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QUMICA ORGNICA PRTICA ANLISE DE COMPOSTOS ORGNICOS

Prof Dr Glucia Maria F. Pinto

2006

QUMICA ORGNICA PRTICA ANLISE DE COMPOSTOS ORGNICOS Prof Dr Glucia Maria F. Pinto .......

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ndice: Experimento 1 Determinao de impureza de cido acetilsaliclico por HPLC Experimento 2 Sntese de acetato de isoamila (aroma de banana) Experimento 3 Determinao de leos essenciais extrados de folhas de eucalipto Experimento 4 Determinao de leos essenciais extrados de cravo da ndia Anlise de eugenol Experimento 5 Sntese e acompanhamento reacional de benzocana Experimento 6 Espectroscopia de RMN Experimento 7 Extrao e anlise de cafena extrada de ch preto Pgina 31 Pgina 45 Pgina 25 Pgina 21 Pgina 12 Pgina 15 Pgina 6

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Experimento 1 Determinao de impureza de cido acetilsaliclico por HPLC Reagentes e Materiais (parte I, II, III e IV) cido acetilsaliclico gua purificada cido saliclico Frascos apropriados HPLC cido actico Coluna C-18 Etanol Acetonitrila gua Balo volumtrico Acetato de etila

Funil de Buchner Sistema de filtrao Papel de filtro Gelo Sistema para banho-maria

Experimento 1 Determinao de impureza de cido acetilsaliclico por HPLC Parte I: Introduo ao HPLC 1- Introduo Cromatografia uma tcnica utilizada para analisar, identificar ou separar os componentes de uma mistura. A cromatografia definida como a separao de dois ou mais compostos diferentes devido a diferentes afinidades que causam uma distribuio entre fases, uma das quais estacionria e a outra mvel. Os componentes da mistura so adsorvidos na fase estacionria, e uma fase mvel arrasta e/ou interage continuamente com os componentes adsorvidos. Pela escolha apropriada da fase estacionria e da fase mvel, alm de outras variveis, pode-se fazer com que os componentes da mistura sejam arrastados ordenadamente. Aqueles que interagem pouco com a fase estacionria (FE) so arrastados facilmente e aqueles com maior interao ficam mais retidos. Os principais fenmenos que governam a separao cromatogrfica so adsoro e absoro (partio). A adsoro ocorre com FE slidas (hoje menos utilizadas) e a partio ocorre com FE lquidas (que so imobilizadas sobre suportes slidos). Os componentes da mistura adsorvem-se com as partculas de slido devido interao de diversas foras intermoleculares. O composto ter uma maior ou menor adsoro, dependendo das foras de interao, que variam na seguinte ordem: formao de sais > coordenao > pontes de hidrognio > dipolo-dipolo > Van der Waals. O processo de absoro (intrafacial) governado pela partio e ocorre devido a diferena de solubilidade dos componentes na FE lquida. Dependendo da natureza das duas fases envolvidas (estacionria e mvel) tem-se diversos tipos de cromatografia: - slido-lquido (coluna, camada fina, papel); - lquido-lquido (HPLC); - gs-lquido (CG). CROMATOGRAFIA LQUIDA: Na cromatografia lquida a FE geralmente um lquido imobilizado sobre um slido inerte e a FM um lquido ou mistura de lquidos. A separao governada tanto por caractersticas da FE quanto da FM. Quando a FE mais polar do que a FM temos a cromatografia de fase normal, quando a FE mais apolar do que a FM temos a cromatografia

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de fase reversa. Hoje, mais de 90% das aplicaes da cromatografia se concentram em fase reversa, sendo a FE mais utilizada a C-18. O fluxo de solvente deve ser contnuo. Os diferentes componentes da mistura mover-seo com velocidade distintas dependendo de sua afinidade relativa pela FE e tambm pelo eluente FM. Assim, a capacidade de um determinado eluente em arrastar um composto adsorvido na coluna depende quase diretamente da polaridade do solvente com relao ao composto. medida que os compostos da mistura so separados, bandas ou zonas mveis comeam a ser formadas; cada banda contendo somente um composto. Por uma escolha cuidadosa das condies, praticamente qualquer mistura pode ser separada (Figura 1).
Introduo de uma mistura

eluio

Separao dos componentes

Figura 1: Separao em cromatografia.

A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE, ou HPLC, do ingls high performance liquid chromatography), um tipo de cromatografia lquida em coluna que trabalha a alta presso e necessita de instrumentos adequados para tal: o cromatgrafo a lquido. A Figura 2 apresenta um esquema com os principais constituintes de um equipamento deste tipo.

Figura 2. Esquema de instrumentao tpica em HPLC.

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No HPLC a separao cromatogrfica pode ser avaliada atravs da obteno de cromatogramas (Figura 3), onde cada pico representa um componente da mistura.

Figura 3. Esquema de cromatograma. 2- Parte experimental Observao e anlise de cada um dos componentes de um cromatgrafo lquido HP no laboratrio. Demonstrao do equipamento.

3- Bibliografia Collins,C.H.; Braga, G.L.; Bonato, P.S.; Introduo a Mtodos Cromatogrficos, Editora da Unicamp. Skoog, D.A.; Leary, J.J.; Principles of Instrumental Analysis, Saunders College Publishing Experimento 1 Determinao de impureza de cido acetilsaliclico por HPLC Parte II: Anlise de cido acetilsaliclico comercial por HPLC 1- Introduo O cido Acetilsaliclico (AAS), tambm conhecido como Aspirina, um dos remdios mais populares mundialmente. Milhares de toneladas de AAS so produzidas anualmente, somente nos Estados Unidos. O AAS foi desenvolvido na Alemanha h mais de cem anos por Felix Hoffmann, um pesquisador das indstrias Bayer. Este frmaco de estrutura relativamente simples atua no corpo humano como um poderoso analgsico (alivia a dor), antipirtico (reduz a febre) e antiinflamatrio. Tem sido empregado tambm na preveno de problemas

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cardiovasculares, devido sua ao vasodilatadora. Um comprimido de aspirina composto de aproximadamente 0,32 g de cido acetilsaliclico. A sntese da aspirina possvel atravs de uma reao de acetilao do cido saliclico 1, um composto aromtico bifuncional (ou seja, possui dois grupos funcionais: fenol e cido carboxlico). Apesar de possuir propriedades medicinais similares ao do AAS, o emprego do cido saliclico como um frmaco severamente limitado por seus efeitos colaterais, ocasionando severa irritao na mucosa da boca, garganta, e estmago. A reao de acetilao do cido saliclico 1 ocorre atravs do ataque nucleoflico do grupo -OH fenlico sobre o carbono carbonlico do anidrido actico 2, seguido de eliminao de cido actico 3, formado como um sub-produto da reao. importante notar a utilizao de cido sulfrico como um catalisador desta reao de esterificao, tornando-a mais rpida e prtica do ponto de vista comercial.
O OH + OH 1 H3C O O 2 O H2SO4 CH3 AAS O O CH3 O OH + H3C 3 O OH

A reao de acetilao nem sempre completa, ou ento ocorrem reaes posteriores de decomposio e o cido saliclico encontrado como uma impureza do cido acetilsaliclico. 2- Parte experimental 2.1- Preparo da fase mvel (FM) Transfira para um frasco de 1L ou 500 mL, 450 mL de gua purificada, com pH ajustado para 3,0 (com cido actico glacial), e 50 mL de acetonitrila. Coloque a mistura homogeneizada em ultra-som para desgaseificar. 2.2- Preparo do diluente Utilize FM como diluente. 2.3- Preparo da amostra Pese aproximadamente 80 mg de cido acetilsaliclico comercial a transfira para balo volumtrico de 25,00 mL. Dissolva com uma poro do diluente e complete o volume do balo volumtrico. (O preparo desta soluo somente deve ser feito no momento da anlise). 2.4- Condies do equipamento Coluna cromatogrfica: slica recoberta com C-18 Comprimento de onda: 254 nm Fase mvel: gua : Acetonitrila, 90:10, pH= 3,0, v:v Volume de injeo: 20 L Vazo de fase mvel: 1,5 mL/min

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Condicione a coluna por no mnimo 30 minutos e faa trs injees da amostra. Confirme a identidade do pico de cido saliclico injetando uma soluo contendo metade da concentrao da soluo de cido acetilsaliclico, preparando-a da mesma forma. Confirme o tempo de reteno da impureza. Guarde a soluo da amostra preparada para avaliao da instabilidade. Calcule a porcentagem de cido saliclico encontrado (impureza), utilizando a seguinte relao: % impureza= (rea do pico cromatogrfico de cido saliclico / somatria de todas as reas encontradas) x 100 3- Bibliografia USP 27, 2004 Apostila de Qumica Orgnica Experimental A, Departamento de Qumica UFSC, 2000. Journal of Chemistry Education 1979, 56, 331. Experimento 1 Determinao de impureza de cido acetilsaliclico por HPLC Parte III: Purificao de cido acetilsaliclico comercial 1- Introduo Grande parte das reaes qumicas realizadas em laboratrio necessitam de uma etapa posterior para a separao e purificao adequadas do produto sintetizado. A purificao de compostos cristalinos impuros geralmente feita por cristalizao a partir de um solvente ou de misturas de solventes. Esta tcnica conhecida por recristalizao, e baseia-se na diferena de solubilidade que pode existir entre um composto cristalino e as impurezas presentes no produto da reao. Um solvente apropriado para a recristalizao de uma determinada substncia deve preencher os seguintes requisitos: a) Deve proporcionar uma fcil dissoluo da substncia a altas temperaturas; b) Deve proporcionar pouca solubilidade da substncia a baixas temperaturas; c) Deve ser quimicamente inerte (ou seja, no deve reagir com a substncia); d) Deve possuir um ponto de ebulio relativamente baixo (para que possa ser facilmente removido da substncia recristalizada); e) Deve solubilizar mais facilmente as impurezas que a substncia. O resfriamento, durante o processo de recristalizao, deve ser feito lentamente para que se permita a disposio das molculas em retculos cristalinos, com formao de cristais grandes e puros. Caso se descubra que a substncia muito solvel em um dado solvente para permitir uma recristalizao satisfatria, mas insolvel em um outro, combinaes de solventes podem ser empregadas. Os pares de solventes devem ser completamente miscveis. (exemplos: metanol e gua, etanol e clorofrmio, clorofrmio e hexano, etc.).

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O cido acetilsaliclico solvel em etanol e em gua quente, mas pouco solvel em gua fria. Por diferena de solubilidade em um mesmo solvente (ou em misturas de solventes), possvel purificar o cido acetilsaliclico eficientemente atravs da tcnica de recristalizao. 2- Parte experimental 2.1- Purificao por recristalizao (com etanol/gua) Dissolva o cido acetilsaliclico (2 g) em cerca de 15 mL de lcool etlico, levando a mistura a ebulio. Despeje esta soluo em 40 mL de gua previamente aquecida. Caso haja formao de precipitado neste ponto, aquea a mistura at dissoluo completa. Deixe esfriar lentamente. Pode-se observar a formao de cristais sob a forma de agulhas. Filtre usando funil de Buchner (Figura 1), seque e reserve. 2.2- Purificao por acetilao (com acetato de etila) Dissolva o cido acetilsaliclico (2g) em cerca de 8 mL de acetato de etila, aquecendo a mistura em banho-maria (CUIDADO). Caso o slido no se dissolva completamente, acrescente mais 1-2 mL de acetato de etila. Deixe a soluo esfriar lentamente a temperatura ambiente. Provoque a cristalizao com basto de vidro. Caso no cristalize, concentre um pouco a soluo. Deixe esfriar lentamente. Filtre usando funil de Buchner e lave o bquer com um pouco de acetato de etila. Seque o produto.

Figura 1: Filtrao a vcuo, com funil de Buchner. 3- Bibliografia Morrison, R.; Boyd, R.; Qumica Orgnica, Fundao Caloustre Gulbenkian Apostila de Qumica Orgnica Experimental A, Departamento de Qumica UFSC, 2000.

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Journal of Chemistry Education 1979, 56, 331. Experimento 1 Determinao de impureza de cido acetilsaliclico por HPLC Parte IV: Avaliao da purificao de cido acetilsaliclico 1- Parte experimental Prepare, no momento da anlise, duas amostras com o material obtido aps cada uma das purificaes (recristalizao e acetilao). Proceda da mesma forma que o descrito na Parte II do experimento. Compare os resultados de %impureza (% cido saliclico) obtidos antes e depois das purificaes. Injete novamente a soluo da amostra guardada anteriormente. Compare a proporo entre os dois picos obtidos com a amostra recm preparada e aps o perodo de armazenagem. Experimento 2 Sntese de um aromatizante: acetato de isoamila Reagentes e materiais (partes I, II) cido actico glacial lcool isoamlico cido sulfrico Bicarbonato de sdio Sulfato de sdio anidro Sistema de refluxo Sistema de destilao (com manta de aquecimento) erlenmeyer Funil e papel de filtro

Experimento 2 Sntese de um aromatizante: acetato de isoamila 1- INTRODUO steres so compostos amplamente distribudos na natureza. Os steres simples tendem a ter um odor agradvel, estando geralmente associados com as propriedades organolpticas (aroma e sabor) de frutos e flores. Em muitos casos, os aromas e fragrncias de flores e frutos devem-se a uma mistura complexa de substncias, onde h a predominncia de um nico ster. Muitos steres volteis possuem odores fortes e agradveis. Alguns destes so mostrados na tabela abaixo: ACETATO Propila ODOR CARACTERSTICO Pra

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Octila Benzila Isobutila Isoamila

Laranja Pssego Rum Banana

Os qumicos combinam compostos naturais e sintticos para preparar aromatizantes. Estes reproduzem aromas naturais de frutas, flores e temperos. Geralmente estes flavorizantes contm steres na sua composio, que contribuem para seus aromas caractersticos. Aromatizantes superiores reproduzem perfeitamente os aromas naturais. Em geral, estes aromatizantes so formados de leos naturais ou extratos de plantas, que so intensificados com alguns ingredientes para aumentar a sua eficincia. Um fixador de alto ponto de ebulio, tal como glicerina, geralmente adicionado para retardar a vaporizao dos componentes volteis. A combinao dos compostos individuais feita por diluio em um solvente chamado de "veculo". O veculo mais frequentemente usado o lcool etlico. Neste experimento ser sintetizado o acetato de isoamila 1 (acetato de 3-metilbutila), um ster muito usado nos processos de aromatizao. Acetato de isoamila tem um forte odor de banana quando no est diludo, e um odor remanescente de pra quando esta diludo em soluo. steres podem ser convenientemente sintetizados pelo aquecimento de um cido carboxlico na presena de um lcool e de um catalisador cido. O acetato de isoamila 1 ser preparado a partir da reao entre lcool isoamlico e cido actico, usando cido sulfrico como catalisador.
O H3C OH + HO H+ H3C O O 1 + H2O

A reao de esterificao reversvel, tendo uma constante de equilbrio de aproximadamente 4,20. Para aumentar o rendimento do acetato ser aplicado o princpio de Le Chatelier, usando cido actico em excesso. O tratamento da reao visando a separao e isolamento do ster 1 consiste em lavagens da mistura reacional com gua e bicarbonato de sdio aquoso, para a retirada das substncias cidas presente no meio. Em seguida, o produto ser purificado por destilao fracionada. ATENO!: importante saber que o acetato de isoamila o maior componente do feromnio de ataque da abelha. Este composto liberado quando uma abelha ferroa sua vtima, atraindo assim outras. Portanto, prudente voc evitar contato com abelhas aps a realizao desta prtica. 2- PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL Em uma capela, misture 17 mL de cido actico glacial com 15 mL de lcool isoamlico, num balo de fundo redondo apropriado. Cuidadosamente, acrescente mistura 1,0 mL de

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cido sulfrico concentrado; adicione ento as pedras de porcelana e refluxe por uma hora (Figura 1). Terminado o refluxo, deixe a mistura reacional esfriar temperatura ambiente. Utilizando um funil de separao, lave a mistura com 50 mL de gua e em seguida duas pores de 20 mL de bicarbonato de sdio saturado. Seque o ster com sulfato de sdio anidro e filtre por gravidade. Destile o ster, coletando o lquido que destilar entre 136C e 143C, pese e calcule o rendimento.

Figura 1: Esquema de uma reao sob refluxo. Caractersticas do produto final Sinonimo Nome qumico Acetato de amila, etanoato de isoamila Etanoato de 3-metilbutil

Frmula qumica C7H14O2 Frmula estrutural

Peso moleculas descrio solubilidade

130,19 Incolor, lquido lmpido, com odor de fruta Levemente solvel em gua, insolvel em glycerol, solvel em etanol, dietil ter e etil acetate : 0.868-0.878

densidade Faixa destilao

de Entre 135 and 143C

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4- QUESTIONRIO 1- Discuta o mecanismo da reao. Qual a funo do cido sulfrico? ele consumido ou no, durante a reao? 2- Como se remove o cido sulfrico e o lcool isoamlico, depois que a reao de esterificao est completa? 3- Por qu se utiliza excesso de cido actico na reao? 4- Por qu se usa NaHCO3 saturado na extrao? O que poderia acontecer se NaOH concentrado fosse utilizado? 5- Sugira um outro mtodo de preparao do acetato de isoamila: 6- Sugira reaes de preparao dos aromas de pssego (acetato de benzila) e de laranja (acetato de n-octila): 7- Sugira rotas de sntese para cada um dos steres abaixo, apresentando o mecanismo de reao para um deles: a) propionato de isobutila b) butanoato de etila c) fenilacetato de metila 8- Qual o reagente limitante neste experimento? Demonstre atravs de clculos: 9- Calcule o rendimento da reao e discuta seus resultados (purificao, dificuldades, rendimentos): 10- Cite alguns exemplos de steres encontrados na natureza. (IMPORTANTE: Procure steres diferentes dos citados durante a aula): 11- steres tambm esto presentes na qumica dos lipdeos. Fornea a estrutura geral de um leo e uma gordura:

Experimento 3 Determinao de leos essenciais extrados de folhas de eucalipto Reagentes e materiais (partes I, II, III e IV) Folhas de eucalipto frescas gua Cloreto de metileno Sulfato de sdio anidro Banho de gelo Sistema de destilao (com manta de aquecimento) erlenmeyer Funil de separao Banho-maria Funil e papel de filtro Cromatografo gasoso completo Coluna capilar FE polietileno glicol

Experimento 3 Determinao de leos essenciais extrados de folhas de eucalipto Parte I: Introduo ao CG 1- Introduo A cromatografia gasosa (CG) uma tcnica cromatogrfica na qual a fase mvel um gs inerte, cuja funo apenas mover a amostra atravs do sistema cromatogrfico, enquanto

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a fase estacionria interage diferentemente com os constituintes da amostra proporcionando sua separao. A cromatografia gasosa (CG) uma tcnica com um poder de resoluo excelente, tornando possvel a anlise de dezenas de substncias presentes em uma amostra.Tambm uma tcnica muito sensvel, permitindo a anlise quantitativa de baixas concentraes. A CG s pode ser empregada na anlise de substncias volteis e estveis termicamente, ou necessita-se formar um derivado com os analitos. A Figura 1 apresenta um esquema ilustrando uma instrumentao bsica de CG.

Figura 1. Esquema de instrumentao bsica de CG. Durante a anlise, a temperatura do injetor, coluna e detector so muito importantes, sendo que a temperatura do injetor deve estar 50C acima da temperatura do composto de maior ponto de ebulio; a temperatura do detector deve ser aproximadamente 25 C acima da temperatura do injetor e a temperatura da coluna pode permanecer constante (CG isotrmica) ou sofrer uma variao linear ou no linear (CG com temperatura programada). A programao de temperatura significantemente importante, pois melhora a separao e diminui o tempo de anlise quando a mistura composta por solutos com volatilidade muito diferenciada. A programao de temperatura realizada comeando a anlise com a coluna em uma temperatura mais baixa, para que solutos de baixo ponto de ebulio possam eluir como picos separados. Durante a anlise a temperatura aumentada para diminuir a reteno de substncias de maior ponto de ebulio, gerando as vantagens de maior simetria dos pico, melhor detectabilidade para picos muito retidos e menor tempo de anlise. A Figura 2 apresenta uma comparao de uma separao obtida em diferentes situaes de temperatura de coluna.

T coluna baixa

T coluna alta

programao de temperatura

Figura 2. Cromatogramas obtidos em diferentes condies de temperatura de coluna. As colunas utilizadas em CG podem ser capilares ou empacotadas (em desuso) (Figura 3). As condies de anlise como vazo de gs de arraste e volume de injeo sero muito diferentes dependendo se a coluna utilizada for capilar ou empacotada. As fases estacionrias

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empregadas em CG variam em polaridade e devem ser escolhidas de acordo com a natureza das amostras, lembrando que polares interagem com polares e apolares com apolares. Um exemplo de coluna apolar seriam as Apiezons e colunas mais polares as de polietilenoglicol (Carbowaxes). Quando se utiliza colunas capilares os volumes de injeo de amostras devem ser muito pequenos (1L ou menos), sendo necessrio empregar uma razo de split no mtodo. Os injetores com vlvulas de split (Figura 3) permitem que parte da amostra seja descartada no atingindo a coluna.

Figura 3. Injetor do tipo split/splitless. Um outro parmetro importante em relao a injeo de amostra que ela deve ocorrer de forma instantnea para no haver alargamento dos picos. O detector mais utilizado para compostos orgnicos (ligao C-H) o detector de ionizao em chamas (FID), cujo princpio de funcionamento est ilustrado na Figura 4.

O efluente da coluna misturado com H2 e O2 e queimado. Como numa chama de H2 + O2 no existem ons, ela no conduz corrente eltrica.

Quando um composto orgnico elui, ele tambm queimado. Como na sua queima so formados ons, a chama passa a conduzir corrente eltrica.

Figura 4. Esquema de gerao de sinal de um detector FID.

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2 Parte experimental Observe os diferentes constituintes do equipamento de cromatografia gasosa disponvel no laboratrio. 3- Bibliografia - Collins,C.H.; Braga, G.L.; Bonato, P.S.; Introduo a Mtodos Cromatogrficos, Editora da Unicamp. - Skoog, D.A.; Leary, J.J.; Principles of Instrumental Analysis, Saunders College Publishing Experimento 3 Determinao de leos essenciais extrados de folhas de eucalipto Parte II: Extrao por arraste de vapor 1- Introduo As essncias ou aromas das plantas devem-se principalmente aos leos essenciais. Os leos essenciais so usados, principalmente por seus aromas agradveis, em perfumes, incenso, temperos e como agentes flavorizantes em alimentos. Alguns leos essenciais so tambm conhecidos por sua ao antibacteriana e antifngica. Outros so usados na medicina, como a cnfora e o eucalipto. Alm dos steres, os leos essenciais so compostos por uma mistura complexa de hidrocarbonetos, lcoois e compostos carbonlicos, geralmente pertencentes a um grupo de produtos naturais chamados terpenos. Muitos componentes dos leos essenciais so substncias de alto ponto de ebulio e podem ser isolados atravs de destilao por arraste a vapor. A destilao por arraste de vapor uma destilao de misturas imiscveis de compostos orgnicos e gua (vapor). Misturas imiscveis no se comportam como solues. Os componentes de uma mistura imiscvel "fervem" a temperaturas menores do que os pontos de ebulio dos componentes individuais. Assim, uma mistura de compostos de alto ponto de ebulio e gua pode ser destilada temperatura menor que 100C, que o ponto de ebulio da gua. O princpio da destilao vapor baseia-se no fato de que a presso total de vapor de uma mistura de lquidos imiscveis igual a soma da presso de vapor dos componentes puros individuais. A presso total de vapor da mistura torna-se igual a presso atmosfrica (e a mistura ferve) numa temperatura menor que o ponto de ebulio de qualquer um dos componentes. Para dois lquidos imiscveis A e B: Ptotal = PoA + PoB onde PoA e PoB so as presses de vapor dos componentes puros. Note que este comportamento diferente daquele observado para lquidos miscveis, onde a presso total de vapor a soma das presses de vapor parciais dos componentes. Para dois lquidos miscveis A e B: Ptotal= XA PoA + XB PoB onde XAPoA e XBPoB correspondem s presses parciais de vapor.

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A destilao por arraste a vapor pode ser utilizada nos seguintes casos: 1. Quando se deseja separar ou purificar uma substncia cujo ponto de ebulio alto e/ou apresente risco de decomposio; 2. Para separar ou purificar substncias contaminadas com impurezas resinosas; 3. Para retirar solventes com elevado ponto de ebulio, quando em soluo existe uma substncia no voltil; 4. Para separar substncias pouco miscveis em gua cuja presso de vapor seja prxima a da gua a 100C. Neste experimento sero isolados os leos essenciais presentes nas folhas de eucalipto, constitudo principalmente por: -pireno, -pireno, -felandreno, limoneno; 1,8-cineolo e cnfora, pela tcnica de destilao por arraste a vapor. Uma vez obtido o leo, deve-se separlo da soluo aquosa atravs de extraes com diclorometano. Traos de gua presentes no solvente devero ser retirados com a ajuda de um sal dessecante (sulfato de sdio anidro). As estruturas de cada um dos compostos de interesse esto na tabela 1. Tabela 1. Estrutura dos compostos presentes no leo de eucalipto.
CH3

H3C

CH3

H3C

CH3

CH3

CH2

H3C

CH3

-pineno
CH3

-pineno
CH3

-felandreno
H3C
O

CH3 CH3 O

H3C

CH2

H3C

CH3

limoneno

cineol

cnfora

Existe uma proporo caracterstica entre os compostos presentes no leo de eucalipto e esta ser determinada por CG.

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2- Parte Experimental Monte a aparelhagem conforme a Figura 1. O frasco coletor, de 125 mL pode ser um erlenmeyer e a fonte de calor uma manta eltrica. Coloque 5 g de folhas de eucalipto em um balo de trs bocas e adicione 75 mL de gua. Inicie o aquecimento de modo a ter uma velocidade de destilao lenta, mas constante. Durante a destilao continue a adicionar gua atravs do funil de separao, numa velocidade que mantenha o nvel original de gua no frasco de destilao. Continue a destilao at coletar 50 mL do destilado, que deve estar em banho de gelo. Tire a gua do funil de separao e coloque o destilado nele. Extraia o destilado com duas pores de cloreto de metileno (5 mL). Separe as camadas (acrescente sulfato de sdio anidro) e despreze a fase aquosa. Seque a fase orgnica com sulfato de sdio anidro. Filtre a mistura em papel pregueado contendo um algodo e sulfato de sdio anidro. Recolha o leo obtido em diclorometano e evapore em banho-maria.

Figura 1: Destilao por arraste a vapor. 3- Bibliografia - Apostila de Qumica Orgnica Experimental A, Departamento de Qumica UFSC, 2000. - Furniss, B.S.; Hannaford, A.J.; Vogels Textbook of Practical Organic Chemistry, 5 ed. Experimento 3 Determinao de leos essenciais extrados de folhas de eucalipto Parte III e IV: Anlise de leos essenciais de eucalipto por CG 1- Parte experimental 1.2- Condies de anlise Coluna capilar polietileno glicol Gs de arraste: nitrognio Vazo de gs: 1,5 mL/min Detector: FID Volume de injeo: 0,5 L (split ratio 1:100) Temperatura da coluna: inicial 60 C, temperatura final 200C

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Temperatura do injetor: 220C Temperatura do detector: 250C Injete a amostra e procure pelos picos descritos na tabela 2 (compare os tempos de reteno relativos). Calcule a porcentagem de cada composto identificado e compare com a porcentagem tpica encontrada no leo de eucalipto (tabela 2).

Tabela 2. Tempos de reteno relativos e porcentagens de cada componente. Composto -pineno -pineno -felandreno Limoneno Cineol Cnfora 2- Bibliografia British Pharmacopeia 2003 European Pharmacopeia 2002 Tempo relativo 0,6 0,75 0,8 0,9 1,0 1,6 de reteno Porcentagem (%) 2-8 < 0,5 < 1,5 4 - 12 > 70 < 0,1

Experimento 4 Determinao de leos essenciais extrados de cravo da ndia Reagentes e materiais Cravo da ndia gua Cloreto de metileno Sulfato de sdio anidro Banho de gelo Sistema de destilao Cromatografo gasoso (com manta de completo aquecimento) Coluna capilar CG erlenmeyer Funil de separao Banho-maria Funil e papel de filtro

Experimento 4 Determinao de leos essenciais extrados de cravo da ndia Parte I: Extrao

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1- METODOLOGIA Neste experimento ser isolado o eugenol (4-alil-2-metoxifenol, 1) do leo de cravo (Eugenia caryophyllata), pela tcnica de destilao por arraste a vapor. Uma vez obtido o eugenol, deve-se separ-lo da soluo aquosa atravs de extraes com diclorometano. Traos de gua presentes no solvente devero ser retirados com a ajuda de um sal dessecante (sulfato de sdio anidro). Como difcil purificar o composto original ou caracteriz-lo atravs de suas propriedades fsicas, pode-se convert-lo em um derivado. Este derivado ser obtido atravs da reao do eugenol com cloreto de benzola. O produto formado o benzoato de eugenila 2, um composto cristalino com ponto de fuso bem definido.

CH3O HO 1

PhCOCl NaOH

CH3O O O 2

Informaes do EUGENOL: frmula: (C3H5C6H3(OH)OCH3), C10H12O2 massa molar: 164,2 mol/g nome: para-oxi-meta-metoxialilbenzeno, cido eugnico. Aspecto: lquido incolor ou amarelado, oleoso, que se torna pardo ao ar, com cheiro forte e aromtico. Fonte: ocorre no leo de cravo, donde pode ser separado. Solubilidade: solvel em lcool, clorofrmio, ter e leos volteis; pouco solvel em gua. Aplicaes: usado principalmente em perfumaria, em medicina (como germicida) e em sntese orgnica para obteno do iso-eugenol na preparao da vanilina. 2- PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 2.1- EXTRAO DO EUGENOL: Monte a aparelhagem conforme a Figura 1. O frasco coletor, de 125 mL pode ser um erlenmeyer e a fonte de calor uma manta eltrica. Coloque 10 g de cravos num balo de trs bocas e adicione 150 mL de gua. Inicie o aquecimento de modo a ter uma velocidade de destilao lenta, mas constante. Durante a destilao continue a adicionar gua atravs do funil de separao, numa velocidade que mantenha o nvel original de gua no frasco de destilao. Continue a destilao at coletar 100 mL do destilado. Tire a gua do funil de separao e coloque o destilado nele. Extraia o destilado com duas pores de cloreto de metileno (10 mL). Separe as camadas e despreze a fase aquosa. Seque a fase orgnica com sulfato de sdio anidro. Filtre a mistura em papel pregueado (diretamente em um balo de fundo redondo previamente tarado), lave com uma pequena poro de CH2Cl2 e em seguida retire o solvente no evaporador rotativo. Opcionalmente, aps a filtrao concentre a mistura (utilizando um banho de vapor na capela), transfira o lquido restante para um tubo de ensaio previamente tarado e concentre o

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contedo novamente por evaporao em banho-maria at que somente um resduo oleoso permanea. Seque o tubo de ensaio e pese. Calcule a porcentagem de extrao de leo, baseado na quantidade original de cravo usada.

Figura 1: Destilao por arraste a vapor. 2.2- PREPARAO DE UM DERIVADO: Coloque cerca de 0,2 mL de eugenol bruto num tubo de ensaio pequeno e adicione 1 mL de gua. Adicione algumas gotas de uma soluo 1 M de hidrxido de sdio at que o leo seja dissolvido. A soluo final pode ser turva, mas no dever conter gotas grandes de leo. Adicione cuidadosamente 0,1 mL (3 a 4 gotas) de cloreto de benzola. Excesso de cloreto de benzola dever ser evitado, uma vez que este impede a cristalizao do produto final. Aquea a mistura em banho-maria durante 5 a 10 minutos. Esfrie a mistura e atrite o interior do tubo de ensaio com um basto de vidro, at que a mistura se solidifique. Caso isto no acontea, esfrie a mistura num banho de gelo. Caso ainda no haja solidificao, decante a fase aquosa. Adicione algumas gotas de metanol ao leo e continue a atritar com o basto de vidro o interior do tubo, imerso em banho de gelo. Colete o slido num funil de Hirsch e lave com um pequeno volume de gua gelada. Recristalize o slido com uma quantidade mnima de metanol. Caso um leo se separe da soluo, reaquea a mesma e esfrie mais lentamente, com atrito no interior do recipiente. Colete os cristais num funil de Hirsch. Seque os cristais e determine o ponto de fuso. O ponto de fuso do benzoato de eugenol 70C. 3- QUESTIONRIO 1- Apresente a reao entre o eugenol e NaOH e escreva estruturas de ressonncia que mostrem como o nion do eugenol estabilizado:

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2- Quais mtodos poderiam ser utilizados para uma purificao do eugenol, a partir do leo de cravo? (eugenol: P.F. = -11oC; P.E. = 254oC)? 3- Escreva o mecanismo de decomposio do cloreto de benzola em H2O: 4- Qual o produto formado na reao de um cloreto de cido (RCOCl) com: a) H2O b) NH3 c) RCOOH d) ROH 5- Apresente o mecanismo de reao entre o eugenol e cloreto de benzola: 6- Que outro reagente poderia ser utilizado no lugar do cloreto de benzola, visando a preparao do benzoato de eugenol? 7- Como pode ser realizada a caracterizao do eugenol? 8- Discuta a pureza do derivado (benzoato de eugenol), a partir da medida de seu ponto de fuso. Como este composto poderia ser melhor purificado? 9- Calcule o rendimento da extrao (porcentagem em massa do leo de cravo isolado) e discuta os seus resultados: 10- Alm do eugenol (1), o leo do cravo contm o carofileno (3) e outros terpenos, em pequenas quantidades. Explique o que acontece com estes compostos quando o eugenol isolado do cravo pelo seu procedimento experimental:
CH3 CH3O HO 1 3 CH3 CH3

11- Cite outros exemplos de compostos orgnicos (aromticos ou no) que podem ser extrados de fontes naturais, tais como: anis estrelado, noz moscada, pimenta, hortel, guaran e sassafrs. 13- Cite um mtodo de extrao e de dosagem para leos essenciais. Explique.

SAIBA MAIS SOBRE O OLFATO QMCWEB: http://www.qmc.ufsc.br/qmcweb/exemplar16.html Experimento 4 Determinao de leos essenciais extrados de cravo da ndia Parte II: Anlise de eugenol por CG 1- Parte experimental a. Preparo da amostra Pese 1,0g de leo e dilua com 10,00 mL de etanol (em balo volumtrico). Dilua esta soluo na proporo de 1 para 50, tambm com etanol. b. Condies de anlise Coluna capilar: polimetilfenilsiloxano Gs de arraste: nitrognio

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Vazo de gs: 1,5 mL/min Detector: FID Volume de injeo: 1,0 L (split ratio 1:40) Temperatura da coluna: inicial 80C, temperatura final 280C Temperatura do injetor: 250C Temperatura do detector: 280 Localize o pico principal no cromatograma, que deve ser de eugenol, e calcule a porcentagem deste, me relao aos demais picos, por normalizao de rea. Descarte o pico do solvente (primeiro e maior). Experimento 5 Sntese de benzocana e caracterizao por Infravermelho HCl Carvo ativo Acetato de sdio triidratado Anidrido actico Sulfato de magnsio hidratado Permanganato de potssio Etanol cido sulfrico Hidrxido de amnio cido actico glacial Carbonato de sodio ter etlico Sulfato de sdio Erlenmeyer Funil Papel de filtrao Chapa de aquecimento Funil de Buchner Banho de gelo Bquer Banho Maria Celite Estufa Papel indicador Basto de vidro Balo de fundo redondo Condensador de refluxo Manta de aquecimento Funil de separao KBr Prensa Espectrmetro Infravermelho

de

1- Introduo A benzocana (4-aminobenzoato de etila) pertence a uma classe de compostos que possuem propriedades anestsicas. Dentre eles podemos citar alguns como: cocana, procana, lidocana e tetracana. Esses compostos possuem certas caractersticas em comum: os que possuem atividade farmacolgica contm em uma das extremidades da cadeia da molcula um grupo aromtico, e na outra um grupo amino secundrio ou tercirio. Esses grupos esto interligados por uma cadeia central de tomos contendo de uma a quatro unidades. A benzocana, em particular, utilizada como um dos ingredientes na preparao de loes e pomadas no tratamento de queimaduras solares. Um reagente de partida adequado para a preparao da benzocana o cido p-aminobenzico (PABA). O PABA muito importante nos processos biolgicos, e considerado uma vitamina para a bactria. A bactria utiliza o PABA na produo do cido flico, que por sua vez necessrio na sntese de cidos nucleicos, os quais participam do crescimento bacteriano. Por outro lado, o cido flico uma vitamina essencial para os animais, pois a clula animal no consegue sintetiz-lo e assim esse deve ser parte da sua dieta.

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Quando combatemos uma determinada bactria atravs do uso de uma droga do tipo sulfa, essa na realidade no mata a bactria mas sim impede o crescimento bacteriano devido a competio entre a sulfa e o PABA pelo stio ativo da enzima que catalisa a reao de formao do cido flico. A sulfa forma um complexo com a enzima, recebendo assim o nome de inibidor competitivo. Se h impedimento na sntese do cido flico a bactria no poder sintetizar os cidos nucleicos, resultando assim em uma supresso do crescimento bacteriano e possibilitando ao corpo tempo necessrio para que o seu sistema imunolgico possa responder e destruir a bactria. Outra importante aplicao do PABA est na preparao de protetores solares, j que o composto tem a capacidade de absorver o componente ultravioleta da radiao solar. Neste experimento ser preparada a benzocana (1), a partir da esterificao do cido paminobenzico (PABA, 2) com etanol e catlise cida. Embora o PABA seja disponvel comercialmente, ele pode ser eficientemente preparado em laboratrio. O PABA ser preparado atravs de uma seqncia de trs reaes, sendo a primeira delas uma acetilao da p-toluidina (3) pelo anidrido actico, fornecendo a N-acetil-p-toluidina 4. A acetilao do grupo amino em 3 tem a funo de proteg-lo durante a segunda etapa: a oxidao do grupo metila pelo permanganato de potssio, formando o cido pacetamidobenzico 5. Se a oxidao do grupo metila fosse executada sem a proteo do grupo amino, este tambm seria oxidado. O grupo acetil em 5 ser removido atravs de tratamento com cido clordrico diludo, gerando o PABA como um slido cristalino.
O CH3 Ac2O H2N 3 O OCH2CH3 H2N 1 EtOH H2SO4 HCI CH3 O N H 4 O OH H2N 2 PABA HCI CH3 KMnO4 CH3 O N H 5 OH

Experimento 5 Sntese de benzocana e caracterizao por Infravermelho Parte I: Sntese de N-acetil-p-toluidina 1- Procedimento Coloque 4,0 gramas de p-toluidina em um erlenmeyer de 500 mL, adicione 100 mL de H2O destilada e 4 mL de HCl concentrado. Se necessrio, aquea a mistura em banho-maria com agitao manual at que se obtenha uma soluo. Caso a soluo apresente colorao escura, adicione 0,3 a 0,5 g de carvo ativo, agite manualmente por vrios minutos e filtre por gravidade. Use papel filtro pregueado para esta filtrao. Prepare uma soluo de 6 g de acetato de sdio triidratado em 10 mL de H2O. Se necessrio aquea a mistura at que todo o slido seja dissolvido. Aquea 50C a soluo contendo p-toluidina previamente preparada e adicione 4,2 mL de anidrido actico, agite rapidamente e adicione imediatamente a soluo aquosa de acetato de sdio. Esfrie a mistura em banho de gelo. Um slido branco deve aparecer nesse estgio.

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Filtre a mistura a vcuo utilizando filtro de Buchner, lave os cristais com trs pores de H2O gelada e deixe secar sob vcuo. Reserve uma poro para anlise de IV e recolha o restante para prosseguir com a sntese. Experimento 5 Sntese de benzocana e caracterizao por Infravermelho Parte II: Sntese de cido p-acetamidobrnzico 1- Procedimento Coloque o composto previamente preparado, N-acetil-p-toluidina, em um bquer de 1,0 L junto com ~12,5 gramas de MgSO4 hidratado e 175 mL de H2O. Aquea a mistura em banhomaria e adicione, em pequenas pores, uma mistura de 10 g de KMnO4 em uma pequena quantidade de H2O (suficiente para formar uma pasta). Mantenha a mistura reacional em banho-maria por 1 hora ( necessrio que o bquer esteja bem imerso no banho). A cada intervalo de 3 a 5 minutos agite a mistura manualmente. Depois de 1 hora, filtre a soluo quente vcuo atravs de uma camada de celite (5 cm) usando filtro de Buchner e lave o precipitado (MnO2) com pequenas pores de H2O quente. Se a soluo apresentar colorao prpura (presena de MnO4), adicione 2,5 mL de etanol e aquea a soluo em banho-maria por 30 minutos. Filtre a soluo quente por gravidade em papel filtro pregueado, esfrie o filtrado e acidifique-o com soluo 20% de H2SO4. Separe por filtrao vcuo o slido branco formado e seque-o na estufa. Reserve uma quantidade para obter a pastilha de KBr (anlise por IV). Recolha o restante para prosseguir com a sntese. Experimento 5 Sntese de benzocana e caracterizao por Infravermelho Parte III: Sntese de cido p-aminobenzico 1- Procedimento Prepare uma soluo diluda de HCl misturando 12 mL de HCl 37% em 12 mL de H2O. Coloque o cido p-acetamidobenzico preparado na etapa anterior em um balo de fundo redondo de 250 mL e adicione a soluo diluda de HCl. Adapte um condensador de refluxo e aquea a mistura (use manta de aquecimento), de tal forma que o refluxo seja brando por 30 minutos. Esfrie a soluo resultante a temperatura ambiente, transfira-a para um erlenmeyer de 250 mL e adicione 24 mL de H2O. Neutralize com uma soluo aquosa de amnia (use a capela) e basifique adicionando pequenas pores de NH4OH (aq.) at pH 8-9 (use papel indicador de pH). Para cada 30 mL da soluo final, adicione 1,0 mL de cido actico glacial, resfrie a soluo em banho de gelo e inicie a cristalizao. Se necessrio arranhe a parede lateral interna do frasco com um basto de vidro para iniciar a cristalizao. Filtre os cristais a vcuo e seque-os deixando sob o mesmo sistema de vcuo. Reserve uma pequena quantidade para obteno da pastilha de KBr (anlise por IV) e recolha o restante para prosseguir com a sntese. Experimento 5 Sntese de benzocana e caracterizao por Infravermelho Parte IV: Sntese de benzocana 1- Procedimento

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Coloque 2,5 g de cido p-aminobenzico em um balo de fundo redondo de 250 mL, adicione 32 mL de etanol 95% e agite suavemente at que a maioria do cido se dissolva (nem todo slido se dissolver). Esfrie a mistura em um banho de gelo e lentamente adicione 2,5 mL de H2SO4 concentrado. Uma grande quantidade de precipitado se formar. Conecte um condensador de refluxo ao balo e aquea a mistura, permitindo que esta refluxe brandamente por um perodo de 1 horas. Durante esta operao agite o balo manualmente em intervalos de 15 minutos durante a primeira hora de refluxo. Transfira a soluo para um bquer de 400 mL e adicione pores de uma soluo aquosa de Na2CO3 10% (total de 30 mL) para neutralizar a mistura. Durante a adio, a evoluo de CO2 ser perceptvel at a proximidade do ponto de neutralizao. Quando essa evoluo cessar, mea o pH da soluo e se necessrio eleve o pH at a faixa de 9 - 10 adicionando pequenas pores de Na2CO3. Decante o slido formado. Caso seja difcil, filtre-o por gravidade. Coloque a soluo em um funil de separao (capacidade 250 mL ou maior) e adicione 50 mL de ter etlico e agite vagarosamente. Separe a fase orgnica da aquosa, seque-a com Na2SO4 ou MgSO4 anidro, filtre por gravidade e remova o ter e o etanol aquecendo a soluo em banho-maria ou chapa quente (ou utilize um evaporador rotativo). Quando a maioria do solvente for removido (no mais que 5 mL remanescentes) voc poder visualizar um leo no frasco. Adicione 2,5 mL de etanol 95% e aquea a mistura em uma placa at que todo o leo se dissolva. Dilua a soluo com gua at tornar-se opaca, esfrie a mistura em banho de gelo e colete a benzocana slida por filtrao a vcuo (utilize filtro de Buchner). Seque o slido temperatura ambiente. Reserve uma pequena quantidade para obteno da pastilha de KBr (anlise por IV). Experimento 5 Sntese de benzocana e caracterizao por Infravermelho Parte V: Caracterizao por Infravermelho 1- Introduo O espectro de infravermelho de um composto uma fonte poderosa de informao a respeito da estrutura. Uma molcula est em constante vibrao: as suas ligaes distendem-se (e contraemse), e flectem-se relativamente umas as outras. Modificaes nas vibraes de uma molcula resultam de absoro de radiao infravermelha. O espectro de infravermelho caracterstico e cada composto orgnico, sendo caracterizados de acordo com o comprimento de onda ou, preferencialmente, a freqncia, expressa em nmero de onda (cm-1). O espectro de infravermelho ajuda a revelar a estrutura de um composto, j que nos indica os grupos que esto presentes ou ausentes na molcula. Os diversos grupos atmicos do origem a bandas de absoro caractersticas, quer dizer, cada grupo absorve radiao em certas freqncias, que variam pouco de composto para composto. Por exemplo, o grupo OH dos lcoois absorve fortemente em 3200-3600 cm-1; o grupo >C=O das cetonas, a 1710 cm-1; o grupo -CN, a 2250 cm-1; o grupo CH3, a 1450 e 1375 cm-1. A interpretao de um espectro de infravermelho no uma tarefa fcil, pois podem ocorrer sobreposies de bandas, podem ocorrer absores secundrias (harmnicas) ou as absores caractersticas podem ser desviadas devido a algumas estruturas, como conjugaes, tenso angular, pontes de hidrognio. Por outro lado, se estes desvios forem conhecidos, eles podem ser teis para reconhecer detalhes da estrutura.

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Para molculas orgnicas, o espectro de infravermelho pode ser dividido em trs regies: absores entre 4000 e 1300 cm-1 so primariamente caractersticas de grupos funcionais e tipos de ligaes. Aquelas entre 1300 e 900 cm-1, formam a regio da impresso digital (fingerprint) e so caractersticas principalmente de interaes complexas na molcula; aquelas entre 900 e 650 cm-1 so usualmente associadas com a presena de anis benzeno na molcula. A tabela 1 apresenta algumas freqncias vibracionais caractersticas de alguns grupos funcionais de molculas orgnicas. Tabela 1. Freqncias vibracionais importantes em molculas orgnicas. Tipo de estrutura Ligao , cm-1 Csp3-H 2800-3000 C-H Csp2-H 3000-3100 3300 Csp-H C-C 1150-1250 C-C C=C 1600-1670 C C 2100-2260 C-N 1030-1230 C-N C=N 1640-1690 C N 2210-2260 C-O 1020-1275 C-O C=O 1650-1800 C-F 1000-1350 C-Cl 800-850 C-X C-Br 500-680 C-I 200-500 RNH2, R2NH 3400-3500 (two) + + N-H RNH3 , R2NH2 , 2250-3000 RCONH2, 3400-3500 ROH 3610-3640 (free) O-H 3200-3400 (H2500-3000 RCO2H RNO2 1350,1560 RONO2 1620-1640, 1270RN=O 1500-1600 N-O RO-N=O 1610-1680 (two), C=N-OH 930-960 950-970 R3N-O+ R2SO 1040-1060 S-O R2S(=O)O 1310-1350 R-S(=O)2-OR' 1330-1420, 1145C=C=C 1950 C=C=O 2150 Ligaes duplas R2C=N=N 2090-3100 RN=C=O 2250-2275 RN=N=N 2120-2160 Vibraes for a do plano

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Alcinos

Alcenos

Aromticos

C C-H RCH=CH2 R2C=CH2 trans-RCH=CHR cis-RCH=CHR R2C=CHR Monoomp1,2,31,3,51,2,41,2,3,41,2,4,51,2,3,5 PentaRCHO C=CCHO ArCHO R2C=O C=C-C=O Ar-C=O Cciicos de Cclicos de Cclicos de RCOOH C=C-COOH RCO2RCOOR C=C-COOR ArCOOR -lactona -lactona RCONH2 RCONHR' RCONR2' -lactam -lactam -lactam

600-700 910, 990 890 970 725, 675 790-840 730-770, 690-710 735-770 750-810, 690-710 810-840 760-780, 705-745 810-865, 675-730 805-825, 870, 885 800-810 855-870 840-850 870 1725 1685 1700 1715 1675 1690 4 1780 5 1745 6 1715 1760 (monomer) 1720 (monomer) 1550-1610, 1400 1735 1720 720 1770 1735 1690 (free) 1680 (free) 1650 1745 1700 1640 1820, 1760 (two)

Freq. de est. carbonila Aldedos

Cetonas

cidos Carboxlicos

Esteres

Amidas

Anidridos cidos 2- Procedimento

Obtenha a pastilha de KBr de cada etapa de sntese (da 1 a 4), lembrando de secar em estufa, previamente, tanto o KBr quanto os compostos a serem analisados.

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Obtenha os espectros de infravermelho de cada composto e avalie a introduo dos grupos funcionais que ocorreram nas 4 etapas de sntese. Utilize a tabela 1 para auxiliar na identificao dos estiramentos correspondentes aos grupos funcionais orgnicos de interesse. Experimento 6 Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN) 1- Introduo: O ncleo de certos elementos e istopos comportam-se como se fossem ms girando em torno de um eixo. Alguns ncleos como o do hidrognio e o do carbono 13. Tm esta propriedade. Quando se coloca um composto contendo tomos de 1H ou de 13C num campo magntico muito forte e simultaneamente se irradia o composto com energia eletromagntica, os ncleos podem absorver energia num processo denominado ressonncia magntica. A radiao utilizada no espectrmetro de RMN a radiofreqncia (rf), de comprimento de onda altssimo (da ordem de metros) e baixa energia (da ordem de 10-6 kcal/mol). A absoro desta radiao pelos ncleos desses elementos quantizada e produz um espectro caracterstico. Esta absoro no ocorre a menos que a freqncia da radiao e a intensidade do campo magntico tenham valores bem definidos. Os espectrmetros permitem aos qumicos medir a absoro de energia pelos ncleos de 1H e de 13C, alm do ncleo de outros elementos que discutiremos mais adiante. Estes instrumentos trabalham com um campo magntico muito forte, capaz de provocar at a morte de uma pessoa que tenha uma ponte de safena e trabalhe muito perto do aparelho de RMN. Vamos nos ater inicialmente espectrometria de ressonncia magntica de prtons (RMN 1H). Os aparelhos de RMN 1H em geral utilizam ms supercondutores com campos magnticos muito intensos e pulsos curtos de radiao de radiofreqncia, que provocam a absoro de energia pelos ncleos de 1H, todos ao mesmo tempo, e ocorre ressonncia. A excitao dos ncleos provoca um fluxo de pequena corrente eltrica numa bobina receptora que envolve a amostra. O instrumento ento amplifica a corrente exibe o sinal (um pico ou uma srie de picos) no computador, que ento efetua a promediao dos sinais e depois um clculo matemtico (transformada de Fourier), exibindo um espectro legvel. 1.1- A origem do sinal: Assim como os eltrons possuem o nmero quntico spin (S), os ncleos de 1H e de alguns istopos tambm possuem spin. O ncleo do hidrognio comum como o eltron: seu spin 1/2 e pode assumir dois estados: +1/2 e -1/2. Isto significa que o ncleo do hidrognio possui dois momentos magnticos. Outros ncleos com nmero quntico spin igual a 1/2 (veja mais sobre momento magntico spin em Termos de Russel-Saunders), so os dos istopos 13 C, 19F e 31P. Elementos como 12C, 16O e 32S no tm spin ( S = 0) e por isso no do espectros de RMN. H ainda ncleos com spin maior que 1/2. Porm, vamos estudar apenas os espectros de 1H e de 13C, ambos com S = 1/2. Como o prton tem carga eltrica, a rotao a rotao do prton gera um pequeno momento magntico - momento cuja direo coincide com a do eixo do spin. Este pequeno momento magntico confere ao prton em rotao as propriedades de uma pequena barra magnetizada. Na ausncia de campo magntico externo, os momentos magnticos dos prtons de uma amostra esto orientados ao acaso. Quando um composto contendo hidrognios

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(portanto, prtons) colocado num campo magntico externo, os prtons s podem assumir uma de duas orientaes possveis em relao ao campo magntico externo. O momento magntico do prton pode estar alinhado "paralelamente" ao campo externo, ou "antiparalelamente" ao campo. estes dois alinhamentos correspondem aos dois estados de spin mencionados anteriormente. Como vemos, os dois alinhamentos do prton num campo magntico no tm a mesma energia. Quando o prton est alinhado a favor do campo (paralelamente) sua energia mais baixa que a energia quando est alinhado contra o campo magntico (antiparalelamente). Sem campo magntico no h diferena de energia entre os prtons, e a diferena de energia gerada pelo campo externo aplicado depende da intensidade desse campo. necessria certa quantidade de energia para fazer o prton passar do estado de energia mais baixa para o estado de maior energia. No espectrmetro de RMN 1H esta energia proporcionada pela radiao eletromagntica utilizada (radiofreqncia). Quando ocorre esta absoro dizemos que os ncleos esto em ressonncia com a radiao. A primeira caracterstica a realar no espectro de RMN 1H a relao entre o nmero de sinais no espectro e o nmero de tipos diferentes de tomos de hidrognio no composto (veremos mais adiante as diferenas entre os tomos de hidrognio). O que importante na anlise de um sinal no espectro no a sua altura, mas a rea subentendida pelo pico. Estas reas, quando medidas com exatido, esto entre si na mesma razo que o nmero de tomos de hidrognio que provocam cada sinal. Os espectrmetros medem automaticamente estas reas e plotam curvas denominadas curvas integrais, correspondentes a cada sinal. As alturas das curvas integrais so proporcionais s reas subentendidas pelos sinais. A resoluo e nitidez dos espectros de RMN dependem da intensidade do campo magntico utilizado. Assim, nos aparelhos que utilizam um campo magntico de 7,04 tesla, a diferena de energia corresponde radiao eletromagntica de 300 MHz. H instrumentos mais modernos que operam com freqncias de 600 e at 800 MHz. 1.2- O deslocamento qumico: Se os hidrognios de uma molcula perdessem todos os seus eltrons e fossem isolados dos outros ncleos, todos os eles (prtons) absorveriam energia num campo magntico de intensidade bem determinada, para uma dada freqncia de radiao eletromagntica. No entanto, no essa a situao real. Numa molcula, alguns ncleos de hidrognio esto em regies de densidade eletrnica maior do que em outros; por isso, os ncleos (prtons) absorvem energia em campos magnticos de intensidades ligeiramente diferentes. Os sinais destes prtons, assim, aparecem em diferentes posies no espectro de RMN. Tm-se, como se diz, deslocamento qumico diferente. A intensidade do campo em que a absoro ocorre depende sensivelmente das vizinhanas magnticas de cada prton. Estas vizinhanas magnticas, por sua vez, dependem de dois fatores: dos campos magnticos gerados pelos eltrons em movimento e dos campos magnticos que provm de outros prtons vizinhos (acoplamentos de spins entre os ncleos de 1H). A circulao dos eltrons de uma ligao sob a influncia de um campo magntico externo gera diminuto campo magntico (campo induzido) que blinda o prton em relao ao campo externo. No prton, o campo induzido se ope ao campo externo. Isto quer dizer que o campo magntico real que atua sobre o prton menor do que o campo externo. Um prton que est fortemente blindado pelos eltrons no pode absorver a mesma energia que um

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prton de baixa blindagem, num mesmo campo magntico externo. Um prton blindado absorver energia num campo externo de maior intensidade (ou em frequncias mais elevadas). O campo externo deve ser mais intenso para compensar o efeito do pequeno campo induzido.

O grau de blindagem do prton pelos eltrons circulantes depende da densidade eletrnica relativa em torno desse prton. A densidade eletrnica em torno do prton, por sua vez, depende, em grande parte, da presena de grupos eletronegativos. Quanto mais prximo destes grupos "retiradores de eltrons", menos blindado estar o prton. A deslocalizao de eltrons (ressonncia) tambm contribui para a desblindagem do prton. Assim, prtons aromticos de anis benznicos no so blindados, e absorvem energia num campo magntico de baixa intensidade. Em contrapartida, prtons ligados a carbonos de duplas e triplas ligaes possuem blindagem relativamente alta, devido alta densidade eletrnica das ligaes pi, e absorvem energia num campo magntico mais alto. Os deslocamentos qumicos so medidos na escala horizontal do espectro, em Hertz (Hz), e normalmente exprimidos em partes por milho (ppm), devido a estes deslocamentos serem muito pequenos em comparao com a intensidade do campo magntico externo. Quanto mais para esquerda se localiza o sinal, menor o campo magntico sobre o ncleo. Estas posies so medidas em relao absoro dos prtons de um composto de referncia, pois no seria prtico medir o valor real do campo magntico no qual ocorre a absoro de energia. O composto de referncia normalmente utilizado o tetrametilsilano (TMS). amostra cujo espectro esteja sendo levantado adiciona-se pequena quantidade de TMS e toma-se o sinal dos 12 prtons equivalentes do TMS como o ponto zero da escala. Veja abaixo a estrutura do TMS:

H vrias razes para a escolha do TMS como composto de referncia:

O TMS tem 12 tomos de hidrognio, e por isso, pequena quantidade do composto provoca um sinal relativamente forte.

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Uma vez que todos os seus tomos de hidrognio so equivalentes, h um nico sinal, bem ntido. Como o silcio menos eletronegativo que o carbono, os prtons do TMS esto em regies de grande densidade eletrnica. Por isso esto muito blindados e o sinal ocorre numa regio do espectro onde poucos tomos de hidrognio absorvem energia.

Assim, o sinal do TMS raramente interfere nos sinais de outros prtons. Depois de o espectro ter sido levantado, pode-se eliminar o TMS facilmente por evaporao. A tabela abaixo apresenta o deslocamento qumico caracterstico de alguns tipos dehidrognio. Tipo de prton Alquila primrio R-CH3 Alquila secundrio R-CH2-R Alquila tercirio R3CH Allico R2C=CR-CH3 Cetona R-CO-CH3 Benzlico ArCH3 Acetilnico RC CH Iodeto de alquila RCH2I ter R-O-CH2-R lcool R-CH2OH Brometo de alquila R-CH2Br Cloreto de alquila R-CH2Cl Vinlico R2C=CH2 Vinlico R2C=CHR Aromtico Ar-H Aldedo R-COH Hidroxila de lcool R-OH Amnico R-NH3 Fenlico ArOH Deslocamento qumico 0,8 - 1,0 1,2 - 1,4 1,4 - 1,7 1,6 - 1,9 2,1 - 2,6 2,2 2,5 2,5 - 3,1 3,1 - 3,3 3,3 - 3,9 3,3 - 4,0 3,4 - 3,6 3,6 - 3,8 4,6 - 5,0 5,2 - 5,7 6,0 - 9,5 9,5 - 9,6 0,5 - 6,0 * 1,0 - 5,0 * 4,5 - 7,7 *

Carboxlico R-COOH 10,0 - 13,0 * *O deslocamento qumico destes prtons varia com o tipo de solvente utilizado, com a temperatura e com a concentrao.

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1.3- Identificao dos tipos de hidrognio: Hidrognios Homotpicos - Numa mesma molcula podem existir vrios tomos de hidrognio equivalentes, isto , com o mesmo deslocamento qumico. Portanto, o sinal destes hidrognios cai na mesma posio do espectro de RMN. Dizemos que estes hidrognios so quimicamente equivalentes e so chamados hidrognios homotpicos. Imagine, por exemplo, a molcula de etano (C2H6). O espectro de RMN 1H desta molcula daria um nico pico - um singleto. Mas como que 6 hidrognios podem dar apenas um sinal? porque todos estes hidrognios do etano tm as mesmas propriedades qumicas. Por exemplo, se substituirmos qualquer um dos hidrognios por um grupo Z qualquer, teremos a mesma molcula C2H5Z, idntica tanto na estrutura geomtrica e espacial quanto nas propriedades fsico-qumicas. Ns sabemos que no grupo metil (-CH3) todos os trs hidrognios so equivalentes, pois existe a possibilidade de rotao da ligao sigma. Assim, se substituirmos um hidrognio qualquer de cada um dos carbonos do etano por um grupo Z, teremos a mesma molcula. J na molcula de eteno (H2C=CH2) a ligao dupla no permite o giro, e podemos formar dois compostos ismeros diferentes (cis e trans) se substituirmos um hidrognio de cada um dos carbonos. Apesar disso, a molcula simtrica, isto , existe um plano de simetria em sua estrutura. Essa simetria faz com que existam hidrognios homotpicos, ou seja, que so interpretados como um nico sinal. Veja agora o seguinte exemplo:

Na molcula do 2-metilpropeno acima temos dois grupos de hidrognios homotpicos (em azul e em vermelho). Substituindo qualquer um dos dois hidrognios azuis por um bromo, temos a mesma molcula: 1-bromo 2-metilpropeno. Tambm podemos substituir qualquer um dos seis hidrognios vermelhos por um bromo, e teremos a mesma

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molcula: 3-bromo 2-metilpropeno. Assim, o 2-metilpropeno d dois sinais no espectro de RMN 1 H: um correspondente aos hidrognios homotpicos azuis e outro correspondente aos hidrognios homotpicos vermelhos. Podemos dizer que os hidrognios so homotpicos porque possuem a mesma vizinhana, e o espectro de RMN 1H no detecta diferenas qumicas entre estes hidrognios, j que eles tm o mesmo grau de blindagem. A diferena entre os dois sinais do 2-metilpropeno o deslocamento qumico dos dois grupos de hidrognios e o valor da curva integrais dos picos: a curva dos hidrognios azuis ter valor relativo 2 (dos dois prtons) e a curva dos hidrognios vermelhos ter valor relativo 6 (dos 6 prtons). Hidrognios Enantiotpicos e Diasterotpicos - Se a substituio de cada um dos hidrognios pelo mesmo grupo leva a compostos que so enantimeros, os dois tomos de hidrognio so enantiotpicos. Eles tm o mesmo deslocamento qumico e do apenas um sinal no espectro. Veja o exemplo abaixo:

Os dois tomos de hidrognio do brometo de etila so enantiotpicos. O composto ento d dois sinais no espectro de RMN 1H: um correspondente aos trs prtons do grupo metil (so homotpicos) e outro correspondente aos dois prtons enantiotpicos, que tambm so equivalentes. Se a substituio de cada um dos hidrognios pelo mesmo grupo leva a compostos que so diasteroismeros, os dois tomos de hidrognio so diasterotpicos (lembre-se que os diasteroismeros no formam par objeto-imagem). A identificao de hidrognios diasterotpicos em um composto muito importante porque eles no tm o mesmo deslocamento qumico e do sinais diferentes no espectro, embora na maioria das vezes estes dois sinais estejam to prximos que torna-se difcil distingu-los, a no ser que se utilize um espectrmetro de alta frequncia. Os hidrognios diasterotpicos, portanto, podem explicar o aparecimento de sinais extras no espectro. Veja os exemplos abaixo:

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1.4- O desdobramento do sinal: Desdobramento do sinal o fenmeno que ocorre graas s influncias magnticas, sobre os tomos de hidrognio responsveis pelo sinal, de outros tomos de hidrognio adjacentes. Este efeito conhecido como acoplamento spin-spin. O acoplamento de um hidrognio com outro gera um pico duplo (dupleto), o acoplamento entre trs hidrognios gera um pico triplo (tripleto) e assim por diante. Sinais com mltiplos picos (mais de 7 ou 8) podem ser chamados multipletos.

Os efeitos do acoplamento spin-spin so transferidos principalmente pelos eltrons de ligao e no so usualmente observados se os prtons acoplados estiverem separados por mais de trs ligaes sigma. No se observa desdobramento de sinal de prtons equivalentes (homotpicos) ou enantiotpicos, ou seja, no h desdobramento de sinal entre prtons com mesmo deslocamento qumico. Assim, por exemplo, no espectro do etano (CH3CH3) h apenas um pico (singleto), correspondente aos seis tomos de hidrognio homotpicos. Veja alguns exemplos de anlise de espectros de RMN 1H: 1) PROPANOL

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O grupo OH age como um grupo "retirador de eltrons", ou seja, devido sua alta eletronegatividade, a densidade eletrnica da molcula est deslocada a favor desse grupo, e o efeito indutivo na cadeia segue tambm esse sentido. Assim, da esquerda para a direita, os hidrognios tm a densidade eletrnica diminuda, o que explica o deslocamento qumico desses prtons no espectro ao lado (lembre-se de que quanto maior a blindagem dos prtons, mais para a direita do espectro ser o seu deslocamento qumico). Os H vermelhos so homotpicos, portanto, tm o mesmo deslocamento qumico. Eles acoplam-se entre si e com os H azuis, que esto separados dos hidrognios em vermelho por menos de quatro ligaes. O sinal desdobrado num tripleto, porm, esse desdobramento devido somente ao acoplamento com os H azuis); o acoplamento entre os hidrognios homotpicos gera apenas um aumento da intensidade do pico (a curva integral tem valor 3). Pode-se generalizar que o nmero de picos no sinal de um prton igual ao nmero de prtons adjacentes + 1. Seguindo o mesmo raciocnio feito acima, temos que:

Os H azuis so homotpicos. Eles acoplam com os H vermelhos e com os H verdes, formando um sexteto de curva integral 2. Os H verdes so homotpicos. Eles acoplam com os H azuis, formando um tripleto de curva integral 2. Pela teoria, os H verdes deveriam acoplar com o H da hidroxila, pois a distncia de trs ligaes. No entanto, hidrognios de hidroxilas muitas vezes, mesmo estando separado de outro hidrognio por menos de quatro ligaes sigma, no sofrem acoplamentos com outros prtons, a no ser em presena de solventes especficos, que diminuem a polaridade do meio. A ausncia desse acoplamento ocorre normalmente porque as hidroxilas fazem ligaes de hidrognio intermoleculares, que dificultam a interao com outros prtons.

2) BROMO-METANOATO DE ISOPROPILA

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Os H vermelhos so homotpicos, possuem a mesma vizinhana qumica, e por isso do apenas um sinal - um dupleto (de curva integral 6), devido ao acoplamento com o H verde. O H verde acopla com os seis H vermelhos e gera um septeto, de curva integral 1. Os H azuis so homotpicos e, por isso, geram um nico sinal. Como no h hidrognios adjacentes, o pico nico - um singleto, de curva integral 2.

Os deslocamentos qumicos observados so explicados devido ao efeito da eletronegatividade dos grupos Br, oxignio e carbonila. O H verde o menos blindado, pois est separado do oxignio por apenas duas ligaes. O H vermelhos esto separados do oxignio por trs ligaes, e por isso, o efeito eletronegativo do oxignio menos pronunciado sobre estes prtons, que ento, ficam mais protegidos. Finalmente, os H azuis esto ligados a um carbono que se liga ao bromo, de pequena eletronegatividade, e a uma carbonila, ou seja, no h perto destes hidrognios um grupo to eletronegativo como o oxignio. Por isso eles tm blindagem maior e a o sinal cai numa posio de campo alto. 3) CIDO PARA-TOLUIL-ACTICO

O H da hidroxila no acopla com outros prtons. O sinal, portanto, um singleto, de curva integral 1. Os H vermelhos so homotpicos, possuem a mesma vizinhana qumica, e por isso do apenas um sinal - um singleto (de curva integral 6), pois no acoplamento com hidrognios adjacentes. Cada H azul acopla com um H violeta adjacente e d um dupleto. Porm, como os H azuis so homotpicos, o sinal tem curva integral 2. Os H violetas tambm so homotpicos e cada um deles acopla com um H azul adjacente, gerando tambm um dupleto de curva integral 2. Os H verdes so homotpicos e no possuem hidrognios adjacentes, e por isso do um singleto, de curva integral 3.

Os deslocamentos qumicos observados so explicados devido ao efeito da eletronegatividade do grupo carboxila e do efeito de deslocalizao de eltrons gerado pela ressonncia do anel benznico, que desblinda os hidrognios aromticos. O H da carboxila fortemente desblindado pela ao da eletronegatividade dos oxignios. Os H verdes tm blindagem relativamente alta, pois esto muito distantes da carboxila.

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Problemas envolvendo espectroscopia, e em particular RMN preocupam os estudantes de qumica orgnica. Este um territrio pouco explorado e que envolve muitos conceitos abstratos. O presente tutorial pretende facilitar o entendimento e resoluo de problemas envolvendo RMN. Este no um guia definitivo, e no h uma frmula mgica, pois no h uma nica maneira de se resolver estruturas orgnicas usando espectroscopia. Entretanto, a tcnica a seguir apresenta 6 passos que orientam a resoluo dos problemas tpicos de RMN. Aproximaes realizadas para resolver problemas: Essencialmente, esta tcnica usa: 1. a integrao e o espectro de IR (quando disponvel) para encontrar os fragmentos dos compostos 2. dividir a figura e colocar os fragmentos juntos 3. analisar o deslocamento qumico e confirmar a estrutura. 6 dicas para ajudar a decifrar uma estrutura Para resolver um problema de espectroscopia voc deve se considerar um detetive e procurar os detalhes.

Dica 1

Determine o grau de insaturao utilizando a formula molecular. Assim, possvel determinar a presena e quantas so as duplas ou triplas ligaes, ou anis na molcula. Grau de insaturao Todos os alcanos possuem a mesma frmula emprica, que relaciona o nmero de carbonos com o nmero de hidrognios mais dois (CnH2n+2 , alcano). Um hidrocarboneto que possui uma dupla ligao (alceno) ou um anel perde dois hidrognios e portanto apresenta um grau de insaturao (CnH2n) nmero de carbonos igual ao nmero de hidrognios).

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Um hidrocarboneto que apresenta duas ligaes duplas ou uma tripla ligao (alcino) ou dois anis perdem quatro hidrognios e portanto apresentam dois graus de insaturao (frmula emprica CnH2n-2). O grua de insaturao total da molcula igual a soma de todas as insaturaes encontradas. Determinando a insaturao: Para se determinar o grau de insaturao pode-se utilizar a frmula geral abaixo: Grau de insaturao= [((Nmero de Carbonos x 2) + 2) Nmero de hidrognios] / 2

Sendo que: - oxignios devem ser ignorados - F, Cl, Br, I devem ser somados com um hidrognio - N devem ser contados como meio carbono Pratique determinando o grau de insaturao das estruturas a seguir:

Dica 2

Analise o espectro de IR (se disponvel) e confirme a presena dos principais grupos funcionais no espectro de RMN. Alguns grupos mais fceis de confirmar so aldedos, anis benznicos e cidos carboxlicos.

Dica 3

Encontre qual o nmero de hidrognios que cada pico do RMN representa, comparando a razo da integrao com a frmula molecular.

Dica 4

Quebre o espectro de RMN em fragmentos utilizando a integrao encontrada de acordo com a dica 3. Abaixo existe uma lista dos fragmentos mais comuns encontrados. Integrao N de Fragmentos fragmentos comentrios representados equivalentes

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1H

Tente confirmar pelo IR (se disponvel) ou pelo valor do deslocamento qumico que este no um H de um lcool (-OH)

2H

Algumas vezes so dois fragmentos equivalentes a CH

3H

4H

Algumas vezes so dosi fragmentos equivalente a CH2 Frequentemente indicam um grupo isopropyl. Raramente indicam 3 fragmentos equivalente a CH2 Frequentemente um grupo t-butil indicam

6H

9H

Dica 5

Combine todos os fragmentos de uma maneira que faa sentido, de acordo com a multiplicidade dos picos do RMN. Esta a tarefa mais difcil, e algumas vezes a melhor maneira tentar e checar. Verifique as possveis estruturas e analise se esto correta. Dica 6

Verifique a estrutura que voc sugeriu com todos os dados disponveis (incluindo IR, se disponvel). Exemplo:

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Encontre a estrutura de um composto desconhecido, de frmula molecular C9H12, utilizando os espectros de IR e RMN. Espectro de RMN

Espectro de IR

Dica 1: Determine o grau de insaturao

Utilize a frmula geral: Grau de insaturao= [((n carbonos x 2) +2) n hidrognios] /2 Grau de insaturao= [((9 x 2) +2) 12] / 2= 4 H 4 graus de insaturao, portanto pode-se esperar duas ligaes duplas, uma tripla, ou um anel aromtico. Dica 2. Procure no espectro de IR grupos funcionais para a molcula

Os picos entre 1800 e 2000 cm-1 no IR indicam um anel aromtico. Este pode ser confirmado pelo deslocamento qumico no RMN ao redor de 7 ppm.

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Dica 3. Encontre quantos hidrognios cada grupo de picos representa.

Encontre as razes relativas usando uma regua. No exemplo existem trs conjuntos diferentes de pico e as alturas so 5:1:6 (total 12). Uma vez que a frmula molecular indica 12 hidrognios, o primeiro conjunto em 7 ppm representa 5 hidrognios, o pico em 3 ppm representa 1 e o pico em 1 ppm representa 6 hidrognios. Dica 4. Encontre todos os fragmentos do composto.

Para encontrar os fragmentos do composto observe a integrao do RMN. O conjunto de picos em 7 ppm representa 5 H, que concorda com um anel aromtico (tambm confirmado por IR) monosubstitudo (6H -1). Escreva este fragmento.

fragmento C6H5 Agora retorne na formula molecular e subtraia este pedao (C6H5). C9H12 - C6H5= C3H7 (note que o anel benznico contm quarto graus de insaturao, uma para o anel e trs para cada dupla ligao, portanto o restante da molcula no apresenta insaturao) C3H7 o que deve ser analisado agora. Os outros fragmentos mostram um conjunto com 1H e outro com 6H. Portanto, a estrutura possui um hidrognio ligado a carbono e tambm 6 outros hidrognios ligados a carbono, o que significa dois metils quimicamente equivalentes.

(1H)

, simtricos (6H) Voc deve checar se todos ao fragmentos foram analisados. Dica 5. Rena todos os fragmentos.

Os quarto fragmentos encontrados formam o isopropil benzeno:

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=> Dica 6. Cheque a resposta

O carbono ternrio com 1H est vizinho a 6H e portanto deve aparecer como um septeto. O conjunto de picos referentes ao 6H aparecem como um dupleto devido ao 1H vizinho. O conjunto de picos referentes ao anel benzeno (com 5H) tem deslocamento ao redor de 7 ppm e aprecem como mltiplos picos devido aos vizinhos. Estes fatores confirmam os dados e a resposta !!! Pratique: www.wfu.edu/~ylwong/chem/nmr/h1/ Experimento 7 Anlise Espectrofotometria UV/Vis e HPLC Materiais Ch preto Carbonato de clcio Cloreto de metileno Tolueno ter de petrleo Bquer Erlenmeyer Funil de separao Sistema para destilao Funil de Buchner Bales volumtricos Pipetas volumtricas Espectrmetro UV HPLC de cafena extrada de ch preto utilizando

Experimento 7 Anlise de cafena extrada de ch Espectrofotometria UV/Vis e HPLC Parte I: Extrao da cafena 1- Introduo

preto

utilizando

Alcalides so substncias orgnicas nitrogenadas de carter bsico, geralmente de origem vegetal, e que provocam efeitos fisiolgicos caractersticos nos organismos humanos. Nem todas as substncias classificadas como alcalides obedecem rigorosamente a todos os

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itens desta definio; por exemplo o alcalide da pimenta (piperina) no bsico, mas tem acentuada ao fisiolgica. Do ponto de vista qumico, os alcalides no constituem um grupo homogneo de substncias. Quase todos, porm, apresentam estrutura qumica derivada de um composto heterociclo. Uma classificao qumica de alcalides baseia-se na estrutura deste heterociclo: alcalides da piridina (ex.: nicotina) da xantina (ex.: cafena), da quinolina, do pirrol, do indol, da piperidina, etc. Certas famlias vegetais so particularmente ricas em alcalides, por exemplo, as rubiceas (caf) e as solanceas (fumo). A cafena (1,3,7-trimetilxantina, 1) pertence famlia dos alcalides xantnicos (Figura 1).
O R O N N R1 R2 N N

1 2 3 4

Cafena: R = R1 = R2 = CH3 Xantina: R = R1 = R2 = H Teofilina: R = R1 = CH3; R2 = H Teobromina: R = H; R1 = R2 = CH3

Figura 1: Alguns exemplos de alcalides xantnicos. A cafena foi isolada do caf por Runge em 1820 e do ch preto por Oudry em 1827. Ela encontrada ainda no guaran, erva-mate e em outros vegetais, e responsvel pelo efeito estimulante de bebidas como ch e caf e de refrigerantes como Coca-Cola e Pepsi-Cola. tambm um dos princpios ativos de bebidas ditas energticas (Red Bull, Power Flash, etc.). A cafena provoca um efeito pronunciado no sistema nervoso central (SNC), mas nem todos os derivados xantnicos so efetivos como estimulantes do SNC. A teobromina (4, Figura 1), uma xantina encontrada no cacau, possui pouco efeito no SNC, porm um forte diurtico e utilizada em medicamentos para tratar pacientes com problemas de reteno de gua. A teofilina (3), encontrada no ch junto com a cafena, tambm tem pouca ao no SNC, mas um forte estimulante do miocrdio, relaxando a artria coronria, que fornece sangue ao corao. Teofilina, tambm chamada de aminofilina, frequentemente usada no tratamento de pacientes que tiveram parada cardaca. tambm um diurtico mais potente que a teobromina. Sendo um vasodilatador, geralmente empregada no tratamento de dores de cabea causadas por hipertenso e asma. A cafena relativamente txica, (LD50 = 75 mg/Kg), mas para se obter uma dose letal de cafena, o indivduo deveria ingerir dezenas de quilos de caf em um curto perodo de tempo. Na Tabela 1 so apresentadas as quantidades mdias de cafena encontradas em algumas bebidas e alimentos. Devido aos efeitos provocados pela cafena no SNC, algumas pessoas preferem usar caf descafeinado. A descafeinao reduz o contedo de cafena do caf para aproximadamente 0,03 - 1,2% Tabela 1: Porcentagem em massa de cafena presente em bebidas e alimentos. BEBIDA/ALIMENTO % EM MASSA DE CAFENA Caf modo 0,64 - 0,88 Caf instantneo 0,42 - 0,56 Ch 0,18 - 0,53 Chocolate 0,71 Coca-cola 0,12

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2- Extrao No experimento ser utilizado ch preto e gua quente contendo carbonato de clcio. Por sua vez, a cafena ser extrada desta fase aquosa com diclorometano. Com a evaporao do solvente obtm-se a cafena impura. A purificao da cafena obtida ser feita atravs da tcnica de recristalizao, utilizando tolueno e ter de petrleo como solventes. Alcalides so aminas, e portanto formam sais solveis em gua, quando tratados com cidos. A cafena encontrada nas plantas apresenta-se na forma livre ou combinada com taninos fracamente cidos. A cafena solvel em gua, ento pode ser extrada de gros de caf ou das folhas de ch com gua quente. Junto com a cafena, outros inmeros compostos orgnicos so extrados, e a mistura destes compostos que d o aroma caracterstico ao ch e ao caf. Entretanto, a presena desta mistura de compostos interfere na etapa de extrao da cafena com um solvente orgnico, provocando a formao de uma emulso difcil de ser tratada. Para minimizar este problema utiliza-se uma soluo aquosa de carbonato de clcio. O meio bsico promove a hidrlise do sal de cafena-tanino, aumentando assim o rendimento de cafena extrada. 3- Procedimento Em um erlenmeyer de 250 mL coloque 15,0 g de ch preto, 150 mL de gua e 7,0 g de carbonato de clcio. Ferva a mistura com agitao ocasional por 20 minutos, filtre a mistura quente em Buchner e esfrie o filtrado a 10-15C. Transfira o filtrado para um funil de separao e extraia a cafena com 4 pores de 20 mL de cloreto de metileno (extrao mltipla com agitao suave para evitar a formao de emulso). Destile o solvente com um aparelho de destilao simples at que se obtenha um volume de 5-7 mL no balo. Transfira ento o extrato concentrado para um bquer e evapore o restante do solvente em banho de vapor at a secura. Pese o resduo esverdeado de cafena bruta e calcule a percentagem de alcalide no ch. O resduo pode ser recristalizado, dissolvendo-o em 5 mL de tolueno a quente e adicionando algumas gotas de ter de petrleo (p. e. 60-80C) at formar o precipitado. Filtre vcuo e recolha o slido. Experimento 7 Anlise de cafena extrada de ch preto Espectrofotometria UV/Vis e HPLC Parte II: Anlise da cafena por UV 1- Introduo A absoro da radiao UV/Vis por um tomo ou molcula (M) apresenta duas etapas: Excitao: M + h M* Relaxao: M* M + calor (no detectvel) utilizando

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A absoro da radiao UV/Vis geralmente excita eltrons ligantes, fazendo com que os picos de absoro indiquem tipos de ligaes, o que permite tambm inferir quais os grupos funcionais presentes (anlise qualitativa). Porm, as aplicaes em anlise quantitativa so as mais importantes. Existem trs tipos principais de transio eletrnica: eltrons , e n eltrons d e f eltrons de transferncia de carga Assim, todos os compostos orgnicos so capazes de absorver radiao eletromagntica porque todos possuem eltrons que podem ser excitados a nveis maiores de energia. Entretanto, alguns grupos absorvem radiao com maior intensidade e so chamados de grupos cromforos. As tabelas 1 e 2 apresentam exemplos de grupos cromforos e tambm os respectivos comprimentos de onda de absoro mxima. Tabela 1. Alguns grupos cromforos importantes.

Tabela 2. Alguns compostos com grupos multicromforos.

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Na anlise por Espectrofotometria de Absoro UV/Vis torna-se importante a escolha do solvente da amostra, pois os solventes polares (gua, lcoois, steres e cetonas) modificam o espectro que se obteria na fase gasosa, devido s interaes formadas. Os solventes apolares permitem obter espectros mais prximos com os da fase gasosa (molcula pura). Os mximos de absoro tambm so influenciados pelo solvente e a pureza do mesmo importante. A absorbncia, A, de uma soluo definida como o logaritmo na base 10 do inverso da transmitncia, T, para luz monocromtica e expressa pela equao: A= log(1/T)= log (I0/I) Onde, I= intensidade da luz monocromtica transmitida I0 = intensidade da luz monocromtica incidente T = I/I0 Na ausncia de outros fatores fsico-qumicos, a absorbncia medida proporcional ao caminho tico (b) atravs do qual a luz atravessa e concentrao (c) da substncia presente, de acordo com a equao: A= . b. c Onde a absortividade molar da substncia quando a concentrao expressa em mol/L (quando a concentrao for expressa em g/L esta constante chamada absortividade especfica, a). A Lei de Beer diz que a relao acima ser linear em concentraes no muito elevadas, geralmente menores que 0,1 mol/L. Absorbncia Especfica - A (1%, 1 cm) A absorbncia especfica de uma substncia dissolvida se refere a absorbncia de uma soluo 1,0% (m/v) medida em uma cela de 1 cm, em um comprimento de onda definido, ento: A(1%, 1 cm)= 10/M

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Onde M= peso molecular da substncia em anlise A absorbncia especfica portanto a absorbncia observada em um dado comprimento de onda, usando um caminho tico de 1 cm e uma soluo com concentrao de 1% m/v, e apresenta um valor especfico para um dado solvente, sendo uma propriedade do soluto. Quantificao atravs de curva analtica Curva analtica ou curva de calibrao o nome dado ao relacionamento matemtico obtido entre as respostas analticas medidas e as respectivas concentraes dos padres empregados. Utiliza-se na sua obteno, solues de concentraes conhecidas (so recomendadas no mnimo 5 concentraes diferentes) e mede-se a resposta analtica (no presente caso, absorbncias no UV/Vis), traando-se um grfico com o relacionamento entre estes valores. No eixo x deste grfico colocam-se as concentraes conhecidas e no eixo y as respectivas respostas (absorbncias). Se o grfico obtido representa uma reta (atendendo a Lei de Beer) torna-se mais fcil obter os parmetros desta correlao, por regresso linear, e definir uma equao matemtica que descreva o relacionamento entre x e y, encontrando os coeficientes linear (a) e angular (b). A qualidade desta regresso linear e assim da reta obtida, avaliada de acordo com o valor de coeficiente de correlao (r). Quanto mais prximo a 1 o coeficiente de correlao for, melhor a reta. Os coeficientes da reta y=a+bx, a e b so calculados aps a regresso linear e so utilizados para calcular a concentrao de solues desconhecidas que apresentam uma resposta analtica obtida da mesma forma que as solues conhecidas 2- Procedimento Obtenha primeiramente uma curva analtica, preparando as seguintes solues: 1- Soluo estoque: pese 10 mg de cafena (que estar sendo considerada padro) em um balo de 10,00 mL e dissolva com gua. 2- Prepare 5 solues de concentraes diferentes a partir de diluies da soluo estoque, considerando a faixa de 0,1 a 0,6 mg/mL 3- Faa a leitura, por espectrofotometria de absoro UV/Vis, das cinco solues. 4- Trace um grfico de absorbncia x concentrao 5- Obtenha a equao da reta (regresso linear). Aps obtida a curva analtica, prepare a soluo da cafena em anlise: 1- Pese 30 mg da cafena obtida por extrao do ch e dissolva em balo volumtrico de 100,00 mL; utilizando gua como solvente. 2- Obtenha o resultado de absorbncia desta soluo 3- Calcule a concentrao real da soluo em anlise, utilizando a regresso linear 4- Calcule a porcentagem de pureza considerando a concentrao real obtida e a terica (massa de cafena pesada) Experimento 7 Anlise de cafena extrada de ch preto Espectrofotometria UV/Vis e HPLC Parte III: Anlise da cafena por HPLC Procedimento utilizando

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Fase mvel = 69:28:3, gua:Metanol:cido actico, v/v/v Coluna C-18 Vazo= 2mL/min Soluo diluente: fase mvel ou metanol:cido actico 95:5, v/v Injete 10 L de uma soluo de amostra de 10 mg em 10 mL de soluo diluente e verifique a pureza da amostra.

Verifique a presena de picos secundrios obtidos no cromatograma da cafena (presena de impurezas).

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