UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA UNIDAD XOCHIMILCO DIVISIN DE CIENCIAS BIOLGICAS Y DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE SISTEMAS BOLGICOS QUMICO FARMACUTICO BILOGO

INFORME DE ACTIVIDADES DEL SERVICIO SOCIAL Actividad insecticida del extracto clorofrmico de Carica papaya L (CARICACEAE) contra Spodoptera frugiperda Smith (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE)

Alumno: Diana Elizabeth Martnez Gonzlez Matricula: 205246378

Asesores: Dra. Ma. Salud Prez Gutirrez. M. en C. Miguel ngel Ramos Lpez.

Lugar de realizacin: Universidad Autnoma Metropolitana Unidad Xochimilco. Laboratorio G-304. Fecha de inicio y terminacin: 22 de Mayo de 2009 al 11 de Diciembre de 2009 Abril, 2010

INDICE

INTRODUCCION La agricultura enfrenta graves prdidas ocasionadas por plagas, tales como insectos, los cuales han ido adquiriendo resistencia a los insecticidas obtenidos por sntesis orgnica empleados para su control debido al uso indiscriminado de ellos, repercutiendo directamente en el costo para el productor. La primera reaccin del agricultor cuando un insecticida pierde su efectividad es incrementar la cantidad y la frecuencia de aplicacin, lo que trae como resultado el aumento del costo directo en e l control de plagas y adems se incrementan los niveles de resistencia (Morillo y Notz, 2001).

La mayora de las sustancias qumicas sintticas que se han comercializado como insecticidas son hidrocarburos halogenados que afectan directamente al medio ambiente, adems la mayora de ellos son txicos por lo que es conveniente buscar nuevas alternativas y una de ellas son los insecticidas de origen natural

El empleo de productos de origen vegetal, tiene diversas ventajas, debido a que las plantas contienen una gran cantidad de substancias qumicas conocidas como

metabolitos secundarios (Franco et al., 2006), dentro de los cuales se encuentra un amplio grupo denominado aleloqumicos y se han dividido, por su forma de interactuar con insectos y otras especies herbvoras en Alomonas, Kairomonas y Sinomonas, (Dicke y Sabbelis, 1988). Las propiedades qumicas de las plantas pueden ser utilizada para controlar la plaga de Spodoptera frugiperda (Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) conocida comnmente como gusano cogollero del maz que ataca diversas plantas silvestres y cultivadas como el maz, la alfalfa, el frijol, papa, sorgo, soya, cebolla y tomate de cscara, ocasionando prdidas de 40-60% del cultivo en Mxico (Franco et al., 2006).
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Al considerar el empleo de productos de origen vegetal como alternativa para contrarrestar la prdida de cultivos ocasionados por plagas, se debe tener en cuenta que el empleo de extractos vegetales ha sido documentado desde la antigedad y que mantiene su popularidad por razones histricas y culturales, pero aun as se reconoce la necesidad de obtener ms informacin cientfica sobre el tema. Por lo que es necesario desarrollar investigacin, comunicacin, regularizacin y estandarizacin en cuanto a extractos de plantas con propiedades insecticidas. (Senz, 2003).

En esta investigacin, se evalu la actividad insecticida del extracto clorofrmico de semillas de Carica papaya (Caricaceae), de sus fracciones activas, y de los cidos grasos mayoritarios que conforman al extracto clorofrmico contra S. frugiperda

MARCO TEORICO Uso de plantas como insecticida. Los plaguicidas pueden ser clasificados de acuerdo al tipo de organismo contra el que es efectivo, pueden ser fungicidas, herbicidas, insecticidas, molusquicidas, nematicidas. (Evans, 2002)

Considerando que un insecticida es un producto que sirve para matar insectos (Diccionario de la Real Academia Espaola, 2001), y que es capaz de eliminar por lo menos el 50% de una poblacin de insectos que se considera como plaga. La mayora de estos compuestos orgnicos, son de origen sinttico, y algunos son extrados de plantas, por lo que se conocen como insecticidas botnicos (CICOPLAFEST, 1993).

El uso de insecticidas botnicos que es muy importante en el manejo de insectos plaga, el cual se remonta al menos dos milenios en la antigua China, Egipto, Grecia y la India, incluso en Europa y America del Norte (Isman, 1997). Por lo que las especies vegetales siguen, considerndose como fuente importante de sustancias qumicas naturales con menor impacto ambiental, y con amplio potencial en el manejo de plagas de insectos (Kubo y Hanke, 1985; Berenbaum et al., 1991; Berenbaum y Zangerl, 1993).

Las plantas al principio fueron utilizadas como polvos o extractos y posteriormente solo se exploraron las especies que presentaban molculas con fcil arreglo qumico y con potencial txico, dejando a un lado las molculas comp lejas, no efectivas en mortalidad, poca especificidad y altamente degradables (Rodrguez et al., 1982). En conjunto existen ms de 100 000 metabolitos secundarios conocidos. Entre ellos se encuentran terpenos, lignanos, alcaloides, esteroides, cidos grasos, etc., esta diversidad qumica es
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consecuencia del proceso evolutivo que ha llevado a la seleccin de especies con mejores defensas contra el ataque microbiano, herbvora por parte de insectos y otros animales (Dixon, 2001).

Adebowale y Adedire (2006) comprobaron la actividad insecticida que presenta el extracto CHCl3 de las semillas de Jatropha curcas (Euphorbiaceae) contra

Callosobruchus maculatus (Coleoptera: Bruchidae), evaluaron la composicin qumica mediante cromatografa de gases, encontrando que el extracto de las semillas de J. curcas contena cido palmtico, cido esterico, cido linoleico, entre otros, mostrando un mayor porcentaje de cido linoleico.

Origen y Clasificacion de Carica papaya. Es de origen centroamericano y de ah se distribuy a otros lugares del mundo en los aos que siguieron al descubrimiento y conquista de Amrica por los espaoles (Alonso, 1952), otros autores son ms especficos mencionando que es originaria de Mxico hasta Panam, se distribuye en zonas tropicales y subtropicales a altitudes que van desde el nivel del mar hasta por encima de los 2400 msnm. (Canini, 2007). De acuerdo a Baraona y Sancho 1991 la taxonoma de C. papaya se considera de la siguiente manera. Reyno: Plantae Division: Spermatophyta Subdivision: Magnoliophytina Clase: Magnoliatae Orden: Violales Familia: Caricaceae
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Gnero: Carica Especie: Carica papaya

Usos de C. papaya Figueroa y colaboradores (2002) estudiaron las propiedades insecticidas de los cidos mirstica y arachidico de las semillas de C. papaya variedad mamey sobre las larvas S. frugiperda. Estos compuestos fueron incorporados en una dieta artificial de este insecto, los resultados mostraron que estos cidos no fueron txicos contra S. frugiperda ya que a concentraciones de 50, 100 y 200 ppm provocaron una mortalidad menor del 50%.

Franco y Jimnez (2006) observaron el efecto insecticida contra S. frugiperda de las semillas de las variedades Mamey, Marmol, Amarilla y Hawaiana de C. papaya presentando un 90 % de mortalidad (actividad insecticida), al evaluar el polvo de las semillas al 10% y 15% en una dieta artificial.

Deshmukhe y Hooli (2009) realizaron estudios sobre la susceptibilidad de las larvas de cuarto instar de Spodoptera litura a diferentes concentraciones del extracto acuoso de hojas de C. papaya mostrando una disminucin drstica en el crecimiento y desarrollo de Spodoptera litura. Teniendo una mortalidad del 96.3 % a una concentracin de 35 % y 96.6 % a una concentracin de 40 %.

Jaiswal y Singh (2009) encontraron que el extracto etanolico de semillas de C. papaya presenta actividad letal contra Lymnaea acuminata a las 24 h con una concentracin letal media de 53.38 mg / l.

En 1904 se report que las semillas de la papaya eran usadas como antihelmnticos (Kilmer, 1904), emenagogas, febrfugas y carminativas (Alonso, 1952).

Se evalu la actividad anticonceptiva de semillas de Carica papaya en ratas albinas mediante un tratamiento a largo plazo con extracto de metanol de semillas de C. papaya, el cual se administr por va oral a una concentracin de 50 mg / Kg por da durante 360 das. Para establecer la seguridad y la eficacia de la actividad de C. papaya, se evalu los parmetros de esperma, los niveles sricos de testosterona, la histologa y la estructura de los testculos. Concluyendo con esta investigacin que la fraccin de metanol de semillas de C. papaya es seguro para el tratamiento a largo plazo y el mecanismo de anticoncepcin se debe al efecto sobre la diferenciacin de espermtida en los testculos, posiblemente mediada por los factores de Sertolli. (Boomi et all., 2009)

Nirmal y col investigaron la eficacia anticonceptiva del extracto de cloroformo de las semillas de Carica papaya en conejos machos adultos. El extracto se les administro durante 150 das. Se encontr que la concentracin de espermatozoides disminuyo gradualmente, llegando a oligospermia severa (menos de 20 millones /mL) despus de 75 d de tratamiento.

La morfologa de los espermatozoides revel dao en la membrana en el acrosoma, cola enroscada, y la cabeza separada de la cola. La histologa de los testculos mostr la detencin de la espermatognesis ms all del nivel de los espermatocitos. La libido de los animales tratados fue afectada y la tasa de fecundidad fue de cero.

Gurung y colaboradores (2009) estudiaron la eficacia del latex de la papaya formulado al 1.0 y 2.5 % en un hidrogel para tratamiento de quemadura y heridas durante 20 dias. A cinco grupos de ratones albinos suizos se les indujo las quemaduras siendo estos grupos: Grupo I control negativo, no recibieron tratamiento, Grupo II fueron tratados con Carbopol 474P, Grupo III Y IV fueron tratados con Carbopol conteniendo 1.0 y 2.5 % de latex de papaya respectivamente y el Grupo-V (control positivo) recibieron el frmaco estndar (sulfadiazina de plata y clorhexidina crema de gluconato). La eficacia del tratamiento se evalu basndose en el contenido de hidroxiprolina, la contraccin de la herida y el tiempo de epitelizacin.

Los resultados mostraron que el contenido de hidroxiprolina es mayor en el grupo III. El porcentaje de contraccin de la herida se observ desde el da 12 en el Grupo-IV y desde el da 20 en el Grupos-III y V. El tiempo ms corto de epitelizacin se present en el Grupo-IV. Con lo que se concluyo que el ltex de papaya formuladas en el gel de Carbopol es eficaz en el tratamiento de quemaduras.

Origen y Clasificacin de Spodoptera. frugiperda. Es un insecto holometbolo y comnmente presenta 6 instares larvarios (Sparks, 1979; Morn y Terrn, 1988), de hbitos generalistas, se encuentra ampliamente distribuido en Amrica, afecta numerosos cultivos en las regiones tropicales y subtropicales (Gonzles y Lagunes, 1986; Arana, 1996). A este insecto se le conoce como plaga del maz, especialmente del maz dulce, aunque tambin se alimenta de alfalfa, trbol, cacahuate, pastos, tabaco y muchas hortalizas (Ralph, 1992) La larva recin emergida se encuentra en el envs de las hojas, posteriormente se mueve por la planta y se dispersa por el cultivo en general, Durante los dos primeros instares, las larvas se alimentan del
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envs de las hojas, posteriormente larvas de instares ms avanzados (4 al 6) pueden causar severas defoliaciones (Marenco et al., 1992).

Clasificacin taxonmica de S. frugiperda de acuerdo a Morn y Terrn, 1988. Reyno: Animalia Phyllum: Arthropoda Clase: Insecta Orden: Lepidoptera Familia: Noctuidae Gnero: Spodoptera Especie: Spodoptera frugiperda (Smith) Nombre comn: Gusano cogollero

Importancia econmica de S. frugiperda El cogollero del maz, S. frugiperda, es considerado una de las plagas de mayor importancia econmica en el sur de Estados Unidos, Centro y Sur Amrica, siendo su principal husped el maz (Malo et al., 2001). Las larvas, se alimentan de las hojas nuevas del maz y pueden causar prdidas hasta por 400 millones de dlares en Brasil, por ejemplo (Vilarinho et al., 2006).

Debido a la resistencia innata a los pesticidas y la exposicin de la planta a esta plaga, el control con productos qumicos se dificulta, (vila et al., 1997), causando prdidas hasta del 100% en la produccin, teniendo la misma dificultad de control Estados Unidos, Mxico, Cuba y Colombia entre otros pases.

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Su importancia econmica y ambiental radica en las prdidas que ocasiona a los cultivos, los costos de control y la contaminacin producida por los agroqumicos empleados. (Polanczyk et al., 2004). OBJETIVOS Objetivo general. Determinar la actividad insecticida del extracto CHCl3 de la semilla de Carica papaya contra larvas de primer instar de Spodoptera frugiperda.

Objetivos especficos. Evaluar la actividad insecticida del extracto CHCl3 de C. papaya contra larvas de primer instar de S. frugiperda. Separar el extracto CHCl3 por cromatografa en columna y evaluar la actividad insecticida de las fracciones obtenidas contra larvas de 1er instar de S. frugiperda. Determinar la composicin del extracto CHCl3 de las semillas de C. papaya que presentan la actividad insecticida contra S. frugiperda.

Hiptesis. El extracto CHCl3 de las semillas de C. papaya presentar actividad insecticida contra larvas de primer instar de S. frugiperda.

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METODOLOGIA: Preparacin del extracto de C. papaya Para este estudio se colectaron semillas de papaya (C. papaya) las cuales se secaron en la sombra 15 das, posteriormente las semillas se lavaron con una cantidad pequea de agua con el propsito de remover material de la fruta y nuevamente las semillas se colocaron a la sombra para que se secaran. Una vez secas las semillas se molieron en una licuadora.

En un matraz baln de 12 L con un refrigerante en posicin de reflujo se colocaron 2 Kg. de la semilla C. papaya seca y molida, con 6 L de cloroformo, la mezcla se calent a temperatura de ebullicin durante 4 h, se filtr y el disolvente se elimin casi a sequedad en un evaporador rotatorio a presin reducida, el disolvente restante se evapor a bao mara y finalmente en una estufa de vaco a temperatura ambiente.

Separacin por cromatografa en columna El residuo obtenido se separ por cromatografa en columna empacada con silica gel 60, usando como eluyente cloroformo al cual se le aument la polaridad con acetato de etilo, las fracciones obtenidas se concentraron a presin reducida y finalmente por cromatografa en capa fina se determinaron las fracciones que presentaron caractersticas similares para mezclarlas.

Esterificacin del extracto clorofrmico En un matraz baln con un refrigerante en posicin de reflujo, se colocaron 40 mg del extracto CHCl3 de semillas de C. papaya disueltas en 2 mL de NaOH metanlico 0.5 N,

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la mezcla se calent a 40o C por 5 h, posteriormente se le adicionaron 2.5 ml de CH3 OHBF3 y se contino el calentamiento durante 15 min. Para recuperar a los esteres de los cidos grasos la mezcla fue diluida con 5 mL de agua y extrada 3 veces con 5 ml de cloroformo. La fraccin orgnica resultante se lav dos veces con 5 ml de agua destilada, y se sec con sulfato de sodio, posteriormente disolvente se evapor a sequedad en una estufa de vaco, se obtenindose un aceite incoloro.

Identificacin de compuestos activos de C. papaya. El anlisis del extracto CHCl3 de las semillas de C. papaya se llev a cabo en un cromatgrafo de gases (CG) Agilet Technologies 6890N,con un detector selectivo de masas EM 5973y una columna capilar HP-5MS de 25 mm de dimetro por 30 m de largo y 0.25 m de tamao de partcula .Se pesaron 10 mg de cada muestra y se

disolvieron en 1 mL de acetona y se inyect al CG 1 L de muestra por el mtodo de split en una relacin 2:1, a 330 o C del puerto de inyeccin. El programa de temperatura que se sigui fue el siguiente: 60 o C por 3 min, con una rampa de 3 o C por min. hasta 170 o C por 1 min y 10 o C por min hasta 330 o C por 10 min. A un flujo de 1 mL/min de gas acarreador (Nitrogeno). La temperatura de la fuente fue 230 o C, del cuadrupolo de 150 o C y el rango de masas de 20 a 800 uma. La comparcin de los espectros de masas se realiz con la biblioteca NIST 02.

cidos grasos Los estndares de cido oleico, palmtico y esterico fueron adquiridos en Sigma Aldrich con una pureza de 98.3 %, 99.3%, 98.0% respectivamente.

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Ensayos biolgicos Se trabaj con larvas de primer estadio provenientes del laboratorio de entomologa del Centro Internacional del Mejoramiento del Maz y del Trigo (CIMMYT), las cuales fueron criadas de acuerdo a la metodologa empleada por Bergvinson y Kumar (1997). Empleando para ello la siguiente lista de ingredientes y cantidades para preparar 100 g de dieta artificial, para la cra de S. frugiperda, (cuadro 1).

Cuadro 1.Ingredientes y cantidades empleados para preparar 100 g de dieta artificial, para la cra de S. frugiperda,, Ingrediente Levadura Dieta (Product# F0635 S. W. Corn Borer, Bio-Serv, Canada) Maz molido Espiga estril Sulfato de neomicina Vitaminas (vitamin mix fortification lepidoptera, Bio-Serv) cido srbico Metil p-hidroxibenzoato Formaldehdo Agar Agua destilada Etanol Cantidad 4g 6.0 g 10.0 g 2.0 g 0.06 g 1.0 g 0.17 g* 0.17 g 0.25mL 1.0 g 80 mL 1.7mL*

* El cido srbico se disuelve en el etanol antes de mezclarlo con los dems ingredientes de la dieta.

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Con los ingredientes del cuadro 1, se prepararon 100 g de dieta artificial de la siguiente manera:

Paso 1) Los siguientes ingredientes se mezclaron en un recipiente, con ayuda de una pala de acero inoxidable estril, de manera manual por 5 min: dieta artificial, levadura, maz molido, espiga estril, vitaminas, sulfato de neomicina y el Metil phidroxibenzoato.

Paso 2) El cido srbico se mezcl con el etanol para disolverlo agitndolo continuamente en caliente.

Paso 3) Se disuelvi el agar en 50 mL de agua fra, una vez disuelto, la mezcla se calent agitndola continuamente, hasta llegar a la temperatura de ebullicin por un minuto.

Paso 4) A la mezcla del paso 3 se le aadieron los 30 mL de agua restantes y se dej enfriar hasta 40 C, entonces se le incorpor la mezcla de los ingredientes del paso 1, agitando continuamente, luego se le incorpor el cido srbico y el formaldehdo y se continu agitando por un minuto ms.

Paso 5) Finalmente a la mezcla obtenida se le agreg el extracto, fraccin o compuesto a evaluar y se vierti en cajas (Multidishes Nuncion
TM

Surfase) de 24 espacios de

acrlico, previamente esterilizadas, y se dej 24 h a que solidifiquen.

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Bioensayo. Se utilizaron siete concentraciones logartmicas (10, 1.0, 0.1, 0.01, 0.001, 0.0001, y 0.00001% peso/volumen), del extracto CHCl3 , este experimento permiti encontrar las concentraciones con mnima y mxima efectividad.

Una vez que se determinaron las concentraciones con mnima y mxima efectividad, se evaluaron siete concentraciones que permitieron la mejor correlacin entre concentracin y efectividad, el cual fue el bioensayo final probndose las concentraciones 24 000, 16 000, 9 600 y 1 600 ppm para el extracto CHCl3 y 1 600, 960, 400 y 160 ppm para los cidos grasos, en ambos casos la dieta sola se utiliz como control negativo.

Se verti aproximadamente 1 mL de la dieta en cada uno de los 24 espacios de una caja de acrlico (Multidishes Nuncion
TM

Surfase),previamente esterilizadas, dejando a que

solidificar la dieta a temperatura ambiente por 24 h, posteriormente se les coloc una larva de primer estadio de S. frugiperda con un pincel del nmero cero, luego se taparon, colocando entre la tapa una hoja de papel absorbente, las cajas se colocaron de manera aleatoria, en una charola de cartn con 30 espacios, y se pusieron en el interior de una cmara bioclimtica a 27 C 2 C; 70% 5% HR y un fotoperodo luz: oscuridad de 14-10 h. Los tratamientos fueron observados diariamente por 15 das. Cada concentracin se consider un tratamiento y la unidad experimental fue una larva.

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Anlisis estadstico. A los datos obtenidos en los experimentos se les determin el error estndar y la distribucin normal, despus se evaluaron por medio de un anlisis de varianza de una va (ANDEVA) y a los resultados de la ANDEVA se les aplic la prueba de Tukey con el paquete estadstico Systat. (Ato et al., 1990)

Prueba de toxicidad aguda oral del extracto Se administraron las siguientes dosis: 500 mg/kg, 1000 mg/kg, 2000 mg/kg y 4000 mg/kg a 100 ratas Wistar (50 ratas macho y 50 ratas hembra, con un peso promedio de 200-250g y 150-200g respectivamente) las cuales se mantuvieron a una temperatura controlada de 20 2 o C con ciclo de luz / obscuridad de 12/12 h. Se dejaron en ayuno por 16 h antes del experimento y se les permiti el acceso al agua ad libetum. Se formaron 5 grupos (para cada gnero) con ocho ratas cada uno, a cuatro grupos se le administr va oral el extracto CHCl3 de semilla de C. papaya a diferentes concentraciones, y el grupo restante fue el control, al cual solo se le administr el vehculo (Polivinil pirrolidona o PVP). Los animales se observaron cada 60 min, durante las primeras 6 h, y despus diariamente por un perodo de 72 h. Al finalizar el perodo se sacrificaron por dislocacin cervical. (Lagarto et al., 2005).

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RESULTADOS Y DISCUSIN En el presente trabajo se llev a cabo la extraccin con cloroformo de la semilla de C. papaya as como la identificacin de algunos componentes presentes en dicho extracto, adems de realizar la evaluacin de la actividad insecticida del mismo contra larvas de S. frugiperda. Para identificar los componentes del extracto CHCl3 , se esterific el mismo, obteniendo un producto caf obscuro, el cual se analiz por CG, encontrando que la mezcla contena (Cuadro 2) cido palmtico (19.60%), acido oleico (59.10%), cido esterico (1.15%) y cido hexadecanoico (0.23%).

Cuadro 2.Composicin del extracto clorofrmico de semillas de C. papaya. N Compuesto Tiempo de retencin (min) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Xileno 2,5-Hexanadiona Decano Tetradecano Hexadecano Dibutil ftalato cido n-Hexadecanoico (cido palmtico) cido 9(Z)-octadecanoico(cido oleico) cido Octadecanoico (cido esterico) Bis(2-etilhexil) ester de cido hexanedioico Diisooctil ester cido 1,2benzenodicarboxilico. 12 Stigmast-4-en-3-one 55.99 1.58 3.39 4.54 6.44 22.54 30.39 42.48 42.87 45.77 46.02 48.39 49.71 0.54 0.75 0.26 0.32 0.31 0.24 12.78 38.53 0.75 0.15 8.98 % presente

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Ensayos biolgicos Con el extracto CHCl3 de semillas de C .papaya se obtuvo un porcentaje de viabilidad larval de 0 %, 30 %, 50 % y 91.7 %, respecto al control, al incorporar a 100 g de dieta en concentraciones de 24000 ppm, 16000 ppm, 9600 ppm y 1600 ppm, respectivamente. Resultados mostrados en el Cuadro 3 y Grafica 1.

Cuadro 3. Porcentaje de viabilidad larval de S. frugiperda en presencia del extracto clorofrmico de las semilla de C. papaya. Los resultados son el promedio de 24 determinaciones error estndar. Concentracin ppm 24 000 16 000 9 600 1 600 Control % Viabilidad 0 29.2 50 91.7 88.5

120

100 % Viabilidad larval 80

60

viabilidad %
40 20 0 24 000 ppm 16 000 ppm 9600 ppm 1600 ppm Concentracin 0 ppm

Grafica 1 Porcentaje de viabilidad larval de S. frugiperda en presencia del extracto clorofrmico de las semilla de C. papaya.

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El cido palmtico fue el compuesto que present mayor porcentaje de actividad insecticida ya que a concentraciones de 1600 ppm, 960 ppm, 400 ppm, 160 ppm, el porcentaje de viabilidad larval fue de 33.34 %, 50 %, 62.5 %, 66.67 %, seguido del cido oleico que a las mismas concentraciones mostr porcentajes de viabilidad larval de 45.83 %, 58.33 %, 70.83 %, 83.33 % respectivamente, finalmente el cido esterico present un porcentaje de viabilidad larval de 62.5 %, 75.0 %, 87.5 %, 87.5 % a las mismas concentraciones. Los resultados se muestran en el Cuadro 4 y Grafica 2.

Cuadro 4. Porcentaje de viabilidad larval de S. frugiperda con cidos grasos comerciales incorporado a la dieta artificial. Los resultados son el promedio de 24 determinaciones error estndar. Concentracin ppm 1 600 960 400 160 Oleico 45.83 58.33 70.83 83.33 Palmtico 33.33 50 62.5 66.66 Esterico 62.5 75 87.5 87.5 Control 87.5 87.5 95.5 95.83

120 100

% Viabilidad larval

80

60 40 20
0 1600 ppm 960 ppm 400 ppm Concentracin 160 ppm

cido Olico

cido Palmtico
cido Esterico

Control

Grafica 2. Porcentaje de viabilidad larval de S. frugiperda con cidos grasos comerciales incorporado a la dieta artificial.
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De acuerdo con los resultados del ensayo anterio res se decidi montar un bioensayo, incorporando a la dieta, la mezcla de los cidos oleico, palmtico y esterico, de acuerdo a los porcentajes que stos presentaron el cuadro 2, que equivalen a 38.53, 12.78 y 0.75 % respectivamente, respetando stas proporciones y tomando como base al 100% la concentracin de 1600 ppm que fue en la nica donde los tres cidos presentaron diferencia significativa con el testigo.

Se identifico el 65.69% de los compuestos presentes en el extracto CHCl3 de C. papaya, siendo los mayoritarios cido oleico (38.53%), cido palmtico (12.78%), y en menos cantidad el cido esterico (0.75%), razn por la cual se decidi probar la actividad insecticida de cada uno de ellos, en las proporciones mostradas en el Cuadro 5.

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Cuadro 5: Proporciones correspondientes para cada una de las mezclas incorporadas en 100 g de dieta artificial. Mezcla A B C D Compuestos de la mezcla cido oleico / cido palmtico cido oleico / cido esterico cido palmtico / cido esterico cido oleico / cido palmtico / cido esterico Proporcin 616.5/204.5 ppm 616.5/12 ppm 204.5/12 ppm 616.5/204.5/12 ppm

Al realizar el estudio con las diferentes combinaciones de cidos grasos, se observ que siempre que est presente el cido palmtico se present una notable actividad insecticida ya que las mezclas A y C mostraron un porcenta je de viabilidad larval de 37.5% y 50% respectivamente, valor que disminuye a 29.6% de viabilidad larval cuando se usa la mezcla de los tres cidos (mezcla D), valor similar al obtenido con el extracto CHCl3 crudo, en cambio cuando solo se usa la combinacin de cido oleico con cido esterico (mezcla B) el porcentaje de viabilidad larval aument hasta 66.66 %, por lo que se puede sugerir que el componente ms activo es el cido palmtico y que posiblemente se deba a un efecto sinrgico con los otros dos cidos grasos. Los resultados se muestran en el Cuadro 6 y Grafica 3.

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Cuadro 6. Porcentaje de viabilidad larval de S. frugiperda con mezcla de cidos grasos comerciales incorporado a la dieta artificial a una concentracin de 1600 ppm. Los resultados son el promedio de 24 determinaciones error estndar. Compuestos de la mezcla cido oleico / cido palmtico cido oleico / cido esterico cido palmtico / cido esterico cido oleico / cido palmtico / cido esterico Control % de viabilidad larval 37.5 66.66 50 20.16 91.66

120 100

80
60 % Viabilidad larval 40 20

0
Oleico + Palmitico Oleico + Estearico Palmitico + Estearico cidos grasos Oleico + Palmitico + Estearico Control

Grafica 3.Porcentaje de viabilidad larval de S. frugiperda con mezcla de cidos grasos comerciales incorporado a la dieta artificial a una concentracin de 1600 ppm.

En el ensayo de toxicidad aguda oral a dosis de 4000 mg/Kg de extracto CHCl3 de las semillas de C. papaya administrado va oral a 100 ratas wistar, 50 hembras y 50 machos no se produjeron muertes ni signos txicos aun despus de 72 h a la administracin, lo que indica que el extracto CHCl3 de C. papaya aun a dosis altas no mostr ser toxico por esta va.

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CONCLUSIONES Con los resultados obtenidos se puede decir que la actividad insecticida del extracto CHCl3 de las semillas de C. papaya contra S. frugiperda, se debe a la presencia de cidos grasos: acido palmtico, esterico y oleico y que existe un efecto sinrgico entre ellos.

El efecto insecticida producido por el extracto CHCl3 de las semillas de C. papaya permite establecer que la planta puede ser una alternativa para el control de S. frugiperda, debido a que mostr actividad letal contra esta larva, adems de que el extracto CHCl3 de semillas de C. papaya tiene una toxicidad muy baja.

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UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA UNIDAD XOCHIMILCO DIVISIN DE CIENCIAS BIOLGICAS Y DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE SISTEMAS BOLGICOS QUMICO FARMACUTICO BILOGO

INFORME DE ACTIVIDADES DEL SERVICIO SOCIAL Actividad insecticida del extracto clorofrmico de Carica papaya L (CARICACEAE) contra Spodoptera frugiperda Smith (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE) Alumno: Diana Elizabeth Martnez Gonzlez Matricula: 205246378 Direccin telfono: Callejn de la Unin No.20 Santa Mara Ajoloapan, Hueypoxtla, Edo.de Mxico. Telfono:015999124366 Asesores: Dra. Ma. Salud Prez Gutirrez. M. en C. Miguel ngel Ramos Lpez. Lugar de realizacin: Universidad Autnoma Metropolitana Unidad Xochimilco. Laboratorio G-304. Fecha de inicio y terminacin: 22 de Mayo de 2009 al 11 de Diciembre de 2009 Abril, 2010

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Introduccin La agricultura enfrenta graves prdidas ocasionadas por plagas, tales como insectos, los cuales han ido adquiriendo resistencia a los insecticidas obtenidos por sntesis orgnica empleados para su control debido al uso indiscriminado de ellos, repercutiendo directamente en el costo para el productor. La primera reaccin del agricultor cuando un insecticida pierde su efectividad es incrementar la cantidad y la frecuencia de aplicacin, lo que trae como resultado el aumento del costo directo en el control de plagas y adems se incrementan los niveles de resistencia (Morillo y Notz, 2001).

El empleo de productos de origen vegetal, tiene diversas ventajas, debido a que las plantas contienen una gran cantidad de substancias qumicas conocidas como

metabolitos secundarios (Franco et al., 2006), dentro de los cuales se encuentra un amplio grupo denominado aleloqumicos y se han dividido, por su forma de interactuar con insectos y otras especies herbvoras en Alomonas, Kairomonas y Sinomonas, (Dicke y Sabbelis, 1988). Las propiedades qumicas de las plantas pueden ser utilizada para controlar la plaga de Spodoptera frugiperda (Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) conocida comnmente como gusano cogollero del maz que ataca diversas plantas silvestres y cultivadas como el maz, la alfalfa, el frijol, papa, sorgo, soya, cebolla y tomate de cscara, ocasionando prdidas de 40-60% del cultivo en Mxico (Franco et al., 2006).

En esta investigacin, se evalu la actividad insecticida del extracto clorofrmico de semillas de Carica papaya (Caricaceae), y de los cidos grasos mayoritarios que conforman al extracto clorofrmico contra S. frugiperda

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OBJETIVOS Objetivo general. Determinar la actividad insecticida del extracto CHCl3 de la semilla de Carica papaya contra larvas de primer instar de Spodoptera frugiperda.

Objetivos especficos. Evaluar la actividad insecticida del extracto CHCl3 de C. papaya contra larvas de primer instar de S. frugiperda. Separar el extracto CHCl3 por cromatografa en columna y evaluar la actividad insecticida de las fracciones obtenidas contra larvas de 1er instar de S. frugiperda. Determinar la composicin del extracto CHCl3 de las semillas de C. papaya que presentan la actividad insecticida contra S. frugiperda.

Conclusiones El efecto insecticida producido por el extracto CHCl3 de las semillas de C. papaya permite establecer que la planta puede ser una alternativa para el control de S. frugiperda.

Con los resultados obtenidos se puede decir que la actividad insecticida del extracto CHCl3 de las semillas de C. papaya contra S. frugiperda, se debe a la presencia de cidos grasos: acido palmtico, esterico y oleico y que existe un efecto sinrgico.

Adems el extracto CHCl3 de semillas de C. papaya tiene una toxicidad muy baja.

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