25/08/2011

Glucoproteinas y Proteoglicanos

Glucosilacin de protenas

Glucoproteinas

Protenas conjugadas a azcares sin unidad repetitiva Protenas conjugadas a polisacridos con unidades repetidas en serie Glucosaminoglicanos Mucopolisacridos

Proteina >> carbohidrato

Proteoglicanos

Carbohidrato >> protena Unidades Repetidas

Glucoprotenas

Un nmero alto de protenas se encuentran unidas covalentemente a uno o ms carbohidratos, formando glicoprotenas Abarca un amplio espectro de protenas con diferentes funciones: enzimas, protenas de transporte, receptores, hormonas , protenas estructurales. El contenido de carbohidratos es variable, desde 1 hasta 90% del peso de la protena. Los carbohidratos pueden estar distribuidos uniformemente en la estructura proteica o estar concentrados en una regin particular de la protena.
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La mayor parte de las protenas que son

secretadas o unidas a la membrana plasmtica se encuentran glucosiladas. En las membranas los oligosacridos se asocian covalentemente a protenas formando glucoprotenas, y en menor proporcin a lpidos formando glucolpidos.
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Glucoprotenas

Glucoprotenas

La parte modificada en las protenas de

membrana es la porcin extracelular. Las protenas intracelulares se encuentran menos frecuentemente modificadas por glcidos, sin embargo esta modificacin les confiere a las protenas intracelulares caractersticas muy particulares.
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La cadena glucdica unida a las glicoprotenas

generalmente tiene menos de 15 residuos de azcar y en algunos casos slo 1. La diferencia entre proteoglicanos y glucoprotenas reside en el tipo y nivel de modificacin por carbohidratos. En el caso de las glucoprotenas la modificacin por los carbohidratos es raramente compleja
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Los azcares predominantes en las glucoprotenas son

Glucosa (Glc) Galactosa (Gal) Manosa (Man) Fucosa (Fuc) N-acetil glucosamina (GlcNAc) N-acetil galactosamina (GalNAc) cido N-acetilneuramnico cido silico (Neu5Ac o NANA).
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Acido silico o N-acetil neuramnico

NANA o Neu5Ac Es un monosacrido cido Deriva del cido neuramnico (de 9C) mediante acetilacin Se sintetiza por epimerizacin de la UDP-Nacetilglucosamina y reaccin con el PEP Es transferido unido a CMP
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Tipo de enlaces

Enlace N-glucosdico

Los carbohidratos se unen a la protena

mediante enlaces

La unin N-glucosdica es con el N del grupo

amida de la asparagina.

N-glucosdicos (Asn) O-glucosdicos (Ser, Thr, OH-Lys)

En los enlaces N-glucosdicos el glcido es GlcNAc.

Enlace N-glucosdico con GlcNAc

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Enlace N-glucosdico

Glucoprotenas con enlace N-glucosdico

El enlace predominante en las glucoprotenas de

clulas de mamfero es el N-glucosdico. El sitio de unin de los carbohidratos a las protenas se encuentra dentro de una secuencia consenso de aminocidos Asn-X-Ser/Thr, donde X es cualquier aminocido excepto prolina.

Contienen una regin

central (core) comn de carbohidratos unidos a la cadena polipeptdica. en 2 residuos GlcNAc y 3 de manosa.

Aproximadamente el 65% de todas las protenas

Esta regin consiste

contienen por lo menos una secuencia consenso de este tipo.

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Una variedad de otros azcares estn unidos a este centro y comprenden a 3 familias principales

N-glucosidico

Alta manosa
Hbrido

contienen manosa en torno a la parte central en

cantidades variables.

contienen diferentes azcares y amino azcares,

pero no cido silico

Complejos

es similar al tipo hbrido, pero adems contienen

cido silico en cantidad variable.
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Complejo

Hbrido

Alta manosa
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Enlace O-glucosdico

Enlace O-glucosdico
La unin de carbohidratos a hidroxilisina se Unidos a 5-OH Lys se pueden encontrar tanto el
monosacrido galactosa como el disacrido lactosa. encuentra fundamentalmente en el colgeno.

El enlace O-glucosdico es con el O del

grupo hidroxilo de serina, treonina o hidroxilisina.

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Enlace O-glucosdico
Formando parte de enlaces O-glucosdicos con Ser
y Thr se encuentra GalNAc.

Enlace O-glucosdico

La unin de carbohidratos a las protenas

citoslicas y/o nucleares se produce mediante enlace O-glucosdico de GalNAc a residuos de Ser o Thr. La unin es catalizada por la enzima O-GalNAc transferasa, OGT. Varios factores de transcripcin y la RNA polimerasa II se encuentran modificadas por O-GalNAc.
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Mecanismo de asociacin de Carbohidratos a Protenas

Sntesis

El componente proteico de todas las

glucoprotenas es sintetizado a nivel de polisomas del retculo endoplsmico (RE) Para las N-glucoproteinas la adicin de los gupos glucosdicos es cotraduccional en la luz del RE y contina en el complejo de Golgi. La unin de azcares en enlace O-glucosdico ocurre a nivel post-traduccional en el Golgi.
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Los azcares empleados para la sntesis de las

glucoprotenas se activan mediante la unin a nucletidos.

Glucosa y GlcNAc se unen a UDP Manosa se une a GDP. Acido silico a CMP

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Sntesis del enlace O-glucosdico

La sntesis del enlace O-glucosdico se produce va la
adicin paso a paso de los azcares activados mediante la adicin de nucletidos directamente a la cadena polipeptdica. Los azcares activados por unin a nucletidos se encuentran unidos a UDP (Glc, GlnNAc), GDP (manosa) o CMP (NANA).

Sntesis del enlace O-glucosdico

La unin del azcar es catalizada por

glucosiltransfereasas (OGT) especficas. Las evidencias indican que cada tipo especfico de unin de carbohidrato en glucoprotenas con enlace O-glucosdico es el resultado de diferentes OGT.

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Sntesis del enlace N-glucosdico

Dolicol
Los dolicoles son poliisoprenoides (C80-C100) que contienen de 17 a 21 unidades de isopreno, en las cuales la unidad terminal se encuentra saturada.

Como vimos antes las tres clases principales de

glucoprotenas con enlace N-glucosdico son alta manosa, hbridos y complejos. La caracterstica principal que distingue la clase compleja es la presencia de cido silico, mientras que la clase hbidos no contiene cido silico. En la adicin de los azcares mediante enlace Nglucosdico se requiere un intermediario lipdico, el dolicol fosfato.
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El parntesis encierra una unidad de isopreno. El fosfato en el dolicol fosfato se encuentra unido al grupo hidroxilo.

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Glucolpidos con enlace N-glucosdico

Glc3Man9GlcNAc2-P-P-dolicol

Esta estructura comunmente se refiere como oligosacrido asociado a lpido, mientras que la estructura glucdica se conoce como bloque de oligosacrido. En clulas de mamfero la importancia del residuo de glucosa terminal es evidente por el hecho de que la transferencia de Man9GlcNAc2-P-P-dolichol es unas 25 veces menos eficiente que la de la estructura completa. Adems, estructuras que contienen tres residuos de glucosa terminal, pero no la estructura completa Man9GlcNAc2, son transferidas efectivamente por la oligosacaril transferasa.
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La formacin del enlace GlcNAc-Asn en las protenas

se produce en el RE por la adicin cotraduccional de una estructura pre ensamblada de carbohidratos que ingresa como un intermediario carbohidrato-dolicol. El pre ensamblaje de la estructura central de carbohidratos comprende 3 residuos de glucosa unidos a un grupo ramificado de 9 residuos de manosa que a su vez se encuentran unidos a 2 residuos de GlcNAc unidos a dolicolpirofosfato (Glc3Man9GlcNAc2-P-P-dolicol)
Dolicol-PP
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Sintesis del dolicol-P-P-oligosacarido

La sntesis del bloque de oligosacrido comienza sobre la cara citoplasmtica de la membrana del RE, donde se agregan las 2 GlcNAc (ingresan como UDP-GlcNAc) y 5 Man (GDP-Man). Luego la estructura pasa al lado luminal de la membrana del RE, donde se agregan 4 resduos de Man y 3 de Glc unidos a dolicol-P.
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N-glucosdico
Entonces el oligosacrido es transferido del dolicol que acta como tranportador a un residuo Asn de la protena que est siendo sintetizada por los polisomas del RE.
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Glicoprotenas con enlace N-glucosdico

Glucosidasas remueven algunos azcares, en particular la Glc necesaria para la sntesis En el aparato de Golgi contina el agregado de
otros azcares como GlcNAc, Gal, Fuc y NANA por accin de glucosiltransferasas especficas En algunas N-glucoprotenas el proceso es extenso formando oligosacridos grandes con varios tipos de residuos glucdicos, mientras que en otras es corto, generando gran diversidad de productos finales.

Funcin de las glucoprotenas Las glucoproteinas sobre la superficie celular son

importantes para la comunicacin inter celular, para mantener la estructura celular y para el auto- y hetero-reconocimiento por el sistema inmune Por tanto alteraciones a nivel de las glucoprotenas de la superficie celular puede producir efectos fisiolgicos profundos

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Enzimas con destino lisosomal

Las enzimas destinadas al lisosoma son dirigida al
organelo por una modificacin especfica. Durante su trnsito por el aparato de Golgi se modifica por residuos de manosa fosforilada en la posicin 6: Man-6-P-proteina. Un receptor especfico de Man-6-P (MPR) est presente en la membrana del aparato de Golgi que dirige las protenas con Man-6-P al lisosoma.

Glucoprotenas y grupos sanguneos

Los antgenos de los

grupos sanguneos ABO son molculas de carbohidratos de glucolpidos de la superficie de clulas y los carbohidratos de glucoprotenas plasmticas.
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Cuadrado blanco = GlcNAc, diamante blanco = Gal, cuadrado negro = Fuc, diamante negro = cido sialico (NANA) 32

Glicoprotenas y grupos sanguneos

Cuando se encuentran en la superficie de las clulas los carbohidratos ABO se encuentran unidos a esfingolpidos y son por tanto glicoesfingolpidos. Cuando los carbohidratos ABO se asocian a protenas formando glicoprotenas se encuentran en el suero y se denominan forma secretada. Algunos individuos producen la forma glicoproteica de los antgenos ABO mientras que otros no. Esta propiedad distingue secretores de no secretores, una propiedad que tiene importancia forense, por ejemplo en el caso de violacin.
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Varios virus (HIV entre otros), bacterias y

parasitos han explotado la presencia de carbohidratos en la superficie celular para su beneficio, principalmente empleandolos como portales para ingresar a las clulas.

Diversas patologas se relacionan con errores congnitos en las enzimas encargadas de la degradacin de glicoprotenas

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Proteoglicanos
Los proteoglicanos son una gran familia de glucoprotenas formadas por un ncleo proteico al que se encuentran unidos covalentemente un tipo especial de polisacridos denominados glucosilaminoglicanos (GAG). Los GAGs son los heteropolisacridos ms abundantes del cuerpo. Se encuentran unidos a la membrana celular en contacto con la matriz extracelular. Actan como moduladores de seales en procesos de comunicacin entre la clula y su entorno
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Proteoglicanos

Glucosaminoglicanos
Son polisacridos largos sin ramificaciones Estn formados por repeticiones de una unidad de disacridos. Las unidades de disacridos contienen, N-acetilgalactosamina (GaINAc) N-acetilglucosamina (GlcNAc) y un cido urnico como el glucurnico idurnico.
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Glucosaminoglicanos
Son polisacridos largos sin ramificaciones Estn formados por repeticiones de una unidad de disacridos. Las unidades de disacridos contienen, N-acetilgalactosamina (GaINAc) N-acetilglucosamina (GlcNAc) y un cido urnico como el glucurnico idurnico.
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Glucosaminoglicanos
Poseen grupos carboxilo (COO-) y grupos sulfatos (SO3-), cuyas cargas negativas permiten una fuerte y abundante asociacin con molculas de agua, aportando una gran hidratacin a la matriz extracelular.
Los GAGs estn principalmente ubicados en la superficie de las clulas o en la matriz extracelular (MEC). Junto con la viscosidad que brindan los GAGs tambin se observa una compresibilidad baja la cual hace que estas molculas sean ideales como lquido lubricante de las articulaciones. Al mismo tiempo, su rigidez brinda integridad estructural a las clulas y provee vas entre las clulas, permitiendo la migracin celular.
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Proteoglicanos
En principio los proteoglicanos poseen una heterogeneidad potencial casi ilimitada. Cada protena central vara mucho en cuanto al nmero y al tipo de cadenas de glucosaminoglicanos que se une a ellas. Adems en cada glucosaminoglicano el patrn repetitivo de los disacridos puede ser modificado por una compleja distribucin de grupos sulfatos . Son un grupo muy diverso de glicoprotenas muy glicosiladas cuyas funciones dependen tanto de su protena central como de sus cadenas de glucosaminoglicanos. Salvo el cido hialurnico los dems glucosaminoglucanos estn unidos covalentemente a una protena formando proteoglicanos.
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Estructura
La mayora de los GAGs estn unidos a protenas centrales y as forman proteoglicanos. Estos GAGs se extienden perpendicularmente desde el centro como una estructura tipo cepillo. La unin de los GAGs a la protena central involucra un trisacrido especfico compuesto de 2 residuos de galactosa y un residuo de xilosa (GAGGalGalXylOCH2proteina).
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Estructura
El trisacrido de unin est acoplado a la protena central a travs de una unin Oglucosdica a un residuo de Ser en la protena. Algunas formas de queratan sulfatos estn unidos a la protena central a travs de una unin N-glucosdica a Asn. Las protenas centrales de los proteoglicanos son ricas en residuos S y T lo cual permite la adhesin de mltiples GAG.
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Enlaces gluco proteicos

CH2 OH H H O HN O C CH2 NH2 CH COOH

Los proteoglicanos se pueden clasificar por el tamao

Asn

Glc
OH

OH

H O H

HN

CH3

NAc

Tipo I
CH2 OH H H O O CH2

Enlace N-Glicosdico con Asn

NH2 CH COOH
H H CH2 OH O O CH CH2 H H OH H2 N CH2 CH COOH NH2 CH2

Glc
OH

OH

H O H

Ser

Glc
OH

OH

HOLys

HN

CH3

NAc

Agrecan, el principal proteoglicano en el cartlago, pertenece al grupo de los proteoglicanos grandes. Veriscan, que se encuentra presente en diferentes tejidos como vasos y piel, tambin es de gran tamao. Existen proteoglicanos pequeos entre los que se incluyen decorin, biglican, fibromodulina y lumican.
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Tipo II Enlace O-Glicosdico con Ser(Thr)

Tipo III O-Glicosdico con 5-HOLys

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Clasificacin segn el tipo de GAG

Todos estn formados por repeticiones de disacridos: Proteoglicanos tipo heparn sulfato
N-acetilglucosamina y cido glucurnico unidos mediante un enlace 14.

Glucosaminoglicanos
Los GAGs de significancia fisiolgica son
condroitin sulfato dermatan sulfato queratan sulfato Heparina y heparan sulfato el cido hialurnico

Proteoglicanos tipo condroitn sulfato

Ac. Glucurnico y GlcNAc (13)

A pesar de que cada GAG tiene un componente disacrido que predomina , existe una heterogeneidad entre los azcares que forman parte de cualquier clase de GAG.
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Condroitina 4 y 6sulfatos
Compuesto de D-glucoronato y GalNAc-4- o 6sulfato unin tipo (1, 3)

cartlago, hueso, vlvulas cardiacas Es el GAG ms abundante

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Dermatan sulfatos
Compuestos de L-iduronato (muchos contienen sulfato) + GalNAc-4-sulfato unin tipo (1, 3)

Queratan sulfatos
Compuestos de galactosa + GlcNAc-6-sulfato unin tipo (1, 4)

Piel, vasos sanguneos, vlvulas cardiacas

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Crnea, hueso, cartlago agregado con condroitin sulfatos

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Heparina y Heparan Sulfatos:

Compuesto de iduronato-2-sulfato (D-glucuronato-2-sulfato) y N-sulfo-D-glucosamina-6-sulfato unin tipo (1, 4) (heparan tienen menos sulfato que las heparinas)

Hialuronatos
Compuestos de D-glucoronato + GlcNAc unin tipo (1, 3)

Heparn: Membranas basales, componentes de las superficies celulares Componente de los grnulos intracelulares de los mastocitos que recubren las arterias de los pulmones, hgado y piel
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El cido hialurnico es nico entre los GAGs ya que no contiene ningn sulfato y no se encuentra unido de manera covalente a ninguna protena como un proteoglicano. Sin embargo, si es parte de los complejos que se forman de manera no covalente con proteoglicanos en la LEC. Los polmeros de cido hialurnico son de gran tamao (con pesos moleculares entre 100.00010.000.000) y pueden desplazar un gran volumen de agua. Esta propiedad les permite actuar como lubricantes y absorbentes de golpes.
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Caractersticas de los GAGs

GAG Hialuronato Condroitin sulfato Heparan sulfato Localizacin Lquido sinovial, humor vtreo, MEC del tejido conectivo laxo Caractersticas y funcin Polmeros grandes, absorben golpes

Sntesis
La cadena de protena es sintetizada en ribosomas unido a la membrana acumulndose en la luz del retculo endoplsmico. La unin del glucosaminoglucanos a la protena tiene lugar en el Golgi.

cartlago, hueso, vlvulas cardiacas GAG ms abundante Membranas basales, componentes Contiene ms glucosamina de las superficies celulares acetilada que la heparina Componente de los grnulos intracelulares de los mastocitos que recubren las arterias de los pulmones, hgado y piel Piel, vasos sanguneos, vlvulas cardiacas Crnea, hueso, cartlago agregado con condroitin sulfatos

Heparina

Contienen ms sulfato que los heparan sulfatos

Dermatan sulfato Keratan sulfato

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Funcin
Dada su diversidad estructural los proteoglucanos tambin tienen una diversidad de funciones tanto en la matriz extracelular como en la clula.

En la matriz extracelular
Mantienen hidratada la matriz extracelular Las cadenas de GAG pueden generar geles con poros de diferente tamao, por lo que pueden intervenir como filtro selectivo en la regulacin del trfico de molculas y de clulas, seleccionndolas en funcin de su tamao, su carga o ambas cosas. Los glucosaminoglucanos y proteoglucanos se asocian formando enormes complejos polimericos y tambin se asocian con otros elementos de la matriz extracelular como el colgeno y con redes proteicas de la lmina basal formado estructuras muy complejas. El agrecan rodea el cartlago y la ayuda a soportar las fuerzas de compresin
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En la membrana plasmtica
Las cadenas de polisacridos son muy rgidas e hidroflicas por lo que tienden a ocupar grandes volmenes en relacin a su masa formado geles su elevada carga negativa hace que atraigan cationes, sobre todo Na+, que debido a su capacidad osmtica hace que se retengan grandes cantidades de agua en la matriz extracelular, produciendo una presin de turgencia que capacita a la matriz a oponerse a fuerzas de compresin.
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Algunos proteoglucanos son componentes integrales de las membranas plasmticas. Pueden actuar como correceptores de la superficie celular, interviniendo tanto en la unin celular a la matriz extracelular como iniciando las respuestas de las clulas a algunas protenas de sealizacin. Los proteoglucanos desempean un papel importante en la sealizacin celular ya que unen diversa molculas de sealizacin. Tambin se unen y regulan las actividades de otros tipos de protenas de secrecin, como enzimas proteolticas y sus inhibidores.
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Importancia Clnica (algunos ej.)

La heparina abunda en los grnulos de los mastocitos que recubren los vasos sanguneos. La liberacin de heparina de estos grnulos en respuesta a una lesin y su ingreso al suero conlleva a la inhibicin de la coagulacin sangunea:
La heparina libre activa a la antitrombina III, la cual inhibe todas las proteasas de serina de la cascada de coagulacin. La heparina inyectable se emplea en las terapias anticoagulantes.
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Importancia Clnica
Varias enfermedades genticas, por ejemplo la enfermedad del almacenamiento lisosomal, resultan de defectos en las enzimas lisosomales responsables del metabolismo de los GAGs asociados a la membrana. Estas enfermedades, conocidas como mucopolisacaridosis resultan en una acumulacin de GAGs dentro de los lisosomas de las clulas afectadas. Existen al menos 14 tipos de enfermedades asociadas al almacenamiento lisosomal que afectan al catabolismo de los GAG..
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