Carlos Yabar MSc Dr(c)

bioyabar@yahoo.es

Laboratorio de Biomedicina y Miicrobiologa

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

LA BIOLOGA MOLECULAR
Es una rama de las

ciencias biolgicas que estudia los cidos nucleicos y protenas y su interaccin con los procesos biolgicos

Bioqumica

Biologa moderna

Biologa molecular

Gentica

Interaccin con otras disciplinas

DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR Trmino

acuado por Crick en 1958

DOGMA DESARROLLADO

Quin descubri el ADN? Johann Friedrich Miescher

descubri el ADN en 1869 a partir de pus de soldados (nuclena) En 1879, Albrecht Kossel descubri que estaba formado por 4 bases: A, C, G y T Richard Altmann, en 1889 acu el trmino cido nucleico En 1910, se descubri que haban dos tipos de molculas: ARN y ADN
Johann Friedrich Miescher

http://www.chemistryexplained.com/Ne-Nu/Nucleic-Acids.html

ESTRUCTURA DE LOS CIDOS NUCLEICOS En 1953,

Watson y Crick postularon la conformacin del ADN en forma helicoidal, lo que le vali el Premio Nobel en Fisiologa y Medicina (1962)
Watson J.D. and Crick F.H.C. Nature 171, 737-738 (1953) http://www.nature.com/nature/dna50/archive.html

CONTRIBUCIN DE ROSALIND FRANKLIN

Sin embargo

Rosalind Franklin haba caracterizado la forma del ADN (forma A y B). Su informe lleg a manos de Crick sin que ella lo supiera. En 1958, fallece de cncer a los ovarios
Franklin R. and Gosling R.G.Nature 172, 156-157 (1953) http://www.nature.com/nature/dna50/archive.html

ESTRUCTURA DEL ADN

ESTRUCTURA DE UN NUCLETIDO

ARN y ADN: similitud y diferencias

http://www.usask.ca/education/coursework/mcvittiej/bio30unit1/print/overheads/1.23.pdf

Interaccin entre las bases nitrogenadas

A+T

G+C

PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS DEL ADN

DENATURACIN

RENATURACIN

EVOLUCIN HISTRICA

Mtodo de Sanger para el secuenciamiento de ADN

A A C G T C G G A A C

A A C G A A C GT A A C GTC
A A C GTC G

A A C GTC G G

FUNDAMENTO DEL SECUENCIAMIENTO DE ADN

SISTEMAS DE SECUENCIAMIENTO
ELECTROFORESIS EN GEL ELECTROFORESIS EN CAPILAR SECUENCIAMIENTO DE SIGUIENTE GENERACIN: -Sec por perlas - Sec por sntesis - Sec por ligacin 28000 nt por 3 das

5000 nt por 3 das

100 millones de bases en menos de 10 horas

ENZIMAS DE RESTRICCIN GAATTC

Werner Arber (1978)

Arber W. Restriction endonucleases.Angew Chem Int Ed Engl. 1978 Feb;17(2):73-9

RFLP
MAPEO DE RESTRICCIN

PFGE (Electroforesis en campo pulsado)

Coleccin de la muestra

Aislamiento del especimen

Fenotipificacin de la muestra

PFGE (Continuacin)

PFGE: Resultado final

HIBRIDACIN
Southern blot : ADN
Northern blot : ARN Western blot : Protenas
Edward Southern

FUNDAMENTO DE LA HIBRIDACIN Transferencia de las

molculas al gel

Electroforesis

Hibridacin

Seal de hibridacin

MICROARREGLOS (Ejm expresin diferencial de genes)

PCR
Kary Mullis invent el PCR

buscando una mejor manera de secuenciar ADN

Mullis et al., 1986. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 1986;51 Pt 1:263-73.

PRINCIPIOS DE PCR

Taq ADN Polimerasa

Y los ciclos continan

ADN molde

TIPOS DE PCR
RT-PCR

ARN

ADNc Taq ADN Polimerasa

Transcriptasa reversa

Y los ciclos continan

TIPOS DE PCR
Nested - PCR

Producto de PCR

Taq ADN Polimerasa

Y los ciclos continan

TIPOS DE PCR PCR multiplex

TIPOS DE PCR
PCR en tiempo real (sistema TaqMan)

PCR - ENSAYO DE MOVILIDAD DE HETERODUPLEX

Barlow et al., Rev. Med. Virol. 2000; 10: 321-335.

INGENIERA GENTICA
Clonacin molecular

Yabar C 2000. Tesis de licenciatura. UNFV

INGENIERA GENTICA
Ligacin inserto vector

CONSTRUCTO INSERTO-VECTOR

INGENIERA GENTICA
+

Vacuna, Ab Ag Dx Antisuero
Yabar C 2000. Tesis de licenciatura. UNFV