EXTRACCION POR EL METODO DE COBB Univ. Jos Luis Guaygua Loayza Introduccin.Los nematodos son un filo de vermes pseudocelomados.

Se conocen vulgarmente como gusanos redondos debido a la forma de su cuerpo en un corte transversal. Son organismos esencialmente acuticos, aunque proliferan tambin en ambientes terrestres. Existen especies de vida libre, marinas, en el suelo, y especies parsitas de plantas y animales, incluyendo el hombre, al que provocan enfermedades como la triquinosis, filariasis, anquilostomiasis, ascariasis, estrongiloidiasis, toxocariasis, etc. Sin embargo el nmero de especies que parasitan directamente al hombre y las que parasitan plantas (nematodos fitoparsitos) son un grupo muy pequeo en comparacin al nmero de especies del filo Nematoda. El mtodo de extraccin de cobb realiza una seleccin y extraccin de los nematodos, presentes en una muestra, por medio de la tamizacin selectiva, el cual es til para reconocer y separar las especies de nematodos presentes en el analito. Objetivo general. realizar la investigacin correspondiente al mtodo de extraccin de cobb.

Objetivos especficos. Principios del mtodo de extraccin de cobb. Describir el mtodo de extraccin de cobb. realizar el esquema del mtodo de extraccin de cobb.

Desarrollo del trabajo.Principio del mtodo de extraccin de cobb.El principio del mtodo de extraccin de cobb, se basa en la precipitacin de los cuerpos no orgnicos como ser las piedras y contaminantes pertenecientes a las sales minerales presentes en la muestra tomada, esta precipitacin selectiva se da debido a la densidad de los cuerpos a separar, y a la existencia de movimiento en los cuerpos orgnicos lo cual facilita su flotabilidad y la separacin de estas de la muestra.

Descripcin del mtodo de cobb.El mtodo de cobb se describe como una secuencia de pasos a seguir para conseguir la extraccin de los nematodos presentes en las muestra, para ello se requiere sierto material que se especifica a continuacin. Materiales: 100 ml de suelo 2 recipientes (baldes 1 y 2) de aproximadamente 4 litros de capacidad. 1 esptula Tamices de: 500 m o 34 mesh 350 m o 45 mesh 175 m o 80 mesh 100 m o 150 mesh 50 m o 280 mesh 4 (vasos) de 500 o 250 ml 1 pizeta El procedimiento que se realiza para realizar la extraccin es la siguiente: Coloque 100 ml de suelo en un recipiente o balde (1) con agua, ms o menos 2 litros, agite bien con una esptula para separar los nematodos de las partculas de suelo, deje reposar la suspensin por 5 segundos para permitir que las partculas ms grandes de suelo sedimenten. Pase ntegramente toda la suspensin a travs de un tamiz de 500 m sobre el otro recipiente o balde (2). Descarte el suelo que qued en el balde (1) y el material grueso que ha quedado en el tamiz de 500 m, porque todos los nematodos activos han pasado a travs del tamiz y se encuentran en el recipiente (2). Algunos nematodos muy largos como algunos Longidoridae no pasan rpidamente y es conveniente agitar suavemente dentro del agua los restos que quedaron en el tamiz. Lave el tamiz. Agite la suspensin que contiene el recipiente (2) y psela lentamente por el tamiz de 350 m sobre el recipiente (1). Al suelo que ha quedado en el recipiente (2) agregue un poco ms de agua, agite y pase esta suspensin lentamente por el tamiz de 350 m sobre el mismo recipiente (2), repita esta operacin una tercera vez. Descarte el suelo que qued en el recipiente o balde (2) y deje limpio el recipiente. Lo que queda en el tamiz de 350 m son los nematodos activos muy grandes como Xiphinema. Para extraerlos enjuague el tamiz con una pizeta y recoja la

suspensin en un beaker que le llamaremos 1. Esta operacin se realiza cada vez que se pasa la suspensin del recipiente 2 a travs del tamiz de 350 m. Deje limpio el tamiz de 350 m. Agite la suspensin que se colect en el recipiente 1 del paso 3 y psela lentamente a travs de un tamiz de 175 m sobre el recipiente 2 el mismo nmero de veces y de la misma manera como en el paso 3. Descarte el suelo que qued en el recipiente 1 y deje limpio el recipiente. Lo que queda en el tamiz de 175 m son nematodos medianos como por ejemplo Helicotylenchus. Para extraerlos, enjuague el tamiz con una pizeta y reciba la suspensin en un beaker que le llamaremos 2. Esta operacin se realiza despus de cada vez que se pasa la suspensin del recipiente 1 sobre el tamiz de 175 m. Deje limpio el tamiz de 175 m. Agite la suspensin que se colect en el recipiente 2 del paso 5 y psela lentamente a travs de un tamiz de 100 m, sobre el recipiente 1 de la misma manera y el mismo nmero de veces como en el paso 3 descarte el suelo que qued en el recipiente 2 y deje limpio el recipiente. Lo que queda en el tamiz de 100 m son nematodos pequeos como por ejemplo Pratylenchus. Para extraerlos, enjuague el tamiz con la pizeta y reciba la suspensin en un beaker al que llamaremos 3. Esta operacin se realiza despus de cada vez que se pasa la suspensin del recipiente 2 sobre el tamiz de 100 m. Deje limpio el tamiz de 100 m. La suspensin que se recibi en el recipiente 1 del paso 7 se agita y pasa lentamente a travs de un tamiz de 50 m, el mismo nmero de veces y de la misma manera como en el paso 3. La suspensin que pasa el tamiz y el suelo que qued en el recipiente 1 se descarta. Deje limpio el recipiente. Lo que queda en el tamiz de 50 m son los nematodos ms pequeos y larvas, para extraerlos enjuague el tamiz con una pizeta y reciba la suspensin en un beaker que llamaremos 4. Deje limpio el tamiz de 50 m. 11 Los nematodos que se encuentran en los beakers 1, 2, 3 y 4 se observan directamente o si las suspensiones tienen muchas partculas de suelo y estn turbias, se pueden utilizar el mtodo de la bandejita para clarificar las suspensiones.

Esquema del mtodo de extraccin de cobb.-

Conclusiones. el mtodo de extraccin de cobb es una herramienta muy til en la separacin de organismos existentes principalmente en la tierra, mayormente utilizado en la separacin de nematodos presentes en muestras solidas para ello se realiza una secuencia de pasos con distintos tamices y la ayuda del agua, para realizar la separacin correspondiente.

Bibliografa.Universidad privada Jos Carlos Maritegui/ facultad de ingeniera agronmica/ mdulo nematologia en hortalizas y frutales/ Moquegua Per Fraga, C.P. 1984. Introduccin a la nematologa agrcola. 2ed.Editorial Hemisferio Sur. Buenos Aires.119pp Qumica Orgnica y Biolgica - Facultad de Cs. Agrarias - UNNE. Sargento Cabral 2131 - (3400) Corrientes Argentina alteraciones histopatologicas causadas por meloidogyne incognita en almendro (prunus amygdalus)L. Rosso, A. De Candia, P. Leonetti, y A. Ciancio Istituto per la Protezione delle Piante, Sezione di Bari, C.N.R. andDipartimento di Genetica, Biologia Generale e Molecolare, Universit di Napoli, Italia.