PRCTICA #15 TCNICA ELISA APLICAR TCNICA INMUNOHEMATOLGICAS ALUMNO: Alfredo Mena Luna GRADO/GRUPO: 4A NLISTA: 30

I.-INTRODUCCIN Esta prueba enzimtica se basa en el uso de antgenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunolgica como enzimtica. Al estar uno de los componentes (antgeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoabsorbente), la reaccin antgeno anticuerpo quedar inmovilizada y, por lo tanto, ser fcilmente revelada mediante la adcin de un substracto especfico que al actuar, la enzima producir un color observable a simple vista o acuantificable mediante el uso de un espectrofotmetro o un colormetro. Existen varios tipos de ELISA: -Anticuerpos marcados *ELISA DIRECTO *ELISA INDIRECTO *ELISA SANDWICH -Antgeno marcado *ELISA COMPETITIVO II.-OBJETIVO Realizar la tcnica ELISA adecuadamente, y proporcionar una correcta interpretacin de resultados III.-MATERIALES -Kit ELISA -De acuerdo al Kit se solicitarn los materiales necesarios IV.-MATERIAL BIOLGICO -Suero problema V.-PROCEDIMIENTO Se seguirn instrucciones de acuerdo al instructivo del Kit. ELISA directo: Consta de las siguientes etapas: -Fijacin del soporte insoluble (tapizado) de antgenos especficos lavado para eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados. -Adicin de anticuerpos (conjugados) con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antgenos, el complejos quedar solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. -Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede para la reaccin si se desea.

-Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado. ELISA indirecto. Consta de las siguientes etapas -Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos para los anticuerpos objeto de estudio. Lavados para eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados. -Adicin del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarn especficamente con los antgenos fijados al soporte. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no se hayan adicionado. -Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reccionan con los anticuerpos especficos aadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los antgenos. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. -Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea. -La lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado. VI.-REPORTE DE RESULTADOS E INTERPRETACIN

VII.-ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS 1.-Realizar dibujos representativos de cada uno de los pasos, utilizando colores diferentes y la representacin de: Antgeno, anticuerpo, enzima y sustrato.

EVALUACIN 1.-Describe el fundamento de la tcnica ELISA

2.-Menciona enfermedades causadas por virus, bacterias, hongos y protozoarios que se puedan detectar por medio de esta tcnica.