ANTIGENOS Tema 7

Curso 07-08

Inmungenos, antgenos y haptenos. Adyuvantes La respuesta inmune adaptativa se produce como consecuencia de la exposicin a molculas extraas. Estas sustancias extraas se definen del siguiente modo: Inmungeno, sustancia que induce la respuesta inmune adaptativa. Antgeno, cualquier agente capaz de unirse especficamente a los componentes de la respuesta adaptativa (receptor del linfocito B [BCR] y anticuerpos solubles, as como al receptor del LT [TCR]) Hay compuestos que no son capaces de inducir una respuesta adaptativa pero, en cambio, reaccionan con los componentes de la respuesta elaborada frente a ellos. Es decir, todos los inmungenos son antgenos, pero no todos los antgenos son inmungenos. Hapteno. Esta diferencia se hace obvia en el caso de las sustancias de bajo peso molecular (grupo en el que se incluyen muchos antibiticos y drogas), que no son capaces, por si mismos, de inducir una respuesta inmune pero que cuando se unen a molculas de peso molecular alto (tales como las protenas) forman conjugados capaces de inducir una respuesta inmune. Estas molculas, de peso molecular bajo, se denominan Haptenos y la molcula a la que se acoplan Portadores (carrier). Por tanto, un Hapteno es un compuesto incapaz, por si mismo, de inducir una respuesta inmune pero que reacciona con los componentes de la respuesta que se induce cuando se

conjuga con una molcula portadora. Se ha comprobado que se puede producir respuesta inmune frente a todas las familias de compuestos bioqumicos conocidas, incluyendo carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos. Tambin se pueden inducir la respuesta a drogas, antibiticos, aditivos alimentarios, cosmticos y pequeos pptidos sintticos, pero solo cuando se acoplan a un portador. Caractersticas de los inmungenos Para que una sustancia sea inmunognica debe tener las siguientes caractersticas: Ser extraa (1) Peso molecular alto (2) Complejidad qumica (3) Estructura (4) Poderse degradar a pptidos que interaccionen con las protenas del CMH (5) (1) El organismo normalmente no responden frente a lo propio; esta es la es la primera condicin para que un compuesto sea inmunognico. Cuanto ms extraa sea la sustancia (ms distancia gnica) mayor ser su inmunogenicidad. (2) Las sustancias necesitan un peso molecular mnimo para ser inmunognicas; 5-6 KDa se consideran el peso mnimo para la inmunogenicidad y esta aumenta en funcin del peso molecular. Pgina 1 de 5 FYTI. Curso 07-08 Tema 07. ANTIGENOS

(3) Un inmungeno debe tener una complejidad qumica mnima. Homopolmeros de un

solo aminocido con peso molecular alto (p.e. poli-lisina de Pm 30 KDa) es muy raro que sean inmunognicos. Pero si se les unen molculas pequeas o se introducen otros aminocidos (sobre todo si son aromticos), la molcula se torna inmunognica. En general, el aumento de la complejidad qumica es directamente proporcional al aumento de la inmunogenicidad. (4) La mayora de los inmungenos son protenas y la respuesta adaptativa reconoce muchos caracteres estructurales de estos compuestos. Por ejemplo, los anticuerpos pueden reconocer caractersticas estructurales de una protena, tales como las estructuras: Primaria (secuencia de los aminocidos en la cadena) Secundaria (plegamientos de la cadena primaria, que pueden ser en hlices alfa o en estructuras planas beta) Terciaria (formada por los plegamientos de la estructura secundaria mantenidos por puentes disulfuro, puentes de hidrgeno, interacciones hidrofbicas, etc.) Cuaternaria (formada por la yuxtaposicin de varias subunidades proteicas) (5) Para que los antgenos interaccionen con las clulas T (que son las que ponen en marcha y coordinan la respuesta adaptativa) tienen que ser capaces de unirse a las molculas CMH que se expresan sobre las CPAs. Estas clulas primero degradan mediante enzimas a los antgenos (procesamiento) y luego unen los fragmentos producidos (epitopos) a las molculas CMH para ensear el conjunto sobre la superficie

(presentacin). Otros requerimientos Hay, adems, otros factores que influyen en la inmunogenicidad, tales como la base gentica (genotipo) del hospedador, la dosis, va de administracin, etc. Las dosis insuficientes y las demasiado abundantes no provocan la puesta en marcha de la respuesta adaptativa, ya que inducen la tolerancia de los linfocitos. Pero adems de la dosis adecuada tambin influye en la respuesta el nmero de dosis administradas (pauta de inoculacin). En cuanto a la va de administracin, la subcutnea da normalmente muy buenos resultados, ya que el antgeno se deposita en la vecindad de las clulas de Langerhans (DCs inmaduras de la piel), que son las CPAs ms potentes del organismo. Estas clulas emigran a los ganglios linfticos prximos, donde se elabora la respuesta adaptativa. Los antgenos administrados por va intravenosa llegan al bazo, donde pueden inducir tolerancia o, si se presentan por CPAs, inducir respuesta. La va oral induce respuestas locales de anticuerpos en la lmina propia del intestino y, con frecuencia, provoca tolerancia sistmica a tal antgeno. La va respiratoria (intranasal) es frecuente que provoque respuestas alrgicas. Como la respuesta adaptativa depende de las interacciones celulares, el tipo y la intensidad de la respuesta refleja la poblacin celular presente en el rgano al que llega

finalmente el antgeno. Respuestas primaria y secundaria El primer contacto con un inmungeno provoca una respuesta primaria, tras una serie de interacciones entre clulas T, CPAs y clulas B. La curva de anticuerpos que se produce es caracterstica. Pgina 2 de 5 FYTI. Curso 07-08 Tema 07. ANTIGENOS

El siguiente contacto con el mismo inmungeno induce una respuesta secundaria que difiere de la primaria (ms rpida, ms amplia, ms eficaz), como si el organismo recordara que ya haba estado expuesto a ese inmungeno antes. De hecho, la respuesta secundaria y las subsecuentes explotan el aumento del nmero de linfocitos especficos para el inmungeno producidos durante la respuesta primaria. Esta respuesta tambin se llama respuesta de memoria o anamnsica y los linfocitos que participan en ella se denominan clulas de memoria. Antigenicidad y sitio de unin al antgeno La respuesta inmune genera anticuerpos y/o linfocitos que reaccionan especficamente con alguna porcin del antgeno, a la que se denomina epitopo (tambin se le llama determinante antignico). El sitio de unin de un anticuerpo o del receptor de un linfocito al epitopo presenta una estructura nica que es complementaria del mismo. La porcin del anticuerpo (Ig) que se une especficamente al epitopo est situada en una

zona hipervariable de la molcula, que forma la llamada regin determinante de la complementariedad (CDR). El tamao del epitopo del antgeno que se combina con el CDR de un anticuerpo es de 5-7 aminocidos. Lo que reconoce el receptor del linfocito T son secuencias de 8-12 aminocidos asociados en forma no covalente a protenas del Complejo Principal de Histocompatibilidad (CMH) en la superficie de las CPAs (clulas presentadoras de antgenos). Reconocimiento antignico por parte de los linfocitos B y T Caractersticas Linfocitos B Linfocitos T Interaccin con el Ag Naturaleza del Ag Fijacin Ags solubles Epitopos reconocidos El receptor B (Ig de membrana) fija al Ag Protenas, hidratos de carbono, lpidos SI Accesibles (secuenciales o conformacionales) El receptor T fija al conjunto Ag-CMH Pptidos NO Secuenciales, procedentes del procesamiento Los epitopos que reconocen las clulas B y T.

Como se ve en la tabla, los epitopos reconocidos por las clulas B difieren de los que reconocen las clulas T. En general, los receptores de los linfocitos B reconocen y fijan antgenos libres, en solucin. Por tanto, los epitopos tienen que estar en la superficie de la molcula antignica donde son accesibles al receptor B. La parte terminal de las cadenas laterales de polisacridos y las porciones hidroflicas de las molculas de protena generalmente forman los epitopos B, aunque tambin los hay procedentes de los plegamientos (epitopos conformacionales). Las clulas T no son capaces de fijar a los antgenos solubles. La interaccin de un epitopo con el receptor T requiere que una CPA procese enzimticamente al antgeno (lo degrade a pptidos pequeos) para que las porciones se asocien a las molculas CMH. Por tanto, los receptores T solo pueden reconocer epitopos lineales (secuenciales), pues los conformacionales se destruyen durante el procesamiento de la protena. Normalmente, estos epitopos lineales son porciones hidrofbicas internas de la protena. El resultado de todo esto es que los polisacridos solo contienen epitopos reconocibles por los linfocitos B, mientras que las protenas contienen epitopos reconocible tanto por las clulas B como por las clulas T. Pgina 3 de 5 FYTI. Curso 07-08 Tema 07. ANTIGENOS

El nmero de epitopos de una molcula puede ser solo uno (hapteno) o mltiple y en

una protena normalmente hay muchos y distintos, mientras que en los azcares suelen ser iguales (repetitivos). Clases de antgenos Polisacridos. Son inmungenos cuando se asocian a portadores proteicos, como ocurre con los que forman parte de molculas ms complejas (glicoprotenas), que inducen una respuesta inmune parte de la cual es especfica para la parte hidrocarbonada de la molcula. Pero tambin se puede inducir una respuesta inmune de anticuerpos frente a muchos tipos de polisacridos, como los que forman parte de microorganismos y clulas eucariotas. El ejemplo clsico de antigenicidad de los polisacridos es la respuesta a los antgenos sanguneos del sistema ABO, que son polisacridos de la superficie de los glbulos rojos. Lpidos. Son normalmente poco inmunognicos, pero pueden inducir respuesta si se unen a protenas portadoras. Los lpidos de las mycobacterias se reconocen por un subtipo especial de clulas T; los Tgd, que forman parte de la respuesta ancestral. cidos nucleicos. No son muy inmunognicos, salvo que se asocien con protenas portadoras. Los anticuerpos anti-DNA son caractersticos de varios procesos autoinmunes. Protenas. Virtualmente, todas las protenas son inmunognicas y la gran mayora de los inmungenos son protenas. Cuanto mayor es la complejidad de la protena ms fuerte es la respuesta. Normalmente contienen muchos epitopos.

Reacciones cruzadas Se producen por la presencia de epitopos comunes en molculas distintas. Un ejemplo es la toxina diftrica que puede manipularse para que pierda su toxicidad conservando la capacidad inmunognica; se ha transformado en toxoide. La inmunizacin con el toxoide (inocuo) da lugar a la formacin de anticuerpos que neutralizan a la toxina diftrica cuando se produce la infeccin. Estamos usando determinantes comunes para vacunar, sin usar la toxina. Hay otros casos de reactividad cruzada donde las sustancias que reaccionan no estn relacionadas, excepto en que tienen una o ms reas con caractersticas tridimensionales similares. A estas sustancias se las llama antgenos heterfilos. Por ejemplo el antgeno sanguneo A reacciona con los anticuerpos formados frente al antgeno capsular (polisacrido) de un tipo de neumococo. Adyuvantes Son los aditivos que se usan para aumentar la respuesta a un inmungeno dado. El nombre viene del latn adjuvare (ayudar). Aunque su uso viene de antiguo, el inters actual se debe a que los inmungenos que se estn desarrollando para hacer nuevas vacunas (sobre todo las basadas en pptidos sintticos) presentan una inmunogenicidad muy pobre. El mecanismo de los adyuvantes incluye: Aumento de la vida media biolgica o inmunolgica de los antgenos de las vacunas

 Aumento de la produccin local de citocinas inflamatorias Mejora en la liberacin del antgeno y en su procesamiento y presentacin por las CPAs, especialmente por las clulas dendrticas. Pgina 4 de 5 FYTI. Curso 07-08 Tema 07. ANTIGENOS

Se sabe de modo emprico que los mejores adyuvantes son los que contienen componentes microbianos (p.e. extractos de mycobacterias). Estos componentes de patgenos inducen la expresin de molculas coestimuladoras en las CPAs (macrfagos y DCs) as como la produccin de citocinas. Ahora se ha comprobado que tal induccin por los componentes microbianos se debe a que contienen patrones moleculares (PAMPs); su unin a los TLRs de las CPAs genera las seales que llevan a la expresin de molculas coestimuladoras y a la sntesis de citocinas. Los adyuvantes autorizados hasta ahora para uso humano son los que se basan en hidrxido de aluminio o fosfato de aluminio (almina). La almina se fija a las protenas y las hace precipitar, induciendo as una respuesta inflamatoria que potencia de forma inespecfica la inmunogenicidad del antgeno. El antgeno precipitado se libera ms despacio en el sitio de inyeccin, lo que unido al aumento de tamao que se genera en la precipitacin propicia una mayor probabilidad de que el antgeno se fagocite por una clula presentadora. En los animales de experimentacin se han usado muchos adyuvantes, siendo uno de los ms corrientes el Adyuvante Completo de Freund (FCA), consistente en mycobacterias

muertas suspendidas en aceite mineral. Al aadir la solucin acuosa del antgeno se genera una emulsin que, inyectada, libera lenta y continuamente al antgeno con lo que mantiene constante la estimulacin durante mucho ms tiempo. Otros microorganismos usados como adyuvantes son el bacilo de CalmetteGuerin (BCG), que es una micobacteria atenuada, Corynebacterium parvum y Bordetella pertussis. En realidad, todos utilizan las propiedades estimuladoras de las molculas asociadas al microbio cuando se fijan sobre los TLRs de las clulas presentadoras (especialmente las DCs). Los ISCOM (complejos inmuno-estimuladores) son unas mezclas de colesterol y saponinas que forman unas estructuras similares a jaulas en las que queda atrapada la solucin acuosa del antgeno. Esta jaulas se funden con los lpidos de las membranas celulares y depositan as su contenido en el citosol. El resultado es una vacuna que induce una respuesta celular mediada por linfocitos T citotxicos, en lugar de los anticuerpos que inducen las restantes vacunas.