PONTIFCIA UNIVERSIDADE CATLICA DE GOIS PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM BIOCINCIAS FORENSES

Tcnicas de Biologia Molecular aplicadas na Investigao Forense

Carla Joara de Fraga Gaertner(1) Dr. Pedro Binsfeld(2)
1 Autora: Biloga. Estudante do Programa de Ps-Graduao em Biocincias Forense, pelo Instituto de Estudos Farmacuticos e Pontifcia Universidade Catlica de Gois. E-mail: carla.gaertner@gmail.com 2 Orientador: Docente do Programa de Ps-Graduao em Biocincias Forense, pela Pontifcia Universidade Catlica de Gois e Instituto de Estudos Farmacuticos, SHCGN 716 Bl. B Lj 05 Braslia-DF CEP: 70770-732. E-mail: pedro.binsfeld@terra.com.br

RESUMO Nos ltimos 20 anos a molcula de DNA tornou-se um elemento poderoso na identificao humana e investigao criminal. H vrias tcnicas de Biologia Molecular que so usados na investigao forense pela anlise de DNA, RNA ou protenas. O objetivo bsico do presente trabalho foi descrever as principais tcnicas moleculares utilizadas no Brasil para fins forenses. Para isso, recorreu-se a uma reviso de literatura atualizada das vrias tcnicas moleculares validadas e aceitas pela justia como prova. Observou-se que as tcnicas esto sendo aprimoradas continuamente e que no meio da investigao forense o uso de DNA est em grande ascendncia tanto para fins de investigao como pela justia. Isso demonstra a importncia e justifica os trabalhos que contribuem para aprimorar o desenvolvimento e difuso das tcnicas moleculares para fins forenses, disponibilizando as melhores e mais atualizadas ferramentas de trabalho, para que estes possam oferecer resultados da investigao precisos e seguros, e com isso, aprimora a investigao forense e o judicirio brasileiro. Palavras-chave: Gentica forense, marcadores de DNA, perfil de DNA, polimorfismo humano.

Molecular biology techniques applied to Forensic Investigation

ABSTRACT Over the past 20 years the DNA molecule has become a powerful element in human identification and criminal investigation. There are several techniques of molecular biology that are used in the analysis of forensic DNA, RNA or protein. The basic objective of this study was to describe the molecular techniques used for forensic purposes in Brazil. For this, we used a review of current literature of molecular techniques validated and accepted by the courts as evidence. It was noted that the techniques are being continually improved and that in the middle of the forensic use of DNA parentage is in great both for research purposes and for justice. This demonstrates the importance and justifies the work that contribute to improve the development and dissemination of molecular techniques for forensic purposes, providing the best and most current tools, to enable them to offer research results accurate and reliable, and thus, improves forensic investigation and the Brazilian judiciary.

Keywords: Forensic Genetic, DNA markers, DNA profile, human polymorphisms.

1. INTRODUO A biologia molecular tem como foco o estudo da estrutura e da funo do material gentico e de seus produtos de expresso que so as protenas. Ou seja, a funo da biologia molecular investigar as interaes entre os diversos sistemas celulares, incluindo a relao entre cido desoxirribonuclico (DNA), cido ribonuclico (RNA) e sntese protica. Seu campo de estudo abrange vrias reas da biologia e da qumica, podendo considerar-se a biologia molecular uma ligao entre a bioqumica e a gentica. A partir de meados dos anos 80, os avanos nas tcnicas de DNA propiciaram significativo impacto no campo da cincia forense, e foi pelas tcnicas de identificao, e anlise do DNA, que se verificou que esta era uma poderosa ferramenta para a identificao humana e para a investigao criminal (KOCH & ANDRADE, 2008). Em geral, na cena de crime encontram-se diversos tipos de vestgios biolgicos, que por meio dos testes de DNA podem tornar-se evidncias importantes, sendo inclusive possvel a identificao de suspeitos, excluindo tambm inocentes, cabendo ao perito identificar o tipo de amostra encontrada e qual melhor tcnica de identificao, sem esquecer que os exames devem ser realizados com a utilizao de mtodos cientficos e os laudos devem ser escritos em linguagem tica e juridicamente perfeita (DOREA et al. 2005). Segundo o legista Francisco Corte-Real do Instituto de Medicina Legal (INML-MS), esta rea do saber extremamente importante para ajudar a deslindar casos que, de outro modo, jamais seriam resolvidos (FELGUEIRAS, 2008). A caracterizao e manipulao dos componentes moleculares das clulas e organismos somente foi possvel, primeiro pela descoberta do ncleo celular e da sua composio qumica. E, segundo foi o conhecimento e a identificao do DNA como material gentico e suas propriedades qumicas e fsicas que permitiu avanos para identificao forense (DUCLOS, 2004). O reconhecimento de que era possvel definir marcadores moleculares que so nicos em cada indivduo, e com isso a identificao individual, torna esse processo muito interessante para fins forenses. Essa tcnica de identificao denomina-se de DNA fingerprint

ou de perfil de DNA e baseia-se no fato de que as pessoas so nicas e possuem marcadores no genoma que as diferencia dos demais e os nicos que so idnticos so os gmeos univitelinos (RUI, 2003/2004, KOCH & ANDRADE, 2008). Neste contexto, o presente trabalho apresenta um levantamento e descrio das principais tcnicas de biologia molecular utilizadas na investigao forense, considerando os benefcios e as limitaes destas tcnicas, assim como, entender a legislao que rege o uso das tcnicas moleculares na investigao forense.

2. METODOLOGIA O presente trabalho uma pesquisa qualitativa, de modalidade terica e com anlise da bibliografia formal, discursiva e concludente. O mtodo de abordagem indutivo foi escolhido como procedimento monogrfico, realizando o levantamento das publicaes em base de dados nacionais, com o objetivo de identificar as principais tcnicas moleculares utilizadas na investigao forense. Com este propsito foi efetuada uma reviso do acervo de documentos bibliogrficos, baseados em artigos cientficos e regulamentos disponveis nas bases de dados disponveis em bibliotecas virtuais e stios da rede mundial de computadores. A busca foi realizada no idioma portugus atravs de palavras chaves relacionadas com o trabalho em questo como, uso de tcnicas moleculares forenses. Sendo que, foram encontrados artigos em diferentes idiomas. Para reviso, considerou-se documentos publicados de 2001 a 2011. Este recorte temporal foi escolhido em funo da maior disponibilidade de bibliografia e o crescente avano que a investigao forense tem alcanado. O assunto abordado apresenta um nmero significativo de estudos, o que possibilitou elencar a eficincia e a limitao das diferentes tcnicas hoje utilizadas, descrevendo tambm o que prev a legislao.

3. RESULTADOS E DISCUSSO Na rea forense, as tcnicas de biologia molecular vm-se fortalecendo no transcorrer dos ltimos vinte e cinco anos (Figura 1). Isso em funo do desenvolvimento de tcnicas cada vez mais sofisticadas e em nmero cada vez maior. Esta evoluo somente foi possvel

pelo desenvolvimento e compreenso da biologia molecular e a descoberta de novas tcnicas e mtodos eficazes para a deteco do DNA humano para fins forenses. Um levantamento realizado no banco de dados PUBMED, usando os termos de pesquisa tcnicas de DNA para gentica forense em humanos (DNA techniques for human forensic genetic), realizado em maro de 2011, mostrou que em 1985, somente dois artigos mencionavam o uso de tcnicas de DNA em forense humana, enquanto que vinte e cinco anos depois, (em 2010) eram duzentos e oitenta e cinco artigos. Observa-se tambm que a cada cinco anos, praticamente o nmero de publicaes dobra em relao ao ano anterior. Esses resultados apontam para um consistente avano e desenvolvimento de novas tcnicas de investigao forense em humanos (Figura 1).

300 250 200 150 100 50 0 1985 1990 1995 2000 2005 2010

Nmero de Publicaes

Anos considerados

Figura 1. Resultado do levantamento do nmero de publicaes no banco de dados do PUBMED, relacionados s tcnicas de DNA para gentica forense em humanos (DNA techniques for human forensic genetic), realizado em maro de 2011.

Com o aprimoramento das tcnicas cada vez mais eficiente a recuperao de traos do material biolgico em cenas de desastres ou crimes. Esses traos contm evidncias de DNA que ajudam a identificar vtimas, suspeitos e exonerar inocentes. Pela importncia que a investigao forense vem adquirindo nos ltimos anos, as tcnicas e os mtodos de identificao de amostras tm se desenvolvido na mesma proporo. A frequncia de sua utilizao, exige cada vez mais estudos de desenvolvimento e aprimoramentos das tcnicas que utilizam DNA para fins forenses (AZEVEDO, 2009).

3.1. Procedimentos de coleta do material biolgico para fins forenses Amostras fsicas e biolgicas que no so coletadas, documentadas e preservadas de modo apropriado no permitem obter bons resultados ou no possuem valor cientfico em investigaes criminais (PARADELA et al., 2001). Para fins forenses o material biolgico (em especial o DNA) deve ser coletado, acondicionado e manipulado com critrios rgidos e restritos para que em anlises posteriores produza os resultados desejados e fidedignos. O mtodo de coleta depender do estado e condio das amostras, devendo-se coletar uma quantidade significativa. Considera-se tambm que as amostras de DNA podem sofre alteraes que afetam a cadeia de nucleotdeos, modificando assim sua composio e estrutura, o que impossibilita o uso da amostra. Para que isso no ocorra esta deve ser mantida em ambiente o mais frio e seco possvel, evitando que sua atividade biolgica no seja perdida (SILVA & PASSOS, 2006). Dado a grande importncia de coletar as amostras biolgicas em condies adequadas para fins forenses so necessrios materiais que alm de caros, so tambm importados, o que pode em determinadas circunstncias resultar em morosidade e dificuldade de acesso, da a importncia de preservar o material e us-lo adequadamente ao fim propostos. Assim, o prprio perito ou a sua instituio podem produzir um kit de materiais para coleta, que so facilmente encontrados. O kit de coleta e preservao deve ser usado somente para essa finalidade, evitando assim contaminao do material.(SILVA & PASSOS, 2006). Entre os principais materiais que compem o kit e que atendem as necessidades em quase todos os casos, tem-se: 1. Maleta destinada para transporte e armazenamento do material de coleta; 2. Suabe e/ou Cotonete (algodo ou dracon) utilizado na coleta de material lquido ou em manchas secas. Pode ser utilizado cotonete comercial; 3. gua destilada estril utilizada para umedecer o suabe (ou cotonete); 4. Pinas coleta de cabelo ou material slido; 5. Luvas descartveis (de procedimento); 6. Mscara cirrgica; 7. Touca cirrgica; 8. Envelopes transporte e armazenamento das amostras; 9. Seringas descartveis coleta de lquidos; 10. Coletor universal acondicionamento e transporte de amostras; 11. Tubos plsticos acondicionamento de transporte de amostras; 12. Esptula descartvel para coleta de amostras slidas; 13. Estilete (com lminas descartveis) efetuar cortes em tecidos, couro, etc.; 14. Bisturi (com lminas descartveis) efetuar pequenos cortes e raspagem de amostras secas;

15. Tesoura efetuar cortes em geral; 16. Palito de cutcula para coleta de amostras sob as unhas; 17. Algodo hidrfilo; 18. Fita adesiva coleta de amostras; 19. Papel (tipo ofcio/A4) coleta e acondicionamento de amostras; 20. Isopor (pedaos) fixar suabe ou cotonetes para secar e transportar; 21. Sacos plsticos transporte e armazenamento de amostras; 22. Sacos de papel - transporte e armazenamento de amostras; 23. Caixa para transporte de suabe; 24. Caixa de isopor pequena transporte das amostras (SILVA & PASSOS, 2006).

Para cada tipo de material biolgico com potencial uso forense, exige-se um tipo diferente de coleta. Quando se trata de fludos (sangue, esperma, saliva e outros), e este estive em estado lquido e em pequenas quantidades, dever ser coletado atravs de suabe estril. Se for em quantidade maior usa-se uma seringa descartvel estril. Se o fludo estiver seco e em pequenos objetos ou roupas, os mesmos devero ser encaminhados para anlise, se estiver em grandes objetos ou em superfcies de metal, paredes ou mveis, devero ser retirados utilizando-se bisturi ou esptula, ou ainda suabe umedecido com gua estril. Objetos que possam ser cortados utilizam-se tesoura e quando o fludo estiver em partes do corpo humano utilizam-se pinas para sua retirada (PARADELA et al., 2001). No caso do sangue lquido coletado recomenda-se que este seja preservado com anticoagulantes. Entretanto, deve-se atentar ao fato de que algumas das substncias empregadas podem afetar a Reao em Cadeia da Polimerase (do ingls, Polymerase Chain Reaction PCR), que uma etapa primordial em se tratando de anlise de DNA. O EDTA (do ingls, Ethylenediaminetetraacetic acid) pode ser usado, desde que em concentraes indicadas para este fim (AZEVEDO, 2009). No caso das amostras serem compostas de tecidos (osso, pele, sangue, unhas, etc), rgos, plos com bulbo capilar (raiz), estes devem ser documentados pela descrio ou fotografia. O material de coleta deve ser estril e cada item deve ser acondicionado separadamente, selado e identificado (SILVA & PASSOS, 2006). Para amostras de saliva, urina e outros fluidos corporais lquidos, estes devem ser envasados em recipientes neutros e estreis. Deve-se manter este material acondicionado a frio e na ausncia de luz (SILVA & PASSOS, 2006). Caso se trate de manchas de fluidos corporais (sangue, smen, saliva, etc), faze-se a documentao e em seguida coleta-se parte do material biolgico no qual este esteja aderido (por exemplo, lenol, vestes, etc.), ou quando se trata de objetos maiores ou metlicos coleta-

se com utenslios apropriados, acondicionado as amostras em recipientes neutros e estreis, tendo o cuidado de evitar contaminaes (SILVA & PASSOS, 2006). Todo procedimento de coleta de material biolgico para anlise deve considerar preceitos de biossegurana padronizadas pela legislao e pelos programas de acreditao laboratorial, visando a proteo pessoal do perito e evitando o que se denomina de erro humano. Aps a coleta e acondicionamento apropriado dos materiais, estes devem ser encaminhados laboratrio credenciado e preparado para anlise (SILVA & GONTIJO, 2010).

3.2. Principais marcadores moleculares utilizados para obteno de perfis genticos

Fluidos biolgicos como normalmente contm clulas, podem ser usados como fonte de DNA. As amostras mais comuns so: sangue, suor, plos, saliva, urina, smen, ossos, unhas, pele, fezes, entre outros (DOLINSKY & PEREIRA, 2006). Os principais marcadores moleculares podem ser agrupados em dois tipos: a) os de polimorfismos de comprimento e b) os de polimorfismos de seqncia (MUNIZ & SILVA, 2010). Os polimorfismos de comprimento incluem regies que se repetem no DNA genmico e so chamados de microssatlites (STRs) e minissatlites (VNTRs) sendo os mais estes os mais usados na atualidade. A investigao ser realizada atravs de sondas de DNA ou pela tcnica de PCR. Estes polimorfismos entre indivduos fundamenta-se pela diversidade e a variao do nmero de repeties entre os indivduos (DOLINSKY & PEREIRA, 2006). J os polimorfismos de seqncia constituem-se de diferentes nucleotdeos em uma determinada localizao no genoma, sendo que suas variaes podem ser manifestadas como regies de alelos alternativos, substituies, adies ou delees de bases (MUNIZ & SILVA, 2010). A grande diversidade nestas regies se d pelo nmero de repeties de uma dada seqncia de bases que varia entre indivduos, podendo ser de 1 a 4 bases nos STRs e de 10 a 100 bases nos VNTRs. Cada possibilidade de tamanho (ou de nmero de repeties) representa um alelo (DOLINSKY & PEREIRA, 2006). Os VNTRs (do ingls, Variable Number of Tandem Repeats) so seqncia curtas de bases que ocorrem em nmeros variveis dentro do grupo de repeties in tandem (MUNIZ & SILVA, 2010). O nmero de repeties encontradas, variam de um local para outro dentro do

genoma e tambm variam entre indivduos. Podendo assim ser diferenciados pelo comprimento de seqncia VNTR do DNA (DOLINSKY & PEREIRA, 2006). Os STRs (do ingls, Short Tandem Repeats) so nucleotdeos alinhados, em curtas repetidas, organizados em sequncia. Estes so trechos de DNA constitudos em unidades repetidas de dois, trs ou quatro nucleotdeos e localizados dentro de regies de seqncia nica com nmero menor do que 100 pares de nucleotdeos (MUNIZ & SILVA, 2010). Cada regio genmica que contm determinado nmero de repeties de uma sequncia constitui um loco gentico, que varia entre os indivduos e tambm multiallico. (DOLINSKY & PEREIRA, 2006). O que difere entre os VNTRs dos STRs o tamanho, ou seja o nmero de bases, sendo que os STRs contm poucos pares de bases. Esta caracterstica permite que seja analisada quantidades mnimas de DNA, enquanto que para a anlise dos VNTRs necessrio maior quantidade e qualidade do DNA, sendo por isso, mais utilizado para investigao forense quando s se encontra vestgios de DNA (MUNIZ & SILVA, 2010). O polimorfismo de base nica SNPs (do ingls, Single Nucleotide Polymorphism) o mtodo mais eficiente de marcadores moleculares para fins de investigao e identificao de um indivduo por meio de DNA. Estes apresentam estabilidade maior comparado os outros mtodos. Entre as caractersticas tem-se uma classe mais geral de polimorfismos e distribudo de forma uniforme por todo o genoma. Alm de ser o polimorfismo mais comum encontrado no genoma. Possui variaes em apenas uma base em cada seqncia de DNA, ocorrendo perto de uma vez a cada 1.350 pb no genoma humano (MUNIZ & SILVA, 2010). Os marcadores SNPs tm como base as alteraes mais elementares da molcula de DNA que so as mutaes em bases nicas de cadeia polinucleitdica (adenina, citosina, timina e guanina). So encontrados apenas duas variantes em uma espcie (bi-allicos), podendo ocorrer em regies codificadas ou regulatrias, sendo, na maioria das vezes, encontrados nos espaos intergnicos, sem funo determinada (MUNIZ & SILVA, 2010). O marcador de DNA Mitocondrial (DNAmit) utilizado quando o material biolgico est muito danificado ou quando no possvel extrair DNA nuclear. Essa tcnica consiste no sequenciamento de determinadas regies de DNAmit, que variam de uma pessoa para outra e que so transmitidas pelas mes para os filhos. O DNAmit est presente em todas as clulas, tendo assim menor risco de degradao em relao ao DNA nuclear (SANTOS & SANTANA & ALVES, 2005). J do pai herda-se o Cromossomo Y onde existem trs regies distintas. Duas regies so homlogas ao cromossomo X e podem sofrer recombinao. No entanto, h uma parte do

cromossomo Y que exclusiva e que no sofre recombinao. Mutaes nessa regio podem ocorrer, mas um evento raro. Sendo assim indivduos masculinos de uma mesma famlia apresentam o mesmo padro de DNA nessa regio do cromossomo Y, enquanto indivduos no relacionados geneticamente apresentam padres diferentes (LIMA, 2006).

3.3. Principais tcnicas de biologia molecular usadas na investigao forense Aps a extrao do DNA presente na amostra colhida, segue-se a anlise dos polimorfismos genticos. Nos ltimos anos foram desenvolvidas diversas tcnicas para estudo de diferentes tipos de polimorfismos de DNA, cabendo ao perito responsvel pela anlise, escolher o mtodo mais adequado para solucionar o problema em questo (DOLINSKY & PEREIRA, 2007). Uma tcnica muito utilizada para visualizao e separao de molculas de DNA a eletroforese. Esta tcnica separa molculas de DNA de acordo com o tamanho (massa), forma e compactao. O DNA migra, em gis de agarose ou acrilamida (que funciona como um suporte), por uma corrente eltrica, que varia em diferentes perfis eletroforticos, que dependem do seu tamanho e forma. Como so de carga negativa, quando submetidas ao campo eltrico, as molculas de DNA, migram para o plo positivo, existindo assim o atrito com o suporte. Quanto maior a molcula, maior o atrito e mais lenta a migrao, portanto, molculas de tamanhos diferentes tero migrado uma distncia diferente depois de algum tempo (KOCH & ANDRADE, 2008). A distncia que o fragmento percorreu a partir do ponto de aplicao comparada com a distncia que outros fragmentos conhecidos percorrem no mesmo gel (VIEIRA, 2006). Na presena de compostos intercalantes, como o Brometo de Etdio (EtBr), o DNA emite fluorescncia por exposio luz ultra violeta (UV), com isso as molculas que tiveram o mesmo tamanho sero visualizadas num mesmo ponto do gel, formando assim uma faixa fluorescente. Se existirem tamanhos diferentes de molculas, estas sero separadas na migrao e ficaro visveis em diferentes localizaes do gel (KOCH & ANDRADE, 2008). As molculas de menor massa molecular tm maior facilidade em migrar atravs da malha do gel ficando mais prximas do catodo, enquanto as molculas de maior massa molecular tero maior dificuldade e posicionam-se mais prximas do nodo (MUNIZ & SILVA, 2010).

Apesar de ser uma tcnica muito verstil e apresentar baixa dificuldade de realizao sua nica desvantagem que a identificao dos fragmentos feita somente quanto ao tamanho e no quanto seqncia (KOCH & ANDRADE, 2008). Para se identificar o DNA com uma seqncia de bases especificas usa-se uma tcnica chamada Shouthern Blotting. Utilizando a capacidade que tem a nitrocelulose de ligar-se com fora ao DNA fita simples, mas no fita dupla, ento o gel recoberto por uma membrana de nitrocelulose. Assim, as molculas que esto no gel so foradas a deslocar-se para a nitrocelulose por capilaridade que retira o lquido usando um papel absorvente pelo outro lado da nitrocelulose, ou seja, como as sondas no se difundem no gel original, os fragmentos de restries presentes no gel de nitrocelulose ou de nylon por capilaridade (KOCH & ANDRADE, 2008). Com isso, a membrana ento incubada em condies de hibridao com uma sonda especfica marcada por radioatividade, obtida a partir de um fragmento de restrio clonado (MUNIZ & SILVA, 2010). A tcnica de Shouthern Blotting pode ser utilizada na identificao de polimorfismos que determinam a alterao do padro de clivagem (devido a mutaes pontuais em stios de restrio) obtido a partir de uma determinada regio do DNA (do ingls, Restriction fragment length polymorphism RFLP) (KOCH & ANDRADE, 2008). Os diferentes padres so detectados utilizando-se a prpria regio potencialmente polimrfica como sonda. Padres de RFLP obtidos com uma determinada sonda podem ser utilizados no estabelecimento de impresso digital de DNA, que permite a diferenciao entre dois indivduos distintos (DOLINSKY & PEREIRA, 2007). A reao de PCR uma tcnica qualitativa bem simples onde molculas de DNA ou DNA complementar so amplificadas milhares de vezes de uma forma bastante rpida (DOLINSKY & PEREIRA, 2007). O mtodo programado para permitir a amplificao de sequncias-alvo de DNA definidas, presentes em uma preparao de DNA. Para que tal amplificao seja possvel, precisa-se de algumas informaes previas a respeito das sequncias-alvo, que sero utilizadas para desenhar dois oligonucleotdeos iniciadores, denominados primers, e que so especficos para a sequncias-alvo apresentando cerca de 15 a 25 nucleotdeos de extenso (KOCH & ANDRADE, 2008). Esta uma tcnica com grande aplicabilidade e especificidade. Uma reao de PCR contm em torno de 30 ciclos de amplificao, sendo que cada um destes ciclos constitudo pelas etapas de desnaturao, pareamento e sntese, nessa ordem, durando em media 3 a 5 minutos em um termociclador automatizado, totalizando menos de trs horas para todo o processo (MUNIZ & SILVA, 2010). Essa velocidade e facilidade so uma das vantagens da

PCR. Sua desvantagem de que se houver DNA contaminante estiver presente em nveis comparveis aos do DNA alvo, sua amplificao pode confundir a interpretao dos resultados, o que leva a uma concluso errada (KOCH & ANDRADE, 2008). Na rea forense a sensibilidade do PCR possibilita a utilizao de pequenas amostras como saliva em filtros de cigarro ou fios de cabelo, permitindo uma comparao com outras amostras j coletadas (MUNIZ & SILVA, 2010). A identificao pelo DNA uma das principais ferramentas do sistema judicirio, pois estabelece laos de parentesco e identifica individualmente as pessoas, sendo que essa identificao fundamentada no conjunto de caractersticas hereditrias que um indivduo possui para um determinado nmero de marcadores genticos (MUNIZ & SILVA, 2010).

3.4. Eficincia e Limitaes das tcnicas de biologia molecular para fim forense A eficincia do DNA sobre a sorologia tradicional reside na possibilidade de sua aplicao sobre qualquer fonte de material biolgico. Uma ampla variedade de tecidos ou lquidos corporais so frequentemente encontrado nas cenas de crimes ou acidentes. Enquanto que testes sorolgicos podem ser realizados somente no sangue e no em outros tecidos ou lquidos corporais, estudos com DNA permitem qualquer quantidade trao de qualquer material biolgico, incluindo o sangue, plos, smen, ossos, tecidos diversos, clulas encontradas na saliva, na urina ou em outros fluidos corporais podes ser analisados para associar para a identificao de um indivduo (MUNIZ & SILVA, 2010). A eficincia com a qual um exame de DNA discriminatrio pode ser considerada como uma das mais importantes caractersticas e responsvel pela ampliao da adoo destas tcnicas para fins forenses. Enquanto a sorologia usando o grupo sangneo ABO, tem capacidade de discriminar aproximadamente um em trs indivduos na populao geral, com o DNA esta capacidade discriminatria pode ser de um indivduo entre o universo de bilhes (KOCH & ANDRADE, 2008). Testes de DNA se tornam eficientes por estarem associados a grande sensibilidade dos exames de DNA. Alm disso, o DNA uma molcula robusta, relativamente resistente aos fatores ambientais, cidos, lcalis e detergentes, diferentemente dos determinantes proticos, lipdicos e carboidratos. Ainda a determinao do polimorfismo do DNA por meio de PCR pode ser efetuada com o DNA de algumas poucas clulas, superando em muito a sensibilidade dos exames tradicionais (DOLINSKY & PEREIRA, 2007).

O uso do DNA para fins forenses, no ir por si s provar a culpabilidade ou inocncia de criminosos, mas ir relacion-lo com a cena do crime. Aceita em processos judiciais por todo o mundo, o uso das tcnicas de biologia molecular na rea forense de grande valia, pois podem ser utilizadas em quase todos os tipos de investigao tais como: crime sexual, identificao de cadveres carbonizados, mutilados ou em decomposio, relao entre instrumento lesivo e vtima, entre outros (DOLINSKY & PEREIRA, 2007). Seus resultados so imediatos e no coloca em dvida, quando coletados e analisados corretamente, a veracidade de seus resultados (MACIEL & ARANTES, 2010). Apesar de grande eficincia os exames em DNA, estes apresentam certas limitaes no que diz respeito s peculiaridades da anlise. Com frequncia, vestgio de outros materiais biolgicos ou impurezas colhidas com as amostras biolgicas, como por exemplo, fragmentos de tecidos coloridos, inibem a reao de PCR (KOCH & ANDRADE, 2008) ou produzem reaes cruzadas. Outras limitaes que as tcnicas baseadas em DNA enfrentam so a falta de padronizao dos mtodos de anlise, falta de banco de dados de DNA, com informaes genticas de criminosos e desaparecidos. Outra limitao, para uma ampla aplicao destas tcnicas a alta dependncia de produtos importados, o que onera e limita o acesso aos vrios laboratrios de forense, implicando em morosidade na obteno dos resultados (SILVA & GONTIJO, 2010).

3.5. Legislao relativa ao uso de tcnicas moleculares na investigao forense

O avano da tecnologia da biologia molecular para fins de anlise forense, no tem tido o mesmo respaldo correspondente no avano da legislao, ou seja, as novas tecnologias genticas tm promovido conflitos e dvidas no mbito jurdico. Pois, enquanto a gentica avana rapidamente, o sistema judicirio e a legislao em todo mundo anda a passos mais lentos. Nos EUA, por exemplo, embora as reivindicaes sejam antigas, somente em 2005 o senado aprovou um projeto de lei proibindo a discriminao com base em informaes genticas. O Brasil ainda no possui uma legislao especfica para anlise e uso dos dados genticos para fins forenses e o estabelecimento de bancos de perfis genticos. Entretanto, h normas que tratam de provas periciais e as condies para que estas sejam aceitas devem cumprir uma sria de requisitos, ser conduzida de maneira idnea e seguir protocolos especficos que garantam sua qualidade e legitimidade (SILVA & GONTIJO, 2010).

No Brasil, o Cdigo do Processo Penal (CPP) explica que a prova pericial deve ser conduzido da seguinte maneira: Art. 158. Quando a infrao deixar vestgios ser indispensvel o exame de corpo de delito, direto ou indireto, no podendo supri-lo a confisso do acusado. Art. 159. O exame de corpo de delito e outras percias sero realizados por perito oficial, portador de diploma de curso superior. Quanto aos exames conduzidos em laboratrio o CPP estabelece em seu Art. 170 que: Nas percias de laboratrio, os peritos guardaro material suficiente para eventualidade de nova percia. Sempre que conveniente, os laudos sero ilustrados com provas fotogrficas, ou microfotogrficas, desenhos ou esquemas. Como j referenciado, a ausncia de uma legislao especfica capaz de padronizar os procedimentos de anlise de amostras de DNA e o uso das tcnicas moleculares, gera ainda inmeros problemas, j que os laboratrios so relativamente novos e no h padres definidos ou rgo responsvel pela certificao, fiscalizao e regulao dos laboratrios forenses (SILVA & GONTIJO, 2010). Neste sentido, sugere-se s autoridades do executivo e legislativo brasileiro de que urgente a definio de um marco regulatrio sobre os procedimentos a serem adotados para a coleta de material gentico e definir os casos em que a obteno deste material seja obrigatria. Pois em muitas situaes a legislao atual protege o infrator e detrimento das vtimas, uma vez que h dificuldades para obtermos o DNA de suspeitos, pois a lei os protege quanto a doar amostras. Deve definir tambm quanto ao uso dos dados e proteo da intimidade e privacidade de dados pessoais, j que este aspecto tem proteo constitucional. Como se verifica este um tema de alta relevncia e recheado de pontos sensveis que merecem ampla discusso no s no legislativo, judicirio e executivo, mas, sobretudo pela sociedade como um todo.

4. CONSIDERAES FINAIS

Nos ltimos anos houve um grande crescimento da investigao forense no Brasil, assim como, enormes avanos relacionados s tcnicas de biologia molecular usada em laboratrio. As tcnicas de identificao baseadas no DNA so consideradas a maior revoluo da esfera criminal, pois tem duas vantagens fundamentais: a estabilidade qumica do DNA e sua ocorrncia em todas as clulas nucleadas dos organismos humanos. As

amostras mais frequentemente usadas so sangue, smen, pelos e objetos com saliva; restos cadavricos, amostras de msculos, ossos, polpa dentaria, entre outros. Dessas amostras so extradas as clulas que contm o DNA com as quais se realiza os testes de DNA. O estudo das regies polimrficas do DNA possibilita construir um perfil-individuo especifico com alto poder de discriminao, levando a resoluo de inmeros casos nos quais se tem a necessidade de identificao individual, vnculos genticos e crimes pela conexo entre suspeitos e locais de crimes. Para que a identificao atravs do DNA tenha veracidade inquestionvel e principalmente seja aceita como prova pericial imprescindvel que se tenha cuidados na hora da coleta das amostras, do processamento e da anlise do DNA. Tambm fundamental que os laboratrios que realizam os testes em DNA passem por credenciamento e testes de qualificao, uma vez que est em jogo a liberdade de um inocente e a sentena para o autor do delito. Ao perito cabe um papel fundamental em todo o processo, desde a coleta do vestgio biolgico at a apresentao do laudo pericial. Por esse motivo, necessrio que o mesmo esteja sempre atualizado no que se refere s novas tcnicas e novas metodologias forenses. do perito a principal responsabilidade no resultado apresentado, e assim sendo extremamente importante que se evite o famoso erro humano. E por fim, cabe considerar a importncia da incorporao de metodologias to contundentes quanto robustas em especial nos casos de crimes nos quais os tribunais certamente reconhecero que as evidncias de DNA so mais confiveis do que as testemunhas oculares e outras provas subjetivas menos poderosas. Entretanto, torna-se imperativo a garantia dos direitos individuais e a regulamentao dos procedimentos de acesso e uso das informaes contidas no genoma humano ao mesmo tempo em que se reconhece a necessidade de incorporao de novas tecnologias para fins forenses.

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