Mezcla doble de oxalatos de Paul y Heller: (Mezcla de Wintrobe).

La mezcla se prepara en una solucin acuosa segn la siguiente frmula: Oxalato de amonio C204(NH4)2 + H2O.......................... 1,2 g Oxalato de potasio C2O4K2 + H2O.............................. 0,8 g Formol............................................................................ 0,5 ml Agua destilada c.s.p....................................................... 100 ml 0,5 ml de esta solucin se pipetea en tubos de ensayo 13 x 100 u otro recipiente adecuado luego se secan a la estufa a una temperatura de 37 a 40 C, para que el agua evapore, quedando en el fondo de los tubos, cristales filamentosos blancos secos, que no producen dilucin de la muestra de sangre. Su mecanismo de accin consiste en la remocin de los iones de calcio de la sangre formando sales insolubles. Se utiliza este anticoagulante respecto a la muestra de sangre es 0,1 ml por cada ml de sangre. Sales EDTA La sal dipotsica se consigue comercialmente como Versenato Potsico y la sal sdica (Dihidroacetato sdico de etilendiamina) como Secuestreno. Las sales sdicas y potsicas de etilendiaminotetractico actan como anticoagulante formando sales insolubles de calcio o inhibiendo al factor V (lbil) de la coagulacin. Tanto la sal sdica como la dipotsica pueden ser usadas, pero se recomienda ms sta ltima por ser ms soluble. Se usa en una concentracin de 1 2 mg/ml de sangre. Citrato de Sodio 3,8 % (Na3 C6H507): El citrato soluble acta como anticoagulante al combinarse con el calcio para formar sales insolubles de calcio. En el laboratorio se utiliza en pruebas de coagulacin en una proporcin de 1 parte de anticoagulante para 9 partes de sangre (1/9) y en la realizacin de la V.S.G. por el mtodo de Westergreen, en una proporcin de 1 parte de anticoagulante para 4 partes de sangre (1/4). Heparina: La heparina es un anticoagulante fisiolgico producido por las clulas cebadas o mastocitos del tejido conectivo, por lo que existe en diversos rganos, tambin se encuentra en la sangre en una concentracin de 1 2 mg / litro. Oxalato de Sodio 0,1 M (1,34 %). El mecanismo de accin de este anticoagulante consiste en la remocin del calcio inico de la sangre formando sales insolubles. Se utiliza en pruebas de coagulacin en una proporcin de 1 parte anticoagulante para 9 partes de sangre. Este anticoagulante no es un buen conservador de los factores lbiles V y VIII de la coagulacin. En el frotis sanguneo as realizado, se diferencian tres zonas: -Cabeza o zona inicial del extendido, que es la zona mas gruesa donde estaba colocada la gota de sangre y donde se encuentra una mayor proporcin de linfocitos

-Cuerpo o zona intermedia, la mayor parte de la extensin donde existe una adecuada proporcin de los leucocitos, es la zona ideal para realizar el recuento diferencial leucocitario por que los hemates estn separados y los leucocitos de los diferentes tipos estn en una proporcin adecuada. -Cola o zona fina que se corresponde con el final y deshilachada de la extensin, donde hay un aumento proporcional de neutrfilos y monocitos. En esta zona las plaquetas suelen ser abundantes y los hemates estn deformes.

Los glbulos rojos inmaduros, no nucleados recin salidos de la mdula, tienen todava pequeas cantidades residuales de cido ribonucleico, que es un material basoflico. En condiciones normales permanecen en la mdula 2 3 dias y terminan su maduracin en 24 horas, aproximadamente, una vez ya en la sangre perifrica
Azul de Cresil Brillante: Muestra: Sangre venosa fresca con anticoagulante o sangre capilar Reactivo: Solucin alcohlica de azul de cresil brillante al 2% Azul de Cresil Brillante ............................. 2 g Alcohol metlico......................................... 100 cc Consrvese en frasco oscuro bien tapado Tcnica: 1) Prepare de antemano, lminas portaobjeto con Azul de Cresil Brillante, de la siguiente forma: a) b) Limpie, desgrase y pula cuidadosamente lminas portaobjetos Coloque en el centro de una lmina, una gota de solucin de Azul de Cresil Brillante e inmediatamente coloque una lmina, sin que coincidan sus extremos. La solucin se extender entre ambas lminas por capilaridad. Deslcelas para separarlas. c) Invierta las lminas sobre una hoja de papel bond y rtelas suavemente para eliminar partculas de colorante. Consrvelas en una caja, listas para su uso. 2) Coloque sobre una laminilla, una gota pequea de sangre venosa fresca o una gota de sangre capilar e invierta sta sobre una lmina coloreada con Azul de Cresil

Brillante. La sangre se extender entre lmina y laminilla por capilaridad. Puede ayudar con una ligera presin para que la sangre se extienda completamente en una delgada pelcula. 3) Espere de 10 a 15 minutos. 4) Observe la preparacin al microscopio con objetivo de inmersin, contando los reticulocitos que se observan en 1.000 glbulos rojos consecutivos. Nuevo Azul de Metileno: Esta tcnica tiene la ventaja de que los contajes pueden realizarse en cualquier momento despus de hacer la preparacin. indefinidamente. Muestra: Sangre venosa fresca o sangre capilar. Reactivo: Solucin colorante Nuevo Azul de Metileno......................... 0,1 g Oxalato de potasio................................. 1,6 g Agua destilada ...................................... 100 cc El oxalato de potasio sirve tanto para evitar la coagulacin como para hacer isotnica la solucin. Tcnica: a) Valindose de un tubo capilar, llene aproximadamente iguales volmenes de la sangre fresca y de la solucin colorante. b) Coloque en un tubo de ensayo, mezcle bien. c) Deje la mezcla en el tubo por 8 a 10 minutos. Si se deja ms tiempo la puede secar en el tubo. d) Coloque una gota sobre una laminilla, practicando un extendido fino en la forma usual. e) Seque al aire. f) Monte la laminilla sobre una lmina con Blsamo de Canad. nmero de reticulocitos que observa en 1000 glbulos rojos consecutivos. h) Exprese el resultado en porcentaje. g) Examine la preparacin al microscopio con objetivo de inmersin, cuente el mezcla, se Si se desea, las preparaciones se pueden conservar

Los glbulos rojos se colorean suavemente de color verde azulado, los reticulocitos destacan claramente de color azul intenso. Otro mtodo utilizado para el contaje de reticulocitos es aquel que utiliza el microscopio de fluorescencia. Para ello, se agregan 10 volmenes de solucin de acridina orange (10 mg/100 ml de NaCl al 0,9%) a 1 volumen de sangre. El ARN d una fluorescencia rojo anaranjada, mientras que el material nuclear (ADN) se colorea de amarillo. Valores normales: Adultos y nios: ................................... 0,5 - 1,5 % Recien Nacidos. 2,5 - 6,5 %