MECANISMOS DE REPARACIN DEL ADN REPLICACIN DEL ADN: Se rompen enlaces de hidrgeno y cada hebra acta como molde

para crear una hebra complementaria. La secuencia de nucletidos particular donde inicia la replicacin se conoce como origen de replicacin y en un mismo ciclo de replicacin puede haber mltiples orgenes de replicacin. La ADN Polimerasa es la encargada principal de sintetizar el nuevo ADN utilizando como base la hebra molde. Esta ADN polimerasa se encuentra enganchada a la cadena molde del ADN y se traslada a lo largo de ella. La primasa sintetiza una longitud corta de nucletidos similar al ARN (alrededor de 10) a partir de la cadena molde, que sirve como Primer para la sntesis de ADN. Es importante mencionar que junto con la ADN polimerasa actan mltiples enzimas necesarias para llevar a cabo este proceso de replicacin: Helicasa: enzima encargada de abrir la doble hlice y agilizar la velocidad de la replicacin. Una sola lnea de unin a protenas es el componente encargado de evitar que los pares de bases se vuelvan a unir al ligarse fuertemente en las hlices de ADN. sliding clamp: encargados de mantener el ADN polimerasa fuertemente atado a la cadena de ADN molde. LESIONES QUE BLOQUEAN LA REPLICACIN: La funcin de correccin de las ADN polimerasas generalmente evitan la insercin de nucletidos enfrente de bases que se encuentran daadas. Si el complejo de replicacin encuentra una lesin en la hebra molde se detiene, provocando un retraso hasta que se resuelva la situacin y as completar el proceso. Hay tres procedimientos generales para resolver estos contratiempos en la replicacin del ADN: 1-el complejo de replicacin puede disociarse o retroceder lo que permite la reparacin de la lesin, 2- salto de la lesin y reanudacin de la sntesis en un punto ms adelante, dejando un hueco en la hebra hija, y 3continuar la sntesis a travs de la lesin. REPARACIN POR ESCISIN DE BASE: Se reparan las bases que sufren cambios por metilacin, oxidacin, desaminacin o sitio absico: 1. Glucosilasa reconoce la base alterada y catalizan la ruptura del enlace Nglucosdico entre la base y el azcar. Este paso no rompe la cadena azcar-fosfato del ADN entonces queda una desoxiribosa absica en la cadena (un sitio AP), que debe ser eliminado. 2. Eliminacin del sitio AP: intervienen dos enzimas, una AP endonucleasa que corta el enlace fosfodiester del lado 5 dejando el azcar todava unido al siguiente nucletido y una AP liasa que corta del lado 3 del sitio AP dejando el azcar libre.

3. Al eliminarse el sitio AP queda un hueco con un 3-hidroxilo libre, que es rellenado por una ADN polimerasa y posteriormente ligado por una ADN ligasa. Dependiendo del tipo de tejido en que se d, la reparacin puede ser por dos mecanismos. En general se cree que la reparacin ser a pequea escala cuando es iniciada por glucosilasas, y a grande escala cuando el sitio AP es resultado de hidrlisis espontnea o prdida de base por oxidacin. Reparacin a pequea escala: Se elimina 1-2 nucletidos. Realizada por glucosilasas/AP liasas. APE1recluta a la ADN pol , que tiene doble actividad: elimina el sito AP y luego tambin rellena el hueco por su actividad polimerasa. ADN ligasa XRCC1 se encarga de ligar. Reparacin a grande escala: Se remueven de 2 a 10 pares de bases. Intervienen gulcosilasas simples (sin actividad AP liasa asociada). APE1 realiza la incisin 5 y luego la endonucleasa FEN1 realiza el corte en el extremo 3. Hueco se rellena por la combinacin de pol/ estimulada por PCNA y luego es ligado por la ligasa 1.

Tipos de glucosilasas (al menos 8 en humanos): Uracilo ADN glucosilasa (UNG) eliminar el U que se forma por la desaminacin de C Metil purina glicosilasa remueve purinas alquiladas Homologos de la endonucleasa III presente en E.coli; elimina pirimidinas oxidadas/reducidas. REPARACIN POR ESCISIN DE NUCLETIDO: El mecanismo de reparacin sigue aproximadamente 5 pasos. Inicialmente, RPA, XPA y muchas veces XPC reconocen lesiones en el ADN por separado, con relativamente baja especificidad. Sin embargo, cuando se ligan estos factores entre ellos (XPA-RPA), se amplifica su capacidad de reconocimiento, sin importar el orden de ensamblaje, es decir, cualquiera puede iniciar el proceso por s sola. Cuando se une el FTIIH, se reconoce la formacin de un complejo pre-incision (PIC 1). Adems, se desdobla una secuencia de aproximadamente 20 pares de bases en el sitio de ensamblaje. Entre ms ADN daado exista ligado al PIC, mayor estabilidad tendr el complejo; este efecto se le atribuye al TFIIH. Una vez que el ADN se ha desdoblado, aumenta la afinidad de la XPG (que se une) y se separa el XPC del PIC 1, formando el PIC 2. Aqu se da la incisin en el extremo 3'. Finalmente, con la unin del XPF-ERCC1, se froma el PIC 3 y se da la incisin 5', que es irreversible y lleva a la liberacin de un oligomero. Los procesos posteriores de sntesis y ligacin son fundamentalmente similares a los de la transcripcin de ADN sin dao. Se llevan a cabo principalmente por la ADN polimerasa y ; se describe

que la polimerasa beta participa en el proceso de reparacin por escisin de bases pero no de nucletidos.

REPARACIN DE APAREAMIENTOS INCORRECTOS: Es una forma especializada de reparacin por escisin de nucletido para eliminar los errores de la replicacin. La diferencia consiste en que las bases no estn daadas o modificadas, simplemente es una base incorrecta. Para reconocer los desapareamientos, estas se basan en las distorsiones en la estructura de la doble hlice. La eleccin de cul de las 2 bases se va a eliminar no ocurre al azar, debido a que si se eliminara la base de la hebra parental, se perdera la informacin gentica original, y se llevara a cabo una mutacin. Por ende, se elimina la base recin sintetizada (en E.coli, se reconoce porque la nueva hebra an no ha sido metilada; en clulas eucariotas es un mecanismo similar, aunque no ha sido del todo establecido). El siguiente es el mecanismo de reparacin en E. coli, el cual es el ms estudiado y que probablemente sea muy similar al mecanismo en humanos. Se da un apareamiento equivocado de bases. La hebra parental esta metilada, pero la hebra recin sintetizada no; MutS y MutL reconocen y se unen a este desapareamiento, formando un bucle. Mut H se une al sitio semimetilado que se encuentra a alguno de los lados del desapareamiento. El fragmento de hebra de ADN desmetilado es cortado, escindido y extendido, y luego el espacio resultante es rellenado gracias a la ADN polimerasa y por ultimo interviene la ADN ligasa para sellar el fragmento.

La reparacin de apareamientos incorrectos no solo ocurre en la proliferacin mittica, sino que tambin se da en el proceso de meiosis, para reparar errores que surjan del proceso de recombinacin. DESMETILACIN ENZIMTICA: La metilacin del ADN contribuye a la regulacin de la expresin gnica. El patrn de metilacin tiene relacin con la actividad del gen y es una marca epigentica estable. FOTORREACTIVACIN: La luz ultravioleta genera daos en las bases de ADN por diferentes mecanismos, entre los cuales se encuentra la produccin de ROS que generan fotoproductos (frecuentemente el dmero de pirimidina en ciclobutano que consiste en una unin covalente entre dos pirimidinas adyacentes, a travs de un 5-6 doble enlace). La fotorreactivacin es un mecanismo especfico de reparacin de los dmeros de pirimidina en ciclobutano al igual que de otras formas de dao del ADN inducidas por radiacin ultravioleta. La reparacin es una reversin directa del dao. Debe haber complementariedad entre la regin daada y una enzima como la fotoliasa, que despus reparan por un mecanismo luz dependiente. La fotoliasa repara al transferir un electrn del cofactor flavina, localizado en la protena, al dmero. La catlisis es iniciada por la luz. El cofactor, meteniltetrahidrofolato, absorbe un fotn y transfiere la energa al cofactor cataltico FADH-. Despus el FADHexcitado transfiere un electrn al dmero, separndolo en dos pirimidinas. Por ltimo, el electrn retorna a la flavina y la enzima se disocia del ADN reparado. REPARACIN DE HUECOS EN LA HEBRA HIJA: Los huecos en la hebra hija son causados por lesiones por especies reactivas de oxgeno, radiacin ionizante y qumicos. Hay lesiones que bloquean la replicacin, si esta se reanuda ms all de la lesin, queda un hueco en el ADN. La reparacin de huecos (recombinacin prospectiva) no elimina la lesin, pero arregla el hueco causado por la lesin y se genera un sustrato que permite que la reparacin por escisin. El arreglo se basa en la recombinacin, con estimulacin por el ADN de cadena sencilla. La recombinacin entre dos dplex permite transferir un fragmento de la hebra parental al hueco. Esto deja un hueco en la hebra parental donadora, pero, puesto que tiene una hebra normal enfrente, el hueco puede ser rellenado fcilmente. La invasin y migracin de la hebra parental a la hebra hija es iniciada por Rad51. Un complejo de replicacin que se haya detenido en una lesin de la hebra retrgrada puede reanudar fcilmente la sntesis en el siguiente fragmento de Okazaki, usando los mecanismos normales de sntesis de la hebra discontinua. La reiniciacin de la hebra continua ms all de un bloqueo es ms difcil, porque est rgidamente controlada por orgenes de replicacin. Las horquillas de replicacin bloqueadas pueden arrancar de nuevo mediante recombinacin que puede volver a crear la estructura de una horquilla de replicacin ms all del sitio de lesin.

SNTESIS A TRAVS DE LAS LESIONES: Cuando hay un dao en el ADN la polimerasa se bloquea. Este mecanismo consiste en la induccin de sntesis de otras polimerasas con menor fidelidad que puedan sintetizar a travs de la lesin con el fin de que la clula no se quede estacionada por un tiempo prolongado.

REPARACIN DE ROTURAS DE CADENA DOBLE (DSB): Se estima que ocurren en 10 clulas por da en mamferos Se ha visto que son producidas por especies reactivas de oxgeno, radiacin ionizante y qumicos que generan especies reactivas de oxgeno. Se ha visto que son el resultado de recombinacin de V(D)J y procesos de intercambio de clases de inmunoglobulinas. La reseccin ineficiente o persistente de estas mutaciones puede llevar a arresto de ciclo celular, apoptosis y atentar con la reparacin del ADN. La reparacin incorrecta puede llevar a prdida cromosomal, amplificacin o rearreglos que pueden llevar a cncer. Se ha demostrado que defectos en la reparacin de DSBs se manifiesta con dos fenotipos: hipersensibilidad a rayos ionizantes e inmunodeficiencias. Se ha visto que existen al menos 2 vas diferentes, mediadas por al menos 4 complejos que facilitan la reparacin de DSBs: Reparacin no homloga: requiere poca, o no requiere homologa entre los extremos que van a ser unidos. Existen dos complejos implicados en esta va: el complejo de la protena kinasa dependiente de ADN (DNA-PK) y el complejo de la Rad50. Acta en la fase G1/S. En esta forma de reparacin, protena Ku se une a ambos extremos de la DSB, y recluta a la DNA-PKcs y la ligasa 4-XRCC4, quienes ligan las dos terminaciones del dplex, sin importar si los dos extremos provienen de mismo cromosoma. Es la principal va de reparacin de DSB inducida por radiacin ionizante y agentes radiomimticos. Recombinacin homloga: se requiere, gran homologa en la regin con la DSB. Este tipo de reparacin es llevada a cabo por el complejo Rad 52, que acta predominantemente en la parte tarda de la fase S/G2, y por el complejo BRCA1/2, el cual acta durante la fase S. Este proceso ocurre en tres pasos: invasin de la hebra, migracin, y formacin de la unin Holliday. Las primeras dos son iniciadas por la protena Rad51 (eucariotas) la RecA (procariotas). Se ha asociado Rad52, Rad54, Rad55, Rad57,

BRCA1 y BRCA2, en la recombinacin homloga pero, su mecanismo an es incierto. El complejo Mre11/Rad50/NBS1 (M/R/N) se encarga de procesar la terminacin en donde estas la DSB antes que ocurra la invasin de la banda por parte de la Rad 51. Luego Las protenas MUS81, MMS4 se unen a las uniones Holliday, para separar ambas bandas y por ltimo la unin Holliday permite la unin covalente de ambas hebras de ADN. La diferencia de la recombinacin no homloga es que la informacin que se pierde de la ruptura del ADN, es recuperada a partir de su parte homloga. Se conocen otras vas para la reparacin de DSB como hibridacin de cadena simple, adicin de telmeros de novo y capping del retrotrasposon. La hibridacin de hebra simple es un tipo de reparacin de DSB, que puede ser considerado como un paso intermedio entre la recombinacin homloga y la reparacin no homloga. En este caso el ADN es digerido por una exonucleasa, posiblemente el complejo M/R/N hasta que regiones con homologa son expuestas en los dos lados de la ruptura. Estas regiones luego son emparejadas. Las partes no homlogas son recortadas, para que ambos dplex se puedan unir. Este mecanismo genera prdida de informacin por la accin de la exonucleasa.

SISTEMA SOS Mecanismo de tolerancia al dao del ADN Reguln= grupo de operones1 regulados por un represor comn LexA es un represor en E. coli que regula la transcripcin de alrededor de 30 genes incluyendo lexA, recA, y genes involucrados en reparacin como para las polimerasas II, IV y V.

ADN en hebra simple

Union ADN-RecA

RecA induce autoproteolisis LexA

LexA libera las regiones del ADN

Se transcriben genes y lexA, recA y polimerasas

Despues de la reparacion del ADN el RecA se libera

Unidad funcional de material gentico que contiene un grupo de genes bajo el control de un solo promotor.

Alanina Treonina
Serina Cistena Glicina

Glutamato Piruvato

Glutamina
Arginina

-cetoglutarato

Prolina
Histidina

Asprtico Asparigina

Oxalacetato