ADN LAMBDA

LECCIN 1. ENZIMAS DE RESTRICCIN. UN PAR DE CUESTIONES TRABAJANDO CON LOS DATOS DE LAS BASES DE DATOS MOLECULARES.

1- Localiza las secuencias palindrmicas de corte de las enzimas EcoRI (GAATTC/CTTAAG), HindIII (AAGCTT/TTCGAA) e PstI (CTGCAG/GACGTC). Cuantos fragmentos se espera que produzcan los ataques sobre el genoma completo del fago lambda con cada uno de estos enzimas? EcoRi: producir 8 cortes Hindll: producir 13 fragmentos Pstl: producir 29 fragmentos 2- Cuantos pares de bases tienen cada uno de estos fragmentos? Si no eres capaz de resolver esta pregunta en la pgina del NCBI, puedes usar el geneboy (http://www.dnai.org/geneboy/) para resolver esta cuestin. EcoRi: Fragmento 1- 6545 Fragmento 2- 6078 Fragmento 3- 8604 Fragmento 4- 4878 Fragmento5- 5643 Fragmento 6- 7421 Fragmento 7- 3464 Fragmento 8- 2342 Hindll: Fragmento1 -18053 Fragmento 4 -731 Fragmento 7 -1170 Fragmento 10 -2560 Fragmento 13 -1500 Fragmento 2 -5078 Fragmento 5 -1590 Fragmento 8 -1246 Fragmento11 -564 Fragmento 3 -2027 Fragmento6 -506 Fragmento 9 -3935 Fragmento12 -5182

Pstl: Fragmento 1 -2560 Fragmento 4 -15 Fragmento 7 -339 Fragmento 10 -18 Fragmento 13 -2838 Fragmento 16 -164 Fragmento 19 -72 Fragmento 22 -590 Fragmento 25 -1159 Fragmento 28 -2140 Fragmento 31 -2972 Fragmento 34 -3802 Fragmento 37 -3316 Fragmento 2 -264 Fragmento 3 -805 Fragmento 5 -216 Fragmento 6 -514 Fragmento 8 -200 Fragmento 9 -193 Fragmento 11 -94 Fragmento 12 -468 Fragmento 14 -871 Fragmento 15 -222 Fragmento 17 - 1463 Fragmento 18 -523 Fragmento 20 -2459 Fragmento 21 -87 Fragmento 23 -1110 Fragmento 24 -150 Fragmento 26 -2443 Fragmento 27 -448 Fragmento 29 -4507 Fragmento 30 -2105 Fragmento 32 -247 Fragmento 33 -4749 Fragmento 35 -307 Fragmento 36 -1134 Fragmento 38 -29

UNAS CUESTIONES SOBRE EL REALIZADO EN EL LABORATORIO.

1- Describe el aspecto macroscpico del ADN en disolucin. Es visible el ADN? (Puedes tomar como referencia para comparar lo que viste en la prctica gentica a domicilio). Si piensas que hay alguna diferencia entre las dos observaciones, a que se puede deber? El ADN s es visible macroscpicamente, ya que cuando hicimos la prctica de la extraccin casera del ADN podamos observar a simple vista unas hebras blanquecinas, que eran las hebras de ADN. En cambio, en la prctica realizada en el laboratorio, al usar cantidades muy pequeas, el ADN no se poda observar a simple vista, pero s tras la electroforesis, que hace que podamos ver el ADN fragmentndolo y tindolo. 2- Rellena la tabla siguiente cos los volmenes usados en la prctica. Tubo P E H L Lambda 4 L 4 L 4 L 4 L Tampn 5 L 5 L 5 L 6 L PstI 1 L EcoRI 1 L 1 L Hindlll

3- En que tubo piensas que no va a haber cambios, que no se van a producir fragmentos de restriccin del ADN? En el tubo L, ya que no aadimos enzima de restriccin. Solo echamos ADN, tampn de carga y colorante. 4- Compara el tubo P y el tubo L, qu piensas que pasar en el tubo P comparado con el tubo L? Justifica la respuesta. En el tubo L no hay encima de restriccin, por lo que no habr fragmentacin de restriccin de ADN, en cambio en el tubo P s observaremos fragmentacin de restriccin del ADN ya que aadimos 1 L de enzima de restriccin PstI. 5- Se el ADN apareciese fragmentado al final de la reaccin en el tubo L, que tendramos que concluir? El tubo L, al no tener enzima de restriccin, no debera aparecer fragmentado el ADN. Si esto ocurriese, podra deberse a que el ADN tendra ya incorporado enzima de restriccin. LECCIN 2. ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA. 1- Indica cual ser el ordenamiento relativo de los fragmentos de ADN segn su tamao, dentro del gel de agarosa. Indica cual es ese orden. Los fragmentos de ADN se ordenan en el gel de agarosa segn su masa molecular, es decir, cuanto menor sea su masa mayor ser su desplazamiento y cuanto mayor sea su masa menor ser su desplazamiento. Tambin influye el tamao de la cadena de ADN ya que cuanto mayor sea este, mayor masa tiene y consecuentemente menor ser su desplazamiento. 2- Suponiendo que tendramos 500 pequeos trozos de cada uno de los cuatro fragmentos despus de un tratamiento con enzimas de restriccin, cuantas bandas apareceran en el gel de agarosa? Aparecen cuatro bandas 3- Rellena la siguiente tabla con los datos obtenidos en la prctica:
M Banda1 Banda2 Banda3 Banda4 Banda5 Banda6 L PstI EcoRI Hindlll pb 13128 21572 23794

mm pb mm pb mm pb mm pb mm 16 23130 18 8188 19 7529 11 14188 12 17 9416 11 14188 21 6310 6 20 6557 17 8884 8 18068 5 23,5 4361 29 2322 31 2027 mm= distancia en mm; pb= nmero de pares de bases do fragmento

LECCIN 3. CMO SE HACE PARA CONVERTIR EN VISIBLE EL ADN MIGRADO EN UN GEL DE AGAROSA. 1- Indica la utilidad del tampn de carga de la tincin Fast Blast. El tampn de carga y la tincin de Fast Blast se emplea para facilitar el pinchazo en el gel de agarosa y posteriormente poder monitorizar los resultados y poder realizar la lectura.