Universidad Nacional Autnoma de Mxico Facultad de Estudios Superiores Cuautitln Campo 1

Carrera: Qumica Asignatura: Bioqumica estructural Grupo: 2601 Reporte de la prctica No. 9 cidos nucleicos Equipo No. 2 Chvez Ramos Kenia Len Len Donaldo Gamaliel Fecha de realizacin de la prctica: 2 de Mayo de 2012 Fecha de entrega del reporte: 9 de Mayo de 2012 Asesoras: Q. Karla Hernndez Prez QFB Jessica Filisola Villaseor

INTRODUCCIN. Los cidos nucleicos son, al igual que los pptidos, polmeros lineales con diferentes sustituyentes distribuidos a lo largo del esqueleto. El esqueleto de los cidos nucleicos est formado por molculas de azcares pentacarbonadas unidos entre s formando steres con cido fosfrico. Los sustituyentes estn formados por varios compuestos heterocclicos nitrogenados denominados las bases de los cidos nucleicos, estando tambin ligadas a las molculas de azcar. La unidad repetitiva de un cido nucleico es as la combinacin de una base nitrogenada, de un azcar y cido fosfrico, denominando a este conjunto nucletido, el cido nucleico es de hecho un polinucletido. La combinacin base-azcar sin el cido fosfrico, es un nuclesido, de forma que un nucletido puede considerarse como un nuclesido-fosfato. Las bases nitrogenadas que pueden estar en un cido nucleico son la adenina, guanina, timina, y citosina (para ADN) y adenina, guanina timina y uracilo (ARN). Los cidos nucleicos almacenan la informacin gentica y son la principal causa de la capacidad de los organismos para reproducirse y transmitir su informacin gentica; estos son el ADN (cido desoxirribonucleico) y ARN (cido ribonucleico). La mayor parte de la estructura y la bioqumica de las clulas se debe a sus protenas, el tipo de protenas es determinado por el ADN, la informacin pasa del ADN hacia el ARN mediante un proceso llamado transcripcin, enseguida la secuencia de ARN se traduce a una secuencia de protena en los ribosomas, proceso que se conoce como traduccin proteica. La estructura principal del ADN es una molcula formada por dos hebras de polinucletidos de forma helicoidal que permite que cada base ligue con su complementaria en la otra hebra. La cadena posee una direccin, ya que cada grupo fosfato est unido a un azcar en la posicin 5 (el quinto carbono en el anillo de azcar) y al otro azcar en la posicin 3 (el tercer carbono en el anillo del azcar). As la cadena tiene un extremo 5 y 3.

Figura 1. Estructura del ADN Dona aqu puedes anexar los tipos de estructura que tiene el ADN que tienes en tu manual es que ya ves que yo no lo tengo xfis. El ARN es el principal material gentico que conforma a los virus, y como ya se mencion es indispensable en la produccin de protenas. Existen 3 tipos de ARN llamados de transferencia, ribosmico y mensajero.

Las diferencias entre el ARN y ADN son muy diversas pero las principales son: ADN 2 cadenas Azcar: desoxirribosa Los tipos de bases: contiene timina (T) ARN 1 cadena Ribosa Contiene Uracilo (U)

OBJETIVO: Extraer el ADN de clulas de un tejido vegetal (cebolla y kiwi) por medio de la aplicacin de un mtodo sencillo con el fin de comprobar que todos los seres vivos contienen esta molcula en donde se almacena su cdigo gentico.

DIAGRAMA ECOLGICO: METODOLOGIA: La indicada en el manual de Bioqumica, correspondiente a la prctica No. 9, pginas 74 y 75. OBERVACIONES Y RESULTADOS:
Extraccin del ADN de la cebolla. Se cort la zona central de la cebolla en trozos pequeos, posteriormente se prepar en un vaso de precipitados de 100 mL una mezcla de 3 cucharaditas de detergente lavavajillas lquido y una cucharadita de sal comn (NaCl) agregando agua destilada hasta llenar el vaso, dicha mezcla adquiri una coloracin verde debido a que ste era el color del detergente utilizado.

Figura 2. Trozos de cebolla colocados en solucin preparada. Se adicionaron los trozos de cebolla a la mezcla y con una varilla se agit lentamente teniendo cuidado de no formar espuma, posteriormente se transfiri la mezcla a un vaso de precipitados de 500 mL y con ayuda de un procesador de comida se realiz un homogeneizado.

Figura 3. Mezcla sometida a triturador de comida Enseguida se observ la formacin de gran cantidad de espuma, por lo que para poder filtrar correctamente con ayuda de la cuchar se retir la mayor cantidad de espuma posible; se filtr con gasa lo cual se tard algunos minutos.

Figura 4. Filtrado de la mezcla preparada Una vez filtrado se aadieron 3 cucharaditas de jugo de pia, enseguida se adicion lentamente por la pared del vaso etanol lo ms fro posible y se apreci en la interfase la formacin de pequeas hebras que corresponderan al ADN, sin embargo al ver que no se apreciaba claramente, se procedi a aadir 2 cucharaditas ms de jugo de papaya, observando inmediatamente la formacin de ms hebras de color naranja.

Figura 5. Formacin de hebras de ADN

Al cabo de unos minutos dichas hebras subieron hasta la parte alta del vaso donde fue posible extraerlas con ayuda de un palillo donde se observ que tenan una estructura gelatinosa como una mucosa.

Figura 6. ADN extrado Extraccin del ADN del Kiwi: Se pel el kiwi, se cort en trozos pequeos y con ayuda de un tenedor se hizo un pur lo ms fino posible, posteriormente se pesaron 30g que se colocaron en un vaso de precipitados de 100 mL.

Figura 7. Muestra de kiwi Se prepar una mezcla con 2 g de sal NaCl, 90 mL de agua y 10 mL de detergente lquido, la cual se agito muy suavemente sin formacin de espuma, nuevamente presento una coloracin verde que corresponda al color del detergente utilizado. Dicha mezcla se verti al vaso con kiwi de tal manera que el volumen fuera el doble que el que se tena inicialmente de pur fino.

Figura 8. Mezcla de kiwi con solucin de extraccin de ADN Dicho vaso se coloc en un bao de agua a aproximadamente 80C dona no s si el bao estaba a esta temperatura, sino es as corrgele xfas por 15 min. Se dej enfriar y se procedi a filtrar con papel filtro, posteriormente se colocaron 5 mL del filtrado en cada uno de 3 tubos de ensayo y con mucho cuidado se agregaron 10 mL de etanol fro resbalando por las paredes. Enseguida se apreci la aparicin de hebras color verde claro, que corresponden al ADN, en la interfase del tubo; al cabo de unos minutos dichas hebras comenzaron a ascender por el tubo.

Figura 9. Fibras de ADn formadas en la interfase

DISCUSIN DE RESULTADOS: Para poder lograr la extraccin del ADN de la cebolla, primero fue necesario romper la pared celular y la membrana plasmtica de esta manera liberamos el ncleo de la clula, posteriormente de la misma manera se rompi la membrana nuclear dejando entonces libre al ADN. Esto se logr gracias a la solucin realizada con la mezcla de detergente lavavajillas y NaCl y al utilizar el procesador de alimentos, es decir al realizar el homogeneizado. De tal manera que el detergente el cual contiene al tensoactivo inico lauril sulfato de sodio ayuda a remover los lpidos y protenas que constituyen las membranas que rodean la clula y el ncleo, puesto que la membrana de las clulas contiene dos capas de molculas de lpidos con protenas atravesndolas.

Figura10. Estructura de la membrana celular y nuclear

Como se sabe la estructura de las molculas del tensoactivo y los lpidos contienen una cabeza polar y una cola no polar, de esta manera cuando el detergente entr en contacto con los lpidos se organizaron formando una esfera con sus cabezas polares orientadas hacia el agua y sus colas hacia adentro pues stas son hidrfobas; algo similar ocurre con las protenas pues al haber una desorganizacin la protena sale de la membrana y es atrapada por la parte no polar (hidrofbica) ya sea de las protenas o bien del lauril sulfato de sodio. En pocas palabras el uso del detergente captur a los lpidos y protenas que forman la membrana celular y nuclear ayudando a la liberacin del ADN.

Figura 11. Liberacin del ADN por efecto del detergente Se utiliz jugo de pia y papaya ya que contienen una enzima, bromelina y papana respectivamente las cuales contribuyeron a eliminar a las protenas que pudieran contaminar el ADN. De igual manera el empleo de sal NaCl ayuda a evitar la unin de las protenas con el ADN. El ADN entonces se encuentra en solucin puesto que es soluble en agua junto con todo el contenido de la clula, para lograr aislarlo y apreciarlo fue necesario precipitarlo, por tal motivo se adicion el alcohol fro, ya que cuando el ADN entr en contacto con el alcohol se desenrollo y por tanto precipit en la interfase formada entre el agua y el alcohol, as por tanto el ADN pudo ser separado de los dems componentes celulares los cuales permanecieron en solucin acuosa. Para el caso de de la extraccin del ADN del kiwi ocurri un procedimiento muy parecido, pues al hacer pur al kiwi y adicionarle la mezcla de detergente, NaCl y agua se propici la lisis de las membranas celular y nuclear, donde el detergente acto de la misma manera que se explic para el caso de la cebolla. No fue necesario el uso del procesador de alimentos puesto que el kiwi es un tejido ms blando que la cebolla. Sin embargo no se adicion ninguna enzima (bromelina o papana) en su lugar se calent durante 15 min a una temperatura aproximada a 80C, igual si no es esta temperatura cmbiale xfas el efecto de la temperatura ayud a suavizar a los lpidos que se encuentran en las membranas de esta manera ocasionando un desorden y por tanto contribuy de igual manera al rompimiento de las membranas para liberar al ADN. De igual manera la

temperatura ayud a desnaturalizar a las enzimas desoxirribonucleasas (ADNasas) las cuales si se encuentran presenten actan sobre el ADN degradndolo en pedazos muy pequeos que sera imposible observarlos. De esta manera se obtuvo el homogeneizado donde el ADN de igual manera se encontraba disuelto en solucin, una vez ms se adicion alcohol fro con el propsito de aislarlo precipitndolo en la interfase etanol-agua. De esta manera podemos suponer que efectivamente se extrajo al ADN de las dos muestras, puesto que todo el tratamiento que se realiz indica que lo ocurrido fue efectivamente la extraccin del ADN, no obstante no podemos asegurarlo ya que no se realizaron pruebas de identificacin, una de ellas hubiera podido ser la reaccin con difenilamina, ya que cuando se trata al ADN en medio cido con difenilamina se forma un compuesto de color azul. sta es una reacciona general para las 2-desoxipentosas, como lo es la 2-desoxirribosa presente en la estructura del ADN. El fundamento de la reaccin es el siguiente: en solucin cida la cadena lineal de una desoxipentosa se convierte a la forma -hidroxilevulinoaldehdo el cual es el que reacciona con difenilamina dando la coloracin azul cuando la reaccin es positiva; como ya se mencion en el caso del ADN la que reacciona es la desoxirribosa. Como se sabe el ADN se encuentra presente en el ncleo de todas las clulas de los seres vivos en forma de genes, incluyendo tambin a los vegetales como el kiwi y la cebolla empleados en la prctica, por lo tanto, la extraccin hubiera podido lograrse empleando otras frutas como por ejemplo mango, pltano o fresa, puesto que siguiendo el procedimiento habra de esperarse lograr la extraccin del ADN. CONCLUSIONES Se logr la extraccin del ADN de tejidos vegetales, es decir, tanto de la cebolla como del kiwi, por medio de la aplicacin de un mtodo muy sencillo que nos ayud a realizar una lisis de la membrana celular y nuclear para liberar al ADN del ncleo de la clula el cual se encontraba disuelto en solucin acuosa, para posteriormente separarlo en forma de precipitado con un poco de alcohol etlico. Sin embargo no se confirm que efectivamente lo obtenido correspondiera al ADN, puesto que no se realiz ninguna prueba de identificacin como pudo ser someter al ADN a la reaccin del difenilamina en medio cido, la cual como ya se explic hubiera dado una coloracin azul si efectivamente se hubiera extrado el ADN. Por tanto slo se puede suponer que de acuerdo a la tcnica seguida efectivamente se extrajo al ADN. Asimismo comprendimos la importancia del ADN ya que ste se encuentra presente en todos los seres vivos, especficamente en el ncleo de la clula en forma de gen, incluyendo todos los vegetales almacenando informacin gentica.

REFERENCIAS McGilvery, Robert W. (1997). Conceptos bioqumicos. Primera edicin, Editorial Revert, Barcelona. Pgs. Consultadas 25-17. Dona a ver si puedes poner alguna otra biblio de algn libro que tengas, es que ahora si todo lo saqu de inter Estructura del ADN. [en lnea] Recuperado www.korion.com.ar/archivos/duplicacin.pdf el 5 de mayo de 2012, de

cidos nucleicos. [en lnea]. Recuperado el 5 de Mayo http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp08.pdf Extraccin de ADN. [en lnea]. Recuperado el 5 de mayo http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/wheatgerm/background.html

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