UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL LISANDRO ALVARADO DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FUNCIONALES SECCIN DE FISIOLOGA

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE FISIOLOGA I

4TO SEMESTRE PROGRAMA DE MEDICINA

BARQUISIMETO, ENERO 2010

UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL LISANDRO ALVARADO DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FUNCIONALES SECCIN DE FISIOLOGA

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE FISIOLOGA I

4TO SEMESTRE PROGRAMA DE MEDICINA
Profesor Miguel Skirzewski Profesor Gregorio Tiskow Compiladores-Editores I Edicin Derechos Reservados 2010 ISBN: pendiente BARQUISIMETO, VENEZUELA
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CONTENIDO
Pgina .- Presentacin 4 .- Dedicatoria.. 5

.- Lineamientos bsicos de trabajo en el laboratorio 6 .- Prctica No. 1: Estudio de las Propiedades Biofsicas del Eritrocito .. .- Prctica No. 2: Naturaleza Biofsica del Potencial de Reposo y del Potencial de Accin Celular .- Prctica No. 3: Estudio de los Reflejos y la Sensibilidad Somatica . 20 43 8

.-Prctica No. 4: Sensibilidad Especial: La Visin

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.-Prctica No. 5: Bases Elctricas de la Actividad Cerebral: Electroencefalografa 61

.- Prctica No. 6: Determinacin de la Sedimentacin Globular, Hematocrito y Valoracin de la Hemostasia 74

.- Anexo No. 1: Toma de una Muestra de Sangre Venosa .

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.- Anexo No. 2: El Uso de los Programas Simuladores en la Fisiologa Mdica

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.- Anexo No. 3: Enlaces Electrnicos de Inters ..

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Presentacin
Las Ciencias de la Salud, y en especial la Fisiologa en general, son unas ciencias dinmicas, en
constante evolucin y progreso. Con el avance de las tcnicas de investigacin, pruebas clsicas de biofsica y fisiologa, modelos dinmicos, programas simuladores y otros artificios de los que se valen los fisilogos para estudiar el funcionamiento del cuerpo humano, se ha podido transmitir a los estudiantes del rea todo el cmulo de conocimientos alcanzados a lo largo de dcadas de anlisis y experimentacin, para una mejor comprensin de nuestro organismo. Este Manual, y en consonancia con la Visin y Misin de nuestra Universidad, y en particular de nuestro Decanato de Ciencias de la Salud y la Seccin de Fisiologa, pretende dar un impulso integral al acto educativo, formando profesionales de la salud con valores cientficos, tecnolgicos y humansticos, con calidad profesional como talento humano que egresa con alta pertinencia social, para tratar de salvar vidas humanas. El presente Manual de Prcticas de Fisiologa Humana para estudiantes de Fisiologa I, Programa de Medicina, representa un esfuerzo contundente para consolidar en el mismo, un grupo de actividades seleccionadas de laboratorio que pretende ensear el trabajo en equipo, con una metodologa cientfica apropiada, con tcnicas verificadas que permiten ensear el funcionamiento normal de distintos grupos de clulas, tejidos y rganos que integran al organismo humano como sistema integral. Cada prctica diseada incluye, una breve introduccin al tema, las instrucciones generales para el buen desarrollo de la misma, las actividades a ejecutar en el laboratorio y una gua de auto-evaluacin que permita al estudiante valorar lo aprendido en la respectiva experiencia. Su publicacin incluye dos versiones; el formato fsico (Guin) y el electrnico (e-libro y CD-ROM)

Los Editores-Compiladores

Propsitos-Objetivos
El presente Manual permitir la estudiante orientarlo en su proceso de aprendizaje. Uno de los objetivos fundamentales del Programa de Fisiologa y de ste guin, es realizar e interpretar algunas pruebas que permitan al estudiante, evaluar el funcionamiento de los sistemas orgnicos humanos. Aparte de ello, las prcticas buscan aplicar los conocimientos impartidos y adquiridos en la parte terica de la presente asignatura. Mediante la estrategia de observacin el estudiante podr afianzar sus aprendizajes, evaluar sus variables y analizar resultados obtenidos. Las prcticas permiten tambin la promocin del trabajo en equipo, la actitud participativa de los mismos y su actitud crtica hacia la investigacin.

Objetivos: .-Presentar a los estudiantes del cuarto semestre de medicina, una gua de desarrollo para cada sesin de prctica en el laboratorio docente. .-Plantear problemas prcticos que se deben resolver integrando los conocimientos de fisiologa .-Buscar que el estudiante desarrolle un pensamiento estructurado por la fisiologa, integrando la prctica con la teora. .-Permitir observar los diferentes fenmenos fisiolgicos y su debida interpretacin cuando stos varan por distintos estmulos internos o externos.

Dedicatoria
El presente Manual de Laboratorio de Actividades Prcticas de Fisiologa I, est dedicado a todos los Profesores de la Seccin de Fisiologa que en su momento planificaron las actividades docentes, tanto tericas como prcticas; a aquellos docentes que hoy da no nos acompaan fsicamente o, ya se encuentran disfrutando de su justa etapa de jubilacin, y en especial al Maestro de Maestros, al egregio Dr. Luis Batalla Sotelo quien ha dedicado su vida profesional a ensear fisiologa, a estudiantes de pregrado y de postgrado, a proyectar valores humansticos y ticos, gua espiritual y tutor de muchos de los docentes que hoy orgullosamente formamos parte de la Seccin de Fisiologa del Decanato de Ciencias de la Salud de la Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado

Lineamientos Bsicos de Trabajo en el Laboratorio

Estimad@ estudiante, para Ud. asistir a las actividades prcticas debe: Usar bata blanca de laboratorio: Normas de Higiene y Seguridad Industrial. Asistir con zapatos cerrados: Normas de Higiene y Seguridad Industrial. Leer previamente y con detalle el guin correspondiente a cada actividad. Repasar sus conocimientos tericos facilitados por el docente instructor y consultar su texto gua. Seguir debidamente las instrucciones que se encuentran al comienzo de cada actividad, y las que se indiquen en el laboratorio. No se permitir la entrada al laboratorio docente a aquellos estudiantes que lleguen con 15 minutos de retraso. Gracias por tu colaboracin en este sentido: responsabilidad y tica primero en el trabajo y estudio. Cada grupo de prctica (A y B) ser sub-dividido en 2 sub-grupos para lograr el mximo aprovechamiento del acto educativo. Cada sub-grupo tiene asignado un docente de laboratorio y un tcnico. El docente ser responsable de impartir y evaluar las actividades acadmicas realizadas dentro del laboratorio por los alumnos de dicho sub-grupo, mediante su participacin y su desempeo en todas y cada una de las diferentes prcticas. No habr cambios de alumnos(as) de grupo o entre sub-grupos de laboratorio, que no sean realizados mediante el trmite administrativo correspondiente ante la Secretara de Seccin y en el perodo estipulado para tal fin.

PRCTICA N

ESTUDIO DE LAS PROPIEDADES BIOFSICAS DEL ERITROCITO

PRESENTACIN El presente material constituye la primera actividad prctica de la Unidad I de la asignatura Fisiologa I del Programa de Medicina, dirigido a estudiantes de 4to. semestre de la carrera de Medicina. Por medio de esta actividad se pretende que el estudiante desarrolle un sentido de aplicabilidad de los conceptos biofsicos bsicos de smosis y turgencia celular mediante la utilizacin de clulas sanguneas (eritrocitos) colocadas en distintas clases de soluciones salinas con propiedades osmticas diferentes entre s.

INTRODUCCIN El eritrocito o glbulo rojo es una clula fcil de obtener a travs de un muestreo sanguneo, y que por sus caractersticas fsico-qumicas, es ideal para la observacin de fenmenos biofsicos que afecten su forma y tamao. La ruptura de la membrana celular produce la salida del contenido de hemoglobina, por lo que se puede medir la ruptura de los eritrocitos midiendo y cuantificando la cantidad de hemoglobina liberada al medio mediante tcnicas espectrofotomtricas. Es por estas condiciones que desde hace mucho tiempo se ha empleado el eritrocito como un osmmetro perfecto, al estimar las propiedades de una solucin cualquiera. La fragilidad osmtica del eritrocito depende de caractersticas como la edad del eritrocito, su tamao, forma y las dems condiciones propias de la estructura interna de la clula. Como se emplea una poblacin de millones de clulas, la fragilidad osmtica sigue la distribucin de una curva normal.
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Los eritrocitos son clulas sanguneas anucleadas que miden aproximadamente 8 m de dimetro (as, unos 3000 eritrocitos en fila ocupan 2,5 cm de longitud) y tienen forma de disco bicncavo. La membrana del eritrocito en un complejo de lpidos y protenas (bicapa lipdica), el cual es importante para mantener la elasticidad celular y la permeabilidad selectiva.

Los eritrocitos pueden deformarse, sin llegar a lesionarse para poder pasar por los ms estrechos capilares. Este grado de deformidad o elasticidad influye en la rapidez del flujo sanguneo por la micro-circulacin. Los eritrocitos son los elementos celulares ms abundantes de la sangre. En el varn adulto existen alrededor de 5.500.000 por cc de sangre, y en las mujeres unos 4.800.000 por cc.

Un eritrocito contiene 200 a 300 millones de molculas de Hemoglobina (Hb). La Hb consiste en la combinacin de una molcula proteica de globina, con cuatro molculas de un compuesto pigmentado llamado grupo hemo. Cada molcula de hemo posee un tomo de hierro en su centro (Fe2+), por lo que, una molcula de Hb puede transportar hasta cuatro molculas de oxgeno y formar oxihemoglobina por medio de una reaccin reversible. La Hb tambin puede combinarse con dixido de carbono para formar carboxi-hemoglobina, tambin por una reaccin reversible. El CO2 se une a la porcin globina de la molcula de Hb. En un varn adulto normal, 100 cc de sangre contienen 14 a 16 g de Hb; la sangre de una mujer contiene de 12 a 14 g de Hb por 100 cc.

El proceso de formacin de eritrocitos se denomina eritropoyesis. La vida promedio de un eritrocito circulante en el torrente circulatorio es de unos 120 das. Se fragmentan en los capilares y son fagocitados por las clulas retculo-endoteliales de la cubierta de los vasos sanguneos en hgado, bazo y mdula sea.
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En condiciones fisiolgicas, los eritrocitos se encuentran en equilibrio osmtico con la sangre que los contiene (valor de osmolaridad del plasma sanguneo: 290 10 mOsm/L), por lo cual se dice que la sangre es una solucin isosmtica e isotnica. Si la osmolaridad del plasma llega a disminuir significativamente (plasma hipotnico), el agua como lquido, entra al interior celular aumentando su volumen. Si por el contrario, la osmolaridad del plasma se incrementa, este se torna hipertnico y el agua sale del eritrocito ocurriendo una reduccin del volumen celular.

La forma y el volumen de los eritrocitos cambian cuando vara la cantidad de agua contenida en su interior, pudiendo tomar una forma estrellada o irregular al ocurrir prdida de volumen (fenmeno de crenacin) o bien aumentar su volumen hasta adquirir la forma de una esfera. Cuando la clula no puede resistir la carga de agua que recibe, la membrana se rompe (fenmeno de hemlisis) y se libera la hemoglobina la cual puede ser cuantificada por mtodos espectrofotomtricos. La hemlisis es un proceso que ocurre en una poblacin mixta de clulas por lo que no ocurre en un solo punto y a la misma velocidad en todos los casos. Como el efecto final es un tanto difcil de apreciar experimentalmente, debido a que la hemlisis ocurre en forma que se hace asinttica al 100 % (curva aplanada), se prefiere analizar el tiempo de hemlisis al alcanzar el 50%.

1.-OBJETIVOS DE LA PRCTICA: Explicar la Fragilidad Osmtica del Eritrocito (FOE) Explicar la Resistencia Globular del Eritrocito (RGE) Construir a partir de una serie de datos, la curva de Fragilidad Osmtica del Eritrocito. Indicar el 50 % de hemlisis en una curva de Fragilidad Osmtica.

2.-MATERIAL REQUERIDO PARA LA EXPERIENCIA PRCTICA: 37 Tubos de ensayo de vidrio de 75 x 10 mm, 2 inyectadoras de 10 cc, guantes estriles, gradillas, un torniquete, un cronmetro, algodonera, heparina, soluciones de NaCl 1%, Manitol 3,1% y MgCl2 3,46%, pipetas volumtricas, agua destilada, espectrofotmetro digital,
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centrfuga clnica y lpiz graso.

3.-PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL: Para la ejecucin de este procedimiento experimental, un estudiante proceder a extraer sangre de la vena del pliegue del codo de uno de sus compaeros, en cantidad aproximada de 6 cc (Ver Anexo N 1 para conocer el mtodo de extraccin sangunea). Seguidamente se colocar dicha sangre en un tubo con dos gotas de heparina. Se organizarn tres grupos de estudiantes los cuales tendrn cada uno un juego de tubos numerados del 1 al 12, colocados ordenadamente en la gradilla respectiva. Adicionalmente, cada grupo tendr una de las tres soluciones salinas de trabajo que sern NaCl 1%, Manitol 3,1% MgCl2 3,46% (las tres soluciones estn a 145 mM), las cuales sern empleadas para preparar diluciones decrecientes de las mismas en los tubos numerados agregando agua en las proporciones indicadas en la Tabla N 1 para el NaCl, Tabla N 2 para el Manitol y Tabla N 3 para el MgCl2. Seguidamente, agregar a cada tubo dos gotas de sangre heparinizada y mezclar muy suavemente. Adicionalmente se preparar un tubo con 10 ml de agua destilada nicamente, al cual se le agregar dos gotas de la misma muestra de sangre heparinizada. Este tubo ser empleado como referencia de obtencin de un 100 % de hemlisis. Dejar los tubos en reposo por espacio de 30 minutos para que los eritrocitos reaccionen con la solucin. Agitar suavemente de nuevo y centrifugar por 5 minutos a 2000 rpm en centrfuga clnica. En compaa de su preparador docente o del tcnico de laboratorio, proceda a medir la absorbancia en el espectrofotmetro del laboratorio. Para ello, saque los tubos con cuidado de la gradilla y extraiga el sobrenadante con una pipeta Pasteur (TENGA MUCHO CUIDADO DE NO TOCAR
EL BOTON DE ERITROCITOS QUE SE FORMO EN EL FONDO DEL TUBO) y colquelo en la cubeta del

espectrofotmetro destinada para tal fin, y lea el registro que le proporciona el equipo a 540 nm de longitud de onda.

Anote en la Tabla N 4 los valores de absorbancia obtenidas para cada uno de los

sobrenadantes y determine el porcentaje de hemlisis para cada uno de ellos, empleando el tubo control (sangre + agua destilada) como el 100 % de hemlisis.

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TABLA No. 1
Tubo N Volumen de NaCl 1% (ml) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 8,5 7,5 6,5 6.0 5,5 5,0 4,5 4,0 3,5 3,0 2,0 1,0 Volumen de agua (ml) 1,5 2,5 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 8,0 9,0 Concentracin de NaCl (%) Osm/L NaCl PM: 58,4 g/mol

TABLA No. 2
Tubo N Volumen de Manitol
3,1% (ml)

Volumen de agua (ml) 1,5 2,5 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 8,0 9,0

Concentracin de Manitol (%)

Osm/L Manitol
PM: 182,2 g/mol

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

8,5 7,5 6,5 6.0 5,5 5,0 4,5 4,0 3,5 3,0 2,0 1,0

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TABLA No. 3
Tubo N Volumen de MgCl2 3,5% (ml) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 8,5 7,5 6,5 6.0 5,5 5,0 4,5 4,0 3,5 3,0 2,0 1,0 Volumen de agua (ml) 1,5 2,5 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 8,0 9,0 Concentracin de MgCl2 (%) MgCl2 Osm/L
PM: 203,3 g/mol

Clculo de la osmolaridad de cada tubo de ensayo:

Una vez obtenidas las lecturas espectrofotomtricas de cada tubo de ensayo, se puede calcular ahora la osmolaridad de cada uno de ellos. Se ha determinado que una solucin 1 Molar (1 mol/L) de NaCl ejerce una osmolaridad de aproximadamente 2000 mOsm/L (2 Osm/L). Tambin es conocido que el peso molecular del NaCl es de 58,4 g/mol. Entonces:

1 mol/L de NaCl ejerce un efecto osmtico de 2000 mOsm/L (2 Osm/L) y 1 mol de NaCl equivale en masa a su peso molecular en gramos a: 58,4 g de NaCl ejercen un efecto osmtico de 2000 mOsm en un litro de agua y

una solucin de 1 % de NaCl, que es la concentracin de la solucin inicial tendr: 1 g de NaCl en 100 ml de agua; para equiparar este valor de concentracin a osmolaridad, lo expresaremos primeramente a 1000 ml de solucin ya que esa es la unidad en la que se expresa la osmolaridad (OSMOL/LITRO) (en un litro hay 1000 ml):
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1 g NaCl X 58,4 g NaCl 10 g NaCl

100 ml. 1000 ml.

X= 10 g NaCl

ejercen efecto osmtico de 2000 mOsm/L ejercern un efecto osmtico de X (Osm/L)

Resolviendo la operacin se obtiene que: X = 342 mOsm/L (esta es la osmolaridad de la solucin inicial)

Hacer los clculos de la misma manera para cada uno de los tubos con las tres soluciones. Posteriormente discutir con su instructor (a) qu tipo de solucin tiene en cada tubo (isotnica, hipertnica o hipotnica).

Cmo calcular ahora el porcentaje de hemlisis en cada tubo de ensayo:

Recuerde que preparamos un tubo de ensayo marcado como tubo control, y que slo contena agua destilada (solucin muy hipotnica); se le agregaron dos gotas de sangre; pues en ese tubo ocurri, y as lo tomaremos, el 100% de hemlisis. A ese tubo tambin se le hizo lectura del sobrenadante en el espectrofotmetro. Esa lectura origin un valor. Entonces: para calcular el porcentaje de hemlisis en el tubo No.1 de cada solucin salina procederemos as: Si el tubo control representa 100 % hemlisis

Y este tubo control origin una lectura en el espectrofotmetro de XX unidades, reformulamos lo anterior as: Lectura del tubo control Lectura del tubo No. 1 100 % hemlisis ? % hemlisis

Resolviendo la regla de tres, da el valor del porcentaje de hemlisis en el Tubo No. 1. Aplique esta simple regla de tres a cada uno de los tubos de cada solucin salina y hallar el porcentaje de hemlisis en cada uno de ellos.

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TABLA No. 4
Tubo N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
D.O: Densidad Optica o absornacia leda por el espectrofotmetro.

D.O NaCl

% Hemlisis NaCl

D.O Manitol

% Hemlisis Manitol

D.O MgCl2

% Hemlisis MgCl2

Lectura de D.O del Tubo control (agua destilada) = __________________

4.-ELABORACION DE LA CURVA DE FRAGILIDAD OSMTICA:

Utilizando de preferencia una hoja de papel milimetrado, graficar los siguientes

parmetros biofsicos: -Porcentaje (%) de Hemlisis en el eje de las ordenadas (Y) -Porcentaje (%) o concentracin de solucin salina en el eje de las abscisas (X) Recordar que el porcentaje de solucin salina vara del tubo 1 al tubo 12. Proceda a graficar cada valor obtenido.
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Obtenga la Curva de Fragilidad uniendo los puntos graficados. Determine a partir de la curva el tubo o porcentaje de solucin salina, en la cual ocurre o sucede el 50% de hemlisis. Este ser el valor de Fragilidad Osmtica Promedio.

As se debera ver su grafico:

5.-DISCUSION DE LOS RESULTADOS:

Curvas basales en sujetos experimentales:

.-Los parmetros a tener en cuenta para evaluar los resultados son: Forma y desplazamiento de la curva respecto a la curva basal Fragilidad Osmtica Promedio o concentracin de la sal en la que se produce el 50 % de hemlisis. Resistencia Globular Mnima: Concentracin de la sal en la que se inicia la hemlisis. Resistencia Globular Mxima: Concentracin de la sal en la que se produce la hemlisis total (100%)

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.-Tips de inters general: En los sujetos normales se obtiene una curva de fragilidad osmtica tipo sigmoidea simtrica. El extremo inferior de la curva corresponde a la fase l o comienzo de la hemlisis, la porcin media o fase II (fase exponencial) corresponde a la salida de hemoglobina en gran cantidad, y el extremo superior o fase III a la hemlisis total. Un aumento de la fragilidad osmtica del eritrocito desplaza la curva hacia la izquierda, mientras que una disminucin de la fragilidad la desplaza hacia la derecha. Normalmente, se obtiene un 10 % de hemlisis a una concentracin de solucin salina que vara de 0.48% a 0.44% (promedio: 0,45%) mientras que el 90 % del hemlisis se produce a una concentracin que va de 0.40 % a 0.30 % (promedio: 0,35%)1 La fragilidad osmtica de los eritrocitos se incrementa en algunos padecimientos como la esferocitosis congnita, anemia hemoltica adquirida, enfermedad hemoltica del recin nacido debido a la incompatibilidad sangunea ABO; y puede estar disminuida en la talasemia, anemia de clulas falciformes, ictericia y anemia por deficiencia de hierro.

Bibliografa Recomendada 1. Biofsica. Edicin II. 1975. Antonio Frumento 2. Tratado de Fisiologa Mdica. Edicin 11 en espaol. Guyton & Hall. 2006 3. Manual de Fisiologa y Biofsica. Ricardo Montoreano, Vol. 1. 4. Fisiologa Mdica. William Ganong. Edicin 20 en espaol. 2007.

Conclusiones: Una vez finalizada la actividad prctica, proceda a emitir sus conclusiones, haciendo nfasis en la importancia de los hallazgos obtenidos y sus posibles aplicaciones en la prctica mdica.

Tomado de: http://medicina2009-grupoa.blogspot.com/2009/02/manual-de-lab-de-bioquimica.html

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Gua de Auto-evaluacin

1. Defina smosis, y d ejemplos de su rol en el movimiento de lquidos entre compartimientos corporales. 2. Por qu los eritrocitos incrementan su volumen e inclusive son hemolizados, cuando son colocados en una solucin de 0,2 % de cloruro de sodio? 3. Qu es fragilidad osmtica y, cual fue la encontrada por Usted para el eritrocito? 4. Qu ocurrira si para la experiencia prctica de hoy en lugar de NaCl se hubiese utilizado Al2(SO4)3? La curva de fragilidad osmtica se desplazara a la derecha o a la izquierda? Justifique su respuesta. 5. Una solucin salina que es isotnica para eritrocitos es necesariamente isotnica para otro tipo de clulas? 6. Cul ser la presin osmtica ejercida por una solucin de glucosa la cual tiene la misma osmolaridad de una solucin de KCl 0,75 M, tomando en cuenta que ambas soluciones se encuentran a 30C? 7. Diferenciar entre una lista de soluciones, cuya composicin se especifique, las que son isotnicas, hipertnicas o hipotnicas respecto al plasma sanguneo. 8. Dada una serie de valores de porcentaje de hemlisis y de osmolaridad de las soluciones, construir una grfica que permita deducir la fragilidad osmtica del eritrocito e identificar la que muestre la mxima fragilidad globular. 9. Cul ser la osmolaridad plasmtica de una solucin que contiene 110 mg/dl de glucosa? 10. Cul es la osmolaridad de una solucin que contiene 142 mEq/L de Na+, 110 mEq/L de Cly 28 mEq/L de HCO3?

Guin actualizado por el Prof. Miguel Skirzewski. Octubre-2009

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PRCTICA N

NATURALEZA BIOFSICA DEL POTENCIAL DE REPOSO Y DEL POTENCIAL DE ACCIN CELULAR

PRESENTACIN El presente guin constituye la segunda actividad prctica de la Unidad I de la asignatura Fisiologa I del Programa de Medicina. Por medio de esta actividad se pretende que el estudiante comprenda en un sentido amplio e integral, la aplicabilidad de los conceptos biofsicos relacionados con la generacin del potencial de membrana en reposo, y los mecanismos involucrados en el desencadenamiento del potencial de accin celular.

INTRODUCCIN La biofsica es una rama de las ciencias bsicas que integra los principios de la biologa y los principios de la fsica, a modo tal de profundizar en la comprensin de la funcin de la fisiologa celular y la fisiologa de sistemas. Es por esta razn que la biofsica se ha convertido en una herramienta fundamental para el estudiante de fisiologa, dado que a travs de la aplicacin de los principios que ella genera es posible predecir y comprender la funcin del cuerpo humano en trminos matemticos, fsicos, qumicos y biolgicos.

Esta prctica permitir al estudiante de fisiologa humana visualizar de manera prctica los
principios biofsicos que rigen la naturaleza del potencial de reposo celular y el potencial de accin

de clulas excitables del cuerpo humano, tales como neuronas y clulas musculares, a travs del empleo de simuladores fisiolgicos.

A comienzos del siglo XXI absolutamente nadie puede negar que los organismos vivientes que habitan este planeta Tierra, funcionamos con base a fenmenos electromagnticos, y que el mismo es, la causa de una gran diversidad de notables fenmenos
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naturales visibles o no al ojo humano. La electricidad generada dentro de nuestro organismo sirve para el control y operatividad de nervios, msculos y rganos. Esencialmente, todas las funciones y actividades del cuerpo humano involucran el uso de la electricidad de alguna u otra manera. La actividad cerebral y cardaca por ejemplo, es esencialmente elctrica; todas las seales nerviosas desde y hacia el cerebro se basan en flujo de corrientes elctricas. El cerebro, considerado un centro computacional integrador y procesador de seales recibe seales externas e internas y elabora posteriormente una respuesta adecuada. La contraccin muscular como respuesta de salida por ejemplo, tambin est basada en seales elctricas. Toda la informacin es transmitida como seales elctricas a lo largo de las fibras nerviosas. Y qu decir del pensamiento humano: probablemente en pocas dcadas los cientficos tendrn que admitir que su esencia es electricidad pura, al igual que el universo en el cual estamos sumergidos.

Para llevar a cabo y en forma integral sus funciones, el cuerpo humano genera muchas seales elctricas, las cuales son el resultado de la accin electroqumica de diversos tipos celulares, y lo ms importante, estas seales elctricas pueden ser apropiadamente detectadas y registradas. Midiendo estas seales en forma selectiva, se convierten en informacin clnica de primera mano acerca de la funcin de un rgano en particular. Hoy da, con el avance de la fsica, de la bioingeniera, de la informtica, la ciberntica y de los sistemas de informacin, podemos registrar con mucha precisin, seales elctricas provenientes del cerebro, registrados en un electroencefalograma (EEG); del corazn, registrados como un electrocardiograma (ECG); de los msculos esquelticos, el electro-miograma (EMG); de la retina, un electro-retinograma (ERG); de los msculos oculares, un electro-oculograma (EOG); electro-gustometra (EGM), para la exploracin del gusto.

El Potencial de Membrana en Reposo:

En clulas excitables (clulas nerviosas y musculares) la diferencia de potencial mantenida a travs de la membrana celular, en ausencia de cualquier estmulo, se denomina potencial de reposo, y se dice que la clula se halla en reposo.
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Las membranas celulares estn sometidas a una diferencia de potencial elctrico existente entre las superficies interna y externa de las mismas. Esta diferencia de potencial es debida a la presencia de iones (+) y (-) distribuidos entre ambos compartimientos, intra- y extracelular. Se ha calculado que el valor del potencial de membrana en reposo de una clula tipo neurona promedia los -70 mV, o llegar a ser -90 mV en una clula de Purkinje cardaca. Esta diferencia de potencial crea sin duda, un campo elctrico importante entre ambas caras de la membrana celular. Esto significa que, el potencial en el interior de la clula es -70 mV ms negativo que el potencial del espacio extracelular.

Pero, Por qu ese valor de potencial de membrana en reposo en la clula?... Qu lo origina?... Qu factores estn involucrados?...

El potencial de reposo de la membrana es generado en virtud de que la membrana celular presenta permeabilidades diferenciales a los distintos iones (bsicamente Na+, K+ y Cl-), as como a la distribucin asimtrica de estos iones entre los dos compartimientos intra- y extracelular. Hoy da se admite que la principal fuente del potencial de reposo es la distribucin desigual de iones inorgnicos como el Na+ y el K+, y ms an, dependiente de la distribucin del ion K+ a ambos lados de la membrana. De igual forma, se ha descrito que la bomba o ATPasa de Na-K, al ser de carcter electrognica, contribuye mnimamente al establecimiento del potencial de membrana en reposo celular.

.-Permeabilidades relativas de los distintos iones. Ecuacin de Goldman-Hodking-Katz: Como se ha mencionado, los principales iones sometidos a gradiente qumico, capaces de difundir a travs de la membrana plasmtica son el Na+, K+ y Cl- los cuales se hallan distribuidos asimtricamente entre el interior y exterior de la membrana. Bajo condiciones de equilibrio cada ion va a tender a llevar el potencial de membrana a su propio potencial de difusin o de equilibrio. De la misma forma, la diferencia de concentracin es el factor preponderante en la determinacin de la magnitud del potencial de equilibrio de un ion; viene determinado por la ecuacin de Nernst:
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a 37 C Ce: concentracin extracelular del in Ci: concentracin intracellular del in

Como se ha determinado electro-fisiolgicamente, en clulas excitables de mamferos la situacin es ms compleja a causa de la presencia de estos iones, con 3 distintos coeficientes de permeabilidad. Sin embargo, como la membrana plasmtica no es permeable igualmente a todos los iones (la permeabilidad del K+ en reposo, es 50 veces la del Cl-, y cerca de 100 veces la del Na+) no todos participarn de igual manera en el establecimiento del potencial de membrana en reposo; los iones ms difusibles sern los que ms participen.

La ecuacin que se desarroll para calcular el potencial de membrana en reposo, considerando las permeabilidades relativas de los 3 iones mencionados, y las concentraciones relativas de cada uno de ellos en los compartimientos extra- e intracelular, fue deducida por David Goldman, Alan Hodgkin y Bernard Katz, y se la conoce como la ecuacin de GoldmanHodgkin-Katz:

a 37 C

Ya que la permeabilidad al Na+ (P Na+) es relativamente baja en situacin de reposo con relacin a la permeabilidad al K+ (PK+), el Na+ contribuye poco al establecimiento del valor del potencial en reposo (Vm). Se puede predecir a partir de la ecuacin de Goldman que, cambios en la concentracin externa de Na+ producirn muy ligeros cambios en el potencial de membrana en reposo, y ya que la (PK+) es mayoritaria en esas condiciones, al modificarse las concentraciones de K+ extracelular, en el sentido de un aumento de su concentracin, el potencial de membrana en reposo (Em) aumentar, o sea, tender ms hacia la electropositividad en el interior celular.

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La contribucin de los iones Cl- al potencial de membrana en reposo, puede ser prcticamente despreciable, ya que este ion tiene una permeabilidad muy baja en relacin al K+, y por el contrario, el Cl- ajusta sus concentraciones en los medios extra- e intracelular, de acuerdo con el nivel de potencial existente en la membrana celular, mostrando una tendencia hacia la no movilidad. Adems se debe tener en cuenta que, para la generacin del potencial de membrana en reposo se requiere de un nmero muy pequeo de cargas elctricas, y que las concentraciones totales de iones (+) y (-) es similar en todos los sitios de la clula (tendencia a la electro-neutralidad), a excepcin de las superficies interna y externa de la membrana plasmtica.

El Potencial de Accin Celular:

Los tejidos excitables propagan, transmiten su informacin a travs de seales elctricas que en lo sucesivo denominaremos el potencial de accin. La comprensin de los mecanismos inicos y biofsicos involucrados, son esenciales para entender los mecanismos neurobiolgicos del funcionamiento normal del tejido muscular (cardaco, estriado esqueltico y liso). Un potencial de accin o tambin llamado impulso elctrico, es una onda de descarga elctrica que viaja a lo largo de la membrana celular. Los potenciales de accin se utilizan en el cuerpo para llevar informacin entre unas clulas y otras.

El potencial de accin una vez generado, no se mantiene en un punto de la membrana plasmtica, sino que viaja a lo largo de la membrana de manera unidireccional. Puede desplazarse a lo largo de un axn a mucha distancia, por ejemplo transportando seales desde el cerebro hasta el extremo de la mdula espinal.

Los potenciales de accin se desencadenan cuando una despolarizacin inicial alcanza un umbral. Este potencial umbral vara, pero normalmente est en torno a -55 a -30 milivoltios sobre el potencial de reposo de la clula, lo que implica que la corriente de entrada de iones sodio supera la corriente de salida de iones potasio. El flujo neto de carga positiva que acompaa los iones sodio despolariza el potencial de membrana, desembocando en una
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apertura de los canales de sodio dependientes de voltaje. Estos canales aportan un flujo mayor de corrientes inicas hacia el interior, aumentando la despolarizacin en una retroalimentacin positiva que hace que la membrana llegue a niveles de despolarizacin elevados (1) El umbral del potencial de accin puede variar cambiando el equilibrio entre las corrientes de sodio y potasio. Por ejemplo, si algunos de los canales de sodio estn inactivos, determinado nivel de despolarizacin abrir menos canales de sodio, y aumenta as el umbral de despolarizacin necesario para iniciar el potencial de accin. Esta es el principio del funcionamiento del periodo refractario (que puede ser relativo o absoluto) (1). Los potenciales de accin son muy dependientes de los equilibrios entre iones sodio y potasio (aunque hay otros iones que contribuyen minoritariamente a los potenciales, como calcio y/o cloro), y por ello los modelos se hacen utilizando slo dos canales inicos transmembrana: un canal de sodio dependiente de voltaje y un canal de potasio pasivo. En la presente actividad prctica se trabajar con 3 iones; Na+, K+ y Cl-.

1.- OBJETIVO GENERAL Identificar la naturaleza inica y elctrica del potencial de reposo celular y del potencial de accin a travs del empleo de dos simuladores fisiolgicos de acceso libre.

2.- OBJETIVO TERMINAL Al finalizar la actividad prctica el estudiante estar en capacidad de identificar los factores fisicoqumicos que afectan el potencial de reposo celular de una clula excitable, as como tambin la naturaleza inica y elctrica del potencial de accin.

3.- MATERIALES Y EQUIPOS NECESARIOS PARA LA PRACTICA: Programas Simuladores en Software Libre. Equipo In View. PC portatil. Pantalla de proyeccin.

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PARTE I
Uso del simulador Macromedia Flash Player POTENCIAL DE REPOSO
Para cada in (p. ej. K+, Na+ y Cl-) usted encontrar tres pasadores (ver figura No. 1). Cada uno de ellos permite activar la posibilidad de modificar varias condiciones fsico-qumicas que cambiarn el potencial de equilibrio para un in o el potencial de reposo celular mediante la aplicacin de la ecuacin de Nernst o la ecuacin de Goldman respectivamente (Revise su bibliografa para ms detalles respecto al principio de estas ecuaciones). Si emplea la ecuacin de Nernst, solo podr tener uno de los pasadores activos a la vez (para el in K +, Na+ Cl-), sin embargo, si emplea la ecuacin de Goldman, el simulador le permitir manipular todas las variables de los tres iones de manera simultnea. (Razone por qu razn el simulador permite realizar esta accin de esta manera).

Concentraciones Inicas. Al activar cualquiera de los tres pasadores, este le permitir controlar las concentraciones intra- y extracelulares del in que usted est manipulando, las cuales pueden ser modificadas en un rango que oscila entre 1 y 600 mM respectivamente (ver figura No. 1). Para modificar estas concentraciones inicas, lo nico que usted tendr que hacer es arrastrar con el ratn de la computadora el indicador de concentracin inica hasta la nueva concentracin que usted desee ajustar. Adicionalmente, en el lado derecho de la pantalla del simulador usted encontrar una casilla que indicar en tiempo real el valor de potencial de equilibrio inico o de reposo celular en funcin del caso que est analizando.

Este simulador le permitir iniciar su experiencia prctica con valores de concentraciones inicas que simularn de manera parcial las caractersticas del axn del calamar gigante.

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Permeabilidad de Membrana Un tercer control que usted encontrar en cada pasador es el que ajusta la permeabilidad del in a la membrana celular (Px). Este valor puede ser ajustado de manera arbitraria en un rango que oscila entre 1 y 10.000, sin embargo, este control slo estar funcional cuando usted active la ecuacin de Goldman. (Podra explicar porqu no se puede controlar esta variable cuando trabaja en el modo de ecuacin de Nernst?) (ver figura No. 1). Formalmente, las unidades de permeabilidad de la membrana a un in son en cm/seg, y en el caso nuestro, este valor reflejar el flujo de conductancia neta de las especies inicas en cuestin. Temperatura Adicionalmente, en el simulador usted encontrar un control que le permitir modificar la temperatura. El valor indicado est expresado en C, sin embargo en la ecuacin de Nernst o Goldman el simulador automticamente re-expresar la temperatura en grados Kelvin. (Podra usted indicar a que se debe esto?). El simulador tambin le permitir forzar las condiciones a una temperatura constante de 37 C. Para modificar la temperatura a la cual va a ocurrir el experimento simulado, usted deber utilizar su ratn y desplazar el indicador de temperatura hasta una nueva posicin de temperatura que usted desee. En la parte inferior del programa, usted tambin podr observar una ventana que le representar el movimiento cintico del in o los iones presentes en la clula hipottica, el cual se modificar de manera directamente proporcional en funcin de la temperatura que usted le asigne al mismo. (Ver figura No. 2) Constantes R y F R es la constante para los gases, cuyo valor es de 8,314 J.K-1.mol-1 F es la constante de Faraday (la cantidad de cargas elctricas elementales que hay en un mol de electrones) y esta tiene el valor de 96.485 coulombios.mol-1 Manejando todas estas variables, usted podr observar que el simulador de manera instantnea calcular en potencial de equilibrio para cada uno de los iones si usted tiene activa la funcin de ecuacin de Nernst, o le presentar el potencial de reposo celular terico si usted tiene activa la funcin de ecuacin de Goldman en su simulador. Este clculo usted lo encontrar del lado derecho superior de su simulador. (ver figura No. 2)
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Figura No. 1: Aspecto general de la pantalla inicial del simulador para registro del potencial
de membrana celular, aplicando la ecuacin de Nernst o la ecuacin de Goldman (en este caso est activo el modo ecuacin de Goldman). Ntese que el Pasador 1 permite controlar las concentraciones intracelulares de potasio [K+]i as como tambin las concentraciones extracelulares para potasio [K+]o. De la misma manera, el Pasador 2 permitir controlar las concentraciones del in sodio y el Pasador 3 para el in cloro.

Registro en tiempo real del potencial de reposo celular.

Pasador 1

Pasador 2

Pasador 3

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Figura No. 2: Simulador activo en el modo de Ecuacin de Nernst. Ntese que solo est
activo un pasador (el que controla al in sodio en este caso) y en l no est habilitada la funcin de control del coeficiente de permeabilidad para este in (PNa+). El simulador de manera automtica activa la ecuacin de Nernst y presenta su potencial de equilibrio, en funcin de las concentraciones inicas del sodio intra y extracelular y la temperatura.

Ecuacin de Nernst y clculo del potencial de equilibrio para el in.

Pasador activo. Control de concentracion de + Na .

Control de la temperatura del fenmeno.

Movimiento cintico de los iones Na y potencial de equilibrio.

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Ejercicios prcticos con el simulador de Potencial de Reposo Celular

Luego que se ha familiarizado con el uso de este simple pero prctico simulador para el clculo del potencial de equilibrio para cada in, y para el clculo del potencial de reposo celular terico mediante el uso de la Ecuacin de Nernst y la Ecuacin de Goldman respectivamente, usted deber seguir los siguientes ejercicios en su laboratorio, y posteriormente, analizar cada uno de los fenmenos observados.

Aplicacin de la ecuacin de Nernst

Ejercicio 1 - Usando el simulador.

Una vez iniciada la ejecucin del simulador, observe cual es el potencial de equilibrio para cada uno de los iones (K+, Na+ y Cl-) (debe estar la temperatura ajustada a 37 C y activa la ecuacin de Nernst en el simulador). Para observar el potencial de equilibrio de cada in, usted deber ir activando cada uno de los tres pasadores. Anote sus observaciones y discuta las diferencias encontradas para cada uno de ellos.

Ejercicio 2 - Efecto de la temperatura Hipertermia.

Activando nuevamente el pasador para el in K +, ajuste la temperatura del simulador a 40 C (imagine usted un estado febril en un paciente). Qu observa en la cintica y el potencial de equilibrio para el in? Explique la razn de este cambio comparndolo con el estado inicial. Repita la misma experiencia para los otros iones. Vuelva a realizar este mismo experimento para cada in incrementando la temperatura en esta ocasin a 100 C y observe las diferencias encontradas en relacin al caso previo. Este ltimo experimento es irreal en trminos fisiolgicos, podra decir la razn del porqu de esta afirmacin?

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 Ejercicio 3 - Efecto de la temperatura Hipotermia.

Active el pasador para el in K+ y en esta ocasin descienda la temperatura a 15 C (imagine usted un estado de hipotermia en el paciente). Anote sus observaciones. Repita la misma experiencia para los otros dos iones. (Si usted desea puede realizar el mismo experimento descendiendo la temperatura a 0 C. Discuta las diferencias encontradas).

Ejercicio 4 - Cambios en la concentracin inica extracelular.

Colocando nuevamente el pasador para el in K+, habilite ahora el simulador en la funcin de ecuacin de Nernst a 37 C. Observe que el simulador cambia la expresin matemtica empleada. Podra discutir a que se debe esta diferencia? Ahora reduzca la concentracin extracelular del in K+ a 2 mM (Hipopotasemia). Qu sucede con el potencial de equilibrio para este in? Discuta su observacin. Seguidamente, incremente la concentracin extracelular del in a 20 mM (Hiperpotasemia). Qu sucede en el experimento? Compare sus resultados con respecto a la experiencia previa. Analice las consecuencias fisiolgicas de cambios en la concentracin extracelular de este in para el potencial de reposo celular de una clula excitable. Ahora active el pasador para el in sodio y descienda la concentracin extracelular a 50 mM (Hiponatremia). Anote sus resultados. Seguidamente incremente la concentracin extracelular de sodio a 130 mM (Hipernatremia). Anote sus resultados. Podra discutir cules podran ser las consecuencias fisiolgicas de alterar las concentraciones inicas extracelulares del sodio considerando los casos analizados? Repita esta experiencia para el in cloro. Qu observa en este caso respecto al potencial de equilibrio del in?

Ejercicio 5 - Cambio de la concentracin inica intracelular.

Manteniendo el simulador a 37 C, active nuevamente el pasador al in K+ y reajuste la concentracin extracelular a 10 mM (observe como cambia nuevamente el potencial de equilibrio para este in)
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Ahora usted incrementar la concentracin intracelular del K +i a 150 mM. Anote sus observaciones. Active el pasador para el in sodio y ajuste la concentracin extracelular al estado inicial (100 mM). Aumente la concentracin de Na+i a 30 mM. Anote lo observado en la experiencia. Repita el mismo procedimiento para el in Cl-i. Anote sus observaciones. Active nuevamente el pasador para el in potasio. Ajuste ahora la concentracin intracelular a 40 mM y analice el potencial de equilibrio para este in. A continuacin active el pasador para el in sodio, reduzca la concentracin de Na +i a 2 mM y observe lo que ocurre con el potencial de equilibrio. Analice y discuta lo observado. Repita la misma experiencia para el in cloro ajustando previamente la concentracin extracelular a 100 mM. Activando el pasador para el in K+ iguale las concentraciones intra y extracelulares. Qu sucede con el potencial de equilibrio para el in? De qu depende el potencial electroqumico de un in?

Aplicacin de la ecuacin de Goldman

Ejercicio 6 - Usando la ecuacin de Goldman.

Ha llegado el momento de ver qu sucede cuando analizamos el potencial electroqumico de una clula cuando se encuentra una poblacin heterognea de partculas cargadas elctricamente a ambos lados de la membrana celular. Para realizar esto, lo primero que deber hacer es activar la aplicacin de ecuacin de Goldman en su simulador. Esto lo podr realizar activando la segunda pestaa que se encuentra en la esquina superior derecha (contando de derecha a izquierda).

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Podr notar que ha activado correctamente la ecuacin de Goldman porque se han activado todos los pasadores para los iones potasio, sodio y cloro, as como el coeficiente de permeabilidad (Px) de cada uno de ellos. Tambin podr notar que ha cambiado la ecuacin presentada y en la ventana cintica ahora se observan en constante movimiento tres clases de partculas (correspondiente a los tres iones). Finalmente notar que al lado de la ecuacin de Goldman habr un valor en milivoltios (mV) correspondiente al potencial terico de reposo celular (Em) el cual es distinto del potencial de equilibrio inico para cada uno de los iones analizados (Ex). Podra decir a que se debe esta diferencia? Qu significa un potencial de reposo celular con valor negativo para la clula? Cmo es la polarizacin de la membrana celular? Ahora deber asegurarse que las concentraciones inicas para el potasio sean de 100 mM para el espacio intracelular y de 10 mM para el espacio extracelular. Tambin ajuste las concentraciones inicas del sodio y el cloro en 100 mM para el espacio extracelular y de 10 mM para el espacio intracelular.

Ejercicio 7 - Efecto de la temperatura sobre el potencial de reposo celular.

Inicialmente usted ajustar la temperatura a 37 C y anotar el valor de potencial de reposo celular terico.

Incremente la temperatura del simulador a 42 C y anote el nuevo valor de potencial de reposo celular. Compare este nuevo valor con el de 37 C y discuta las diferencias encontradas. Discuta si la clula se despolariza o hiperpolariza? Cmo estar la excitabilidad celular en un paciente que presente esta temperatura?

Ahora descienda la temperatura a 15 C y observe cmo se altera el potencial de reposo celular. En esta situacin cmo ser la excitabilidad celular?

Considera que los cambios observados para las dos temperaturas estudiadas (15 C y 42C) son suficientes para generar cambios significativos en la funcin nerviosa del cuerpo humano?
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 Ejercicio 8 - Efecto de la permeabilidad de un in a la membrana celular.

Antes de iniciar los experimentos de este ejercicio ajuste nuevamente la temperatura a 37 C. Si coloca en simulador en funcin de ecuacin de Goldman a 37 C notar que la ecuacin presentada cambia. A qu se parece el cambio observado? Habr notado que su simulador presenta diferentes valores de coeficientes de permeabilidad para cada uno de los iones. Podra decir en funcin de los valores indicados cul de ellos presenta mayor permeabilidad a la membrana en estado de reposo? De qu manera influye la permeabilidad de un in en una clula en el establecimiento del potencial de membrana celular? Ajuste el PK+ a un valor de 10. Observe que ocurre con el potencial de membrana de la clula. Cmo ser la excitabilidad celular bajo estas nuevas condiciones? Si observa el potencial de equilibrio (EK) en esta situacin notar que no ha cambiado respecto a la condicin experimental previa. Podra explicar por qu razn no cambia el potencial de equilibrio para el potasio a pesar de que si cambia el potencial de membrana de la clula cuando se reduce el coeficiente de permeabilidad? Incremente ahora del PNa+ a un valor de 100 (sin alterar el PK+ anteriormente modificado). Anote lo observado y discuta. Cmo ser la excitabilidad celular? Diga cmo ser la polaridad de la membrana celular en esta circunstancia? Compare este resultado con el fenmeno de potencial de accin y diga que analoga hay entre ambos.

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PARTE II
Uso del simulador HHsim Hodgkin-Huxley
Este simulador que usted tiene la oportunidad de manejar, al igual que el simulador que usted emple en la seccin previa de la prctica, es til para facilitar la comprensin de la funcin elctrica de clulas excitables, y en particular, de los fenmenos dinmicos que ocurren en una clula excitable cuando esta ha recibido un estmulo elctrico apropiado capaz de modificar el potencial de reposo celular. Antes de continuar con un conjunto de actividades prcticas en esta segunda parte, usted deber aprender a manipular el simulador HHsim Hodgkin-Huxley por lo que es muy importante que lea detenidamente este guin de instrucciones as como tambin cuente con acceso a un computador de modo tal que pueda familiarizarse con la manipulacin del mismo.

Controladores del simulador

Una vez que se haya iniciado el programa, usted observar dos trazados (ver figura No.3) que tienen en comn la variable tiempo representado en milisegundos (msec) en el eje de las abscisas, mientras que el trazado superior presenta en el eje de las ordenadas al potencial de membrana en milivoltios (mV). El trazado inferior mostrar en el eje de las ordenadas unidades arbitrarias, sin embargo, estas unidades sern modificadas y adaptadas en funcin del fenmeno que usted desee analizar en el simulador. En la seccin inferior izquierda (ver figura No. 3) encontrar dos botones de color violeta rotulados como Stim1 y Stim2 los cuales son dos generadores de estmulos elctricos sobre la superficie de la clula excitable hipottica que estamos analizando. Cuando usted utilice alguno de estos botones podr visualizar que la clula ha recibido un estmulo elctrico de manera grfica observando una lnea violeta que es generada en el trazador superior del simulador.

Al lado derecho de los botones Stim1 y Stim2, podr encontrar tres botones de color verde, mostaza y rojo, rotulados como Run, Nudge y Stop respectivamente (ver figura 3),
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los cuales sirven para controlar el desplazamiento de los trazadores. Si usted presiona el botn Run, usted observar que comenzarn a desplazarse unas lneas tanto en el trazador superior como en el inferior. Si presiona el botn Stop, las lneas que se dibujan en los trazadores se detendrn inmediatamente. Por otra parte, si usted presiona el botn intermedio Nudge (traduce empujn), observar que las lneas en los trazadores avanzarn nicamente 2 milisegundos (msec), luego de lo cual se detendrn automticamente.

Finalmente, en la parte superior de los botones Run, Nudge y Stop, usted encontrar tres pasadores (amarillo, verde y azul) (ver figura 3) los cuales le permitirn indicar que es lo que su trazador inferior mostrar en la simulacin. Note usted que el color de cada pasador corresponde a un color de las lneas representadas en el trazador inferior. Sin prdida de tiempo ajuste el pasador amarillo a la posicin de [g_Na(pS)] y el pasador verde a la posicin [g_K(pS)]. El pasador azul lo ajustar a la posicin blank. Note como han cambiado las posiciones de las lneas amarillo y verde a 0 pS para g_Na, 0 pS para g_K y la lnea azul ha desaparecido del trazador inferior. En esta situacin, lo que usted ha hecho es indicarle al simulador que desea observar los valores de conductancia para los iones Na+ (g_Na) y K+ (g_K) en tiempo real. Podra definir que es conductancia para un in? Qu quiere decir pS? Podra indicar de qu manera cambios en la conductancia inica modifican el potencial de membrana celular?

Modificando parmetros experimentales

Los controles principales para modificar las variables de sus experimentos simulados los encontrar en la seccin superior izquierda de la pantalla del programa (vea nuevamente la figura 3). Notar que el primer botn (contando de izquierda a derecha) indica Membrane, y si lo presiona el simulador generar una ventana nueva que le permitir modificar las concentraciones inicas intra y extracelulares en miliMolar (mM) para los iones Na+, K+ y Cl(fjese en las relaciones de concentraciones indicadas para cada in y diga si estas son normales para un sistema celular real). En la misma ventana encontrar el control de la temperatura en (C), la resistividad de la membrana (Rm) y la capacitancia de la membrana (Cm). Podra usted definir Rm y Cm desde el punto de vista biofsico?
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El segundo botn es Channels y al activar este botn aparecer una ventana que le permitir modificar algunos parmetros de conductancia elctrica para canales inicos (Na+, K+ y Cl-) pasivos y activos (Podra decir qu diferencia hay entre estas dos clases de canles inicos?). Para los canales pasivos, el nico parmetro modificable es la conductancia en (S). Para los canales activos (fast sodium y delayer rectifier), se desplegar una nueva ventana que permitir ajustar las propiedades cinticas y elctricas para cada subunidad del canal de sodio voltaje-dependiente. El tercer botn que usted encontrar es Stimuli, y al activar el mismo una nueva ventana permitir controlar las caractersticas de los estmulos elctricos tales como intensidad y duracin, de los botones Stim1 y Stim2 previamente mencionados. Note usted que el parmetro de estimulacin elctrica del botn Stim1 est preestablecido a un estmulo simple de +10 nA de intensidad y 1 msec de duracin. Por otra parte, el botn stim2 est ajustado para generar un estmulo elctrico de -10 nA de intensidad y 2 msec de duracin. Podra indicar que diferencia fisiolgica existe para una clula excitable (y en nuestro caso para el simulador) que se aplique un Stim1 o un Stim2 con las caractersticas anteriormente mencionadas? Qu estmulo de los anteriormente sealados espera usted que sea capaz de generar un potencial de accin? Razone sus respuestas. El cuarto botn Drugs le permitir aplicar a la clula excitable simulada cantidades controladas en mM de Tetrodotoxina (TTX), Tetraetilamonio (TEA) o Pronasa. Podra usted indicar de qu manera cada una de estas sustancias afecta la capacidad de generar un potencial de accin?

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Figura No. 3: vista general del simulador HHsim Hodgkin-Huxley. El mismo le permitir
realizar registros de potenciales de accin en tiempo real, en funcin de la aplicacin de estmulos elctricos de tipo despolarizantes o hiperpolarizantes. Adicionalmente usted podr modificar variables tales como capacitancia o resistencia membranal, conductividad de canales inicos y administracin de drogas que alteran la funcin elctrica celular de la clula hipottica.

Controladores de variables experimentales

Trazadores

Botones estimuladores elctricos

Control de desplazamiento de los trazadores

Pasadores para el control de registro del trazador inferior

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Ejercicios prcticos con el simulador de Potencial de Accin

Ejercicio 9 - Umbral de excitacin, estmulo despolarizante hiperpolarizante.

Una vez se halla familiarizado con el uso del simulador HHsim Hodkin-Huxley, lo primero que deber hacer es asegurarse que el trazador inferior est indicando los valores de conductancia para el Na+ y para el K+, tal y como tuvo que haberlo ajustado en la seccin de instrucciones previa. Active la ventana Stimuli y para el botn Stim1 colocar una intensidad de 0 nA (cero). Cierre esta ventana, presione el botn Nudge y luego el botn Stim1. Observe que sucede en los trazadores superior e inferior y anote sus observaciones. Reajuste la intensidad del botn Stim1 de la misma manera que lo acaba de hacer pero ahora incremntela a 1 nA. Presione el botn Stim1 y anote sus observaciones. Repita la operacin incrementando en cada ciclo 1 nA la intensidad del estmulo hasta que logre generar un potencial de accin. Responda lo siguiente: Cul es el umbral de excitacin de la clula? Qu se observ en los estmulos sub-umbrales? Qu observa respecto a los cambios de conductancia para el Na+ y el K+ en este experimento? Podra correlacionar estos cambios de conductancias con el potencial de accin observado? Identifique en el potencial de accin el perodo de latencia. Repita todo el procedimiento anterior utilizando ahora el botn Stim2 pero en esta ocasin ajustar la intensidad del estmulo a valores negativos (llegue hasta -5 nA). Qu observa con el potencial de membrana celular? Por qu en esta ocasin no es posible generarse un potencial de accin? Podra correlacionar los cambios de conductancia inica observadas con el cambio de potencial de membrana observado cuando se aplican los estmulos elctricos negativos?

Ejercicio 10 - Efecto de la duracin del estmulo.

Active la ventana de control de estmulo y ajuste la intensidad a 1 nA en el botn Stim1 (esta intensidad permanecer constante en todo el ejercicio). Ahora ajuste la duracin del estmulo a 1 msec y cierre la ventana. Presionar 6 veces de manera pausada el botn Stim1 y anotar sus observaciones. Seguidamente incremente la duracin del estmulo en 1
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msec y aplique nuevamente 6 estmulos elctricos. Repita la operacin de incrementar la duracin del estmulo hasta que observe un potencial de accin. Cul fue la duracin mnima necesaria del estmulo para generar un potencial de accin? A qu se debe este fenmeno? Qu observ en el potencial de membrana celular en la medida que se incrementaba la duracin del estmulo?

Ejercicio 11 - Sumacin de estmulos subumbrales.

Ajuste la intensidad del Stim1 a 3 nA (estmulo subumbral) y 1 msec de duracin. En este mismo botn ajuste la intensidad del segundo estmulo a 3 nA y 1 msec de duracin (debe haber in intervalo inter-pulso de 1 msec). Cierre la ventana de control de estmulo y presione el botn Stim1 (hgalo 4 veces de manera pausada). Anote sus observaciones. Por qu razn dos estmulos subumbrales generan un potencial de accin?

Ejercicio 12 - Papel de los iones Na+ y K+ sobre el potencial de accin.

Papel del Na+: Ajuste el botn Stim1 a un estmulo sencillo de 6 nA de intensidad y 1 msec de duracin (usted ya debera saber cmo se realiza esta operacin). Genere 3 potenciales de accin. Ahora active la ventana Membrane y reduzca la concentracin de Na+ extracelular (Cout mM) a 220 mM (Hiponatremia) (observe cmo se modifica el ENa). Cierre la ventana Membrane y genere 3 potenciales de accin. Qu diferencias observa en este potencial de accin respecto al potencial de accin inicial? A qu se debe la diferencia encontrada? Seguidamente reduzca la concentracin de Na+ extracelular a 50 mM, haga 3 rplicas y anote sus observaciones. Discuta las diferencias encontradas comparando con los resultados previos. Ajuste la concentracin extracelular de Na+ nuevamente a 440 mM y genere 3 potenciales de accin. Posteriormente incremente la concentracin del Na+ a 500 mM (Hipernatremia) y genere 3 potenciales de accin. Compare las alturas de las espigas a 440 mM y 500 mM del in.

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Repita la experiencia incrementando la concentracin extracelular del Na + a 600 mM y nuevamente analice la altura de la espiga. Por qu existe una dependencia de la concentracin de Na+ extracelular y la altura de la espiga? Papel del K+: Activando la ventana Membrane, presione el botn Reset para restablecer las concentraciones inicas iniciales. Genere 3 potenciales de accin bajo estas condiciones y seguidamente reduzca la concentracin de K+ extracelular a 10 mM (Hipopotasemia). Observe como el potencial de membrana se reajusta inmediatamente. A qu se debe este fenmeno? Analice los potenciales de equilibrio de este in a 20 mM y 10 mM de concentracin extracelular. Genere 3 potenciales de accin en condiciones de Hipopotasemia y anote sus observaciones. Por qu no es posible generar un potencial con un estmulo supraumbral? Restablezca las concentraciones inicas de K+ originales y genere 3 potenciales de accin. Seguidamente incremente la concentracin de K + extracelular a 25 mM (Hiperpotasemia). Anote sus observaciones. Por qu razn la clula genera potenciales de accin espontneos?

Ejercicio 13 - Accin de la Tetrodotoxina (TTX) sobre el potencial de accin.

Restablezca los gradientes inicos de concentracin originales con el botn Reset y asegrese que est el botn Stim1 ajustado para generar un estmulo simple de 6 nA de intensidad y 1 msec de duracin. Ajuste el pasador azul que se encuentra en la parte inferior de la pantalla de la posicin blank a la posicin I_Na (A). Este cambio agregar una lnea azul al trazador inferior y la misma corresponde a la corriente trans-membranal generada por el paso de Na+ a travs de la misma. Genere 3 potenciales de accin (analice la corriente de sodio y discuta al respecto). Posteriormente active la ventana Drugs y para la droga TTX (tetrodotoxin) inhiba las corrientes de Na+ en un 10 %. Cierre la ventana Drugs y genere 3 potenciales de accin. Compare el aspecto general de los potenciales de accin en ambas situaciones (sin inhibicin vs 10% inhibicin). Compare las conductancias inicas para el Na+ y el K+ en ambas situaciones. Compare las corrientes de Na+ observadas A qu se deben las diferencias encontradas.
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Ahora incremente el porcentaje de inhibicin de la corriente de Na+ al 20 %, genere 3 potenciales de accin y compare los resultados encontrados. Repita el procedimiento inhibiendo la corriente de Na+ al 25 %. Compare y analice los resultados encontrados. En funcin de los resultados hallados por usted, analice el mecanismo de funcionamiento de los canales de Na+ voltaje-dependientes. Cul compuerta de los canales de Na+ voltaje dependientes estn bloqueados con la TTX?

Bibliografa Recomendada
1.-Manual de Fisiologa y Biofsica. Ricardo Montoreano, Vol. 1. 2.-Fisiologa Mdica. Guyton & Hall. 11 edicin en espaol- McGraw-Hill Interamericana 3.-Fisiologa Animal. Eckert, A. 4ta Edicin en espaol. 4.-Fisiologa Mdica. William Ganong. Edicin 20 en espaol. 2007.

Enlace electrnico para descargar o manipular el software de instruccin: software libre

http://www.nernstgoldman.physiology.arizona.edu/

Prctica diseada por el Prof. Miguel Skirzewski-Mayo - 2009

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PRCTICA No.

ESTUDIO DE LOS REFLEJOS Y LA SENSIBILIDAD SOMATICA

PRESENTACIN El presente guin constituye la primera actividad prctica de la Unidad II (Neurofisiologa) de la asignatura Fisiologa I del Programa de Medicina. Por medio de esta actividad se pretende que el estudiante conozca y describa en forma integral, los mecanismos bsicos que participan en la elaboracin de los reflejos en el hombre, sus mecanismos intrnsecos y sus respuestas fisiolgicas.

1.- OBJETIVOS DE LA PRCTICA: Al finalizar la prctica los alumnos sern capaces de: -Describir el circuito neuronal de los reflejos monosinpticos y polisinpticos. -Identificar la utilidad de estudiar los reflejos monosinpticos y polisinpticos en la prctica clnica. -Obtener los principales reflejos de utilidad en la prctica clnica. -Enunciar el concepto de receptor. -Describir la representacin central de las vas sensoriales. -Identificar la va sensorial. -Identificar las poblaciones de receptores en las distintas partes del cuerpo humano. -Describir los principales mtodos de exploracin de las sensibilidades.

2.-MATERIAL REQUERIDO PARA LA EXPERIENCIA PRCTICA: Martillos percutores, agujas finas o alfileres, escobillas, compas, envase con hielo, envase con agua caliente, objetos de pesos diferentes, camilla clnica, sillas.

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PARTE I ESTUDIO Y EVALUACIN DE LOS REFLEJOS EN EL HOMBRE

3.- MANIOBRAS EXPERIMENTALES:

Por qu estudiar o evaluar los reflejos? Porque nos permite detectar cualquier manifestacin de una lesin a nivel del sistema nervioso. Constituye un mtodo objetivo de examen. Si evaluamos los sistemas motor y sensitivo, stos tienen que estar ntegros, sanos. El arco reflejo debe funcionar adecuadamente. De igual manera, si exploramos un grupo de msculos agonistas, en forma indirecta estaremos evaluando un grupo de msculos antagonistas, ya que se aplica en este caso, la Ley de Inervacin Recproca de Sherrington, la cual nos dice que si por accin refleja se contrae un grupo muscular flexor, simultneamente relajar el correspondiente grupo muscular extensor, y viceversa. Siempre la exploracin de los reflejos se debe asociar al resultado del estudio de otras funciones del sistema nervioso.

Tcnicas y recomendaciones generales para explorar los reflejos en el hombre: El individuo a explorar debe estar cmodo y relajado. Se buscarn los reflejos en forma simtrica para comparar los resultados; en condiciones normales las respuestas son simtricas. Existen zonas bien precisas donde se debe aplicar el estmulo, y a esa zona corresponde un centro nervioso tambin localizado. Para buscar los reflejos se debe utilizar el martillo percutor del cual existen varios modelos. Algunos traen incorporada una aguja y un cepillo pequeo para explorar las zonas sensitivas. El martillo percutor tiene la punta de caucho y un mango metlico. Se lo debe tomar con la mano, por su base y siempre percutir con suavidad la zona a explorar.

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3.a) EXPLORACIN DE REFLEJOS MONOSINPTICOS O MIOTTICOS:

.-Exploracin del reflejo Orbicular de los Prpados: a) Maniobra: colocndose detrs del paciente (para evitar el reflejo de oclusin palpebral defensivo), percutir con suavidad la zona de la raz de la nariz. b) Respuesta a obtener: oclusin palpebral bilateral c) Segmento de Integracin: En la Protuberancia Cerebral. Va Receptora: V par craneal (Nervio Trigmino); Va Efectora: VII par craneal (Nervio Facial).

.-Exploracin del reflejo Maseterino: a) Maniobra: paciente con la boca ligeramente entreabierta, se le percute directamente el mentn, interponiendo entre el martillo y el mentn el dedo pulgar del explorador. b) Cierre brusco de la boca por accin de los msculos maseteros y temporales. c) Segmento de Integracin: La Protuberancia Cerebral. Tanto la va receptora como efectora lo forman ramas del Nervio Trigmino. .-Exploracin del reflejo Bicipital: a) Maniobra: percusin con el martillo de nuestro dedo pulgar sobre el tendn del bceps con el antebrazo del sujeto en semiflexin y semisupinacin. b) Respuesta a obtener: flexin del antebrazo sobre el brazo. c) Segmento de Integracin: C5-C6 (C: segmento medular cervical)

.-Exploracin del reflejo del Supinador Largo (Estilorradial): a) Maniobra: percusin del estiloide radial con el antebrazo en semiflexin y semisupinacin de 45. b) Respuesta a obtener: contraccin del supinador largo con flexin del antebrazo. c) Segmento de Integracin: C6

.-Exploracin del reflejo Tricipital: a) Maniobra: percusin con el martillo del tendn del trceps por encima del olecrann con el antebrazo en semiflexin. b) Respuesta a obtener: extensin del antebrazo. c) Segmento de Integracin: C7

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.-Exploracin del reflejo de los Pronadores (o cubital): a) Maniobra: percusin con el martillo del estiloide cubital en su cara dorsal con el antebrazo en semiflexin y semipronacin. b) Respuesta a obtener: movimiento de pronacin c) Segmento de Integracin: C6, C7 y C8 .-Exploracin del reflejo Rotuliano o Patelar (o del Cuadrceps): a) Maniobra: con el sujeto sentado en la camilla con las piernas colgando, se percute el tendn rotuliano. b) Respuesta a obtener: extensin de la pierna. c) Segmento de Integracin: L4 (L: segmento medular lumbar)

.-Exploracin del reflejo Aquleo (o del Trceps Sural): a) Maniobra: con el sujeto arrodillado con los pies libres y en semiflexin dorsal, se percute el tendn de Aquiles. b) Respuesta a obtener: flexin plantar del pie. c) Segmento de Integracin: S1 (S: segmento medular sacro)

3.b) EXPLORACION DE REFLEJOS POLISINAPTICOS O NOCICEPTIVOS: .-Exploracin del reflejo Corneal: a) Maniobra: Haciendo mirar al paciente al frente, tocar muy suavemente la crnea con un trocito de algodn o un hisopo limpios, abordando la zona lateralmente. b) Respuesta a obtener: oclusin de ambos prpados y elevacin del globo ocular. c) Segmento de Integracin: Respuesta es bilateral. Centro de integracin a nivel del ncleo del nervio facial (VII par craneal). Rama aferente: rama oftlmica del trigmino. Rama eferente: nervio facial.

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.-Exploracin del reflejo Cutneo Plantar: a) Maniobra: Estimular el borde externo de la planta del pie, siempre de atrs hacia adelante con un objeto ligeramente agudo (una aguja o un alfiler) b) Respuesta a obtener: flexin plantar de los dedos del pie. Este reflejo da respuesta a partir de los 3 aos de edad, o ms tarde an. c) Segmento de Integracin: L5, S1, S2

.-Exploracin del reflejo Cutneo-Abdominal: a) Maniobra: con el sujeto en decbito dorsal (acostado), rozar la piel del abdomen con un objeto agudo (ejemplo, un alfiler), en tres zonas: superior (epigstrica), media (umbilical) e inferior (hipogstrica). b) Respuesta a obtener: contraccin de la zona de la pared abdominal estimulada. c) Segmento de Integracin: zona superior: D7-D8-D9; zona media: D9-D10-D11; zona inferior: D11-D12. (D es: segmento medular dorsal)

3.c) EXPLORACION DEL TONO MUSCULAR: El tono muscular es difcil de medirlo cuantitativamente. Se requiere de cierta experiencia previa. Normalmente el msculo ofrece una ligera resistencia a la movilizacin pasiva. El paciente debe estar completamente relajado. Comience hablando de temas generales con l. Inspeccione sus 4 miembros. Lo ms importante del examen es la resistencia pasiva de los msculos a su manipulacin cuando estn relajados. Lo ideal es explorar los msculos de las extremidades. Movilice las articulaciones suavemente al comienzo y luego con mayor velocidad; podr notar una pequea resistencia a los cambios de posicin de los diversos segmentos mioarticulares.

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GUA DE AUTOEVALUACIN POST-LABORATORIO .- Qu se entiende por estmulo? .- Qu es un reflejo? .- Mediante un dibujo, esquematice un arco reflejo e indique sus elementos. .- Haga una clasificacin general de los receptores conocidos. .- Explique por qu un sujeto siente en algunas ocasiones las dos puntas del comps y en otras slo siente una. .- Defina nocicepcin

.- Seale la opcin verdadera: El reflejo miottico: a. b. c. d. Tiene una funcin postural. Aumenta su actividad por la accin de las motoneuronas alfa. Produce una prdida del tono muscular. Es consecuencia de una respuesta muscular, al contraer el msculo ste responde con un estiramiento.

.- Seale la opcin verdadera: Un movimiento dirigido a un objetivo depende de: a. b. c. d. La seleccin del plan. El lugar que ocupa el cuerpo en el espacio. Su ejecucin. Todo lo anterior.

.-Seale la opcin verdadera: Los rganos tendinosos de Golgi: a. b. c. d. Estn inervados por axones sensoriales Ia. Se encuentran en la unin del msculo y el tendn. Proporcionan a la mdula informacin sobre la longitud muscular. Son la nica fuente de aferencia propiceptiva desde el msculo.
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GLOSARIO DE TRMINOS BSICOS:

.-Reflejo: un reflejo es una respuesta predecible a un estmulo sensorial (sensitivo) especfico. Los reflejos son involuntarios o procesos automatizados ya que ocurren sin que el individuo piense en ello. .-Estmulo: cualquier evento que puede desencadenar o generar una respuesta en el cuerpo humano. .-Arco Reflejo: es la ruta, la va para que pueda ocurrir un reflejo. Es un circuito neuronal. Abarca comnmente el msculo, los nervios que inervan el msculo y las neuronas ubicadas en la mdula espinal. .-Sinapsis: es una estructura anatmica (ultraestructural) y en el cual ocurre la transmisin de la informacin entre dos neuronas. .-Transmisin Sinaptica: es el evento de la transmisin de la seal, la cual puede ser de naturaleza qumica o elctrica. .-Reflejo Monosinptico: el ms simple de los arcos reflejos. Slo tiene una sinapsis entre los nervios aferentes sensoriales y los nervios eferentes motores. .-Reflejo Polisinptico: es el ms complejo de los arcos reflejos ya que envuelve mltiples sinapsis neuronales. .-Sistema Motor Somtico: la musculatura somtica est inervada por las neuronas motoras somticas del asta ventral de la mdula espinal. Las neuronas que inervan la musculatura distal y proximal se encuentran en los engrosamientos cervical (segmentos espinales C3-T1) y lumbar (segmentos espinales L1-S3) de la mdula espinal, mientras que las de la musculatura axial se encuentran a todos los niveles. .-Mdula Espinal: estructura cilndrica con sentido cfalo-caudal, es la porcin intrarraqudea del sistema nervioso. .-Potencial de Accin: lenguaje de sealizacin universal del sistema nervioso; es la corriente elctrica que se genera y se transmite como informacin en una neurona. .-Neurona: clula muy especializada y fundamental del sistema nervioso en los seres vivos. .-Axn: proyeccin o proceso que emerge de una neurona. Generalmente es larga. .-Dendrita: proyeccin o proceso que emerge de una neurona. Generalmente es corta. .-Interneuronas: neuronas de asociacin. Pueden ser aferentes o eferentes. .-Receptores: estructuras sensoriales que reciben o captan informacin del entorno. .-Unidad Motora: es una estructura compuesta por la motoneurona y las fibras musculares que inerva. .-Tiempo de Latencia: perodo de tiempo que transcurre entre un estmulo y la obtencin de una respuesta. .-Tono Muscular: estado de tensin de los msculos (de origen reflejo) existente cuando estn relajados, o lo que es lo mismo, es la resistencia pasiva al movimiento cuando el control voluntario esta ausente. Contribuye a los ajustes de la postura y de la actividad en general.

Guin elaborado-revisado por los Prof. Nelson Loureiro y Miguel Skirzewski.Enero-2010

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PRCTICA No.

SENSIBILIDAD ESPECIAL: LA VISION

PRESENTACIN El presente guin constituye la segunda actividad prctica de la Unidad II (Neurofisiologa) de la asignatura Fisiologa I del Programa de Medicina. Por medio de esta actividad se pretende que el estudiante comprenda los mecanismos neurofisiolgicos que intervienen en la captacin, elaboracin, procesamiento e integracin de las seales que conducen a la visin en el Ser Humano, as como a evaluar su funcionalidad.

INTRODUCCION: La visin es un sistema sensorial crucial en la relacin con nuestro entorno o mundo exterior. La visin nos permite percibir la luz, la sombra, el color y la forma de la naturaleza. Hay que acotar tambin que, la percepcin por el sistema visual es un campo muy propicio para desarrollar investigaciones experimentales; as, es posible intervenir en el estmulo del sistema visual con la luz o hacerlo a nivel de receptores de la retina o trabajar con la transmisin de la informacin desde los ojos a la corteza visual cerebral, entre otros. Las maniobras que se presentan en esta gua prctica no persiguen contestar preguntas de actualidad cientfica, sino sencillamente tienen una finalidad puramente didctica, y dentro del estudio de la sensibilidad especial se ha elegido la visin, porque el resultado de su experimentacin es ms objetivable, y esto porque es a travs de ella que nos relacionamos con el mundo exterior percibiendo la luz, la forma, los colores.2

La visin se nutre de mltiples fuentes de informacin para interpretar el mundo que

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SABIAS QUE!: El Da Mundial de la Visin, que se celebra el segundo jueves de cada mes de octubre, es una iniciativa de mbito mundial que tiene por objetivo haber eliminado para el 2020 todos los casos evitables de ceguera. Su primera edicin tuvo lugar en 2000, y es el principal instrumento de promocin de "Visin 2020: El derecho a ver", una accin para prevenir la ceguera a escala mundial.

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nos rodea. As, el uso de dos ojos permite la visin binocular, con la cual podemos percibir la distancia a la que se encuentra un objeto o la diferencia entre el movimiento de un pjaro y el movimiento del fondo de matorrales sobre el que sita, nos permite distinguir al animal portando una ramita (fuente: www.es.wikipedia.org). Cmo se forma la imagen visual? Hay que recordar que es el estmulo que impresiona la retina es la luz. La luz consta de ondas electromagnticas de determinadas longitudes de onda y que se propaga por distintos medios. El cristalino se acomoda (porque puede alterar su poder de refraccin) a fin de proporcionar una visin diferente cada vez. Si se mira a un objeto a ms de 6 metros (objeto distante), los rayos de luz sern virtualmente paralelos entre s. Si el poder del ojo es suficiente para proporcionar una imagen aguda, el punto lejano de visin puede localizarse a unos 6 metros; ste es el punto ms cercano a partir del cual un objeto puede ser focalizado sin necesidad de acomodacin del cristalino (recurdelo: a 6 metros). Si los rayos de luz son producidos por un objeto muy cercano (a menos de 6 metros), stos son divergentes, o sea no son paralelos, y es necesario un mayor poder de refraccin (mayor acomodacin del cristalino) para focalizarlos en la retina. Aunque los detalles de la anatoma ocular no son objeto de la actividad prctica presente, echemos un vistazo a lo ms importante en la figura No. 1.

1.- OBJETIVOS DE LA PRCTICA: -Describir los parmetros anatomo-fisiolgicos que intervienen en la percepcin de la luz, color, sombra, forma. -Identificar desde el punto de vista fisiolgico, los constituyentes del quebrado de Snellen. -Indicar los parmetros anatomo-fisiolgicos que intervienen en el estudio del campo visual. -Caracterizar la funcionalidad de la musculatura intrnseca del ojo humano. 2.- MATERIALES Y EQUIPOS NECESARIOS PARA LA PRCTICA: Linternas de mano, campmetros visuales, cartas de Snellen, apuntadores.

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3.- MANIOBRAS EXPERIMENTALES: Aunque la exploracin netamente no forma parte del estudio de la fisiologa, perteneciendo esta ms a la semiologa o exploracin clnica, cuando se examina el sentido de la visin en un paciente, es importante explorar los globos oculares, siempre hacindolo en forma simtrica; su ubicacin es importante dentro de la cavidad ocular. Puede presentarse una protusin de los globos oculares (uni- o bilateral), o sea, un exoftalmos, o al revs, estar hundidos dentro de la cavidad orbitaria lo que se llama enoftalmos. Se observa la simetra de los ojos. Se explora visualmente la esclertica (el blanco de los ojos), la pupila, el iris. Luego se procede a palpar con dos dedos y en forma alternativa, la tensin de los globos oculares, que puede estar aumentada como en el caso del glaucoma, o disminuida como en el coma diabtico y en toda deshidratacin severa.

Tambin se puede percibir la direccin de los globos oculares, que puede estar desviada en uno o ambos ojos, caso del estrabismo, que se llama convergente o divergente segn se acerquen o alejen entre s los globos oculares. Observe con detalle la crnea; pueden existir ulceraciones u opacidades. El anillo blanco-grisceo cerca del limbo ocular, es muy frecuente en los ancianos (el llamado arco senil). En las pupilas se examinan el tamao, la forma, la simetra, y los reflejos fotomotor y de acomodacin. La miosis son las pupilas contradas y la midriasis son las dilatadas.

3.1..-EXPLORACION DE LA AGUDEZA VISUAL:

Qu es la agudeza visual? Sencillamente es, la capacidad del ojo para distinguir entre dos puntos cercanos entre s. Nos permite percibir la forma y figura de los objetos con detalle.

Cmo se explora? Mediante el uso de los Carteles o Cartas de Snellen. Es una prueba que se utiliza para determinar las letras ms pequeas que una persona puede leer en una tabla o tarjeta estandarizada sostenida a una distancia de 6 metros (20 pies). Estn formados por filas de
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letras que van de tamao ms grande a ms pequeo conforme bajamos la mirada. Cuanto ms abajo logre ver ntido el paciente, mayor agudeza visual tendr. Este examen se puede realizar en el consultorio del mdico, en una escuela, en un sitio de trabajo o en cualquier otra parte. El paciente permanece sentado a una distancia de 6 metros de la tabla. Se deben retirar los anteojos o los lentes de contacto. Ambos ojos deben permanecer abiertos y uno de ellos cubierto con la palma de la mano, con un vaso de papel o con un trozo de papel mientras se lee en voz alta la lnea ms pequea de las letras que la persona pueda leer en el cartel. Si el paciente no est seguro de la letra, puede adivinar. Se repite el procedimiento con el otro ojo. A la persona se le puede pedir que lea letras o nmeros de una tarjeta sostenida a 35 cm de la cara, con el fin de evaluar la visin cercana. Cmo se representa o expresa el resultado? Sencillamente como una fraccin: el llamado Quebrado de Snellen. Por ser un quebrado, el nmero superior se refiere a la distancia entre el paciente y la tabla, la cual es generalmente es de 6 metros (20 pies en medida inglesa). El nmero inferior indica la distancia a la que una persona con vista normal podra leer la misma lnea que la

persona ley correctamente. Por ejemplo, 20/20 se considera visin normal; 20/40 indica que la lnea que el paciente ley correctamente a los 20 pies (6 metros) pudo ser leda por una persona con visin normal a los 40 pies (12 m) 20/20 es la visin NORMAL (el sujeto es emtrope: la imagen se forma normalmente sobre la retina)

Ejemplos:

Si la visin es 20/15 la visin es mejor que la normal. Si la visin es 20/100 la visin est disminuida, alterada.

Un poco de Biofsica! Las Dioptras. La longitud focal del cristalino (f), es una medida de su
poder de refraccin; por ser una lente, el cristalino puede refractar la luz. La unidad del poder de refraccin es la dioptra, definida como la inversa de la longitud focal (1/f) expresada en
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metros. Ejemplo: una lente con longitud focal de 0,5 metros, poseer un poder de refraccin de 2 dioptras (1/f = 1/0,5= 2). El poder de refraccin del cristalino es 12 dioptras.

Fig. No. 2 Carta de Snellen Procedimiento paso a paso: --Se le coloca al paciente sentado frente del cartn de Snellen a 6 metros de distancia. --El paciente se tiene que cubrir un ojo sin oprimirlo. --Instruir al paciente para que lea progresivamente hasta las letras ms pequeas y que llegue a no distinguirlas. --Anotar las lneas ms pequeas que pudo leer el paciente (20/20, 20/30, etc. Cuanto menor sea el valor de la fraccin ms grave ser la miopa) --Repetir con cada ojo. (Hay que realizar la prueba con rapidez, evitando que el paciente memorice la tabla.) Para nios pequeos y analfabetas, existen cartas de Snellen especiales basadas en figuras que ellos(as) pueden reconocer sin dificultad.
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La imagen visual, captada por los receptores retinianos transmite la informacin a travs del nervio ptico (derecho e izquierdo), que luego pasa al quiasma ptico (donde hay entrecruzamiento de la informacin visual). Las imgenes formadas el cuadrante temporal de la retina, se dirigen por la cintilla ptica ipsolateral (del mismo lado) hacia el cuerpo geniculado lateral del tlamo. Las imgenes formadas en el cuadrante nasal de la retina, atraviesan el quiasma para finalizar en el cuerpo geniculado contralateral. En el cuerpo geniculado lateral, todas las fibras de las cintillas pticas terminan y hacen sinapsis con las neuronas ah localizadas. Los axones de estas neuronas se dirigen hacia la corteza visual, donde hacen numerosas sinapsis a distintas profundidades.

3.2.- EXPLORACION DEL CAMPO VISUAL. LA CAMPIMETRIA:

La mejor definicin de campo visual nos la da el autor Robert Cubbidge: campo visual es todo el espacio que puede ver el ojo en un instante. El campo visual nos indica los lmites de la visin perifrica, es decir, el espacio en el cual puede ser visto un objeto mientras la mirada permanece fija en un determinado punto. Las dimensiones monoculares (un solo ojo) se extienden aproximadamente, hasta 600 a nivel superior, y hasta los 700 a nivel inferior. En el sentido horizontal se extiende, nasalmente hasta los 600 y en el sentido temporal hasta los 1000. Estos campos estn limitados por la anatoma facial del individuo, posicin del prpado, el peinado que utilice, la prominencia de las cejas y la nariz. Teniendo en cuenta los dos ojos (visin binocular), los dos campos visuales se solapan, lo que origina una visin estereoscpica de unos 1200 en la dimensin horizontal. La periferia temporal extrema del campo binocular se ve con un solo ojo (Cubbidge, R. 2006) (en: www. books.google.co.ve/)

Cmo se puede evaluar el campo visual de un individuo?

Mediante el empleo de la CAMPIMETRIA o PERIMETRIA. Es un examen del campo visual que emplea una pantalla tangente (es la que se emplea en el Laboratorio de Fisiologa). Se hace por separado para cada ojo. La misma determinacin del campo visual se hace con seales de distintos colores. Se comprobar que el campo visual para los colores es menor en relacin al blanco y negro. El campo visual para el amarillo y azul es mayor que para el rojo y el verde.
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Pasos a seguir: 1. Siente al paciente a 1 metro de la pantalla tangente. El ojo que va a ser evaluado debe estar alineado con el punto de fijacin central. Chequee regularmente que el paciente mantenga la fijacin. 2. El paciente debera usar su correccin habitual para lejos. Ocluya completamente el ojo que no va a ser evaluado.

ESBOCE EL CAMPO CENTRAL: 6. Mantngase a un lado de la pantalla, temporalmente al ojo evaluado del paciente. Comience fuera de la pantalla, mueva lentamente el objetivo sobre la pantalla a lo largo del meridiano horizontal. Cuando el paciente diga que el objetivo es visible, gire la varilla de modo que el objetivo se vuelva negro, y retrelo de la pantalla. Use movimientos suaves y lentos cuando maniobre la varilla y el disco del objetivo contra la pantalla. 7. Evale el campo visual nasal. Mueva el objetivo a lo largo de los meridianos nasales oblicuos que irradian desde la fijacin a intervalos de 30. 8. Mueva el objetivo a lo largo de los meridianos verticales, desde arriba hacia abajo. Evale el campo visual temporal. 9. Camine hacia el otro lado de la pantalla (el lado de la pantalla nasal al ojo evaluado). Mueva el objetivo a lo largo de los meridianos temporales de una manera similar a lo descrito antes. Hoy da, gracias a los adelantos tecnolgicos, se emplea por parte del Oftalmlogo la perimetra automatizada: el paciente debe sentarse frente a un domo cncavo (con soporte estabilizador) y fijar la vista en un objeto central. Un programa computarizado hace titilar pequeas luces en diferentes lugares de la superficie del domo y el paciente debe presionar un botn para indicar que detect las pequeas luces en su visin perifrica. Las respuestas del paciente se comparan con grupos de control de edades equivalentes para determinar la presencia de defectos en el campo visual.

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Fig. No. 8 Los Campos Visuales

Temporal

Campo Nasal

Temporal

Campo Visual Izquierdo

Campo Visual Derecho

Fig. No. 9 Campos Visuales Normales en el Ser Humano

Los resultados anormales pueden indicar la presencia de enfermedades del sistema nervioso central, tales como tumores que lesionan o comprimen las partes del cerebro que tienen que ver con la visin. Otras enfermedades que pueden afectar el campo visual del ojo son diabetes, hipertiroidismo, hipertensin arterial, enfermedades de la glndula pituitaria y esclerosis mltiple, entre otras.

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 ALTERACIONES QUE PUEDEN DETECTARSE EN LOS CAMPOS VISUALES: Los pequeos defectos en los campos visuales suelen denominarse ESCOTOMAS, y los defectos mayores suelen denominarse ANOPSIAS. Los escotomas son reas del campo visual en las que existe una disminucin parcial o total de la visin y que estn rodeados por reas de visin normal. Cuando la disminucin de la sensibilidad es total, es decir, que no se detecta ningn estmulo luminoso y por lo tanto, estamos en una zona de ceguera el defecto recibe el trmino de escotoma absoluto . Por el contrario, si son detectados estmulos luminosos de intensidad superior a la normal nos hallamos ante escotomas relativos.

Dentro de las anopsias se pueden encontrar: a.-Hemianopsias: Es la prdida absoluta o el dficit importante de la visin en la mitad del campo visual. Segn qu mitades del campo visual se hallen afectadas las podemos clasificar en: a.1.-Hemianopsia altitudinal: Es la prdida de la mitad superior o inferior del campo visual de manera que se aprecia en l un nivel horizontal que delimita el nivel de la lesin. Es tpica de las neuritis ptico-isqumicas. a.2.-Hemianopsia heternima: Prdida de las mitades nasales o temporales de cada ojo, segn sea una u otra la dividimos en: a.2.1.-Hemianopsia heternima binasal: Es el defecto campimtrico que afecta a la mitad nasal de ambos ojos. a.2.2.-Hemianopsia heternima bitemporal: Es el defecto campimtrico que afecta a la mitad temporal de ambos ojos. a.3.-Hemianopsia homnima: Defecto campimtrico en las mitades simtricas de ambos ojos. Se suele generalizar que los defectos homnimos independientemente de su extensin, son debidos a lesiones en la va ptica retroquiasmtica. A su vez la podemos dividir en: a.3.1.-Hemianopsia homnima derecha: son los casos en los que se afecta la mitad del campo
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visual derecho de ambos ojos, es decir: temporal del ojo derecho y la mitad nasal del ojo izquierdo. a.3.2.-Hemianopsia homnima Izquierda: En este caso la afectacin se encuentra en el hemicampo temporal del ojo izquierdo y en el nasal del ojo derecho. a.4.-Cuadrantanopsia: Es la prdida absoluta o dficit importante de la visin en un cuadrante del campo visual. De la misma manera que en las hemianopsias, las cuadrantanopsias se clasifican en temporales o nasales, superiores o inferiores dependiendo del cuadrante afectado.

3.3.-ESTUDIO DE LOS REFLEJOS OCULARES:

3.3.1.-Reflejo Fotomotor o pupilar directo: Se refiere a la contraccin (miosis) que presentan las pupilas cuando se iluminan. Se debe utilizar una linterna de mano para ello. Es conveniente que el haz de luz llegue desde el lado y no apuntando directamente al ojo. La va del reflejo fotomotor comienza en la retina, sigue por el nervio ptico prosigue por quiasma y cintillas pticas hasta el cuerpo geniculado externo, donde se separa de la va ptica dirigindose al tubrculo cuadrigmino anterior (ncleos pretectales), de donde salen los estmulos al centro o ncleo de Edinger Wesphal. Desde aqu, sigue la va efectora parasimptica haciendo sinapsis en el ganglio ciliar, hasta que llega al esfnter del iris.

3.3.2.-Reflejo Fotomotor consensual o indirecto: La respuesta constrictora pupilar a la entrada de luz en el ojo examinado (iluminado) recibe el nombre de reflejo fotomotor directo, reaccionando de la misma forma el ojo contralateral en condiciones normales, en cuyo caso hablamos de reflejo fotomotor consensual. La estimulacin luminosa de una retina provoca una contraccin de la pupila en el ojo contralateral y ello es que, si recordamos que parte de las fibras de la va refleja se decusan con la va ptica a nivel del quiasma ptico, tendremos la explicacin del reflejo consensual.

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3.3.3.-Reflejo de Acomodacin: El reflejo de acomodacin es la contraccin de la pupila (miosis) al enfocar la vista en algn objeto distante. Ahora, al dirigir la visin desde un punto lejano a un objeto cercano, la contraccin de los msculos rectos internos hace converger los ejes oculares, se contraen los msculos ciliares y el cristalino se engruesa para aumentar su poder refractario, y la pupila se contrae para concentrar las ondas luminosas en la porcin ms gruesa del cristalino.

Cmo se evala? Se coloca un dedo a unos 50-60 cm del paciente y se le pide que se fije en l. Al acercarlo a la cara se produce contraccin de la pupila, que se acompaa de convergencia de los ojos y acomodacin del cristalino. El arco reflejo pasa por el nervio ptico, cuerpo geniculado lateral, corteza visual primaria, proyecciones corticotectales, colculo superior, ncleo de EdingerWestphal, nervio oculomotor y ganglio ciliar.

3.4-DETERMINACION DEL PUNTO CIEGO DEL OJO: En una tarjeta blanca de unos 8 x 12 cm. dibuje una (X) de un centmetro de longitud; a 6 cm. a la izquierda de la equis dibuje un crculo relleno de unos 2 cm. de dimetro. Al mirar la cruz con el ojo derecho (manteniendo cerrado el ojo izquierdo) y sosteniendo la tarjeta con su brazo extendido (unos 30 cm), acerque lentamente la tarjeta, y habr una distancia (que debe anotar) en la que ya no notar el crculo negro. Es el punto ciego. A qu porcin de la retina corresponde el punto ciego? Haga la maniobra ahora con el ojo izquierdo empleando otro cartn.

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Bibliografa Consultada:

.-Fisiologa. Linda Constanzo. 1999. Editorial McGraw-Hill Interamericana. .-Tratado de Fisiologa Mdica. Arthur Guyton. 2006. Elsevier-Saunders. .-Exploracin Clnica Prctica. Noguer Molins, L.; Balcells, A. 1980. .-Semiotecnia y Fisiopatologa. Mazzei, E.; Rozman, C. 1978. El Ateneo.

CONCLUSIONES DE LA ACTIVIDAD PRCTICA:

A continuacin, y con sus propias palabras proceda a elaborar las principales conclusiones obtenidas de la experiencia efectuada en el laboratorio. Esta actividad la puede realizar posterior a la prctica. Reflexione y piense sobre los datos obtenidos y la importancia de las exploraciones efectuadas. Para su futuro profesional: Cul sera la importancia de tales maniobras?, Qu lograra con ellas?

Guin elaborado-transcrito-revisado por los Profesores Nelson Loureiro y Gregorio Tiskow. Enero-2010
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GUIA DE AUTOEVALUACION POST-LABORATORIO 1.-Defina agudeza visual. 2.-Cmo explora Ud. en un paciente la agudeza visual? 3.-Qu es la campimetra? Cul es su utilidad? 4.-Qu es el quebrado de Snellen? Sus componentes, Qu representan? 5.-Qu representa una dioptra? 6.-Mencione al menos, tres anormalidades en la refraccin del ojo. 7.-Haz en tu cuaderno un esquema de las vas visuales. Seale sus partes. 8.-Qu entiende por punto o mancha ciega? 9.-Cmo estn divididos los campos visuales? 10.-Qu son las hemianopsias? 11.-Cules reflejos fotomotores explora Ud. en la prctica clnica? 12.-Cules son los pares craneales que inervan la musculatura del ojo? 13.-Dnde se localiza la corteza visual primaria? 14.-Defina qu es un escotoma? 15.-Describa el reflejo de acomodacin ocular. 16.-Cmo explora Ud. la pupila en la prctica. 17.-Cmo se llama la anomala en el campo visual cuando hay lesin del quiasma ptico? 18.-Mencione los 6 msculos responsables del movimiento de los ojos.

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PRCTICA No.

BASES ELECTRICAS DE LA ACTIVIDAD CEREBRAL: ELECTROENCEFALOGRAFA

PRESENTACIN El presente guin constituye la tercera prctica de la Unidad II (Neurofisiologa) de la asignatura Fisiologa I del Programa de Medicina. Por medio de esta actividad el estudiante al concluir la misma conocer la metodologa para el registro de la actividad elctrica cerebral, sus mecanismos de generacin e identificar los ritmos cerebrales normales. INTRODUCCION: La Electroencefalografa, que es una tcnica de diagnstico no invasiva, es el registro y evaluacin de los potenciales elctricos generados por el cerebro y obtenidos por medio de electrodos situados sobre la superficie del cuero cabelludo. El electroencefalograma (EEG) es el registro de la actividad elctrica de las neuronas piramidales de la corteza cerebral. Dicho registro posee formas muy complejas que varan mucho con la colocacin y ubicacin de los electrodos y, entre los distintos individuos. Esto es debido al gran nmero de interconexiones que presentan las neuronas y por la estructura no uniforme del encfalo. La electroencefalografa se efectu por vez primera en animales despiertos en el siglo XIX por el fisilogo Richard Caton en 1875; pero fue en 1929 cuando el Psiquiatra alemn Hans Berger ide un mtodo que prometa una investigacin de la actividad elctrica cerebral y acu el trmino de electroencefalograma, descubriendo lo que se conoci como ritmo de Berger. Sin embargo, debido a su falta de conocimientos tcnicos, no fue hasta algunos aos despus cuando se reconoci su importancia. Mientras tanto, las posibilidades de la electroencefalografa clnica se discutan, por primera vez, en una reunin en el Laboratorio Central de Patologa del Hospital Maudsley de Londres, en 1929.
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El cerebro es la parte ms evolucionada del encfalo y en l estn localizadas las funciones conscientes del sistema nervioso. Posee dos partes llamadas hemisferios que se relacionan con las partes opuestas del cuerpo. La subdivisin ms importante del encfalo es la corteza cerebral que contiene unos 9 de los 12 billones de neuronas que hay aproximadamente en el cerebro humano. La corteza es en realidad una capa ms bien fina de neuronas situada en la periferia del cerebro que contiene muchas fisuras o pliegues penetrantes para dar una mayor rea superficial. Algunas de las fisuras ms profundas, llamadas tambin surcos se utilizan como lmites para dividir la corteza en ciertos lbulos.

Fig. No. 1 Corteza Cerebral y sus divisiones

El tejido nervioso presenta como una de sus funciones bsicas la capacidad de generar potenciales elctricos, potenciales que son la base de la excitabilidad del organismo. Para comprender la forma en que se generan estos potenciales es preciso un conocimiento de la
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estructura y las conexiones de aquellas partes del cerebro que los originan. En sentido amplio, todo el sistema nervioso posee capacidad electrognica. Sin embargo, para los propsitos del EEG bastar con considerar la corteza cerebral y las regiones directamente relacionadas con ella1. El EEG puede registrar las diferencias de potencial que se producen entre 2 electrodos colocados sobre la piel del cuero cabelludo, y en este caso se habla de registro bipolar, o puede ser el resultado del registro de la diferencia de potencial entre un electrodo colocado en la superficie del cuero cabelludo y un electrodo neutro colocado sobre otra regin del cuerpo (por ejemplo, las orejas), tratndose en este caso de un registro monopolar.

1.- OBJETIVOS DE LA PRCTICA: 1.- Identificar los conceptos biofsicos elementales para registro de electroencefalogramas. 2.- Describir las tcnicas para el registro del electroencefalograma. 3.- Identificar en un electroencefalograma las distintas ondas cerebrales. 4.- Describir los diferentes montajes y programas utilizados. 5.- Identificar las caractersticas de los distintos ritmos cerebrales.

2.- MATERIAL REQUERIDO: Registros electro-encefalogrficos con ritmos basales normales.

3.- ACTIVIDADES A REALIZAR EN EL LABORATORIO:

3.1- Componentes de un Electro-encefalografo: El electroencefalgrafo es el aparato utilizado para registrar la actividad elctrica cortical. Consta de: Electrodos de registro (Electrodos de Superficie) de metal de ptima conduccin (plata clorurada, oro o cinc), que se colocan sobre el cuero cabelludo perfectamente limpio de grasa que acta como aislante, (electrodos activos en nmero de 19) y en los lbulos de
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las orejas (electrodos neutros en nmero de 2), para un total de 21 electrodos. Para mejorar la conduccin se le aplica una pasta electroltica de alto ndice de conduccin. Estos electrodos interconectados registran variaciones de potencial entre 2 electrodos activos del cuero cabelludo (montaje bipolar) o entre uno activo del cuero cabelludo y uno neutro en la oreja (montaje referencial o monopolar) Como regla general, los electrodos del lado izquierdo llevan numeracin impar, mientras que los del lado derecho la llevan par. Adems, como ya se dijo, los electrodos de la lnea media reciben el subndice z (por zero, cero en ingls) y los de las orejas se identifican con la letra A

Sistema Amplificador: Amplifica la actividad cortical que es normalmente en microvoltios (V), de tal manera que ste aparezca como un grafoelemento en el que una altura de 7 mm = 50 V (puede haber otras variaciones)

Sistema Inscriptor (plumillas) para electroencefalografa convencional o analgica, y para EEG digital, el sistema inscriptor es el PC que graba el registro para su posterior anlisis. Este sistema traduce la actividad elctrica en elementos grficos sobre una base milimetrada, dibujando ondas positivas (inscripcin hacia abajo), y ondas negativas (inscripcin hacia arriba). La velocidad de desplazamiento del sistema inscriptor generalmente circula a una velocidad de 30 mm/seg.

3.2. Tcnica de Registro: Previa colocacin de los 20 electrodos siguiendo el sistema Internacional 10-203 (Recomendacin de la Federacin Internacional de Sociedades de Neurofisiologa y Electroencefalografa)4, el registro se realiza con el sujeto en reposo, generalmente acostado con los ojos cerrados y se los hace abrir para ver la reaccin de bloqueo (Reaccin de Bloqueo
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La denominacin de esta convencin deriva de la fraccin del dimetro ceflico medido en centmetros donde se colocan los electrodos de forma equidistante, esto es: 10% y 20% de la distancia medida.
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Este sistema toma como base 3 puntos clave de la cabeza: El nasin, punto ubicado en la base de la nariz sobre la sutura fronto-nasal. El inin, situado en la parte posterior de la cabeza y que corresponde a la protuberancia occipital. Los puntos interauriculares, localizados al comienzo del hueso cigomtico delante del trago.

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de Berger) del ritmo alfa. Existen mltiples montajes5 para interconectar los electrodos (combinar derivaciones), pero los que se estudiarn en la prctica son dos: Uno monopolar o referencial (figura No. 3) y otro bipolar (figura No. 4). Se denomina Derivacin a la combinacin de dos electrodos. En la derivacin monopolar se combina un electrodo activo y uno de referencia (ejemplo, uno en la superficie craneal y otro de referencia en la oreja del mismo lado). En la bipolar se combinan dos electrodos activos cercanos entre s. El nmero de derivaciones que puedan registrarse simultneamente depende del nmero de canales (amplificadores) que tenga el sistema de registro, por ejemplo 8, 16, 32, 64, etc. Los electrodos de referencia que se colocan en el lbulo de la oreja para un registro monopolar se denominan (A1) el izquierdo y (A2) el derecho (A: por auricular) Durante el registro observarn que al paciente se le hace inspirar y espirar por la boca durante 3 minutos, esto se emplea como mtodo de activacin cortical (existen otros mtodos de activacin como lo son el sueo, la estimulacin luminosa intermitente (ELI), estmulos auditivos y estmulos tctiles) Para iniciar el registro el sujeto de estudio deber estar cmodamente acostado, relajado y quieto. Se recomienda mantener ligeramente abierta la boca durante el registro para relajar los msculos temporales y evitar la interferencia por actividad muscular. De la misma manera la apertura y cierre de los ojos se deber efectuar de manera suave.

Es importante sealar que en ocasiones se observan grafoelementos en el trazado que no corresponden a actividad electroencefalogrfica y que se denominan "artefactos" y los podemos considerar de 2 tipos:

1) Artefactos biolgicos: Parpadeo, actividad muscular, sudoracin, marcapasos cardiaco, temblor. 2) Artefactos originados por el sistema: inadecuada conexin a tierra, lnea base defectuosa, movimientos del cable, electrodos defectuosos o mal colocados.

Se denomina montaje a la combinacin de derivaciones que se registran simultneamente pudiendo ser combinaciones de derivaciones en sentido longitudinal, transversal o circunferencial, esto depende del nmero de canales del equipo utilizado y de las preferencias del electrofisilogo o el neurlogo.

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3.3.- Anlisis del Registro: Un registro de electroencefalografa est compuesto por varios parmetros, entre los que se pueden encontrar: Forma (morfologa) de la onda. Por ejemplo, se pueden presentar ondas en arcadas, puntas, ondas de frente abrupto, entre otros. Frecuencia. La actividad del electro-encefalograma est compuesta por diferentes ondas que se clasifican en bandas de frecuencia. Es el nmero de ondas cerebrales que ocurren en la unidad de tiempo (un segundo) Amplitud. Es la medida de la distancia vertical de la onda y se expresa en V. La diferencia entre los valores mximos y mnimos determina la amplitud. Simetra. La simetra se refiere a que la seal del electro-encefalograma es igual en amplitud, morfologa y frecuencia en dos zonas homlogas. Distribucin. Se refiere a la ocurrencia de la actividad elctrica registrada por los electrodos colocados en diferentes partes del crneo. Los patrones del electro-encefalograma pueden aparecer en una gran rea, a ambos lados del crneo, sobre un solo lado o en una pequea rea.

Ondas del electroencefalograma:

Poseen amplitudes que van desde los 10 mV en registros sobre el crtex a 100 mV en la superficie del cuero cabelludo. Las frecuencias de estas ondas se mueven entre 0,5 y 100 Hz y dependen mucho del grado de actividad del crtex cerebral. Los diferentes ritmos que pueden distinguirse en un electroencefalograma son:

Ritmo Alfa: Se registran en sujetos normales despiertos, en reposo y con los ojos cerrados
(reposo fsico y mental), localizndose sobre todo en las regiones posteriores del cerebro (zona occipital); En los infantes se puede identificar desde los 6 aos, pero se estabiliza alrededor de los 10 aos. En algunas ocasiones se presenta en rfagas, y normalmente es bloqueado por la apertura palpebral. Su amplitud (voltaje) est comprendida entre 50 y 100 V. La frecuencia oscila entre 8 13 Hz.

Ritmo Beta:

Se registran fundamentalmente en las regiones parietal y frontal. Son de menor amplitud o voltaje. La frecuencia es mayor de 13 Hz. Amplitud de 5 a 50 V. Es caracterstica del estado de vigilia y atencin.

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Ritmo Theta: Estas ondas poseen frecuencias entre 4 y 7 Hz y se presentan en la infancia

aunque tambin pueden presentarlas los adultos en perodos de stress emocional y frustracin. Prominente durante el sueo MOR (movimientos oculares rpidos). Se localizan en las zonas parietal y temporal. Amplitud entre 75 y 125 V.

Ritmo Delta: Son ondas grandes y lentas; se presentan durante el sueo profundo y en
enfermedades orgnicas cerebrales graves. En los adultos su aparicin en estado de vigilia es patolgica, pero puede encontrarse en nios y su proporcin indica el grado de madurez electrocortical. Frecuencia de 0,5 3.5 Hz. (Todo lo que se ubica por debajo de 4 Hz se considera ritmo Delta). Amplitud de unos 200 V.

La ausencia de actividad elctrica cerebral (electro-encefalograma isoelctrico), puede definirse como MUERTE CEREBRAL (utilidad o aplicacin mdico-legal)

Alfa

Beta

Theta

Delta

Ojos abiertos

Ojos cerrados

Fig. No. 2 Ritmos normales en un electroencefalograma

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Cuando el ritmo predominante es el alfa, y el sujeto abre sus ojos, dicho patrn es sustituido por una actividad rpida e irregular de bajo voltaje. A este fenmeno se le denomina Reaccin de Bloqueo de Berger (ver Fig. No. 2) Ya se ha mencionado cmo la actividad cerebral durante la vigilia modifica sustancialmente el electro-encefalograma. Algo parecido ocurre durante el sueo, en el que tienen lugar de forma cclica cambios muy notables, pudiendo ser cualquier diferencia indicativa de una patologa cerebral. En la figura No. 3 se distinguen distintas fases del sueo que corresponden sucesivamente a los estados de alerta o excitacin, de relajacin, de somnolencia, de sueo y, finalmente, de sueo profundo. Obsrvese que la frecuencia de las ondas del EEG va disminuyendo progresivamente.

Alerta

Relajacin

Somnolencia

Sueo ligero

Sueo profundo

Fig. No.3 Electroencefalograma durante distintas fases del sueo normal

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Montajes

Sensibilidad: 7 V = 1 mm

Velocidad del papel: 30 mm = 1 segundo Puede ser modificada a 15 mm/seg, 40 mm/seg, dependiendo del equipo

Figura No. 4 Montaje de electrodos Monopolares o Referenciales

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Figura No. 5: Montaje de electrodos bipolares o parasagitales.

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Bibliografa recomendada: 1. Frumento Antonio. Biofsica. Edicin II. 1975. 2. Guyton & Hall. Tratado de Fisiologa Mdica. Edicin 11 en espaol. 2006 3. Fernndez Nancy. Manual de Laboratorio. 1999. Mc Graw Hill Interamericana 4. Mountcastle Vernon. Medical Physiology. Lippincott editores. 1979.

Conclusiones: Una vez finalizada la actividad prctica, proceda a emitir sus conclusiones, haciendo nfasis en la importancia de los hallazgos obtenidos y sus posibles aplicaciones en la prctica mdica. Breve Gua de Autoevaluacin: 1.-Defina actividad elctrica cerebral 2.-En un registro electroencefalogrfico, identificar los principales ritmos cerebrales 3.-Mencione y describa los 2 tipos de registros electro-encefalogrficos. 4.-Qu entiende Ud. por reaccin de bloqueo de Berger? 5.-Cmo se modifica la actividad cerebral dependiendo de la fase de sueo y del estadio en que se encuentre el individuo? 6.-Describa la tcnica para realizar un electroencefalograma 7.-Realice un dibujo donde ubique topogrficamente los electrodos segn el Sistema Internacional de Registro 10-20. 8.-Examine los ritmos theta y delta. Cundo los ojos estn abiertos hay un aumento en la activida theta y delta? Explique su observacin. 9.- Qu podra explicar la diferencia de amplitud de ondas registradas desde un sujeto analizado solo en un cuarto oscuro, y sujetos analizados en un laboratorio lleno de estudiantes hablando y arrastrando los bancos de sentarse? 10.-Examine las formas de las ondas alfa para los cambios entre los estados ojos cerrados y ojos abiertos. Cundo los ojos estn abiertos ocurre desincronizacin del ritmo alfa?

Guin revisado por la Dra. Liseth Guirola. Mdico Neurpediatra. Prof. Gentica Mdica.UCLA.

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PRCTICA No.

DETERMINACION DE LA SEDIMENTACIN GLOBULAR, HEMATOCRITO Y VALORACION DE LA HEMOSTASIA

PRESENTACIN La sangre es un tejido lquido complejo de color rojo la cual se encarga del transporte de gases tales como O2 y CO2 a travs de todo el cuerpo, as como tambin del transporte de hormonas, nutrientes y sustancias de desecho. Por otra parte, otros fenmenos pueden ser atribuidos al tejido sanguneo entre los que se pueden citar la termorregulacin, homeostasis del agua, balance de electrolitos, la inmunidad a agentes extraos o infecciosos y la hemostasia. Esta prctica, la ltima de la asignatura Fisiologa I, pretende ser una actividad en la cual el estudiante pueda verificar mediante la experimentacin, el mtodo por el cual se determina la velocidad de sedimentacin globular y el valor del hematocrito, y la existencia de fenmenos fisiolgicos intrnsecos al tejido sanguneo que tienen relacin con la coagulacin (hemostasia) y algunos factores fisicoqumicos que la alteran.

INTRODUCCION No es complicado determinar en un laboratorio de fisiologa, ciertos parmetros hematolgicos que sirven para obtener un perfil hematimtrico de un paciente. Es importante conocer la fundamentacin de cada mtodo con el que se trabaja, lo que permite tener bases slidas para interpretar cualquier resultado y orientar algn diagnstico.

Entre los varios parmetros hematolgicos que se pueden medir en el laboratorio, dos son muy interesantes por sus basamentos biofsicos, y son los que se van a estudiar en la actividad de hoy: la determinacin de la Velocidad de Sedimentacin Globular (VSG) y el Valor Hematcrito (Hto). La diferencia de gravedad especfica entre los eritrocitos y el plasma sanguneo ocasiona la precipitacin de los primeros en el fondo de un tubo que contiene
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sangre anticoagulada con una velocidad que es medida en determinada cantidad de tiempo es la Velocidad de Sedimentacin Globular (VSG). La eritrosedimentacin es una prueba que detecta reactantes de fase aguda: desde el punto de vista clnico es muy inespecfica. Se encuentra elevada en infecciones, enfermedades inflamatorias, reacciones autoinmunes y enfermedades malignas, especialmente las discrasias de clulas plasmticas. La eritrosedimentacin es particularmente til en las enfermedades reumatolgicas, especialmente en artritis reumatoidea, en la evaluacin de artritis temporal y en la polimialgia reumtica; pueden haber variaciones fisiolgicas que se deben tener en cuenta ya que la VSG se puede acelerar en caso de nios y ancianos, en la mujer se aumenta antes y despus de la menstruacin, durante el embarazo y puede estar elevada uno o dos meses despus del parto, la toma de anticonceptivos orales puede tambin acelerar la velocidad.

El valor Hematocrito (Hto) mide la relacin porcentual ocupada por eritrocitos respecto del volumen total de una muestra de sangre, o expresado de otra forma, es la relacin entre el volumen de eritrocitos y el de la sangre total. Se expresa como porcentaje (%) Se encuentra aumentado en: quemaduras, infecciones, intoxicaciones, policitemia, insuficiencia respiratoria crnica. Se encuentra disminuido en: concentraciones bajas de volumen globular, anemias crnicas, cirrosis, insuficiencias cardacas, ciertas hiperproteinemias.

Por otra parte, los fenmenos de la hemostasia son los que permiten evitar o detener el sangrado en los vasos sanguneos que en un momento dado pueden ser lesionados. La hemorragia se produce cuando la integridad de los vasos sanguneos se altera, y es detenida cuando se activan o participan 3 factores:

Vascular Plaquetario Activacin de la cascada de la coagulacin

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La reaccin vascular consiste en un proceso de vasoconstriccin local, que ocurre de inmediato, una vez lesionado el vaso. Sucede por la libracin de agentes vasoconstrictores locales, como la serotonina.

La respuesta plaquetaria, que ocurre en forma simultnea a la anterior, sucede por fases, dndose en primer lugar la adhesin plaquetaria por la exposicin de la colgena vascular, luego la activacin de las plaquetas y por ltimo, la agregacin de estos elementos formes, formndose el tapn plaquetario o tapn primario, el cual suele ser laxo los primeros minutos.

La participacin de una variedad de protenas circulantes en el plasma sanguneo, conduce a la activacin de la cascada de la coagulacin, la cual consta de varias etapas: la primera o fase tromboplstica tarda de 3 a 10 minutos en producirse; la segunda, llamada la va comn tarda de 12 a 15 segundos, y la tercera, que es la conversin del fibringeno en fibrina, de 1 a 2 segundos.6

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Tomado de: Fernndez Nancy. Manual de Laboratorio de Fisiologa. 1999. McGraw-Hill Interamericana.

1.- OBJETIVOS DE LA PRCTICA: - Describir el mtodo y el procedimiento necesario para determinar el valor de Velocidad de Sedimentacin Globular del Eritrocito (VSG) - Describir el mtodo de determinacin del Valor Hematocrito (Hto) - Identificar varios factores fsicos y qumicos que pueden alterar el proceso de coagulacin sangunea. - Citar ciertos ndices que permiten valorar la hemostasia sangunea.

2.- MATERIAL NECESARIO: Guantes desechables. Tubos de ensayo de vidrios de 75 x 10 mm. Astillas de madera o palillos. Alcohol etlico. Algodn. Perlas de vidrio. Papel de filtro. Envase con trozos de hielo. Heparina sdica. Gradillas para tubos de ensayo. Jeringas descartables y estriles de 10cc. Torniquetes. Cronmetros. Algodonera. Pipetas Pasteur con bulbos de goma. Pipetas volumtricas de vidrio. Succionador para pipetas. Beakers de 25ml. Bao de mara regulado a 40C. Silicn en spray. Agua destilada. Lancetas estriles. Tubos de Westergreen. Tubos de Wintrobe. Centrfuga clnica. Marcadores.

3.- TOMA DE MUESTRAS DE SANGRE: 3.1. Sangre Venosa: referirse al anexo No. 1

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PARTE I ESTUDIO DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR DETERMINACION DEL VALOR HEMATOCRITO

1.a.- ESTUDIO DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (V.S.G) Recuerda, qu es la Velocidad de Sedimentacin Globular (VSG) ? Es la velocidad a la que precipitan (sedimentan) los glbulos rojos en un perodo de tiempo de 1 hora (60 minutos). Se mide en mm/hora. Para medirlo, se requiere de un tubo de ensayo especial llamado tubo de Westergreen. Qu se necesita para medirlo? En primer lugar, tomar una muestra de sangre venosa de uno de tus compaer@s quien voluntariamente deber acceder a donarla. En segundo lugar emplear la tcnica o mtodo de Westergreen. Procedimiento Experimental: Verter con mucho cuidado mediante una pipeta Pasteur de punta larga en el tubo de Westergreen, una muestra de sangre con heparina (anticoagulante). Dejarla deslizar muy lentamente sobre los bordes del tubo. El tubo de Westergreen es un tubo cilndrico de vidrio con una graduacin que va del 0 a 100 mm ledo de arriba hacia abajo, con separacin de 1 mm entre cada graduacin. Sus extremos son abiertos. Llenar con sangre la pipeta hasta la marca cero y luego colocarla en una gradilla especial que cierra ambos extremos del tubo, mediante unos rodetes de goma. Luego de transcurrida una hora, leer en milmetros la columna de plasma que se forma encima de la masa de eritrocitos sedimentados. Valores de referencia (valores basales o normales): En adultos sanos: Valores promedio: Hombres: 0 mm a 15 mm /1 hora Mujeres: 0 mm a 20 mm/ 1 hora Los valores pueden variar con el sexo, la edad y el mtodo empleado.

2.a.- DETERMINACION DEL VALOR HEMATOCRITO (Hto) Recuerdas qu es el valor Hematocrito o volumen globular? Muy sencillo; es la relacin entre el volumen de eritrocitos (masa de glbulos rojos) y el de la sangre total. Se expresa como porcentaje (%). Para su determinacin se emplea el mtodo de Wintrobe.
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Procedimiento Experimental: Con una pipeta Pasteur tome con cuidado una muestra de sangre heparinizada recin extrada, y proceda a llenar el tubo de Wintrobe con delicadeza para no provocar la presencia de espuma, comenzando desde el fondo hasta la marca superior que indica 10 del lado derecho. Proceda a centrifugar a 3000 rpm durante media hora. Leer ahora directamente en el tubo graduado y expresar los resultados en porcentaje.

Valores de referencia (valores basales o normales):

En adultos sanos: Valores promedio: Hombres: Mujeres: 45 % a 54 % 36 % a 47 %

Los valores pueden variar con el sexo, la edad y el mtodo empleado (ejemplo el uso del mtodo del micro-hematocrito)

ANOTA LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN LA PRACTICA (PARTE I)

TABLA No. 1 Parmetro evaluado Velocidad Sedimentacin Globular (VSG) Valor Hematocrito (Hto) Valor obtenido Unidades

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PARTE II ESTUDIO DE LA COAGULACION SANGUINEA

2.1- Algunos factores que pueden alterar el tiempo de coagulacin:

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL: Para el estudio de ciertos factores que pueden alterar el proceso normal de la coagulacin sangunea, se requerir una muestra de sangre NO heparinizada de un@ de l@s estudiantes del grupo de prcticas (aproximadamente unos 8 cc). Ver Anexo No. 1 Antes de recoger la muestra, se dividir el trabajo en la siguiente forma: se seleccionar a un(a) alumn@ que se encargar de recibir un tubo de ensayo marcado para cada experimento y del cual ser responsable en cuanto a la medicin del tiempo de coagulacin (los tubos se hallarn numerados del 1 al 7) Al obtener la muestra (recuerda que no est heparinizada) cada alumno (a) recibir rpidamente 1 ml. de la muestra de sangre en el tubo de ensayo del cual es responsable. Cuidar el respectivo tubo. Experiencia No. 1: Determinacin del tiempo de coagulacin. Efecto de la agitacin. El tubo marcado con el No. 1 se mover (agitar) con movimientos suaves de manera continua. Cada 30 segundos se deber revisar el menisco de la muestra de sangre en el tubo. Cuando exista inmovilidad del menisco durante la operacin de movimiento suave del tubo, ello indicar que la sangre ha coagulado. Anota el tiempo transcurrido en la Tabla No. 2. Ese tiempo ser el tiempo de coagulacin del tubo No.1 El tubo No. 2, una vez recibida la muestra de sangre, deber ser colocado en una gradilla y dejado en reposo hasta que el tubo No. 1 haya coagulado. Repite ahora las mismas operaciones que hiciste en el tubo No. 1. Anota el tiempo de coagulacin. Experiencia No. 2: Efecto de la heparina sdica. El tubo No. 3 contendr 0,2 ml de una solucin de heparina sdica y al cual se le colocar 1 ml de sangre. Observe los resultados y anote. Experiencia No. 3: Efecto de la temperatura. .-Efecto del fro: El tubo No. 4 ser aquel el cual estar colocado en un beaker con hielo (0-2C). Recibida la muestra de sangre sumerja de inmediato el tubo en hielo. Cada 30 segundos este pendiente de la movilidad o no del menisco. Observe y anote los resultados.
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.-Efecto del calor: El tubo No. 5 ser aquel que una vez recibida la muestra de sangre, deber ser sumergido en una bao de incubacin caliente (40-42C). Cada 30 segundos este pendiente de la movilidad o no del menisco. Observe y anote los resultados. Experiencia No. 4: Efecto de la superficie de contacto. .-Efecto del silicn aplicado a la superficie interna del tubo: El tubo No. 6 ser aquel que previamente el tcnico de laboratorio ha impregnado de silicn su superficie interna. Observe el menisco cada 30 segundos. Discuta los resultados. .-Efecto de la colocacin de perlitas de vidrio en el interior del tubo: El tubo No. 7 ser aquel que el tcnico de laboratorio le ha colocado en su interior una cantidad de perlitas de vidrio, que ocupen un volumen aproximado de 0,25 ml.(ello permitir aumentar la superficie de contacto) Al ser colocada la muestra de sangre, cada 30 segundos observe el menisco y anote los resultados.

TABLA No. 2 Tiempos de Coagulacin de las Experiencias Observadas Tubo con la experiencia observada 1 (Movilidad) 2 (Reposo) 3 (+ Heparina) 4 (en fro) 5 (en calor) 6 (+ silicn) 7 (+ perlas de vidrio) Recuerda que el Tiempo normal de Coagulacin en un sujeto sano oscila en promedio entre 1 a 10 minutos. 2.2.- Determinacin del Tiempo de Sangra (mtodo de Duke): Limpie con alcohol el lbulo de la oreja de un(a) voluntaria(o). Con una lanceta estril puncione el centro del lbulo de la oreja y deje que la sangre fluya sin hacer presin en la zona. Con un papel filtro, toque levemente la zona punzada cada medio minuto hasta que deje de observar manchas de sangre en el papel filtro. Anote el tiempo de sangra y exprselo en minutos. Recuerda que el Tiempo de Sangra oscila en promedio en un sujeto sano entre 1 y 6 minutos. Permite evaluar la fase vascular y la fase plaquetaria de la hemostasia sangunea.
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Tiempo de coagulacin (min)

Tiempo de Sangra obtenido: ___________________________ (min)

Factores que se oponen a la coagulacin sangunea:

En los vasos sanguneos intactos, la cubierta endotelial normal forma una superficie lisa en la que las plaquetas no pueden adherirse. As no hay liberacin de los factores plaquetarios, y no se desencadena el mecanismo de coagulacin de la sangre en los vasos sanguneos normales. Adems la sangre contiene sustancias llamadas antitrombinas, que inactivan a la trombina, y por lo tanto el fibringeno no puede convertirse en fibrina. La heparina es un constituyente normal de la sangre que acta como antitrombina. Su concentracin normal en sangre es muy baja. Las inyecciones de heparina se usan para prevenir la formacin de cogulos en los vasos. La cumarina (otro tipo de anticoagulante) altera la utilizacin heptica de la vitamina K, por lo tanto de manera indirecta, retrasa la coagulacin.

Factores que aceleran la coagulacin

Un sitio de lesin en el endotelio vascular y la lentitud excesiva en la corriente circulatoria, facilitan la formacin de trombos. La aterosclerosis causa irregularidades en sitios endoteliales y aumenta la tendencia a la trombosis. La inmovilidad causa trombosis porque se enlentece el flujo sanguneo. Una vez que se ha comenzado a formar, el cogulo tiende a crecer. Las plaquetas atrapadas en la red de fibrina, se rompen y liberan ms factores de la coagulacin.

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 Disolucin del cogulo

La fibrinlisis es el mecanismo fisiolgico que causa disolucin de los cogulos. De manera ininterrumpida actan los dos fenmenos antagnicos de formacin de cogulos y fibrinlisis. La sangre posee una enzima, la fibrinolisina, que cataliza la hidrlisis de la fibrina, lo cual produce disolucin del cogulo. Hay otros factores que participan en esta disolucin. 2.3.- Prueba de Retraccin del Cogulo: Esta prueba constituye una medicin indirecta que se utiliza para confirmar algn problema plaquetario, como una trombocitopenia. nicamente se deja coagular la sangre en un tubo de ensayo sin anticoagulante, y se coloca en un bao mara a 37 C hasta observar que se efecte la retraccin del cogulo. Se basa en el hecho de que la sangre total que coagula normalmente, se retracte de las paredes de su recipiente, con lo que se separa el suero transparente y el cogulo. Las plaquetas son muy importantes en el mecanismo de la retraccin del cogulo, as que esta reaccin se altera cuando las plaquetas disminuyen o funcionan de manera anormal. Adems, esta reaccin tambin depende del contenido de fibringeno del plasma y de la relacin entre el volumen plasmtico y eritrocitos. Mtodo: Muestra: sangre entera no anticoagulada. Valor de referencia: normalmente la retraccin del cogulo comienza a la hora (60 min) y se completa dentro de las 24 horas. Fundamento: cuando la cascada de coagulacin se completa, se formara un cogulo. La trombina acta sobre el factor XIII, el cual causa que los filamentos se contraigan. La capacidad del cogulo para contraerse (retraerse) depende de la existencia de un nmero adecuado de plaquetas y de la accin de la trombina. Se piensa que las plaquetas pueden proporcionar la energa necesaria a travs del ATP. Los filamentos de fibrina del cogulo se unen a los bordes y la retraccin es esencial para el proceso de la hemostasia. Por lo general, el cogulo disminuye a la mitad de su tamao original en una hora, el fibringeno sin suero se expulsa y es visible un margen definido entre el cogulo, el suero y la pared del tubo de ensayo. El cogulo resultante, de ser normal, es mucho ms firme que el original.
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Significado fisiolgico: el proceso de retraccin del cogulo conduce a la consolidacin de un cogulo hemosttico o trombo. La retraccin ocurre por la interaccin entre los pseudpos de las plaquetas y las hebras de fibrina. Esto ocurre dentro de los 60 minutos y el cogulo ocupa el 50% del volumen total de sangre. La retraccin del cogulo resulta en una masa estabilizada de plaquetas y de fibrina que cierra firmemente el vaso lesionado para prevenir prdidas de sangre importantes. La retraccin del cogulo esta reducida en la trombocitopenia, enfermedad de von Willebrand cuando las plaquetas son de mala calidad, y en las alteraciones causadas por eritrocitos. La retraccin del cogulo aumenta en la anemia e hipofibrinogenemia como resultado de la formacin del cogulo pequeo al aumentar el volumen plasmtico. Utilidad clnica:

Evaluar la funcin plaquetaria y la estructura de la fibrina en inducir la retraccin del cogulo.

BIBLIOGRAFA CONSULTADA: .-Fisiologa. Linda Constanzo. 1999. Editorial McGraw-Hill Interamericana. .-Tratado de Fisiologa Mdica. Arthur Guyton. 2006. Editorial Elsevier-Saunders. .-Manual de Laboratorio de Fisiologa. Nancy Fernndez. 1999. Editorial McGraw-Hill Interamericana. .-http://www.laboratorioabc.com/

CONCLUSIONES DE LA ACTIVIDAD PRCTICA: A continuacin, y con sus propias palabras proceda a elaborar las principales conclusiones obtenidas de la experiencia efectuada en el laboratorio. Esta actividad la puede realizar posterior a la prctica. Reflexione y piense sobre los datos obtenidos y la importancia de las experiencias efectuadas. Para su futuro profesional: Cul sera la importancia de tales experiencias?, Qu aplicabilidad tendran para t?

Guin elaborado y revisado por los Profesores Gregorio Tiskow y Miguel Skirzewski- Julio-2009

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GUIA DE AUTOEVALUACION POST-LABORATORIO A continuacin se enuncian una serie de interrogantes que debers resolver en tu casa, en la biblioteca y con el apoyo de tus textos guas. Servirn para reforzar tus conocimientos adquiridos. 1.-Menciona las 3 maniobras bsicas para efectuar una adecuada determinacin de la Velocidad de Sedimentacin Globular (VSG) 2.-Cul es el mtodo para determinar la V.S.G? 3.-Mencione los valores normales de V.S.G. en un adulto sano. 4.-Menciona dos o tres condiciones fisiolgicas en las que puede aumentar la V.S.G. 5.- Menciona dos o tres condiciones fisiolgicas en las que puede disminuir la V.S.G. 6.-Definir el valor de Hematocrito. 7.-Cules son los valores normales del hematocrito en un adulto sano? 8.-En qu condiciones fisiolgicas puede variar el valor hematocrito? 9.-Consignar el valor normal de osmolaridad del plasma sanguneo. 10.-Describir las caractersticas ms resaltantes de la sangre coagulada. 11.-Describa cmo acta la heparina como anticoagulante. 12.-Mencione el valor normal del tiempo de coagulacin sangunea. 13.-Mencione el valor normal del tiempo de sangra. 14.-Describa el efecto del fro sobre el tiempo de coagulacin. 15.-Describa el efecto del calor sobre el tiempo de coagulacin. 16.-Describa el efecto del aumento de la superficie de contacto sobre el tiempo de coagulacin. 17.-Consignar los valores normales de plaquetas en el plasma sanguneo. 18.-Menciones los 3 factores fundamentales que intervienen en el proceso de hemostasia.

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ANEXOS

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ANEXO N

TOMA DE UNA MUESTRA DE SANGRE VENOSA:

Para la toma de una muestra de sangre, por lo general se utiliza una de las venas del
pliegue del codo. Ya lo has visto en los laboratorios clnicos cmo lo hacen; hoy te tocar hacerlo a ti. Verifica que todos los elementos o insumos estn listos y a la mano. Colocarse guantes desechables, ya que se trabajar con muestras o fluidos orgnicos. El voluntari@ deber estar sentado cmodamente o acostado, si es posible. Aplica el torniquete de goma unos 3 a 4 dedos por encima del pliegue del codo y sujetar con un medio nudo pero en forma suave. Limpia la zona de extraccin con alcohol isoproplico. El (la) donante deber abrir y cerrar la mano durante unos segundos y luego la mantendr cerrada, para as lograr visualizar mejor las venas del codo. Recuerda que la aguja de la jeringa deber tener el bisel hacia arriba. Ahora colocar la aguja en direccin paralela a la vena, perforando la piel y penetrando con suavidad la vena. Aspira ahora la jeringa hasta el volumen necesario para la actividad. Retira el torniquete e indica al (la) donante que deje de apretar el puo. Colocar una torunda de algodn seco encima de la zona de puncin y retira la aguja. Retirar la aguja de la jeringa y dejar correr lentamente por los bordes de un tubo de ensayo (o un vial) que contenga un anticoagulante, por lo general heparina (0,5 ml sern suficientes). Agita con suavidad y en crculos el tubo de ensayo para homogenizar mejor la muestra de sangre con la heparina.

Venas de la fosa cubital (pliegue del codo)

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Tienes que tener presente que la muestra de sangre puede tomarse de distintas zonas del cuerpo: capilar o perifrica, venosa y rara vez, arterial. Al tomar una muestra de sangre, sta se utiliza para valorar distintos parmetros fisiolgicos de nuestro sistema corporal. La muestra a analizar puede ser la sangre total o con una fraccin de la misma (plasma o suero) La sangre capilar o perifrica se obtiene por lo general de las yemas de los dedos, borde del lbulo de la oreja y del taln (sobre todo en nios muy pequeos). Debes tener en cuenta que muchos parmetros a medir pueden variar al tomar una muestra de sangre perifrica comparada con una venosa. Para tomas de muestras venosas es preferible utilizar agujas o scalps de calibre 21 para adultos y calibre 22 para nios y neonatos.7
7

Manual de Laboratorio de Fisiologa. Fernndez Nancy. 1999. Mc Graw Hill-Interamericana.

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ANEXO N

EL USO DE LOS PROGRAMAS SIMULADORES EN LA FISIOLOGIA MEDICA

Hoy en da, es posible mejorar la definicin convencional de una alternativa. Los desarrollos en la tecnologa y en el pensamiento tico, y los ejemplos creativos para reemplazar el uso daino de animales alcanzado en todas las disciplinas de las ciencias de la vida, colaboran con dicha mejora. Especficamente, la definicin de alternativas dentro de la educacin se puede hacer ms rigurosa para que incluya solamente alternativas de reemplazo; y puede ser ampliada para incluir enfoques que impliquen un trabajo imparcial o beneficioso con animales individuales. Tal definicin va ms all de la reduccin, reemplazo y refinamiento de los experimentos con animales. Es ms apropiado para la naturaleza del conocimiento y la adquisicin de tcnicas dentro de la educacin de la ciencias biolgicas, y refleja las posibilidades y oportunidades actuales para el reemplazo.8 Consecuentemente, las alternativas son soportes educativos humanitarios y enfoques pedaggicos que pueden reemplazar el uso daino de animales o pueden complementar la educacin humanitaria. Son usadas tpicamente en combinacin para alcanzar los objetivos pedaggicos existentes y proporcionar otros resultados pedaggicos que no se pueden obtener a travs de experimentos con animales. stas incluyen: Pelculas y videos Modelos, maniques y simuladores Simulacin por computadora en multimedia Cadveres y tejidos de animales obtenidos de fuentes ticas Trabajo clnico con pacientes y voluntarios Auto-experimentacin por parte del estudiante Laboratorios in-vitro Estudios de campo

Tomado de: Inter-NICHE Coordinator: Nick Jukes 42 - South Knighton Road, Leicester LE2 3LP. Inglaterra. www. Interniche.com.

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La reciente tecnologa digital presenta nuevas oportunidades para desarrollar creativamente y maximizar el potencial de los recursos pedaggicos basados en videos en conjuncin con software de computadora. La digitalizacin de videos es sencilla y de bajo costo. La edicin de videos digitales, incluyendo la incorporacin de comentarios auditivos, fotos y grficos, su copia y distribucin, pueden lograrse con un hardware de computadora comn, el software adecuado y tcnicas informticas bsicas. La digitalizacin permite acceder rpidamente a video-clips y usarlos con facilidad durante una conferencia o laboratorio prctico y se pueden proporcionar las copias va Internet. El uso creativo de esta tecnologa puede proporcionar un soporte para un aprendizaje altamente efectivo. Modelos, maniques y simuladores9 Estas alternativas que no usan animales incluyen tanto objetos sintticos para capacitacin diseados para simular rganos, miembros o animales completos, como aparatos para la capacitacin y simulacin de funciones fisiolgicas o tcnicas y escenarios clnicos. Los trminos descriptivos se usan flexiblemente y a veces de manera intercambiable. En general, 'modelos' se refiere a objetos diseados para observar la estructura anatmica; los 'maniques', o a veces los 'simuladores', son representaciones reales de animales o seres humanos diseados para la capacitacin de tcnicas clnicas; y los 'simuladores' son herramientas para la prctica de tcnicas clnicas, ciruga y cuidado crtico, e incluyen maniques computarizados, dispositivos de capacitacin quirrgica e instructores de suturas. Los modelos plsticos de animales que muestran sus estructuras internas son comnmente usados para la enseanza de la morfologa en todo el mundo. Por ejemplo, a travs de la plastinacin, se puede hacer la diseccin de cadveres de animales verdaderos y preservarlos. Dentro de la ortopedia en medicina humana y veterinaria, comnmente se usan huesos de plstico para ilustrar fracturas. Se pueden usar simuladores sencillos y de bajo costo para la prctica efectiva de las tcnicas psicomotoras y clnicas tales como coordinacin ojo-mano o /visual-manual, manejo de instrumentos y suturas. Los simuladores de piel y rganos huecos, los simuladores de anastomosis intestinal, instructores de microciruga y otros, estn hechos de plsticos o ltex especialmente preparados para simular de manera realista los tejidos u rganos relevantes. Las patologas tales como los quistes pueden ser incluidas en ciertos simuladores para practicar la extirpacin. Incluso las cmaras de las llantas para bicicletas son a veces usadas como equipo prctico apropiado para el nivel bsico en la adquisicin de tcnicas.10 Simuladores dinmicos Un simulador quirrgico que se usa para la capacitacin de la ciruga mnimamente invasiva puede abarcar rganos de animales obtenidos de fuentes ticas, sobre los cuales se realice la perfusin y la prctica. Otro bajo desarrollo, usa la perfusin en un cadver de un ser humano obtenido de fuentes ticas, o parte del mismo para proporcionar una alternativa realista a la
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Tomado de: Inter-NICHE Coordinator: Nick Jukes 42 - South Knighton Road, Leicester LE2 3LP. Inglaterra. www. Interniche.com.

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ciruga en seres vivos. Se llenan las venas y arterias dinmicamente de un lquido teido con una bomba especialmente diseada. sta tambin aplica una presin pulsante que puede transmitirse a los vasos, y por ende simula confiablemente el rbol vascular, todo dentro de un sistema cerrado. Se puede realizar disecciones y una variedad de enfoques quirrgicos y microquirrgicos tales como suturas vasculares, anastomosis y reparacin, aplicaciones de grapas para aneurismas, reseccin de parenquima interno, manejo del sangrado, y procedimientos endoscpicos. Consecuentemente, se puede practicar una ciruga realista y potencialmente aplicar la tcnica a fuentes conformadas por cadveres de seres humanos y de animales. Otros simuladores incluyen aparatos construidos por profesores para ilustrar procesos dinmicos tales como la fisiologa de la circulacin. Pueden ser fcilmente creados usando recursos bsicos de laboratorio tales como bombas, tuberas, vlvulas y lquidos teidos; o pueden ser simuladores de circuito electrnico para la ilustracin de procesos neurofisiolgicos. Simulacin por computadora en multimedia La aparicin y aplicacin de tecnologas informticas han revolucionado la ciencia y la sociedad en su conjunto. Los procesadores de alta velocidad y los poderosos software han transformado el modo en que se recopila y se procesa la informacin, como se moldean y explican los procesos biolgicos y como se transfiere el conocimiento. Las oportunidades asociadas con el desarrollo de la tecnologa basada en la informtica que contribuyen a una efectiva educacin de las ciencias de la vida han crecido de manera exponencial en la ltima dcada. La Internet y el software multimedia disponible en CD-ROM y DVD desempean impactantes papeles en muchas universidades, y tienen aplicaciones en laboratorios y conferencias, clases individuales y proyectos. Desde disecciones virtuales y experimentos en laboratorios bien equipados los cuales los alumnos pueden realizar en un monitor, hasta simulaciones completas de realidad virtual de tcnicas clnicas con estructuras tactilares, las posibilidades del aprendizaje asistido por computadora estn limitadas slo por fronteras tcnicas e imaginativas.10 Mientras que las primeras simulaciones por computadora no eran ms que libros de texto en disco, los programas interactivos multimedia de hoy integran un laboratorio virtual, imgenes fotogrficas y grficos en 3D, video clips, e informacin textual para mejorar significativamente la calidad y profundidad del aprendizaje. Creado por profesores para cumplir mejor con los objetivos de enseanza de cursos especficos, estos paquetes diseados profesionalmente pueden facilitar la habilidad de los alumnos para visualizar y comprender estructuras y procesos, experimentar y aprender estrategias para resolver problemas, y obtener una serie de otras tcnicas sin la necesidad de sacrificar animales, lo cual es anti-tico.

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ANEXO N

ENLACES ELECTRNICOS DE INTERS .- www.ucla.edu.ve La Pgina de la Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado

.- http://www.biologia.arizona.edu/ Recursos interactivos en lnea para aprender Biologa. .- http://www.cellsalive.com / Sitio web donde pueden encontrarse imgenes de clulas vivas y otros organismos, muy tiles para campos como la educacin y la investigacin biomdica. .- www.ugr.es / Recursos interactivos en Biologa. .- www.unidosporlosanimales.com / Normas de biotica y enlaces de inters adicionales. .- www.medjaveriana.edu.co /Programas simuladores .- www.investigacion.fcs.uc.edu.ve/simuladores .- www.apuntesdemedicina.net/videos .- www.trendmicro.com/download .- www.physiologyeducation.org .- www.mural.uv.es/galenos .- www.cucs.udg.mx/caael .- http://wps.aw.com/bc_physioex_6 .- www.scribd.com/doc .- www.gennio.com/tags .- http://web.jet.es .- www.iadb.org/int/rct/ecourses Cursos interactivos varios Demo del simulador Physioex.6 Banco de preguntas para fisiologa /Universidad de Carabobo/Hay simuladores

/Videos y simuladores /Simuladores /Pgina en ingls sobre innovaciones educativas

Para enlazarse con la pgina Web hacer: Ctrl+clic para seguir el vnculo.

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