i e m p o (minutos) Voluntario Formulacin pH A B C D E 0 Vol. pH 20 Vol. pH 40 Vol. pH 80 Vol. pH 120 Vol.

Bibliografa Goodman-Gilman. Las Bases Farmacolgicas de la Teraputica. IX ed. Ed. McGraw-Hill Interamericana. Mxico. 1996. Katzung, B.G. Farmacologa Bsica y Clnica. VIII ed. Ed. El Manual Moderno. 2002. Litter, M. Farmacologa Experimental y Clnica. 7 ed. Ed. El Ateneo. Buenos Aires. 1988. Reyes-Snchez, J.C. y Jaramillo-Jurez, F. Manual de ejercicios experimentales de farmacologa. I ed. Sociedad Mexicana de Ciencias Fisiolgicas. Programa Nacional de Formacin de Profesores en el rea Biomdica (PRONFOPAB). 2000.

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Practica 7. Efectos de las drogas sobre el ojo del conejo Introduccin El iris est compuesto de dos tipos de fibras musculares, el circular y el radial. Las fibras circulares estn inervadas por fibras nerviosas parasimpticas y las radiales por fibras radiales simpticas. La estimulacin de nervios simpticos y parasimpticos producen midriasis y miosis respectivamente y su inhibicin produce efectos opuestos. Las drogas que estimulan los efectos del sistema nervioso autonmico pueden producir los efectos mencionados arriba. Este experimento usa algunas de estas drogas sobre el ojo del conejo. Objetivo Determinar los efectos de algunas drogas sobre el tamao de la pupila, reflejo a la luz y tensin intraocular del ojo de conejo. Material y Mtodo 1. Material biolgico: Conejos Nueva Zelanda. 2. Sustancias necesarias: solucin salina, fisostigmina 0.5%, sulfato de atropina 1.0%, efedrina 0.5%, hidrocloruro de adrenalina 0.1%, hidrocloruro de lidocana 1.0%. 3. Otros: cepos para conejo, regla de medicin, goteros, lmparas de mano, pincel. Procedimiento: Inmovilizar a los conejos en un cepo y cortar las pestaas. Medir el dimetro de ambas pupilas. Note la tensin intraocular (baja, normal o alta). Pruebe los reflejos a la luz y corneal. No olvide anotar las lecturas.

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Seleccione un ojo como control (izquierdo) y otro de prueba (derecho). Aplique solucin salina en el ojo control y una droga en el ojo de prueba. Repita las mediciones: dimetro de pupilas, tensin intraocular y reflejos. Tabule sus resultados de acuerdo con la tabla incluida en el programa. Notas: 1. Tome las lecturas antes de adicionar solucin salina o drogas. 2. Use solucin salina como control para todas las drogas. 3. Las mediciones deben registrarse antes y despus de adicionar solucin salina o drogas. 4. Use slo una droga por conejo. Para probar las drogas use solamente conejos que no hayan sido tratados previamente. 5. Use la escala dada para medir el tamao de la pupila. Cada divisin es 1 mm. Resultados Use la tabla suministrada para presentar sus datos. Discusin Discuta sus resultados y obtenga conclusiones. Cuestionario 1. Cul es la diferencia entre las midriasis inducida por agentes adrenrgicos y drogas anticolinrgicas? 2. Mencione algunos midriticos y miticos usados clnicamente. 3. Cules son los usos teraputicos de los midriticos?

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4. El fluido del estmago tomado de un caso de envenenamiento produjo pupila de alfiler cuando se instil en el ojo del conejo. La tensin intraocular se encontr disminuida tambin. Cul es su probable diagnstico?
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Prctica No. 8. Efecto de algunas drogas sobre el corazn aislado de rana Introduccin Existen muchos frmacos que actan sobre el corazn. Las drogas adrenrgicas y colinrgicas producen efectos opuestos sobre l. Estos frmacos producen sus acciones a travs de receptores especficos. Algunas drogas actan tambin directamente sobre el corazn. Este experimento demuestra los efectos de algunas de estas drogas (agonistas, antagonistas, calcio y potasio) sobre el corazn aislado de rana. Objetivo Determinar las acciones de ciertas drogas sobre el corazn aislado de rana. Material y Mtodo 1. Una rana de gran tamao. 2. Soluciones y frmacos: ringer de rana, epinefrina (10 mcg/ml), norepinefrina (10 mcg/ml), isoprenalina (10 mcg/ml), acetilcolina (10 mcg/ml), propanolol (1 mg/ml), sulfato de atropina (100 mcg/ml), cloruro de calcio (10 mg/ml), cloruro de potasio (10 mg/ml). 3. Otros: transductor de fuerza, soporte, fisigrafo con hoja de registro. Procedimiento. Desmedular y diseccionar la rana para exhibir el corazn. Canular el seno venoso usando una cnula de vidrio, asegurando con hilo. Aislar el corazn con la cnula y perfundir con la solucin Ringer a travs del seno venoso. Insertar un gancho en el

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pice y unirlo a un transductor de fuerza para registrar las contracciones sobre el fisigrafo. Inyectar las drogas una por una dentro del tubo de hule donde penetra la solucin Ringer y registrar las contracciones resultantes. Registrar tambin la frecuencia cardiaca (latidos/min). Las dosis de cada substancia que deben administrarse,

disueltas en un volumen final de 0.2 ml con solucin Ringer, son las siguientes: ringer de rana (0.2 ml), epinefrina (2 mcg/ml), norepinefrina (2 mcg), isoprenalina (2 mcg), acetilcolina (2 mcg), propanolol (200 mcg), sulfato de atropina (20 mcg), cloruro de calcio (2000 mcg), cloruro de potasio (2000 mg). Nota: Antes y despus de la administracin de las sustancias observe lo siguiente: a) Fuerza de contraccin o amplitud (normal, incrementada o disminuida). b) Tono (normal, incrementado o disminuido). c) Frecuencia cardiaca (latidos por minuto). Los parmetros a y b se obtienen observando el registro. La amplitud de la contraccin refleja la fuerza. Un cambio de posicin del punto medio de las contracciones sistlicas y diastlicas indica el cambio en el tono. Estos parmetros deben registrarse en la tabla de resultados. Precauciones: a. Espere hasta que las contracciones aparezcan sobre la hoja antes de administrar las drogas. b. Espere el tiempo suficiente para que el corazn se recupere despus de la administracin de una droga. c. Siempre anote las lecturas de los parmetros antes y despus de dar drogas.

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d. No pueden mezclarse dos drogas. stas deben darse una por una. Observe la seal que indica cuando una sustancia est actuando. Si otra droga es suministrada antes de que la accin de la primera termine, la interaccin puede observarse. As, la interaccin entre agonistas y antagonistas puede observarse, sin embargo, la potenciacin entre las drogas adrenrgicas no. e. Las dosis administradas son fijas. No dar una droga repetidamente con la finalidad de incrementar la dosis. Resultados Reportar tabla de resultados y registro. Discusin Interprete los datos y proporcione sus conclusiones. Cuestionario 1. Mencione 7 estimulantes y 7 depresores cardiacos. 2. Por qu las inyecciones intravenosas de potasio y calcio deben administrarse lentamente? 3. Por qu la dopamina es preferida a la adrenalina en el shock cardiaco? 4. Mencione brevemente los usos y efectos adversos del propanolol, la digoxina y la adrenalina. 5. Un paciente con asma bronquial present palpitaciones e incremento en la presin arterial. Si el medicamento que estaba tomando era Brovon Inhaler, cul es la naturaleza probable de este medicamento?
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Prctica No. 9. Bioensayo de la histamina sobre el leon de cobayo Introduccin Un bioensayo se define como la estimacin de la concentracin o potencia de una substancia a travs de la medicin de su actividad biolgica sobre un sistema apropiado. Los bioensayos son principalmente usados para cuantificar sustancias biolgicas para las cuales procedimientos qumicos establecidos, u otros ensayos, no estn disponibles. Este experimento muestra una curva dosis respuesta gradual y un ensayo de combinacin para la histamina sobre el leon de cobayo. Objetivo Obtener una curva dosis respuesta gradual de histamina y determinar la concentracin de la misma en una solucin de concentracin desconocida usando un ensayo de combinacin. Material y mtodo Material: Bao de circulacin, bao de rganos, leon de cobayo, fisigrafo y hoja de registro, transductor de fuerza. Soluciones y frmacos: Histamina y solucin de Tyrode. Desarrollo. Sacrificar un cobayo, abrir el abdomen y aislar el leon. Retirar el tejido mesentrico unido al leon, cortarlo transversalmente y colocarlo en una caja petri conteniendo solucin de Tyrode. Cortar un pequeo segmento de leon (de 5 cm), limpiarlo y fijarlo

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por uno de sus extremos a un gancho de tejidos con ayuda de un hilo. Atar un hilo al otro extremo e introducir el tejido al bao de rganos. Fijar el hilo a un transductor de fuerza conectado al fisigrafo. El bao de circulacin se llena de agua, la cual debe mantenerse a una temperatura de 37 C con ayuda de un termostato. El bao de rganos lleno de solucin de Tyrode debe conectarse a un reservorio. El tejido se fija apretadamente con abrazaderas y se conecta aire a travs de un tubo de hule. Las burbujas de aire deben salir a un lado de la solucin de Tyrode. Con este sistema seguir con el procedimiento siguiente: 1. Elegir e inyectar una dosis de histamina. Obtener una curva dosis respuesta incrementando la dosis en progresin geomtrica. La dosis de inicio puede ser 0.1 mcg. Si el tejido es muy sensible iniciar con 0.01 mcg. 2. Una vez alcanzada la respuesta mxima iniciar el ensayo de combinacin. 3. Al inicio de este ensayo, dar una solucin de concentracin desconocida de histamina. Seleccionar una curva estndar de la curva dosis respuesta e ingresar la cantidad de histamina que produjo la curva estndar. La curva estndar se selecciona con base en que la respuesta producida por la curva es cerca del 50 % de la respuesta mxima (la respuesta mxima es aquella que no se incrementa ms con un incremento de la dosis). 4. Inyectar la dosis estndar y la desconocida alternadamente. La desconocida es dada en ml. La dosis inicial puede ser de 0.1 ml. Ajustar la dosis desconocida hasta empalmarlas (o combinarlas bien) con la estndar. El empalme se alcanza a travs de pruebas de ensayo y error.

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5. El empalme puede confirmarse dando 2s o s/2 (el doble o la mitad de la cantidad de la estndar) y la mitad o el doble de la dosis desconocida que se empalma con la estndar. Despus de que el empalme se haya confirmado, calcular la concentracin de histamina en la solucin desconocida. Resultados Reportar el registro y los datos considerados en el clculo de la concentracin de histamina. Discusin Discuta ampliamente sus resultados. Cuestionario 1. Qu es un bioensayo y cul es su importancia? 2. Qu otros tipos de bioensayos existen? Mencione algunos ejemplos. 3. Mencione algunos de los instrumentos modernos empleados en los bioensayos de concentracin de frmacos en los fluidos del cuerpo, como por ejemplo la sangre. 4. Cules son las acciones de la histamina sobre el tracto gastrointestinal?

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Prctica No. 10. Efecto de algunos frmacos sobre la motilidad ciliar en el esfago de rana Introduccin El esfago de rana contiene cilios. La motilidad ciliar depende de la accin de la acetilcolina (Ach) en la membrana mucosa. La Ach produce la contraccin de los cilios llevndolos a incrementar sus movimientos. Las drogas colinrgicas producen efectos similares, mientras que las anticolinrgicas paralizan los cilios produciendo una disminucin de sus movimientos. En este experimento se usan algunas de estas drogas para poder observar sus efectos sobre el movimiento ciliar. Objetivo Determinar la accin de ciertos frmacos sobre la motilidad ciliar del esfago de rana. Material y mtodo 1. Material biolgico: una rana grande, semillas pequeas. 2. Frmacos y soluciones: Ach 10%, fisostigmina 10%, Atropina 0.1%, Ringer de rana. 3. Otros: soporte de madera y cronmetro. Procedimiento. Descerebrar la rana y remover la mandbula inferior. Descubrir el esfago desde la cavidad oral hasta el estmago y fijarlo a una charola con alfileres. El exceso de sangre debe limpiarse con algodn y solucin Ringer de rana. La superficie debe mantenerse hmeda tambin con el mismo Ringer. Colocar una semilla de amapola en la parte

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ceflica del esfago y determinar el tiempo que tarda en recorrer una distancia determinada (fija), procediendo como se indica a continuacin: 1. Ubicar la distancia del movimiento de las semillas. El punto de inicio y el punto final se indican con los alfileres a la izquierda de la preparacin. 2. Instilar ringer de rana sobre la superficie del esfago (control). Colocar una semilla en la terminal ceflica del esfago. La semilla comenzar a moverse debido a la movilidad de los cilios. Iniciar el cronmetro cuando las semillas crucen el punto inicial (alfiler en parte ceflica). Detener el cronmetro cuando la semilla alcance el alfiler caudal (distal). 3. Anotar el tiempo que tarda la semilla en recorrer la distancia. Repetir el paso 2 hasta obtener tres lecturas. Calcular el promedio. 4. Instilar Ach y tomar tres lecturas. 5. Repetir los pasos 2 y 3. 6. Instilar fisostigmina y tomar tres lecturas. 7. Repetir los pasos 2 y 3. 8. Instilar atropina y tomar tres lecturas. 9. Instile Ach (sin usar Ringer de rana despus del paso 8) y observar sus efectos. Compare con el efecto obtenido con Ach sola (paso 4). 10. Tabule sus lecturas y obtenga conclusiones. NOTAS: 1. Use nuevas preparaciones (ranas) para cada frmaco. 2. Para observar interacciones las drogas se deben aplicar en la misma preparacin sin usar Ringer.

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Resultados Compare las lecturas del Ringer con las lecturas de los frmacos usando una prueba estadstica (prueba de t Student para muestras independientes), usando un nivel mnimo de significancia del 95%. Discusin Discuta ampliamente sus resultados. Cuestionario 1. Mencione por lo menos otros tres sitios del organismo en donde los movimientos ciliares tengan un papel importante. 2. Cules son las acciones de la Ach sobre el tracto gastrointestinal? 3. Mencione 5 frmacos colinrgicos y 5 anticolinrgicos. 4. Con qu finalidad se usan la desrdenes gastrointestinales? 5. Mencione al menos 4 frmacos que no sean colinrgicos ni anticolinrgicos pero que se usen en el tratamiento de desrdenes gastrointestinales. 6. Explique el por qu del uso de drogas anticolinesterasa en la miastenia gravis. atropina y sus derivados en el tratamiento de

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Agradecimientos Agradecemos el apoyo del Biol. Exp. Mauro Lpez Armenta por la elaboracin de los dibujos y a la tambin Biol. Exp. Ana Anglica Chvez Miranda por su contribucin en la elaboracin del presente manual. Adems, nuestro ms sincero agradecimiento a todos los alumnos de la Licenciatura en Biologa Experimental que han cursado la U.U.E.E.A.A. de Farmacologa General por sus valiosas observaciones y aportaciones al presente Manual.

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