UNIVERSIDADE SO FRANCISCO CURSO DE FARMCIA CAMPUS CAMPINAS

UTILIZAO DA TCNICA DE ESPECTROMETRIA DE INFRAVERMELHO PRXIMO (NIR) PARA ANLISE QUANTITATIVA

Alessandra A. de S. Cirino Vanessa C. de S. Ildefonso

Campinas 2011

UNIVERSIDADE SO FRANCISCO CURSO DE FARMCIA CAMPUS CAMPINAS

GUIA DIDTICO PARA UTILIZAO DA TCNICA DE ESPECTROMETRIA DE INFRAVERMELHO PRXIMO (NIR) PARA ANLISE QUANTITATIVA

Alessandra A. de S. Cirino Vanessa C. de S. Ildefonso

Monografia da disciplina de Trabalho de Concluso de Curso de Graduao em Farmcia da Universidade So Francisco, campus de Campinas Orientao: Prof. Dr. Iara Lcia Tescarollo Dias

Campinas 2011

AGRADECIMENTOS
Primeiramente Deus por sua graa, sua misericrdia e pelas foras que tem renovado a cada manh. A nossas famlias que contriburam grandemente para que pudssemos superar os desafios. A todos os profissionais que colaboraram com as experincias e ensinamentos, para a concluso deste trabalho. Aos amigos e colegas pelo companheirismo em relao concluso desta jornada. Aos professores que durante todo esse perodo nos capacitaram, dando condies para juntos trilhamos uma etapa importante de nossas vidas.

RESUMO

O presente trabalho tem como objetivo elucidar de forma didtica a utilizao da tcnica para fins quantitativos, assim como trazer exemplos prticos e as principais vantagens e desvantagens da tcnica de Quantificao de Compostos Qumicos atravs de Infravermelho Prximo (NIR). A tcnica de espectrometria de infravermelho (IV) ou infrared (IR) a medio de comprimento de onda e intensidade da absoro de luz infravermelha prxima realizada pela amostra. A luz infravermelha prxima se estende em uma faixa de 800 nm - 2.500 nm (12,500 - 4000 cm-1) e tem energia suficiente para excitar sobretons e combinaes de vibraes moleculares a altos nveis de energia. A espectrometria NIR tipicamente usada na identificao de grupos funcionais orgnicos, especialmente O-H, N-H, e C=O. Os limites de deteco so normalmente 0.1% e as aplicaes mais comuns incluem anlises farmacuticas, agrcolas, polimricos e clnicos. Os componentes e o design do instrumental do NIR so similares aos espectrmetros de absoro UV-Vis. A fonte de luz normalmente uma lmpada de tungstnio e o detector um detector de Sulfato de Chumbo estado slido. Os recipientes para a amostra podem ser de vidro ou quartzo e os solventes tpicos so Tetracloreto de Carbono e Dissulfeto de Carbono. O instrumental da espectroscopia de infravermelho prximo (NIR) comparado com a espectroscopia de infravermelho tradicional torna-o mais adequado para o monitoramento on line e o controle de processos. Palavras-chave: espectrometria, luz infravermelha prxima, radiao.

ABSTRACT

This study aims to elucidate in a didactic manner using the technique for quantitative as well as bring practical examples and the main advantages and disadvantages of the quantification of chemical compounds using Near Infrared (NIR). The technique of infrared spectroscopy (IR) or infrared (IR) is the measurement wavelength and intensity of the absorption of near-infrared light held by the sample. Near-infrared light extends over a range of 800 nm - 2,500 nm (12,500 - 4000 cm-1) and have enough energy to excite overtones and combinations of molecular vibrations to higher energy levels. NIR spectrometry is typically used to identify organic functional groups, especially OH, NH and C = O. The detection limits are typically 0.1% and the most common applications include pharmaceutical, agricultural, polymer and biological. The components and design of NIR instrumentation are similar to the absorption spectrometers UV-Vis. The light source is usually a tungsten lamp and the detector is a detector of lead sulfate solid. The sample containers can be glass or quartz and typical solvents are carbon tetrachloride and carbon disulfide. The instruments of near-infrared spectroscopy (NIR) compared to traditional infrared spectroscopy makes it more suitable for on-line monitoring and process control. Keywords: spectrophotometry, near-infrared light, radiation.

LISTA DE ABREVIATURAS

ANVISA ASTM CG CLAE FIR FTIV ICH INMETRO IR ou IV MID MLR NIR NIRR PLS PCR USP

Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria American Society for Testing and Material Cromatografia Gasosa Cromatografia Lquida de Alta Eficincia Infravermelho Longquo Transformada de Fourier International Conference on Harmonisations Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial Infrared ou Infravermelho Infravermelho Mdio Regresso Linear Mltipla Near Infrared ou Infravermelho prximo Reflexo no infravermelho prximo Regresso por quadrados mnimos parciais Regresso por Componentes Principais United States Pharmacopoeia

LISTA DE TABELAS

Tabela 1: Comparativo das caractersticas das tcnicas analticas

LISTA DE FIGURAS

Figura 1: Experimento de William Hershell Figura 2: Modos de Vibraes Moleculares Figura 3: Espectro de Etanol. Figura 4: Tipos de radiao Figura 5: Espectrmetros Dispersivos Figura 6: Espectrmetros com Transformada de Fourier Figura 7: Componentes bsicos de um equipamento que opera na regio do infravermelho. Figura 8: Construo da matriz X para calibrao multivariada.

SUMRIO
1. INTRODUO............................................................................................................01 2. JUSTIFICATIVA..........................................................................................................06 3. OBJETIVO...................................................................................................................06 4. MATERIAIS E MTODOS..........................................................................................08 5. RESULTADOS............................................................................................................09 5.1. Definio..............................................................................................................09 5.2. Princpio da espectroscopia no infravermelho.....................................................11 5.3. Tecnologias..........................................................................................................14 5.3.1. Tipos de radiao infravermelha................................................................14 5.3.2. Evoluo Tecnolgica................................................................................15 5.3.3. Espectrmetros dispersivos.......................................................................15 5.3.4. Instrumentos no dispersivos.....................................................................16 5.3.5. Espectrmetros com Transformada de Fourier.........................................17 5.4. Principais componentes de um equipamento de infravermelho. ..................18 5.5. Processamento de Dados.............................................................................20 5.5.1. Quimiometria..............................................................................................20 5.5.2. Anlise Multivariada...................................................................................22 5.5.3. Calibrao...................................................................................................23 5.5.4. Regresso Linear Mltipla MIR...............................................................23 5.5.5. Regresso por Componentes Principais....................................................26 5.5.6. Regresso por Mnimos Quadrados Parciais............................................26 5.5.7. Deteco de amostras anmalas Outliers..............................................27 5.6. Aplicaes da Espectroscopia e da Quimiometria na anlise de medicamentos .........................................................................................................................................28 6. DISCUSSO...........................................................................................................30 7. CONCLUSO.........................................................................................................35 8. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.......................................................................36

1. INTRODUO

Os medicamentos vm sendo cada vez mais objetos de preocupao e de inmeras pesquisas realizadas mundialmente. Estas pesquisas dizem respeito prtica mdica, reaes adversas, aumento e disseminao de resistncia bacteriana antibiticos, padro e influncia da propaganda na prescrio de medicamentos na rea clnica, como tambm na rea odontolgica (CASTILHO, PAIXO, PERINI, 1999). Por tais razes, de enorme importncia o desenvolvimento de mtodos eficazes e rpidos para maior controle de qualidade dos medicamentos comercializados, tornando-se imprescindvel o desenvolvimento de rotinas de anlises que, alm de servirem para este propsito, favoream sua implantao em comparao aos mtodos usuais (PARISOTTO et al., 2005). Havendo a necessidade de mtodos rpidos, versteis, confiveis, capazes de emitir resultados em tempo real, como alternativas eficazes aos mtodos tradicionais. O infravermelho e demais mtodos espectroscpicos modernos como a ressonncia magntica nuclear (RMN), espectroscopia na regio do ultravioletavisvel (UV-VIS) e espectrometria de massas (EM) constituem hoje os principais recursos para a identificao e elucidao estrutural de substncias orgnicas. So, tambm, de alta relevncia na determinao da pureza e quantificao de substncias orgnicas, bem como no controle e acompanhamento de reaes e processos de separao. O uso dos referidos mtodos fsicos de anlise traz uma srie de vantagens, destacando-se a reduo no tempo de anlise, diminuio substancial nas quantidades de amostra, ampliao da capacidade de identificar ou caracterizar estruturas complexas, no destruio da amostra (exceto EM) e a possibilidade de acoplamento com mtodos modernos de separao, como a cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR) e cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). A espectroscopia na regio do infravermelho tem sido, tambm, amplamente utilizada em linhas de produo, no controle de processos industriais (LOPES,FASCIO,2004). A radiao na regio do infravermelho foi descoberta por William Herschel, um astrnomo ingls que, em 1800, estava investigando qual cor da radiao solar

produzia calor. Ele empregou um prisma de vidro, transparente radiao, para decompor a luz branca do sol em seus comprimentos de onda visveis e, com o auxlio de um termmetro com um bulbo enegrecido, pde verificar a temperatura produzida por cada cor. Surpreendentemente, a mais intensa variao de temperatura foi observada quando o termmetro foi colocado logo acima da regio vermelha do espectro. Herschel chamou esta radiao de raios calorficos, que mais tarde foi denominada Infravermelho (LIMA et al. 2009). Atualmente, a espectroscopia na regio do infravermelho tem se destacado como tcnica analtica, proporcionando mtodos rpidos, robustos, no-destrutivos, no-invasivos, possibilitando aplicaes automticas e em tempo real. Muitos dos mtodos baseados na espectroscopia na regio do infravermelho mdio (MID) ou na regio do infravermelho prximo (NIR) empregam um feixe de fibras pticas para efetuar medidas de reflectncia ou transflectncia diretamente na amostra, sem a necessidade de pr-tratamento. Esta peculiaridade facilmente explicada considerando que as fibras pticas conferem muitas vantagens para medidas em campo e na anlise de processos, uma vez que a sonda de fibra ptica vai at a amostra, mesmo em locais de difcil acesso, mantendo o instrumento longe de ambientes hostis. Muitos dos mtodos analticos no infravermelho so baseados nas propriedades intrnsecas dos constituintes da amostra e o sinal analtico resulta da interao da radiao eletromagntica com os nveis vibracionais das molculas. Neste sentido, os mtodos no infravermelho baseados em fibras pticas podem ser classificados no escopo de sensores pticos, uma vez que a fibra ptica atua passivamente como guia de luz. Este tipo de sensor pertence primeira gerao, possibilitando o sensoriamento remoto desde que uma propriedade ptica intrnseca da amostra possa ser distinguida. Em outras palavras, o analito fornece a informao analtica diretamente, por meio de absoro ou emisso de radiao (LIMA et al. 2009). A espectroscopia no infravermelho vem sendo amplamente estudada, como por exemplo, a tcnica de reflexo no infravermelho prximo (NIRR) que abrange a faixa entre 1300 a 2500 nm, que vem sendo utilizada em anlises farmacuticas (BLANCO et al., 1999a; HERKERT, PRINZ, KOVAR, 2001; PASQUINI, 2003).

At recentemente, a espectroscopia na regio do infravermelho era pouco utilizada em anlises quantitativas em decorrncia de algumas limitaes inerentes tcnica (DE SOUZA, FERRO, 2006). Porm, com a utilizao da transformada de Fourier, aliada evoluo de tcnicas quimiomtricas, ao advento dos microprocessadores digitais e de tcnicas computacionais avanadas, permitiu-se a anlise de misturas complexas, como os medicamentos (DE SOUZA et al., 2004). Associada ao crescente desenvolvimento do mtodo de refletncia difusa, este tipo de anlise garante a caracterizao de frmacos com extrema rapidez (DE SOUZA, FERRO, 2006). A identificao destas substncias pode ser alcanada tanto quantitativamente como qualitativamente atravs da espectroscopia por refletncia difusa no infravermelho com transformada de Fourier (Diffuse Reflectance Infrared Fourier Transform Spectroscopy - DRIFTS) (YANG, IRUDAYARAJ, 2002), aliada a ferramentas quimiomtricas de anlise multivariada (NEUMANN et al., 2004; PARISOTTO et al., 2005). A espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier uma tcnica instrumental que vem sendo amplamente utilizada no controle de qualidade de frmacos, principalmente, pela rapidez e facilidade com que podem ser obtidos os espectros. Deve-se destacar, tambm, que a combinao da espectroscopia de infravermelho com as ferramentas quimiomtricas (anlise exploratria de dados e calibrao multivariada) vem colaborando para a disseminao do infravermelho como ferramenta analtica na indstria, pois, alm de quantificar o medicamento j acabado, permite controlar o processo de fabricao do medicamento (monitoramento on-line) e obteno de informaes que no poderiam ser alcanadas com as tcnicas convencionais de anlise (GABRIELSSON; LINDBERG; LUNDSTEDT, 2002). A interpretao de espectros de infravermelho de substncias orgnicas uma tarefa que, devido ao grande nmero de informaes que devem ou precisam ser manipuladas, geralmente apresenta dificuldades para os alunos e profissionais iniciantes. Assim, necessrio um meio para, de modo sistemtico, interpretar um espectro na regio do infravermelho e propor uma possvel estrutura molecular. Os livros textos geralmente apresentam tabelas de correlao entre as absores de estiramento e deformao, em nmero de onda (4000 - 400 cm-1) e/ou comprimento de

onda (2,5 - 25 m), e os respectivos grupos funcionais ou ligaes qumicas correspondentes. No h, contudo, uma preocupao com a sistematizao de um caminho que possibilite aos alunos, assim como demais profissionais analisar um espectro infravermelho, obter informaes sobre as principais ligaes e grupos funcionais de uma determinada substncia orgnica e, finalmente, propor uma possvel estrutura (LOPES,FASCIO,2004). Para facilitar a quantificao de compostos qumicos atravs da tcnica de IV NIR, associa-se a calibrao multivariada, possibilitando mtodos seguros e prticos para vrias quantificaes, como por exemplo: teor de protenas, umidade, entre outros. (LIMA et al., 2009). Em mtodos de Calibrao Multivariada duas ou mais respostas instrumentais so relacionadas com a propriedade de interesse. Esses mtodos possibilitam anlises mesmo na presena de interferentes, desde que estejam presentes nas amostras de calibrao, determinaes simultneas, anlises sem resoluo etc. Isso faz com que, modelos de Calibrao Multivariada sejam uma alternativa quando mtodos univariados no podem ser aplicados. Diversos modelos de calibrao multivariada vm sendo utilizados, tais como Regresso Linear Mltipla (MLR), Regresso por Componentes Principais (PCR) e Regresso por Mnimos Quadrados Parciais (PLS). Esses modelos tm apresentado timos resultados, com aplicaes em diversas reas. Contudo, sua aceitao e implementao tm sofrido restries em alguns setores, como as reas farmacutica e mdica, devido s exigncias de validao. Essa validao feita com base no clculo e anlise das chamadas figuras de mrito, que certificam que o modelo multivariado proposto confivel e atende s especificaes impostas pela indstria e rgos de fiscalizao nacionais e internacionais como United States Pharmacopoeia (USP), International Conference on Harmonisations (ICH), American Society for Testing and Materials (ASTM), Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial (INMETRO), Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) etc. (BRAGA, POPPI, 2004). Os fabricantes de equipamentos disponibilizam diferentes softwares, que utilizam mtodos matemticos e estatsticos para o mximo aproveitamento das informaes obtidas, tm sido desenvolvidos e aplicados para tratar estes tipos de dados, sendo o

da regresso por quadrados mnimos parciais (PLS) um dos mais empregados. Embora nem sempre ocorram relaes lineares entre os sinais espectroscpicos e as medidas da concentrao total das espcies contidas na amostra, estes procedimentos j foram aplicados com sucesso em anlises de matrizes complexas, fornecendo resultados rpidos, precisos e exatos (LIMA et al., 2009). O presente trabalho tem como objetivo elucidar a utilizao da tcnica para fins quantitativos, assim como trazer exemplos prticos e as principais vantagens e desvantagens da tcnica de Quantificao de Compostos Qumicos atravs de Infravermelho Prximo (NIR). Contribuir de forma a facilitar a tarefa de anlise e interpretao de espectros de infravermelho, estabelecendo um caminho bjetivo e prtico que permita a quantificao de compostos qumicos. O trabalho foi desenvolvido atravs de pesquisa bibliogrfica de artigos publicados, literaturas auxiliares (manuais de equipamentos) e livros e experincia prtica de usurios da tcnica.

2. JUSTIFICATIVA

Apresentar uma nova alternativa para a quantificao de compostos qumicos atravs da tcnica de Infravermelho Prximo (NIR), em substituio aos mtodos tradicionais (Cromatografia Lquida, Cromatografia Gasosa, UV/Vis).

3. OBJETIVO

Elucidar a utilizao da tcnica para fins quantitativos, as principais vantagens e desvantagens da tcnica de Quantificao de Compostos Qumicos atravs de Infravermelho Prximo (NIR), de modo a facilitar a utilizao da tcnica por alunos e tambm profissionais ingressantes na qumica analtica, de uma forma clara e objetiva, estimulando ao uso de mais uma ferramenta na qumica analtica.

4. MATERIAIS E MTODOS

Foi realizada uma reviso bibliogrfica sobre o tema escolhido, com coleta de dados, utilizando as palavras-chave: Infravermelho, radiao, quimiometria e multivariada. Atravs de pesquisa de artigos cientficos e trabalhos acadmicos, utilizando as seguintes bases de dados digitais: Medline (www.medline.com/ nlm.nih.gov/PubMed); Lilacs (www.bireme.br) e SciELO (www.scielo.br). A consulta em literatura impressa tambm foi utilizada na elaborao do trabalho. Os dados foram analisados, sendo adotado como critrio para a seleo dos trabalhos e artigos, aqueles que faziam meno a utilizao da tcnica de anlise por infravermelho, independente do tipo especfico, como por exemplo, mdio ou prximo, sem limitao de data, nos idiomas ingls e portugus. Como no foram encontrados muitos trabalhos publicados com as palavras-chave utilizadas, foi adotado como critrio para excluso a avaliao dos trabalhos, sendo excludos trabalhos que no apresentaram informaes relevantes para a elaborao dessa monografia.

5. RESULTADOS 5.1. Definio

A espectrometria de infravermelho prximo (NIR) a medio de comprimento de onda e intensidade da absoro de luz infravermelha prxima realizada pela amostra. A luz infravermelha prxima se estende em uma faixa de 800 nm - 2.500 nm (12,500 - 4000 cm-1) e tem energia suficiente para excitar sobretons e combinaes de vibraes moleculares a altos nveis de energia. A espectroscopia NIR tipicamente usada na medio quantitativa de grupos funcionais orgnicos, especialmente O-H, NH, e C=O. Os limites de deteco so normalmente 0.1% e as aplicaes mais comuns incluem anlises farmacuticas, agrcolas, polimricos e clnicos (LINDE, 2011). A radiao infravermelha (IV) uma radiao no ionizante na poro invisvel do espectro eletromagntico que est adjacente aos comprimentos de onda longos, ou final vermelho do espectro da luz visvel. Ainda que em vertebrados no seja percebida na forma de luz, a radiao IV pode ser percebida como calor, por terminaes nervosas especializadas da pele, conhecidas como termorreceptores (WIKIPDIA, 2011). A radiao infravermelha foi descoberta em 1800 por William Herschel, um astrnomo ingls de origem alem. Hershell colocou um termmetro de mercrio no espectro obtido por um prisma de cristal com o a finalidade de medir o calor emitido por cada cor (BURNS; CIURCZAC, 2001). Descobriu que o calor era mais forte ao lado do vermelho do espectro, observando que ali no havia luz. Esta foi a primeira experincia que demonstrou que o calor pode ser captado em forma de imagem, como acontece com a luz visvel. Em uma primeira fase, as aplicaes qualitativas concentraram-se principalmente na faixa espectral do infravermelho mdio, uma vez que nessa regio possvel a observao de bandas de absoro de grupos orgnicos especficos como N-H, C-H, O-H, C-C, entre outros. Assim, esta tcnica foi largamente empregada pelos qumicos orgnicos para auxiliar a caracterizao de diversas substncias qumicas (BURNS; CIURCZAC, 2001).

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Fonte: < http://www.geocities.ws/saladefisica5/leituras/infravermelho.html> Figura 1: Experimento de William Hershell. A partir dos anos setenta uma nova fase de estudos espectroscpicos foi iniciada, agora tambm no campo das anlises quantitativas, promovido pelo desenvolvimento dos espectrofotmetros com Transformada de Fourier, da informtica, do interfaceamento de instrumentos eletrnicos com computadores e a introduo de recursos matemticos mais sofisticados. Com essas inovaes tecnolgicas, os estudos quantitativos expandiram suas fronteiras para as regies espectrais no infravermelho prximo e mdio. Isso desencadeou um surpreendente interesse de vrios grupos acadmicos de pesquisas, governamentais e industriais, na tentativa de desenvolver metodologias de anlise, trazendo como conseqncia o impacto direto no crescimento da produo e produtividade industrial, reduo de gastos e da quantidade de resduos industriais (BURNS; CIURZACK, 2001). A primeira aplicao da espectroscopia no infravermelho foi para monitorar a qualidade e controlar a produo na indstria petroqumica, por ocasio da segunda guerra mundial. Os principais compostos monitorados foram combustveis, lubrificantes e polmeros e os equipamentos utilizados, projetados pelas maiores companhias qumicas da poca como, Dow, Shell e Cyanamid, eram configurados somente para medidas de absoro na regio do infravermelho mdio (COATES,1999). A espectroscopia no infravermelho prximo no foi considerada inicialmente como uma tcnica analtica com algum valor prtico, sendo originalmente, uma extenso da regio do visvel que no foi explorada at por volta de 1970 (COATES,1999). Os primeiros trabalhos que proporcionaram interesse pelo estudo da

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espectroscopia no infravermelho prximo como ferramenta de anlise industrial foram desenvolvidos na dcada de setenta, pelo grupo de pesquisa do professor Karl Norris, quando este era responsvel por um grupo de pesquisa do Departamento de Agricultura dos Estados Unidos. Entretanto, as limitaes tecnolgicas da poca no permitiram o desenvolvimento vertiginoso do NIR como atualmente observado em diversos setores industriais como agrcola, petroqumico, alimentcio e farmacutico (WILLIAMS, 1998). Atualmente, o valor, a funcionalidade e os benefcios oferecidos pela espectroscopia no infravermelho, principalmente a espectroscopia no infravermelho prximo, so incontestveis (COATES,1999).

5.2. Princpio da espectroscopia no infravermelho

A radiao infravermelha no suficientemente energtica para causar transies eletrnicas e a absoro desta radiao est muito restrita a espcies moleculares que possuem diferenas de energia pequenas entre vrios estados vibracionais e rotacionais. Para absorver radiao infravermelha a molcula precisa sofrer uma variao no momento de dipolo como conseqncia do movimento vibracional ou rotacional. Apenas nessas circunstncias o campo eltrico alternado da radiao pode interagir com a molcula e causar variaes na amplitude de um de seus movimentos. O momento dipolar determinado pela magnitude da diferena de carga e a distncia entre os dois centros de carga. Quando uma molcula que possui essa variao do momento dipolar vibra, uma variao regular do momento dipolar ocorre e surge um campo que pode interagir com o campo eltrico associado radiao. Se a freqncia da radiao coincidir exatamente com a freqncia vibracional natural da molcula, ocorre uma transferncia de energia efetiva e resulta em uma variao da amplitude da vibrao molecular e a conseqncia a absoro de radiao. Do mesmo modo, a rotao de molculas assimtricas em torno dos seus centros de massa resulta em uma variao peridica do dipolo que pode interagir com a radiao. Nenhuma variao efetiva no momento de dipolo ocorre durante a vibrao ou rotao

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de uma molcula homonuclear, como O2, N2 ou Cl2 e, conseqentemente, essas substncias no podem absorver no infravermelho (COATES, 1999;SKOOG, 2002). A energia necessria para causar uma mudana de nvel rotacional pequena, da ordem de 100 cm-1 ou menor que 100.000 nm. O espectro infravermelho de um gs consiste normalmente de uma srie de linhas aproximadamente espaadas, isso porque h vrios estados rotacionais de energia para cada estado vibracional. Por outro lado, a rotao est rigorosamente restrita em lquidos e slidos e nestas condies as linhas discretas vibracionais/rotacionais desaparecem deixando picos vibracionais alargados (SKOOG, 2002). Em uma molcula, as posies relativas dos tomos no esto fixas variando continuamente em conseqncia dos tipos de vibraes e rotaes em torno das ligaes da molcula. Para uma molcula diatmica ou triatmica simples possvel definir com certa facilidade o nmero e a natureza de tais vibraes e relacion-las s energias de absoro. Entretanto, para molculas constitudas de muitos tomos possuindo um grande nmero de centros de vibrao, como tambm para molculas apresentando interaes entre vrios centros, muito difcil definir o nmero e a natureza das vibraes envolvidas e relacion-las suas respectivas energias de absoro (SKOOG, 2002). As vibraes so divididas em duas categorias: estiramentos (deformao axial) e deformaes angulares. Uma vibrao de estiramento envolve uma variao contnua na distncia interatmica ao longo do eixo da ligao entre dois tomos podendo acontecer de forma simtrica ou assimtrica, enquanto que as deformaes angulares so caracterizadas pela variao do ngulo entre duas ligaes e podem acontecer no plano ou fora do plano da molcula. Alm desses tipos de vibrao, interaes ou acoplamentos de vibraes podem ocorrer se as vibraes envolverem ligaes de um mesmo tomo central e o resultado disso uma variao nas caractersticas das vibraes envolvidas (SKOOG, 2002). Considerando que as vibraes acontecem de forma isolada em uma molcula, estas podem ser representadas por um modelo mecnico simples e conhecido como oscilador harmnico. As caractersticas da vibrao de estiramento pode se aproximar s de um modelo mecnico consistindo de duas massas ligadas por uma mola e as

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freqncias fundamentais de quaisquer dois tomos ligados podem ser calculadas assumindo que a energia segue o comportamento de um oscilador harmnico que obedece a Lei de Hooke. Assim as massas representam os tomos e a mola representa a ligao qumica entre eles. Uma perturbao de uma das massas ao longo do eixo da mola resulta em uma vibrao denominada de movimento harmnico simples e a fora restauradora proporcional ao deslocamento (lei de Hooke) e tende a restaurar as massas para sua posio original (BURNS; CIURZACK, 2001).

Fonte: < http://www.sorocaba.unesp.br/gpm/ftir.htm> Figura 2: Modos de vibrao molecular. Os sinais X e indicam movimentos para dentro e para fora do plano do desenho, respectivamente.

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Fonte: < http://www.webbook.nist.gov/chemistry> Figura 3: Espectro do Ethanol.

5.3. Tecnologias 5.3.1. Tipos de radiao

200-400nm U.V. 400 1000nm U.V. Visvel 1000 2500nm Infravermelho Infravermelho prximo (NIR) Infravermelho mdio (MID) Infravermelho longnquo (FIR) Microondas Rdio

Fonte:<http://estadoquantico.blogspot.com/2011/04/25-anos-do-desastre-dechernobyl.html> Figura 4: Tipos de radiao.

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5.3.2. Evoluo tecnolgica

O incio da utilizao da tcnica de infravermelho para anlises de compostos qumicos teve incio nos anos 70, sendo inicialmente utilizada apenas para anlises qualitativas, devido a necessidade de ferramentas algbricas de difcil processamento, o que impossibilitava o uso para anlises quantitativas, no decorrer dos anos a tcnica foi aprimorada, passando por diversas tecnologias. 1970: Filtros - Tcnica mais antiga, uso de Filtros Coloridos. 1980: Dispersivos - Luz de uma fonte decomposta atravs de um prisma (ou uma grade). 1980: Arranjo de fotodiodos 1990: Transformada de fourier

5.3.3. Espectrofotmetros dispersivos

Os espectrofotmetros dispersivos no infravermelho so instrumentos

registradores de feixe duplo, que usam redes de difrao para dispersar a radiao. Essa uma caracterstica importante devido baixa intensidade das fontes de infravermelho, baixa sensibilidade dos transdutores para infravermelho e conseqente necessidade de grandes amplificaes de sinal (COATES, 1999; SKOOG, 2002). Geralmente, este tipo de equipamento incorpora um modulador de baixa freqncia que permitir ao detector distinguir entre o sinal da fonte e sinais de radiao espria, tal como emisso infravermelha ao redor do transdutor. Baixas velocidades de modulao so requeridas devido ao tempo de resposta lento dos transdutores para infravermelho usados na maioria dos instrumentos dispersivos. Em geral, a ptica dos instrumentos dispersivos muito parecida com a de equipamentos no UV/VIS, exceto que os compartimentos de amostra e referncia esto sempre localizados entre a fonte e o monocromador nos instrumentos no infravermelho. Essa disposio possvel

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porque a radiao infravermelha, em contraste com a UV/VIS, no energtica o suficiente para causar decomposio fotoqumica da amostra. Colocando a amostra e a referncia antes do monocromador, tem-se a vantagem de que a maior parte da radiao espalhada, gerada no compartimento da clula, efetivamente removida pelo monocromador e no atinge o transdutor (SKOOG, 2002).

Fonte: FELLI,2011. Figura 5: Espectrofotmetros Dispersivos.

5.3.4. Instrumentos no-dispersivos

Estes instrumentos so simples e robustos e foram projetados para anlise quantitativa. Alguns so fotmetros de filtro nico ou no-dispersivo, outros usam filtros no lugar de um elemento dispersivo para a obteno de um espectro completo, outros ainda, no fazem uso de qualquer dispositivo para seleo de comprimento de onda. Em geral, este tipo de instrumento menos complexo, mais robusto, fcil de manter e menos caro que os instrumentos descritos anteriormente. Os fotmetros de filtro podem utilizar filtros de interferncia e so normalmente designados para anlises quantitativas. Uma variedade de filtros disponvel atualmente, cada um indicado para uma aplicao especfica (SKOOG, 2002).

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5.3.5. Espectrofotmetro com Transformada de Fourier

Espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIV) uma tcnica de anlise para colher o espectro infravermelho mais rapidamente. Em vez de se coletar os dados variando-se a freqncia da luz infravermelha monocromtica, a luz IV (com todos os comprimentos de onda da faixa usada) guiada atravs de um interfermetro. Depois de passar pela amostra o sinal medido o interferograma. Realizando-se uma transformada de Fourier no sinal resulta-se em um espectro idntico ao da espectroscopia IV convencional (dispersiva) (WIKIPDIA, 2010). Esse tipo de equipamento utiliza um interfermetro ao invs de redes de difrao. Sua popularizao ocorreu com o surgimento de microcomputadores, com o seu interfaceamento e com a utilizao da transformada de Fourier para o tratamento de dados. Espectrofotmetros com Transformada de Fourier apresentam algumas vantagens, como a grande eficincia no transporte da radiao at o detector, o que melhora a relao sinal/rudo, apresenta um alto poder de resoluo e reprodutibilidade do comprimento de onda, todos os elementos de resoluo para um espectro so medidos simultaneamente o que possibilita a aquisio de dados de um espectro inteiro em cerca de um segundo ou menos (COATES, 1999; SKOOG, 2002). A maioria dos equipamentos utilizados atualmente, utilizam o princpio interferomtrico, sendo que diante de tantas vantagens, a existncia e utilizao de equipamentos dispersivos para a regio NIR justificada pelo fator custo e por se tratar de uma regio onde os sinais observados so em sua maioria bandas relativamente largas, em que uma grande resoluo no requerida na maioria das vezes, uma vez que as aplicaes geralmente so quantitativas (BURNS; CIURCZAK, 2001, dentre outros).

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Fonte: FELLI,2011. Figura 6: Espectrofotmetros com Transformada de Fourier.

5.4. Principais compontes de um equipamento de infravermelho

A Figura 1 mostra um esquema bsico dos componentes principais de um equipamento de infravermelho:

FONTE

SELETOR DE COMPRIMENTO DE ONDA

RECIPIENTE DE AMOSTRA

TRANSDUTOR

PROCESSADOR E DISPOSITIVO DE SADA

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Figura 7. Componentes bsicos de um equipamento que opera na regio do infravermelho. As fontes de infravermelho consistem em um slido inerte como a fonte de Nernst que composta de xido de terras raras, a fonte Globar que consiste em uma barra de carbeto de silcio, a fonte de filamento incandescente que representada atravs de um espiral de nquel-cromo, o arco de mercrio, a lmpada de filamento de tungstnio, o laser de dixido de carbono, so exemplos de fontes para a regio do infravermelho que encontram aplicaes de acordo com o interesse especfico ou a regio NIR/MID/FAR (COATES, 1999; SKOOG, 2002). A princpio, os equipamentos de infravermelho no diferem muito dos equipamentos utilizados nas regies do ultravioleta e do visvel no que diz respeito aos componentes bsicos. Contudo, diferenas notrias so encontradas principalmente na fase de seleo de comprimento de onda, que originam espectrofotmetros dispersivos ou interferomtricos ou, ainda, fotmetros que so equipados com filtros (COATES, 1999; SKOOG, 2002). Os recipientes para a amostra variam de acordo com a regio NIR/MID/FAR e com o estado fsico da amostra. Os transdutores para o infravermelho so de trs tipos gerais: 1. Transdutores trmicos: a resposta depende do efeito de aquecimento da radiao sendo comumente encontrados em fotmetros e espectrofotmetros dispersivos. 2. Transdutores especializado piroeltricos: com consiste em um e transdutor eltricas trmico muito e so propriedades trmicas especiais

encontrados em fotmetros e espectrofotmetros dispersivos. 3. Transdutor fotocondutor: consiste na absoro da radiao pelos materiais componentes do transdutor, essa absoro promove eltrons no-condutores de valncia a um estado condutor, de energia mais elevada, decrescendo a resistncia eltrica do semicondutor. A composio dos materiais componente do transdutor varia de acordo com a regio NIR/MID/FAR. Esse tipo de

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transdutor encontrado em instrumentos multiplexados com transformada de Fourier (SKOOG, 2002). Os instrumentos para a regio do infravermelho prximo so semelhantes aos utilizados para a espectroscopia de absoro no UV/VIS. Lmpadas de tungstnio/halognio com janelas de quartzo servem como fontes, as clulas para medidas de absoro so normalmente de quartzo ou slica fundida, transparentes at 3.000 nm. O caminho ptico varia de 0,1 a 10 cm. Os detectores so, em geral, fotocondutores de sulfeto de chumbo (SKOOG, 2002). Esto disponveis uma srie de fotmetros e espectrofotmetros projetados especificamente para a regio do infravermelho prximo. A variedade de instrumentos muito grande, indo dos mais sofisticados com Transformada de Fourier, aos de feixe duplo com redes de difrao ou arranjo de diodos, at os instrumentos mais simples baseados em filtros (BURNS, 2001; MCCLURE, 1994, dentre outros).

5.5. Processamento dos dados 5.5.1. Quimiometria

A quimiometria pode ser definida como a pesquisa e utilizao de mtodos matemticos e estatsticos para o tratamento de dados qumicos de forma a extrair uma maior quantidade de informaes e melhores resultados analticos. Os mtodos utilizados na quimiometria, a princpio, foram desenvolvidos em outras disciplinas que com a aplicao e pesquisas voltadas para o tratamento de dados qumicos acabou dando origem a uma nova rea dentro da qumica analtica. Isso se deu aps a segunda metade dos anos 60, com o surgimento de mtodos instrumentais computadorizados para a anlise qumica que promoveu a gerao de uma grande quantidade de dados. At este perodo, os qumicos baseavam suas decises em uma pequena quantidade de dados que, na maioria das vezes, eram obtidos de forma lenta e dispendiosa. A partir dos anos 60, com a grande quantidade de dados de obteno rpida e com menor esforo, foi preciso analisar todos esses dados e extrair maior

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quantidade de informaes relevantes. Foi ento, que teve incio a pesquisa e utilizao dos mtodos matemticos e estatsticos que acabaram resultando nessa nova rea conhecida como quimiometria (OTTO, 1999). A quimiometria pode ser considerada uma das reas mais recentes da qumica analtica. Desde o seu surgimento no final dos anos 60 at os dias de hoje, foram desenvolvidos muitos mtodos que tem tornado possvel o processamento e interpretao de dados que antes seriam impossveis de serem analisados. Um exemplo importante do sucesso da utilizao da quimiometria so as anlises realizadas na regio do infravermelho prximo, as quais, sem a utilizao de modelos de calibrao multivariada no apresentam possibilidades para determinaes quantitativas (OTTO, 1999). Com o crescimento da quimiometria foram desenvolvidas novas ferramentas para tratamento de dados encontrando aplicaes distintas conforme o objetivo do estudo como, por exemplo, a otimizao de processos, a classificao de dados, as determinaes quantitativas, entre outros. Assim, a quimiometria foi dividida em diversas frentes de pesquisa e aplicao: - Processamento de sinais analticos; - Planejamento e otimizao de experimentos; - Reconhecimento de padres e classificao de dados; - Calibrao multivariada; - Mtodos de inteligncia artificial (OTTO, 1999). Dentro dessa diviso, a principal linha de pesquisa da quimiometria aplicada qumica analtica tem sido a construo de modelos de regresso a partir de dados de primeira ordem, ou seja, dados que podem ser representados atravs de um vetor para cada amostra, sendo a construo desses modelos denominada de calibrao multivariada (BRERETON, 2000).

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5.5.2. Anlise multivariada

Mtodos de Anlise Multivariada tm sido cada vez mais utilizados em qumica analtica, principalmente quando os componentes presentes em uma mistura precisam ser determinados, mas a informao analtica disponvel no apresenta seletividade, ou seja, em uma mistura no possvel se identificar os componentes individuais de cada espcie a partir da resposta instrumental. A calibrao multivariada baseia-se em estabelecer uma relao entre duas matrizes (ou blocos) de dados qumicos, quando ocorrer uma dependncia entre as propriedades que descrevem cada uma delas (DE SOUZA et al., 2004). Nos mtodos de anlise univariveis, somente a absorbncia de uma freqncia associada concentrao, enquanto que mtodos multivariados usam, simultaneamente, duas ou mais freqncias. A preciso dos mtodos univariveis dependente da capacidade para identificar uma nica banda isolada para cada componente. Os mtodos multivariveis,entretanto, podem ser utilizados igualmente quando esto sobrepostas informaes espectrais selecionadas (DE SOUZA et al., 2004). Os mtodos de anlise multivariada aplicados na modelagem de informaes qumicas fazem parte da rea da quimiometria, e so assim denominados pois no caso da espectroscopia permitem manipular dados de absorbncia espectrais associadas a uma ou mais freqncias ao mesmo tempo. Estes mtodos tm recentemente tornado possvel modelar propriedades qumicas e fsicas de dados simples e complexos, a partir de dados espectroscpicos (Zamora et al., 1997). Pode-se citar a regresso por quadrados mnimos parciais (PLS) como um dos tratamentos de dados matemticos mais utilizados em anlises de multicomponentes na calibrao de sistemas complexos e verificao da preciso e exatido da exatido da sua calibrao, bem como previso sem experincia espectroscpica extensiva (DE SOUZA et al., 2004).

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5.5.3. Calibrao
A calibrao pode ser definida como uma srie de operaes que estabelecem, sob condies especficas, uma relao entre medidas instrumentais e valores para uma propriedade de interesse correspondente (EURACHEM/CITAC, 1998). O conjunto de dados empregado para essa finalidade chamado de conjunto de calibrao. Os parmetros do modelo so denominados de coeficientes de regresso (b) determinados matematicamente a partir dos dados experimentais (HELLAND, 1998; MARTENS, 1996). O passo seguinte calibrao a validao. Nesta etapa, as variveis independentes obtidas, para um outro conjunto de amostras, so utilizadas em conjunto com o coeficiente de regresso, para calcular os valores previstos para a varivel dependente. No conjunto de validao utilizam-se amostras cujas variveis dependentes sejam conhecidas para que seja possvel estabelecer uma comparao entre os valores previstos pelo modelo e os valores conhecidos previamente atravs de uma metodologia padro, o que permitir a avaliao sobre o desempenho do modelo de calibrao proposto (MARTENS, 1996). Existem diversos mtodos para a construo de modelos de calibrao, sendo que a funo que ajusta as variveis dependentes e independentes pode ser linear ou no, dependendo da complexidade do sistema em estudo (SEKULIC, 1993). Dentre os mtodos de calibrao existentes, sem dvida, os mais difundidos so ainda os mtodos de calibrao univariada que tambm so conhecidos como calibrao de ordem zero, ou seja, tem-se apenas uma medida instrumental para cada uma das amostras de calibrao, isto , para cada amostra tem-se apenas um escalar. Esses mtodos so descritos na literatura em vrios trabalhos sua aplicao e validao so relativamente fceis. No entanto, a aplicao da calibrao univariada restrita, visto que, quando a amostra no livre de interferentes e a medida realizada diretamente na metodologia instrumental, isso provavelmente provocar desvios na determinao da propriedade de interesse e a aplicao deste mtodo de calibrao torna-se invivel (CHARNE, 1999;MILLER, 2000, dentre outros).

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Em calibrao multivariada, mais de uma resposta instrumental relacionada com a propriedade de interesse. Esses mtodos de calibrao possibilitam a anlise mesmo na presena de interferentes, desde que esses interferentes estejam presentes nas amostras utilizadas para a construo do modelo de calibrao. Outras possibilidades apresentadas por este tipo de calibrao so determinaes simultneas e anlises mesmo sem resoluo. Isso faz com que os modelos de calibrao multivariada sejam uma alternativa quando os mtodos univariados no encontram aplicao. Neste tipo de calibrao a resposta instrumental representada na forma de matriz, enquanto a propriedade de interesse, determinada por uma metodologia padro, representada por um vetor (VALDERRAMA, 2005). Uma diversidade de mtodos de regresso vem sendo utilizado em qumica analtica para a construo de modelos de calibrao multivariada, dentre esses os mais empregados tem sido a regresso linear mltipla (MLR), regresso por componentes principais (PCR) e regresso por mnimos quadrados parciais (PLS), que so mtodos para ajuste linear entre as variveis. Tem-se verificado que a maioria dos mtodos de calibrao multivariada empregados em espectroscopia utiliza ajuste linear entre as variveis, uma vez que este representa o modelo de mais fcil elaborao e interpretao (VALDERRAMA, 2005).

5.5.4.

Regresso Linear Mltipla MLR

O modelo mais simples em calibrao multivariada consiste na resoluo de um

sistema de equaes lineares em uma regresso linear mltipla (MLR do ingls, Multiple Linear Regression) (OTTO, 1999). Este modelo de calibrao inversa, para a determinao de um analito, pode ser obtido a partir de uma matriz X de respostas instrumentais. com dimenso (i x j), arranjada de acordo com a Figura 2, onde i representa o nmero de amostras a ser utilizada na construo do modelo (conjunto de calibrao) e j representa o nmero de variveis, e um vetor y de dimenso (i x 1), que contm as concentraes de referncia das amostras de calibrao. A partir da cada varivel dependente de y expressa como uma combinao linear das variveis

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independentes da matriz X e um vetor que contm os coeficientes de regresso, bMLR, relaciona X e y por meio da expresso (BRERETON, 2000): y = XbMLR em que bMLR um vetor de dimenso (j x 1). Para a obteno do vetor dos coeficientes de regresso, esta equao pode ser resolvida por mnimos quadrados (BRERETON, 2000): ^ b MLR (XTX) -1XTy (1)

(2)

em que, os ndices sobrescritos 1 e T representam a inverso e transposio de uma matriz ou vetor, respectivamente. Uma estimativa para a concentrao da espcie de interesse ( y ) pode ser obtida por (BRERETON, 2000): y = XbMLR (3)

A regresso linear mltipla apresenta dois problemas que limitam sua aplicao. O primeiro deles que o nmero de amostras deve ser igual ou superior ao nmero de variveis, uma vez que o modelo consiste na resoluo de um sistema de equaes lineares simultneas quando o nmero de variveis superior ao nmero de amostras, ou vice-versa, o sistema de equaes a ser resolvido torna-se indeterminado. O segundo problema constatado para a MLR que a matriz (XTX) pode no apresentar inversa devido a alta correlao entre as variveis (BRERETON, 2000):

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Fonte: VALDERRAMA, 2005. Figura 8. Construo da matriz X para calibrao multivariada.

5.5.5.Regresso por Componentes Principais

A regresso por componentes principais (PCR- do ingls, Principal Components Regression) surge como uma alternativa no intuito de contornar os problemas apresentados pela MLR. Neste mtodo de regresso utiliza-se a anlise de componentes principais (PCA do ingls, Principal Component Analysis) como a tcnica de ortogonalizao baseada em mudana de base vetorial. Este procedimento resolve os dois principais problemas da MLR, uma vez que a PCA pode ser utilizada para a reduo do nmero original de variveis sem acarretar na perda significativa de informao resolvendo, assim, o problema de existncia de alta colinearidade entre as colunas de X e a necessidade de um nmero excessivo de amostras para a construo do modelo por MLR (OTTO, 1999; BEEBE, 1987, dentre outros). 5.5.6. Regresso por mnimos quadrados parciais Este mtodo foi desenvolvido nos anos 70 por Herman Wold, e um excelente guia prtico foi escrito por Geladi e Kowalski (1986). Como usual em procedimentos analticos primeiro desenvolve-se um modelo de calibrao (Pimentel, Barros Neto,

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1996). Uma matriz X com m colunas, correspondendo ao sinal espectral (p. e. absorbncia) para cada nmero de onda, e n linhas, representando cada amostra (padro). Uma segunda matriz Y, definida com k colunas, com as informaes qumicas (p. e. concentraes) e com n linhas, correspondendo a cada amostra. Utilizado tcnicas de anlise fatorial a matriz X decomposta numa soma de matrizes menores (equao 1). X = M1 + M2 + ... + Ma + E (4)

Sendo Mi os componentes principais ou variveis latentes, com dimenso 1, 2 ... a, onde a corresponde ao nmero de fatores (componentes principais ou variveis latentes) selecionado para truncar a igualdade. E corresponde a matriz de resduos, relacionada ao nmero de fatores. A matriz Y decomposta de maneira anloga. Finalmente, determina-se a correlao entre as variveis latentes usando os componentes das matrizes menores. No modelo PLS as decomposies das matrizes X e Y so feitas simultaneamente por meio interativo e se acredita que a informao contida em Y transferida para X. Aps a calibrao possvel prever as propriedades de novas amostras a partir de medidas espectrais. Os sinais espectrais so definidos numa nova matriz Xp, que contm m colunas mas t linhas, correspondendo as t novas amostras. Usando a correlao construda na fase de calibrao as propriedades desconhecidas so coletadas numa nova matriz Yp (DE SOUZA, FERRO, 2006). 5.5.7. Deteco de amostras anmalas Outliers

Outliers o termo utilizado para designar amostras anmalas que podem estar presentes nos conjuntos de calibrao e de validao, que sero empregados na construo e validao de um modelo de calibrao multivariada, respectivamente. Normalmente, essas amostras anmalas possuem um comportamento diferente das demais amostras do conjunto de dados (VANDEGINSTE, 1998).

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A presena desse tipo de amostra no conjunto de calibrao pode conduzir a modelos com baixa capacidade de previso, ou seja, que produzem altos valores de erro. Quando presentes no conjunto de validao, podem influenciar os resultados, geralmente, levando a resultados que indicam que o modelo no adequado ou que a sua capacidade inferior que poderia ser apresentada na ausncia destas amostras anmalas. Assim, a identificao de anomalias um passo importante para a otimizao dos conjuntos de calibrao e validao, sendo que, a excluso destes permite a construo de modelos mais eficientes e precisos e com melhor capacidade de previso (MARTENS; NAES, 1996). Existem diversas tcnicas para a identificao de amostras anmalas, como por exemplo: a distncia de Mahalanobis, mtodo da incerteza (HOY, 1998;FERNNDEZ PIERNA, 2002, dentre outros), uma metodologia conhecida como convex hull funes potenciais, (FERNNDEZ PIERNA, 2002;JOUAN-RIMBAUD, 1999), RHM (do ingls, Resampling by the Half-Means) (FERNNDEZ PIERNA, 2002;EGAN, 1998, dentre outros), SHV (do ingls, Smallest Half- Volume), (FERNNDEZ PIERNA, 2002;EGAN, 1998), entre outros, sendo que esta rea constitui uma linha de pesquisa recente e em andamento que, no entanto, de grande importncia tendo em vista a variedade de tipos de equipamentos e a grande quantidade de amostras que geram dados de primeira ordem.

5.6. Aplicaes da espectroscopia e da quimiometria na anlise de medicamentos

A tcnica de anlise de reflexo no infravermelho prximo (NIR) pode ser aplicada nas anlises farmacuticas, sua aplicao ainda um desafio, pois a tcnica ainda no descrita em farmacopias para fins quantitativos, porm amplamente utilizada em outros segmentos, como por exemplo, polmeros, agroqumicos, agrotxicos, entre outros. O desenvolvimento da tcnica se deve a adequada determinao qualitativa e quantitativa de parmetros fsicos e qumicos, habilidade no processo, alm de ser compatvel com a fibra tica, fator este que acaba por facilitar as anlises. O mtodo de anlise por NIR geralmente utilizado como uma alternativa

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para os mtodos de referncia, como por exemplo, Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE), Cromatografia Gasosa (CG), Espectrofotmetria de UV/Vis, visando a diminuio nos custos analticos, otimizao dos processos e diminuio no tempo de anlise.

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6.

DISCUSSO

Os resultados apresentados, demonstram que a tcnica de quantificao de compostos qumicos por Infravermelho Prximo (NIR) de grande relevncia, ainda em expanso, principalmente quando se fala na aplicao em qumica analtica quantitativa. A tcnica representa hoje uma alternativa eficaz, que depende de alguns fatores importantes, para que sejam obtidos resultados confiveis e precisos. A calibrao um dos fatores de grande importncia, os melhores equipamentos disponveis no mercado atual, devem conter em seu sistema operacional a calibrao multivariada, que faz o uso de um simples ponto espectral, mas leva em considerao as caractersticas espectrais de uma larga faixa. Por essa razo, as anlises de bandas espectrais com picos largos tornam-se possveis. A informao contida no espectro de amostras de calibrao sero comparadas com a informao de valores usando a regresso, que pose ser a PLS. O mtodo assume que as variaes observadas no espectro so em conseqncia da mudana na concentrao dos componentes. Contudo, a correlao entre a mudana de concentrao dos componentes e a mudana de sinal do infravermelho no necessariamente linear. As principais desvantagens da Calibrao Multivariada so: A calibrao Multivariada requer um grande nmero de amostras de calibrao contendo grande quantidade de informaes (vrios espectros com centenas ou milhares de pontos com informaes relevantes). Para manipular as informaes de forma conveniente, os dados espectrais e os dados de concentrao so escritos na forma de matrizes, onde cada linha na matriz de dados espectrais representa os espectros das amostras. A matriz de dados de concentrao contem os correspondentes valores de concentrao das amostras. As matrizes sero quebradas em vetores que sero chamados de fatores ou componentes principais.

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As principais vantagens da Calibrao Multivariada so: A principal vantagem dessa abordagem, que nem todos os componentes principais so necessrios para descrever uma relevante caracterstica espectral, por exemplo, alguns desses vetores representam simplesmente o rudo espectral da anlise. Somente relevantes componentes principais sero ento usados ao invs de todos os dados espectrais originais, reduzindo consideravelmente a quantidade de informaes. O Algoritmo PLS entrar em ao para encontrar a melhor funo de correlao entre a matriz dos dados espectrais e matriz da concentrao. A utilizao do algoritmo PLS permite quantificar mais de um componente em uma amostra. Para a utilizao da tcnica, alm de um equipamento que tenha disponvel a calibrao multivariada, com um logaritmo tipo PLS, necessrio que seja desenvolvido um mtodo quimiomtrico, usando um nmero representativo de amostras de calibrao de composio conhecida, que tenha como referncia um mtodo analtico confivel, validado. Os espectros IR destas amostras sero usados para calcular uma funo de calibrao, que um elemento indispensvel no modelo quimiomtrico desconhecidas. Para se desenvolver um mtodo quimiomtrico necessrio: O primeiro passo para se construir um modelo quimiomtrico selecionar um nmero suficientemente de amostras para representar o sistema. Essas amostras precisam ter seus componentes analisados quantitativamente em mtodos confiveis (mtodos de referncia) e seus espectros coletados no infravermelho. Dependendo do tipo de mtodo de validao usado, um set de calibrao e um set de teste so formados com esses espectros. Nmero mnimo de amostras recomendados: Estudo de viabilidade: ~ no mnimo 20 amostras que ser usado posteriormente para analisar as amostras

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Aplicaes comuns: ~ 50-100 amostras Aplicaes complexas: > 150 amostras Alguns fatores que podem interferir na modelagem e na preciso do mtodo quimiomtrico: Qualidade do instrumento (Resoluo, estabilidade, relao sinal/rudo, preciso, robustez); Preparao da amostra e representatividade da amostra; Preciso do mtodo referncia (por exemplo, via mida) (em muitos casos, a preciso do mtodo IR ou NIR depende unicamente da preciso do mtodo referncia). Alguns fatores que podem interferir na qualidade da predio: Seleo da faixa espectral: Regies com rudos espectrais includos na calibrao; Regies com absoro total includos na calibrao. Seleo correta do experimento para medio; Ferramentas para o processamento de dados; Valores das amostras de calibrao bem distribudas na faixa selecionada. Evitar o rudo espectral, como por exemplo a borda direita ou esquerda (extremos) onde o detector tem menor sensibilidade. Evitar faixas espectrais com absoro total (absoro > 2,0 AU). Outro cuidado ser tomado no desenvolvimento de um mtodo quimiomtrico, so os outliers, que so erros de calibrao devido a valores de referncia ruins. As possveis causas para os outliers so: A amostra no homogeneizada corretamente;

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Variao de temperatura de amostras lquidas; Utilizao incorreta de probe; Presena de bolhas no gap ptico; Seleo errada do mtodo ou do experimento (parmetros de medio); Os porta amostras utilizados na calibrao e na medio no so idnticos.; Mesmas condies de anlise. (exemplo: ngulo da probe, etc.). As solues para os outiliers so: Reviso do mtodo de anlise referncia; Reviso de preciso, limite de erros e reprodutibilidade das anlises referncia; Repetio e/ou determinao mltipla de valores referncia de algumas amostras. A tabela 1 abaixo, mostra as caractersticas da tcnica de anlise por Infravermelho Prximo quando comparado aos mtodos tradicionais: Tabela 1: Comparativo das caractersticas das tcnicas analticas Parmetros Custo Equipamento Tempo de Anlise Forma de Medio Preparo na amostra Uso de reagentes Uso de Consumveis Custo Manuteno Metodologia pode ser validada NIR Relativamente Elevado Rpido (cerca de 5 segundos) Automtico No necessrio No necessrio No necessrio Mdio Sim, mas depende de outro mtodo como Analisa mais de um referncia Sim Sim No CLAE Relativamente Elevado Considerado Demorado Automtico Necessrio Necessrio Necessrio Alto Sim, independente UV/VIS Mdio Rpido Semi-Automtico Necessrio Necessrio Necessrio Mdio Sim, independente

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composto de uma vez Emite Resultados Precisos

Sim

Sim

Sim

7. CONCLUSO

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Atravs do presente trabalho foi possvel esclarecer e elucidar a tcnica de analtica de quantificao de compostos qumicos atravs da espectrometria de IV NIR. Conclui-se que a tcnica analtica uma alternativa eficaz, rpida e robusta e representa uma alternativa para a substituio dos mtodos analticos tradicionais, como por exemplo, Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE), Cromatografia Gasosa (CG), Espectrofotmetria de UV/Vis desde que observados as condies para a aplicao da tcnica, que exige o avano dos sistemas informatizados, assim como tambm um investimento considerado elevado, porm esse investimento deve ser avaliado com cautela, levando-se em considerao o custo benefcio que a tcnica traz, principalmente pela rapidez nos resultados e por no exigir pr-tratamento de amostras, alm disso o mtodo no substitui totalmente os mtodos tracionais, j que necessita de um mtodo de referncia validado para a sua utilizao, sendo assim se torna muito til a utilizao dessa tcnica na rotina laboratorial de controle de qualidade de medicamentos, pois com a implantao da tcnica de Infravermelho Prximo (NIR) em um laboratrio, pode-se poupar os equipamentos tradicionais ou utiliz-los para anlises mais complexas ou outras atividades laboratoriais. As principais vantagens da aplicao da tcnica so: rapidez, mtodo no invasivo, no necessidade de reagentes e possibilidade monitoramento on-line. As principais desvantagens da aplicao da tcnica so: Custo elevado, necessidade de software avanado, necessidade de um mtodo de referncia validado, e aceitabilidade os rgos de fiscalizao. Avaliando-se cuidadosamente as vantagens e desvantagens da tcnica e a aplicao desejada, possvel implantar em um laboratrio analtico a tcnica de quantificao de compostos qumicos atravs da espectrometria de IV NIR e obter timos resultados, que associada as demais tcnicas analticas pode contribuir positivamente na rapidez, otimizao dos processos, diminuio dos custos a longo prazo, gerao de processos automatizados, diminuio de gastos de reagentes, e melhor utilizao e aproveitamento dos equipamentos analticos tradicionais.

8. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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