1 CROMATOGRAFA DE GASES

Objetivos
* Conocer los fundamentos y aplicaciones de la cromatografa de gases * Describir los instrumentos utilizados en la cromatografa de gases

Bibliografa A. Braithwaite y F.J. Smith, Chromatographic Methods, Blackie Academic & Professional, 5a Ed., Glasgow, 1996 I.A. Fowlis, Gas Chromatography, Analytical Chemistry by Open Learning, John Wiley & Sons, Chichester, 1998 R.P.W. Scott, Introduction to Analytical Gas Chromatography, Marcel Dekker, New York, 1998 D. Rood, A practical guide to the care, maintenace and troubleshooting of capillary gas chromatographic systems, Hthig, Heidelberg (Ger.), 2a Ed. 1995 K.A. Rubinson y J.F. Rubinson, Anlisis Instrumental, Prentice Hall, Madrid, 2001

1.1.

Introduccin

En la cromatografa de gases la fase mvil que est en estado gaseoso transporta al analito a lo largo de la columna. A esta fase se le denomina gas portador. La fase estacionaria puede ser un lquido o un slido y es por ello que se puede hablar de cromatografa gas/lquido o de cromatografa gas/slido. De estas dos cromatografas la ms utilizada es la gas/lquido y de hecho cuando se habla de la cromatografa de gases se hace referencia a la cromatografa gas/lquido. Mediante la cromatografa de gases es posible la determinacin de compuestos que presentan una volatilidad importante a temperaturas inferiores a 350-400 o C. Adems, a esas temperaturas

1.1. INTRODUCCIN

los analitos han de ser estables y no han de degradarse ni perderse parte de los mismos a travs de reacciones secundarias. La composicin de los componentes qumicos as como su peso molecular suelen ser determinantes para predecir la volatilidad de los compuestos. En la mayora de los casos, cuanto mayor es la polaridad o el peso molecular la volatilidad suele ser menor. Mientras hidrocarburos ms pesados que los de 500 umas pueden ser analizados por medio de cromatografas de gases normales, los de peso superior a 1400 umas necesitan condiciones especiales. Si aparecen grupos polares provocan una disminucin de la volatilidad y en consecuencia habra que rechazar para esos casos la cromatografa de gases. En ese sentido, azucares, aminocidos etc. no se analizan de esa forma. Igualmente, los compuestos inorgnicos no se analizan por CG. Como excepcin estn los compuestos organometlicos.

En la Figura 1.1 se puede ver un esquema de un cromatgrafo de gases. En general, la muestra que normalmente suele estar en forma gaseosa o liquida suele ser introducida a travs del septum (a travs del disco de goma) en un inyector que se encuentra caliente utilizando para ello una jeringa. En ese inyector caliente la muestra enseguida se evapora y el gas portador lo lleva rpidamente a la columna. Como consecuencia de la interaccin entre los analitos y la fase estacionaria los distintos analitos llegan separados al detector; concretamente al extremo nal de la columna. La temperatura de la columna debe de ser lo sucientemente alta como para provocar la elucin del analito en un tiempo corto (<de 40 - 60). Adems, el detector ha de estar ms caliente que la columna para que los analitos que salen de esta no se condensen al pasar al detector.

Figura 1.1: Esquema general de un cromatgrafo de gases.

1.2. GAS PORTADOR

1.2.

Gas portador

A la fase mvil que transporta los analitos desde la columna al detector se le denomina gas portador. El gas portador es inerte por lo que no tiene ningn tipo de interaccin ni con la fase estacionaria ni con los analitos. Los gases ms utilizados son los siguientes: el helio, nitrgeno e hidrgeno especialmente y en algunos casos tambin el argn y el dixido de carbono. Para elegir el gas portador en cromatografa de gases hay que tener en cuenta por lo tanto los siguientes factores: coste, accesibilidad, inercia qumica, detector y, en muchos casos, la ecacia para la separacin. Para hacer un estudio acerca de la ecacia se puede observar la ecuacin de Van Deemter. Como se puede observar en la Figura 1.2, la mejor ecacia se obtiene con el nitrgeno (puesto que tiene el menor valor de B en la ecuacin de Van Deemter) pero se necesitan velocidades de ujo muy bajas. Por lo tanto, a pesar de obtener buenas ecacias los tiempos de anlisis suelen ser muy altos. Por lo tanto, muchas veces se utiliza el helio y el hidrgeno que si bien disminuyen la ecacia hacen que se obtengan tiempos de anlisis ms adecuados. La utilizacin del hidrgeno puede traer otro tipo de problemas por el carcter inamable del mismo.

Figura 1.2: Altura de los platos tericos de la columna (H) en funcin de la velocidad para tres gases portadores habituales. En algunos casos, el ujo adecuado para la separacin de los analitos en la columna puede ser bajo para el modo de funcionamiento del detector. En estos casos se puede usar un gas ayudante (make up) entre la columna y el detector. Un factor que puede tener mucha inuencia en la separacin de los analitos en la cromatografa

1.2. GAS PORTADOR

de gases es el caudal del gas puesto que ste va a limitar la velocidad de separacin. El caudal normalmente se controla a travs de dos reguladores de presin (Ver Figura 1.3): concretamente los que se ponen en la botella que contiene al gas y en el cromatgrafo de gases. A pesar de que el caudal puede ser controlado por medio de un rotmetro puesto en la cabeza de la columna, se suele utilizar un medidor de mano basado en pompas de jabn que es colocado a la salida de la columna. Este medidor realiza su trabajo de la siguiente forma: se aade una disolucin de jabn al medidor y se controla el tiempo que necesita una pompa de jabn para recorrer dos marcas y se determina el caudal.

Figura 1.3: Adecuacin y control del gas portador.

Los gases utilizados en cromatografa de gases tienen que tener una alta pureza (>99.995 %) y antes de ser introducidos al instrumento hay que quitarles la humedad, el oxgeno y los hidrocarburos. El oxgeno puede ser un contaminante importante puesto que puede degradar la columna y en muchos detectores (espectrmetro de masas y detectores basados en captura electrnica, por ejemplo) puede originar problemas. Para evitar estos gases contaminantes el gas portador se hace pasar por un cartucho absorbente.

1.3. FUNDAMENTOS DE LA SEPARACIN EN CROMATOGRAFA DE GASES

1.3.

Fundamentos de la separacin en cromatografa de gases

Aunque los fundamentos de las separaciones por medio de cromatografa de gases se han explicado en el Captulo anterior, se pueden hacer una serie de menciones especiales. Entre otras, est la relacin de fases (), esto es, el cociente entre el radio interno de la columna capilar y el doble del grosor de las paredes (d f ): r 2d f

(1.1)

Por medio de esta ecuacin pueden relacionarse la constante de reparto del analito (Kd ) y el factor de capacidad (k) de la siguiente forma:

Kd = k

(1.2)

Para un determinado analito, fase estacionaria y temperatura de columna, cualquier cambio que tenga lugar en el grosor de las paredes o radio interno de la columna producir cambios en la retencin de los analitos. Las consecuencias de esos cambios aparecen resumidas en la Tabla 1.1.

Cuadro 1.1: Efecto del dimetro interno y grosor de las paredes de la columna sobre la retencin.

Dimetro de la columna Aumento Disminucin -

Grosor de las paredes Aumento Disminucin

Aumento Disminucin Disminucin Aumento

Retencin Disminucin Aumento Aumento Disminucin

1.4.
1.4.1.

Inyectores y sistemas de muestreo

Portal de inyeccin

El objetivo del inyector es introducir una cantidad signicativa de muestra en la columna cromatogrca. En la cromatografa de gases los lquidos son inyectados por medio de jeringas. Despus de pinchar en un disco de goma denominado septum, la jeringa llega a un tubo de vidrio silanizado (denominado liner) que posee el portal de inyeccin, donde deja la muestra

1.4. INYECTORES Y SISTEMAS DE MUESTREO

(Ver Figura 1.4). Puesto que el portal de inyeccin se encuentra a temperatura alta, la muestra se va a evaporar rpidamente y el gas portador transportar la muestra hasta la columna. En la cromatografa analtica se usan volmenes de inyeccin del orden de 0.1-2 l. Los productos de descomposicin de la muestra as como los no evaporados se quedaran en el tubo de vidrio y por lo tanto este tubo tiene que ser limpiado o cambiado de vez en cuando. Si la muestra estuviese en fase gaseosa se introducira por medio de una jeringa hermtica con sistemas parecidos a los portales de inyeccin utilizados en la cromatografa de lquidos.

(a)

(b)

Figura 1.4: (a): Esquema general del portal de inyeccin; (b): tubos de vidrio (liners) tpicos.

Inyectores con reparto y sin reparto1

Los inyectores empleados para columnas capilares se pueden usar de dos formas: Modo con reparto: Solo se introduce una parte de la muestra en la columna y el resto se enva a los deshechos. Este modo de inyeccin se utiliza cuando existen grandes cantidades de analito en la muestra. En estos casos, un pequeo volumen de muestra (1 l) a alta temperatura (por ejemplo 350 o C) es introducido en el inyector correspondiente con el n de que tenga lugar su evaporacin en un corto espacio de tiempo (<1 s). El gas portador lleva la muestra hasta la despensa de mezcla donde tendr lugar la evaporacin y la homogenizacin total de la misma. En el punto de reparto, una parte del vapor se introducir en la columna y la la otra parte es enviada fuera por medio de una vlvula (Figura 1.5 en la pgina siguiente). A la parte que no se introduce en la columna se le denomina relacin de reparto y est en el intervalo 50:1 - 600:1.
1 Split/splitless

1.4. INYECTORES Y SISTEMAS DE MUESTREO

Figura 1.5: Esquema de una inyeccin con reparto

Modo sin distribucin o reparto: Esta forma es vlida para el anlisis de muestras donde la proporcin de analito sea menor al 0.01 %. Se introduce un volumen de disolucin diluido de analito (1-2 l) a altas temperaturas ( 220 o C) en el inyector correspondiente. La temperatura del portal de inyeccin suele estar unos 15-30 o C por debajo de la temperatura de ebullicin del disolvente para as provocar la condensacin del disolvente en la columna y de esa manera aumentar la concentracin de los analitos. De esta forma los analitos y el disolvente crean una banda bastante estrecha al principio de la columna y eso garantiza picos cromatogrcos estrechos. Una vez de que la disolucin de analitos ha tenido tiempo como para colocarse en la cabeza de la columna, el portal de inyeccin ha de ser vaciado y limpiado (Figura 1.6 en la pgina siguiente).

Existe otra forma de condensar los solutos en una banda estrecha que es la captura fra. En este caso, la temperatura inicial de la columna se mantiene a una temperatura 150 a C inferior a la temperatura de ebullicin de los analitos. El disolvente y los analitos de baja temperatura de ebullicin se escapan rpido pero los analitos de mayor punto de ebullicin crean una banda ancha. A continuacin, al calentar la columna eluirn los compuestos de alto punto de ebullicin. Cuando los analitos de inters tienen un punto de ebullicin bajo, se utiliza una captura especial denominada crioenfoque. En ese caso se pueden obtener temperaturas bajas con N2 (l) y CO2 (l).

1.4. INYECTORES Y SISTEMAS DE MUESTREO

Figura 1.6: Etapas de la inyeccin sin reparto.

Inyeccin en columna

La inyeccin en columna (on-column injection) es un modo de inyeccin en columnas empaquetadas donde se hace pasar toda la muestra a travs de la columna. Se puede usar tambin con columnas de tipo capilar pero en este caso la columna ha de estar obligatoriamente fra. Esta inyeccin directa es muy apropiada cuando los analitos son inorgnicos o cuando se tienen analitos de intervalos de volatilidad bastante anchos. Despus de introducir directamente la disolucin en la columna se lleva a cabo un aumento de temperatura para facilitar una mejor separacin de los analitos. De utilizar jeringas comunes, el dimetro de columna ha de ser de 0.53 mm. Se puede obtener una mejor resolucin con columnas de 0.25-0.32 mm pero para estos casos son necesarias jeringas especiales de slice. Para evitar la sobresaturacin en la cabeza de la columna, sobre todo en columnas capilares, el volumen inyectado ha de ser bastante bajo ( 0.3 l).

Inyectores de temperaturas programables.

Estos inyectores son los ms generales en el caso anterior y en todos los casos, por tanto pueden utilizarse en inyeccin en columna y en la inyeccin con y sin reparto. Los inyectores de temperaturas programables garantizan las condiciones optimas de inyeccin (por ejemplo el enfoque de calor) puesto que se pueden controlar las temperaturas del inyector y del horno. Igualmente, se podemos obtener una repetitividad de los valores de tiempos de retencin muy alta, con coecientes de variacin del 0.1 al 0.5 %.

1.4. INYECTORES Y SISTEMAS DE MUESTREO

1.4.2.

Sistemas de muestreo

Los sistemas de muestreo llevarn a cabo los pretratamientos y transformaciones de la muestra que garanticen el anlisis. Entre estos procedimientos se encuentran, entre otros casos, la extraccin, la preconcentracin, la eliminacin de especies interferentes y/o la transformacin de los analitos con el n de obtener especie ms detectables.

Tcnica de espacio de cabeza2

Supongamos que en un recipiente cerrado hay una muestra (tanto slida como lquida) con compuestos voltiles y un lugar entre la muestra y el recipiente (espacio de cabeza). El reparto de esos compuestos voltiles entre esas dos fases se realiza en funcin de la constante de Henry. Si se coge a travs de una jeringa de gases una cantidad pequea de la muestra de ese espacio de cabeza y se inyecta de forma directa en el cromatgrafo de gases se habla de la tcnica de espacio de cabeza esttico. Esta tcnica es rpida, sencilla, automatizable y bastante directa puesto que la muestra que se introduce en el cromatgrafo va sin matriz. De todas formas, esta tcnica del espacio de cabeza esttico solo es viable en el caso de compuestos voltiles, puesto que la sensibilidad respecto a compuestos no voltiles es muy baja.

Purga y trampa3

En el caso del recipiente cerrado expuesto anteriormente si junto con la muestra (tanto slida como liquida) se purgara una fase gas en equilibrio, tras introducir continuamente una fase gaseosa limpia o sin analitos se romperamos el anterior equilibrio gas-lquido o gas-slido. Gracias a la ruptura de ese equilibrio se conducira el analito de modo ms cuantitativo que el caso anterior al cromatgrafo de gases. En esa idea esta basada la tcnica denominada lugar de espacio de cabeza dinmico o purga y trampa.

Desorcin trmica

En la tcnica denominada desorcion trmica los analitos que se encuentran a nivel de trazas en el aire son atrapados en tubos adsorbentes. Una vez que los analitos estn acumulados en el tubo, el tubo es calentado y utilizando gas helio los analitos son transportados a la columna cromatogrca. Para focalizar los analitos, se coloca una trampa criognica de pequeo volumen
2 Head 3 Ver

Space Seccin 11.2.5.

1.4. INYECTORES Y SISTEMAS DE MUESTREO

antes de la columna cromatogrca. Los analitos focalizados en la trampa criognica se desorben de nuevo y se lleva a cabo su anlisis cromatogrco. Puesto que en estas trampas no se adsorben ni el oxgeno ni el nitrgeno del aire, por medio de este mtodo, concentrando los analitos se puede llevar a cabo el anlisis de sustancias contaminantes que aparecen como trazas.

Microextraccin en fase slida

La microextraccin por medio de fases slidas es un mtodo simple para la extraccin de analitos de muestras tanto lquidas como gaseosas sin necesidad de utilizar disolvente. El fundamento de esta cromatografa es una bra del material que se utiliza en las columnas de cromatografa de gases de un espesor de 10-100 m. En funcin de los grupos funcionales que presente esa bra en su capa ms externa se pueden obtener distintas polaridades. Esa bra esta adherida a una aguja metlica de la jeringa y tiene la posibilidad de estar tanto dentro como fuera de la aguja. Para poder llevar a cabo esta tcnica se han de seguir los siguientes pasos. En primer lugar y una vez que la bra est dentro de la aguja, se inyecta la jeringa en el recipiente donde se encuentra la muestra. A continuacin, se saca la bra de la aguja y se pone en contacto con la muestra o con el espacio de cabeza de la muestra. En todo momento la muestra ser agitada y de quererlo as se podra calentar. Una vez que ha nalizado el tiempo de contacto, la bra ser introducida de nuevo en la aguja y los analitos adsorbidos en la bra se desorbern en el inyector del cromatogrfo de gases a lo largo de un tiempo denido. La representacin graca de esos pasos se puede observar en la Figura 1.7 en la pgina siguiente. Aunque la cantidad de masa extraida sea pequea con respecto a la masa del analito de la muestra, puesto que el volumen de la capa de la bra es pequeo tiene lugar una preconcentracin importante y travs de esta tcnica de muestreo es posible obtener buenos lmites de deteccin.

Pirlisis

Las molculas muy grandes, especialmente los polmeros, no se pueden analizar por cromatografa de gases porque la volatilidad de estos compuestos es pequea. En la pirlisis, estas sustancias que no volatilizables son transformadas en sustancias ms pequeas que si pueden ser analizadas por cromatografa de gases utilizando para ello una energa en forma de calor. Se pueden utilizar diversas fuentes de calor como ribbon type, punto curie o pirolizantes lser. Esta tcnica, adems de usarse para la determinacin de la composicin de los polmeros, tambin sirve para analizar los procesos de estabilidad trmica y descomposicin por medio de calor.

10

1.4. INYECTORES Y SISTEMAS DE MUESTREO

Figura 1.7: Extraccin y desorcin por medio de la microextraccin en fase slida.

11

1.5. COLUMNA CROMATOGRFICA

Derivatizacin

En el caso de molculas que no son vaporizables es necesario crear derivados que si lo sean. En el proceso de derivatizacin tiene lugar un cambio qumico en los grupos funcionales de la molcula y como consecuencia de ello se mejoran tanto las caractersticas de detencin como de separacin de las molculas. Utilizando una reaccin de derivatizacin adecuada se pueden obtener mejoras especicas con respecto a la evaporacin, hidrlisis, estabilidad trmica, aspecto de los picos, resolucin cromatogrca, selectividad de la detencin y sensibilidad.

Condiciones tcnicas generales de inyeccin

Los problemas que se pueden presentar en la inyeccin de las muestras son los siguientes: Si aparecen picos cromatogrcos partidos o distorsionados puede ser signicativo de que se ha introducido demasiado analito o muestra. Si la temperatura de inyeccin es demasiado baja los picos pueden presentar colas. Si la temperatura de inyeccin es demasiado alta puede tener lugar la degradacin de los compuestos. Si los analitos no se concentran en una banda estrecha por medio de la inyeccin y las tcnicas de muestreo, los picos del comienzo del cromatograma pueden ser demasiado anchos. Si el inyector esta contaminado pueden producirse efectos de memoria y pueden aparecer demasiados picos en el cromatograma. Hay que limpiar o cambiar a menudo el tubo de vidrio silanizado (el llamado liner) del inyector.

1.5.

Columna cromatogrca

La columna es el componente ms importante de un sistema cromatogrco puesto que en ella se concentran la mayora de los mecanismos necesarios para la identicacin, separacin y cuanticacin de los componentes de la muestra. En un principio, las columnas ms utilizadas eran las empaquetadas pero hoy en da se utilizan ms las de tubo abierto o capilares. Las empaquetadas presentan una longitud que oscila entre los 1-6 metros y dimetros que oscilan entre los 2 y 6 mm mientras que las capilares presentan longitudes entre 10 y 100 m y dimetros entre 0.1 y

12

1.5. COLUMNA CROMATOGRFICA

0.6 mm. En cuanto al material de produccin, las empaquetadas suelen ser de acero inoxidable o vidrio mientras que las capilares suelen ser de slice. En la Figura 1.8 se recoge una clasicacin de las columnas utilizadas en la CG.

Figura 1.8: Clasicacin de las columnas utilizadas en GC.

1.5.1.

Fase estacionaria

La fase estacionaria utilizada en la cromatografa gas-lquido debe de tener las siguientes caractersticas: baja volatilidad, estabilidad trmica e inercia qumica. A la hora de elegir la fase estacionaria adems de cumplirse las caractersticas anteriores, hay que tener en cuenta que la fase escogida tiene que tener el poder suciente como para disolver la muestra para que as los compuestos puedan quedar retenidos. En ese sentido, se puede seguir la regla de que los semejantes son disueltos por los semejantes4 donde la palabra semejante se reere a que tengan polaridad parecida. Antes de nada, para saber cuales van a ser las interacciones entre el analito y la fase estacionaria se han recogido en la Tabla 1.2 en la pgina siguiente las fases ms utilizadas as como sus grupos funcionales caractersticos. Uno de los problemas ms extendidos de la cromatografa de gases es la degradacin de la fase estacionaria o de la columna5 , sobre todo a altas temperaturas. El responsable de ello suele ser la rotura del material de la fase estacionaria y una de las consecuencias ms signicativas de ello suele ser es que la lnea base del cromatograma (y en la mayora de los casos la temperatura)
4 En 5 lo

latn Similia solvuntur a similibus. que en Ingls se denomina bleeding.

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Grupo funcional

Figura

Fuerzas de dispersin

Dipolo-dipolo

Enlace de H

Tmax (o C) Analitos

HO

Si

Si

OH

Polisiloxano

Fuertes

325-350

Hidrocarburos (n-alcanos)

CH3

HO

Si O

CH3

MetilFuertes 325-350

Hidroxarburos (alcanos, alquenos, aromticos)

HO

CH3 Si O

Si

OH

Fenil-

Cuadro 1.2: Fuerza de las interacciones de la fase estacionaria.

Cianopropilfenil-

1.5. COLUMNA CROMATOGRFICA

Polietilenglicol (PEG)

14 Muy fuertes Dbiles 325-350 Fuertes Muy fuertes Intermedios 280-300 Fuertes Fuertes Intermedios 250-260

H3C

Hidrocarburos aromticos

H3C

HO

Si

Si

OH

H3C

Compuestos ligeramente polares (hidrocar. halogenodos, bifenilos, teres...)

Compuestos polares (cetonas, alcoholes, cidos carboxlicos, aminas...)

1.5. COLUMNA CROMATOGRFICA

presentar una tendencia hacia arriba a medida que avanza el cromatograma. Por ello, en la Tabla 1.2 en la pgina anterior aparecen tambin las temperaturas de trabajo mximas para cada fase estacionaria. Las fases estacionarias mas utilizadas en la cromatografa gas-liquido son las siguientes: Compuestos polimricos: tenax, chromosorb y poropaks. Histricamente, era tpico utilizarlos en columnas empaquetadas. Tienen aplicaciones generales empezando por los hidrocarburos hasta los cidos. Fases lquidas: Entre las fases liquidas tpicas tenemos los hidrocarburos, los poliglicoles, politeres, polisteres y los polisiloxanos, siendo estos ltimos los ms utilizados. En la Figura 1.9 aparecen ordenadas en funcin de la polaridad varias fases lquidas. Cuando la fase lquida no es polar, el orden de elucin de los analitos es funcin de sus puntos de ebullicin. Las fases lquidas son las ms utilizadas y existen aplicaciones para cualquier tipo de analito y de matriz.

Figura 1.9: Clasicacin de fases lquidas tpicas en funcin de su polaridad. En cuanto a la cromatografa gas-slido, las fases estacionarias utilizadas suelen ser slidos adsorbentes (almina, slica, zeolita, tamices moleculares). La fase ms utilizada en las llamadas columnas PLOT son la almina y su actividad puede ser variada aadiendo tanto cloruro de potasio como sulfato sdico. Se utilizan mucho en el anlisis de gases inertes, freones e hidrocarburos muy voltiles del tipo C1-C10.

15

1.5. COLUMNA CROMATOGRFICA

1.5.2.

Columnas empaquetadas

Como se ha dicho, estas columnas presentan longitudes comprendidas entre los 6-10 m y dimetros entre 2-6 mm y se trata de tubos tanto de acero inoxidable como de vidrio. Estos tubos estn llenos de partculas nas (0.25-0.15 mm de dimetro) y esas partculas hacen la funcin de soporte slido puesto que estn cubiertas por medio de una na capa (0.05-1 m) de lquido no voltil. Las columnas bien empaquetadas pueden tener de 1000 a 2000 platos tericos. Los materiales utilizados como soporte slido tienen que cumplir las siguientes condiciones: slido inerte y duro de amplia supercie, estable trmicamente y poroso y que no se adsorba el soluto en su supercie. Entre los materiales investigados los ms utilizados son las tierras de diatomeas. Uno de los problemas que presentan los soportes slidos basados en tierras de diatomeas son la actividad de las mismas. Esa actividad corresponde sobre todo a los grupos silanol (Si-OH) producidos en las supercies de silicato. Los silanoles son lugares activos que pueden adsorber grupos polares y como consecuencia de ello pueden aparecer picos cromatogrcos con colas. Se puede reducir la actividad (desactivacin) de estos supercies por medio de la silanizacin a travs del dimetilclorosilano. Otro de los materiales utilizados en la cromatografa de gases son microesferas tanto de vidrio como de ten o polmeros organcos.

1.5.3.

Columnas tubulares abiertas o capilares

Este tipo de columnas son ms estrechas (0.1-0.6 mm) y ms largas (10-100 m) que las columnas empaquetadas. Entre las columnas capilares ms utilizadas estas son las ms importantes (Figura 1.10 en la pgina siguiente): La llamada WCOT (wall coated open tubular) o de pared cubierta. La llamada SCOT (support coated open tubular) o de soporte cubierto. La llamada PLOT (porous layer open tubular) o de capa porosa. Estas ltimas son, concretamente, las que se utilizan en la cromatografa gas-slido. Las columnas de pared cubierta (WCOT) no son ms que tubos capilares cuya pared interna aparece cubierta de fase estacionaria. En las columnas SCOT, en cambio, la parte interna del tubo capilar esta cubierta por un soporte y a este ltimo se le une la fase estacionaria. En general, si bien la ecacia de las columnas SCOT es inferior a las WCOT, es ms alta que la de las columnas empaquetadas. Es por ello que las columnas WCOT han sustituido a las columnas SCOT.

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1.5. COLUMNA CROMATOGRFICA

Figura 1.10: Corte transversal de las columnas capilares WCOT, SCOT Y PLOT En un principio, si bien las columnas WCOT eran de acero inoxidable, de vidrios tratados qumicamente, de plstico, cobre o aluminio, las de hoy en da son la mayora de slice fundido y presentan una cubierta protectora de poliimida en su exterior. Las diferencias ms sustanciales entre columnas tipo WCOT y columnas empaquetadas son las siguientes: 1. Puesto que las capilares son ms largas tienen mayor resolucin. 2. Puesto que poseen menor cantidad de fase estacionaria los analitos se retienen menos y por lo tanto los tiempos de anlisis son ms cortos. 3. La cantidad de muestra utilizada en las columnas capilares es del orden del nanogramo ( 50 ng) y en las empaquetadas se utilizan cantidades del orden del microgramo. 4. En las columnas capilares se obtienen limites de deteccin mayores a pesar de utilizar cantidades de muestra inferior. Puesto que en estas columnas los picos se extienden menos se obtendrn picos estrechos bien denidos.

1.5.4.

Programacin de la presin y la temperatura

La temperatura es una variable muy importante en la cromatografa de gases y para obtener valores repetitivos es obligatorio controlar esta variable. Asimismo, la columna esta colocada

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1.5. COLUMNA CROMATOGRFICA

en el interior de un horno. La temperatura del horno se puede variar entre 10-450 o C con una incertidumbre del 0.1 o C. Para programar la temperatura del horno existen dos opciones: Mantener la temperatura constante a lo largo del cromatograma (modo isotermo). Aumentar la temperatura a medida que transcurre el cromatograma (modo no isotermo).

Figura 1.11: Cromatogramas obtenidos a distintas temperaturas de elucin. Cuando la elucin es isotrmica, los compuestos de temperatura de ebullicin parecidos sern difcilmente separados y en funcin de la temperatura de elucin se obtendrn picos pequeos y anchos, sobre todo con compuestos difcilmente evaporables (Figura 1.11 (a)) o se apreciara una resolucin muy baja (Figura 1.11 ( b)). Cuando se programa la temperatura de elucin se pueden obtener mejores resoluciones y separaciones de los compuestos (Figura 1.11 ( c )). La programacin de la temperatura es fundamental para el desarrollo de mtodos de cromatografa de gases, sobre todo cuando la mezcla a separar es muy compleja. En la mayora de los casos, las partes ms importantes de la programacin son las temperaturas inicial y nal y la

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1.5. COLUMNA CROMATOGRFICA

velocidad de aumento de temperatura (a C/ min). Segn los cromatgrafos, el programa puede incluir tres pasos, esto es, el aumento de temperatura puede ser el siguiente: To = 110 0 C (1 min); 10 o C/min hasta 2000 C (0.5 min); 5 o C/min hasta 2500 C (0.5 min); 15o C/min hasta 3250 C (1 min). Algunos de los cromatgrafos utilizados hoy en da tienen controladores electrnicos que controlan la presin del gas portador que circula a lo largo de la columna. Al aumentar el ujo de la fase mvil el tiempo de retencin de los analitos disminuir. De esta forma, la programacin de la presin puede ser utilizada en el caso de compuestos que eluyen muy tarde.

1.5.5.

Utilizacin de las columnas capilares

Las columnas capilares son de muy distintos tamaos y en funcin de ellas y de la fase estacionaria existen bastantes combinaciones con las que poder llevar a cabo las separaciones. En cuanto al tamao fsico, las variables ms importantes son la longitud (m), dimetro interno (mm) y espesor (m). En funcin de esas variables, la resolucin y efectividad de las columnas puede ser muy diferente. En consecuencia, antes que nada habr que saber cuales son las columnas ms adecuadas para las muestras tpicas y cual es la combinacin ms ecaz a la hora de abordar el anlisis de la muestras especiales. En cuanto a la longitud se pueden encontrar columnas entre 5-60 m. Entre estas la de 30 m es la ms utilizada puesto que presenta un equilibrio en cuanto a resolucin y tiempo de separacin. En consecuencia, ante una muestra desconocida esa sera la primera de las opciones para llevar a cabo un anlisis previo de la muestra. Si se dobla la longitud de la columna su ecacia (N) casi se duplica y la mejora obtenida en la resolucin es del orden de 2. En lo relativo al dimetro interno de la columna los factores que entran en juego son la ecacia (N) y el contenido de la muestra (se puede considerar la masa de muestra ). Mientras que las columnas estrechas (0.10- 0.32 nm) presentan ecacias y resoluciones bastante altas, las columnas anchas (0.53-0.75 mm) presentan contenidos muy altos. Adems de esas variables, se pueden poner otra serie de limites. As por ejemplo, en el caso de la deteccin con MS no se pueden utilizar columnas ms anchas que 0.20-0.25 nm puesto que llegara un ujo muy alto de materia al detector. En cuanto al espesor de la fase estacionaria o pared, hay que decir que presenta una tendencia inversa con respecto a la ecacia. Esto es, a medida que se aumenta el espesor la ecacia de la columna ser menor, siendo los tiempos de retencin ms largos y el contenido de la columna mayor. Adems, las columnas de gran espesor necesitan de temperaturas mximas de

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1.6. DETECTORES

trabajo menores debido al problema de degradacin o bleeding. En general, las columnas estrechas se utilizan con compuestos sencillos y/o para distinguir compuestos de alta temperatura de ebullicin (>300 o C). Las columnas anchas, en cambio, se utilizan con compuestos de baja temperatura de ebullicin (compuestos orgnicos voltiles y gases).

1.6.

Detectores

Una vez que los compuestos han sido separados en la columna cromatogrca, al salir de ella es necesario detectarlos para poder medirlos y para de alguna forma poder identicarlos. En general, la mayora de los detectores no identican al compuesto que sale de la columna, es decir, no es posible averiguar de que compuesto se trata, si no que solo indican que un compuesto ha salido de la columna. Si se quiere llevar un anlisis cualitativo de los componentes de la muestra, es decir, si se quiere llevar a cabo la identicacin de los compuestos que salen de la columna se necesita un espectrmetro de masas o un detector de infrarrojos. En el caso de estos detectores, los espectros de los compuestos son comparados con espectros que estn ya recogidos en bibliotecas y de esta forma pueden ser identicados. Otra solucin no muy sotiscada, es comparar los tiempos de retencin de los analitos de la muestra con los tiempos de retencin de sustancias puras que han sido introducidos en columnas de distinta polaridad. Otra posibilidad puede ser la de aadir a la muestra una cantidad de una sustancia que se sospeche que pueda estar en la misma, y si se observa un aumento de la seal es una indicacin de que se trata del compuesto del que se sospechaba. El ms adecuado es el ltimo pero para ello habra que usar columnas de diferente polaridad. Para un anlisis de tipo cuantitativo, se toman como referencia el rea y la altura del pico cromatogrco y se comparan con las reas que corresponden a los estndar de los analitos puros. En la mayora de los casos se utilizan calibraciones con estndares internos, bien para llevar a cabo correcciones en el sistema cromatogrco (la correspondiente al volumen de inyeccin, por ejemplo) as como para corregir el cambio de la seal con respecto al tiempo del detector6 .
Detector de conductividad trmica (TCD)7

1.6.1.

El detector de conductividad trmica (TCD) mide el cambio que tiene lugar en la conductividad de la corriente gaseosa como consecuencia de la presencia del analito. El fundamento de este
6 Para 7 Thermal

profundizar ms en este campo se puede revisar el Captulo 12: Instrumentacin Analtica Conductivity Detector.

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1.6. DETECTORES

Figura 1.12: Esquema del detector de conductividad trmica (TCD). detector es un lamento metlico. En una situacin estacionaria y como consecuencia de la conductividad de los gases que lo rodean, este lamento al calentarse adquiere una temperatura. Al cambiar la composicin del gas, la temperatura del lamento tambin cambia y ese cambio se maniesta en un cambio en la resistencia elctrica. Un esquema de este detector se representa el la Figura 1.12. Llevar a cabo medidas absolutas de conductividad trmica es muy difcil por lo que se suelen usar dos lamentos, tal que por uno de ellos pasa el gas portador puro y por el otro el que viene de la columna; de esta forma, se mide la diferencia de conductividad entre los dos lamentos. En otros casos, hay un nico lamento y se hace pasar tanto el gas puro como el que viene de la columna en distintos intervalos de tiempo. Los lamentos estn unidos a un puente de Wheastone y cuando sobre los dos se hace pasar un gas puro el puente se equilibra en el punto cero. Cuando eluye un compuesto de la columna, la conductividad trmica del gas y en consecuencia la temperatura del lamento cambia. En estas condiciones cambia la resistencia del lamento y el puente se desequilibra. En este tipo de detectores se utilizan como gases portadores el helio y el hidrgeno puesto que su conductividad trmica es muy alta, tal como se recoge en la Figura 1.13 en la pgina siguiente. De esta forma, aunque la cantidad de analito sea baja el detector muestra cambios de temperatura importantes. El detector de conductividad trmica es universal (todos los analitos dan su seal), simple y barato. Lamentablemente, el detector de conductividad trmica no es muy sensible y no se puede

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1.6. DETECTORES

Figura 1.13: Algunos valores de conductividad trmica a 100 o C. usar con columnas capilares de dimetro interno superior a 0.53 mm. De hecho, hoy en da los detectores de conductividad trmica son utilizados con columnas empaquetadas o capilares de dimetro interno del orden de 0.53 mm.

1.6.2.

Detector de ionizacin de llama (FID)8

El detector de ionizacin de llama (FID) es un detector basado en la conductividad elctrica de los gases. En condiciones normales de presin y temperatura los gases no son conductores pero por medio de la energa aportada por la llama, si los analitos incluidos en ese gas son ionizados, se puede medir una variacin de la conductividad. Este detector consiste en un encendedor donde por medio de la mezcla de hidrgeno y aire se obtiene una llama. La energa de la llama tiene la capacidad de ionizar algunas molculas. Los tomos de carbono (salvo los de los grupos carbonilo y carboxilo) generan radicales CH y estos a su vez iones CHO+ : CH + O CHO+ Entre el encendedor y el segundo electrodo que acta de colector de iones se aplica una diferencia de potencial del orden de 100 voltios. En ese campo elctrico y como consecuencia del
8 Flame

Ionization Detector.

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1.6. DETECTORES

movimiento de los iones originados en la llama se puede medir la intensidad de la corriente resultante (Figura 1.14). Puesto que las corrientes generadas son pequeas (1012 A) es necesaria una amplicacin de las mismas.

Figura 1.14: Esquema del detector FID. En la Figura 1.15 en la pgina siguiente se muestra una fotografa de un sistema de GC con 2 detectores, uno FID y otro TCD. En el detector de llama todos los compuestos orgnicos que tengan enlaces C-H pueden dar seal. No, por ejemplo gases del tipo CO2 , SO2 , O2 , CO, H2 O, NH3 , H2 S, SiF4 y los xidos de nitrgeno. Los mejores lmites de deteccin se obtienen usando N2 como gas portador. Cuando se utilizan columnas capilares abiertas se aade nitrgeno antes de la llegada del analito al detector. Las caractersticas del detector FID se pueden resumir en las siguientes: 1. Tiene una alta sensibilidad respecto a los compuestos orgnicos. 2. No es nada sensible respecto a impurezas que pueda tener el gas transportador (CO2 , agua...). 3. Tiene uctuaciones pequeas respecto a cambios de temperatura y presin. 4. Intervalo lineal muy amplio, del orden de ocho. 5. Es 100 veces mas sensible que el detector de conductividad trmica.

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1.6. DETECTORES

Figura 1.15: Sistema de GC con detectores FID y TCD. 6. Puesto que la seal del detector con respecto a gases inorgnicos presentes de forma continuada ( aire, hidrgeno, productos resultantes de la llama) es muy pequea, la respuesta o ruido interno es tambin pequea y estable.

1.6.3.

Detector de captura electrnica (ECD)9

El detector de captura de electrones (ECD) tiene Ni63 en una despensa que emite partculas . Como consecuencia de la interaccin de estas partculas de alta energa con el gas portador (nitrgeno o argn) se genera una cantidad muy alta de electrones. Estos electrones se dirigen al electrodo colector dando lugar a una corriente uniforme o corriente fundamental. Al llegar al detector las molculas que muestran anidad por los electrones, atrapan a stos provocando una disminucin de la corriente. La seal basada en este descenso es la que da lugar al cromatograma (Figura 1.16 en la pgina siguiente). El detector de captura electrnica es muy sensible pero a la vez no muy estable. Su mayor ventaja es la de su selectividad. De esta forma, mientras es muy sensible respecto a molculas que contienen halgenos, carbonilos conjugados, nitrilos y/o grupos nitro asi como con respecto a compuestos organometlicos se trata de un detector que apenas responde en el caso de hidrocarburos, alcoholes y cetonas. De esta forma se trata de un detector muy utilizado en el anlisis de muestras que contienen compuestos halogenados voltiles, PCBs, dioxinas y pesticidas.
9 Electron

Capture Detector.

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1.6. DETECTORES

Figura 1.16: Esquema del denominado detector ECD. El intervalo lineal de este detector es bastante acotado, del orden de 2 a 4 y su ecacia tanto para tiempos cortos como largos es inferior a la del caso del FID.

1.6.4.

Espectrmetro de masas (MS)10

El espectrmetro de masas es el detector ms poderoso utilizado tanto en la cromatografa de gases como en la cromatografa liquida para llevar a cabo un anlisis tanto cualitativo como cuantitativo de los analitos. En la espectrometra de masas, las molculas gaseosas son ionizadas, son aceleradas en un campo elctrico y por ltimo son separadas en funcin de la masa. El proceso natural tiene la suciente energa como para romper las molculas en varios trozos y al grco que representa la abundancia isotpica relativa de cada trozo se le denomina espectro de masas. En el eje X de este espectro de masas se representa la relacin m/z donde m es la masa del in (en unidades de masa atmica -uma-) y z es la carga del in. Como en muchos casos la carga del in equivale a la unidad la relacin m/z se reduce a la masa del in. Al trozo de igual masa al de la molcula original (M+ ) se le denomina in molecular. Como muestran las Figuras 1.17 en la pgina siguiente el espectrmetro de masas se puede separar en cuatro partes: interfase, fuente de ionizacin, zona de separacin y detector. La interfase une la columna capilar y la fuente de ionizacin. Por una parte, la presin de la columna es muy alta y en la fuente de ionizacin lo que es alto es el vaco. En esas condicio10 Mass

Spectrometry.

25

1.6. DETECTORES

Figura 1.17: Esquema general de un detector MS.

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1.6. DETECTORES

nes, las funciones de la interfase son las siguientes: quitar las molculas de gas transportador e introducir las molculas de analito en el espectrmetro de masas. Las molculas de analito que llegan a la fuente de ionizacin son molculas bombardeadas con electrones de alta energa que provienen del lamento (ionizacin por medio del choque de electrones). Normalmente una energa controlada de los electrones de 70 eV suele ser suciente para provocar la ionizacin (M + e M+ + 2 e ) y garantizar la rotura de la molcula inica. Las partes obtenidas son llevadas al espectrmetro de masas para medir su espectro.

Figura 1.18: Esquema de la fuente de ionizacin y proceso de particin de molculas. Otra tcnica de ionizacin que provoca una rotura o particin menor es la ionizacin qumica. En este caso la fuente de ionizacin se llena con metano a una presin cercana a las 100 Pa. Los electrones de alta energa transforman el metano en productos ms reactivos: CH4 + e CH+ + 2 e 4 CH+ + CH4 CH+ + CH3 4 5 El CH+ es un excelente donor de protones y reacciona con el analito que llega a la fuente 5 de ionizacin (M) dando lugar a MH+ . Este ltimo in es el que se obtiene en ms cantidad por medio de la ionizacin qumica. A diferencia de la anterior ionizacin, en esta apenas se producen particiones. Los iones producidos en la fuente de ionizacin deben de llegar repartidos al detector. Con ese objetivo, los espectrmetros de masas se basan en distintos medios. Entre otros, los ms extendidos son el cuadropolo, la trampa de iones11 o el tiempo de vuelo12 . Los tres, de una
11 Ion-Trap 12 Time-Of-Flight

(TOF)

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1.6. DETECTORES

forma u otra, consiguen hacer la distincin entre los trozos o iones y al detector solo llegan aquellos iones que tienen una relacin m/z concreta. Los iones repartidos en la zona de separacin llegan a un detector con forma de embudo. Los iones al chocar con el detector liberan los electrones de la supercie y estos a su vez hacen lo mismo a lo largo de la longitud de la columna. Por medio de este salto de electrones se consigue una amplicacin de la seal en la salida del detector. Representando la seal de todos los iones obtenidos por unidad de tiempo se obtiene el cromatograma. Este cromatograma y los obtenidos en cualquiera de los casos anteriormente explicados son parecidos. Ahora, la diferencia estriba en lo siguiente: en cualquier punto del cromatograma se puede obtener el espectro de masas del compuesto eluido en ese punto (Figura 1.19).

Figura 1.19: Anlisis con el detector MS y ventajas respecto a otros detectores.

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1.6. DETECTORES

En vez de hacer las medidas en todo el intervalo de la masa molecular (en el caso de CG-MS entre 40-650 umas) el instrumento puede ser programado para medir masas concretas o masas simples. A esta forma de trabajar se le denomina motorizacin de iones simples (SIM). De esta forma se obtienen cromatogramas de menor numero de picos y limites de deteccin mejores. Entre las caractersticas ms importantes de los espectros de masas estn las siguientes: es un detector universal, trabajando en la forma SIM presenta limites de deteccin inferiores a los del FID, intervalo lineal del orden de 3-4 y los compuestos pueden ser identicados a partir de sus espectros de masas.

1.6.5.

Otros detectores

El detector de nitrgeno-fsforo o detector de llama alcalina es un detector de ionizacin a la llama transformado. Este detector solamente presenta gran sensibilidad para molculas con fsforo o nitrgeno. En consecuencia, se utilizar mucho para el anlisis de medicamentos, pesticidas y herbicidas. Al poner en contacto los analitos con una bola de vidrio que contiene Rb2 SO4 situada en el extremo del encendedor o mechero se generan iones tal que se puede medir la corriente elctrica de los mismos. Como es obvio, en este caso no se puede utilizar el nitrgeno como gas portador si lo que se quiere es analizar compuestos con nitrgeno. El detector fotomtrico de llama mide la emisin ptica de elementos concretos, entre otros, fsforo, azufre y estao. Al pasar el analito por la llama originada a travs de la mezcla aire-hidrogeno los tomos excitados emiten una luz propia. Estas emisiones pueden ser diferenciadas por medio de un ltro de interferencias de banda estrecha y pueden ser detectados por medio de un tubo multiplicador. En el detector de fotoionizacin se utiliza una fuente ultravioleta a vaco para ionizar compuestos aromticos e insaturados. El detector cuantica los electrones liberados por estos compuestos. Los compuestos saturados, en cambio, casi no dan seal. El detector de quimiluminiscecia de azufre mezcla con aire los productos que se obtienen del detector de ionizacin de llama, entre otros el monxido de azufre que resulta de la oxidacin del azufre. En consecuencia, se origina un monxido de azufre excitado que emite una radiaccin ultravioleta. El detector quimiluminiscente de nitrgeno realiza una labor parecida. El analito es quemado a una temperatura de 1800o C y se genera NO. Este ultimo en reaccin con el ozono da lugar a un producto quimiluminiscente. La sensibilidad de ambos detectores respecto al S y al N es 107 veces mas grande que la referida al C.

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1.7. DESARROLLO DE MTODOS EN CROMATOGRAFA DE GASES

En el detector de emisin atmica (AED13 ) los analitos son conducidos hasta el plasma de helio generado por microondas. Todos los elementos de la tabla peridica llevan a cabo su emisin a un valor de longitud de onda propio y cada emisin puede ser comparada con el fotodiodo policromado puesto en la.

1.7.

Desarrollo de mtodos en cromatografa de gases

A la hora de analizar muestras por medio de cromatografa de gases hay que poner una serie de mtodos en marcha y los caminos adecuados a seguir pueden ser distintos. En este apartado solo se van a mencionar algunas normas. A la hora de tomar decisiones se har en el siguiente orden: 1. Objetivo del anlisis. 2. Tratamiento de la muestra 3. Detector 4. Columna 5. Inyeccin
Objetivo del anlisis

Para conocer el objetivo del anlisis hay que responder a varias preguntas: Que se busca a travs de ese anlisis? Se necesita la distincin de todos los compuestos de la muestra o solamente se quiere la resolucin de parte del cromatograma? Se puede perder resolucin con el n de que el anlisis sea mas rpido? Se quiere llevar el anlisis cuantitativo de un solo compuesto o de varios? Se necesita de gran precisin? La concentracin de los analitos es suciente o se necesitan tcnicas especiales (preconcentracin y detectores muy sensibles) para el anlisis de compuestos que aparecen a nivel de trazas? En funcin de las respuestas a estas preguntas se considerarn tambin distintas variables.
13 Atomic

Emission Detector.

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1.7. DESARROLLO DE MTODOS EN CROMATOGRAFA DE GASES

Tratamiento de la muestra

Para tener un xito en el anlisis de muestras complejas en una cromatografa de gases es necesario llevar a cabo una limpieza de las mismas antes de inyectarlas a la columna. En el apartado anterior se han mencionado la microextraccin, el espacio de cabeza, la purga y trampa y/o la desorcin trmica como tcnicas para separar algunos compuestos voltiles contenidos en algunas muestras de sus respectivas matrices. Cuando los compuestos no son tan voltiles existen otras posibilidades para separar estos compuestos de sus matrices: extraccin liquida, extraccin por medio de una fase slida, extraccin por medio de un uido supercrtico y la extraccin por medio de un uido a presin (Ver el Captulo 11). Si las muestras no fuesen limpias el cromatograma dara muchos picos sin separar y los compuestos no voltiles acabaran con la columna (que no es muy barata).
Eleccin del detector

A la hora de elegir el detector hay que tener muy claro que si lo que se quiere es determinar todos los compuestos de la muestra o solamente se quiere un detector sensible respecto a un solo elemento o grupo de elementos. En el caso de columnas capilares, el detector que mayor informacin aporta es el espectrmetro de masas. A pesar de que el detector de ionizacin a la llama el ms extendido hay que tener en cuenta que no es tan sensible como el de captura electrnica, el de nitrgeno-fsforo o el detector quimiluminiscente. El detector de conductividad trmica es el mtodo ms general para detectar cualquier tipo de compuestos pero no es muy sensible para el caso de columnas capilares de alta resolucin (Figura 1.20 en la pgina siguiente). Los detectores vlidos para anlisis a nivel de trazas solo son sensibles con algunos analitos. As por ejemplo, el de captura electrnica solo es sensible para compuestos con grupos halgeno, carbonilos conjugados, nitrilos y nitrocompuestos. El detector de fotoionizacin es especco para compuestos aromticos e insaturados. En cuanto al detector de nitrgeno-fsforo si bien es sensible para molculas que contengan estos dos tomos tambin es sensible a los hidrocarburos. En cuanto a la quimiluminiscencia de azufre y nitrgeno, como es lgico, solo sern sensibles a compuestos que posean estos dos tomos en su estructura. El detector fotomtrico de llama es especico para elementos como el Pb, P, Sn y S. Este tipo de detectores especcos se pueden usar para facilitar el cromatograma puesto que no emiten seal para todos los compuestos eluidos. Si al identicar los analitos es importante la informacin de tipo cualitativo se pueden considerar el espectrmetro de masas o los detectores de infrarrojos. Como ocurre en el caso de los detec-

31

1.7. DESARROLLO DE MTODOS EN CROMATOGRAFA DE GASES

Figura 1.20: Intervalos lineales y limites de deteccin de los detectores en GC . tores de conductividad trmica, los detectores de infrarrojos no presentan suciente sensibilidad con respecto a columnas capilares.

Eleccin de la columna

A la hora de elegir la columna hay que tener en cuenta la naturaleza, el espesor, la longitud y el dimetro de la fase estacionaria. Las fases estacionarias apolares son las ms utilizadas. Las fases estacionarias de polaridad media separan ms compuestos que las apolares. En el caso de compuestos polares, en cambio, son necesarias columnas polares. En la Tabla 1.3 en la pgina siguiente aparecen los dimetros y espesores de las fases estacionarias ms recomendables. Par obtener una resolucin mxima son necesarias columnas estrechas de pequeo espesor. Esta combinacin disminuye la transferencia de masa tanto de la fase estacionaria como de la fase mvil (variable C en la ecuacin de Van Deemter) disminuyendo la altura de los platos tericos. Las columnas estrechas de pequeo espesor son adecuadas para el caso de compuestos de alto punto de ebullicin que quedan retenidos en columnas gruesas. En este tipo de columnas, en cambio, la cantidad de muestra que se puede introducir es pequea y necesitan detectores muy sensibles. Adems retienen muy poco a los compuestos de bajo punto de ebullicin. Las columnas estrechas de gran espesor consiguen un equilibrio entre la cantidad de muestra

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Descripcin Columnas estrechas de gran espesor 0.25-0.32 mm 1-2 m 0.53 mm 2-5 m

Dimetro interno Espesor de la capa Ventajas

Capacidad buena Retencin de compuestos voltiles Adecuadas para espectrometria de masas

Columnas estrechas de pequeo espesor 0.10-0.32 mm 0.2 m

Columnas achas de gran espesor

Cuadro 1.3: Comparacin de las columnas usadas en cromatografa de gases.

1.7. DESARROLLO DE MTODOS EN CROMATOGRAFA DE GASES

33

Capacidad muy buena Adecuada para detectores de conductividad trmica e ionizacin de llama

Desventajas

Alta resolucin Anlisis de trazas Separacin rpida Bajas temperaturas Elucin de compuestos de alta temperatura de ebullicin Baja capacidad Se necesitan detectores de alta sensibilidad Resolucin intermedia tR altos para compuestos de alta temperatura de ebullicin

Resolucin baja tR altos para compuestos de alta temperatura de ebullicin

1.7. DESARROLLO DE MTODOS EN CROMATOGRAFA DE GASES

a introducir y la resolucin. Se puede usar con la mayora de los compuestos voltiles y con la mayora de los detectores (con las excepciones, en general , de los detectores de infrarrojos y conductividad trmica). Los tiempos de retencin son menores que en el caso de columnas de espesor pequeo. Cuando se usan detectores de conductividad trmica o infrarrojos son ms adecuados las columnas anchas de gran espesor. Este tipo de columnas aceptan gran cantidad de muestra y pueden separar compuestos muy voltiles pero presentan los problemas de una baja resolucin y tiempos de retencin muy altos. Otra posibilidad para aumentar la resolucin es la de aumentar la longitud de la columna pero as tambin se alargarn los tiempos de retencin. Puesto que cambiando la fase estacionaria cambia por completo la retencin de los compuestos, es posible separar los compuestos que se quieren distinguir.

Inyeccin

En el ultimo paso se suele elegir la tcnica de inyeccin. Cuando la muestra est muy concentrada, la mejor solucin suele ser la distribucin o reparto. No es muy buena para anlisis cuantitativos y para compuestos voltiles y de baja estabilidad trmica pueden producirse prdidas. Por otro lado, poseen buena resolucin y puede distinguir mezclas complejas sobre todo en el caso de introducir material adsorbente en el tubo de vidrio del inyector. En el caso de disoluciones diluidas es necesaria la inyeccin sin reparto. Pueden tener lugar prdidas en el caso de compuestos no tan voltiles pero es ms adecuada para compuestos que presentan inestabilidad trmica puesto que el calentamiento no es tan agresivo. En este tipo de inyeccin, puesto que es necesaria la utilizacin de la captura por medio del disolvente o por enfriamiento, no se puede trabajar de modo isotermo. Para muestras de concentracin inferior a 100 mg.l1 se utilizan columnas que tienen una pelcula de un grosor inferior a 1 m. Para concentraciones entre 100 y 1000 mg.l1 la columnas necesitarn espesores superiores a 1 m. Para llevar a cabo anlisis cuantitativos y para compuestos muy sensibles al calor la tcnica mas adecuada es la inyeccin en columna. Se trata de una tcnica de baja resolucin y no se pueden utilizar columnas que tengan un dimetro inferior a 0.25 mm.

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