UNIDAD 3ENZIMAS

3.1. Actividad enzimtica 3.2. Especificidad de accin y del sustrato 3.3. Clases de enzimas 3.4. Hidrlisis enzimtica 3.5. Metabolismo del glucgeno 3.6. Coenzimas

INTRODUCCIN
Las enzimas son biocatalizadores, es decir que son compuestos de origen biolgico que aceleran las reacciones qumicas en la clula. El metabolismo es posible porque cada clula dispone de un contenido enzimtico determinado. Casi todas las enzimas son protenas pero tambin hay cidos nuclicos catalticamente activos conocidos como ribozimas (RNA hn o Polimesa II que despus se van a transformar en RNA mensajero).

ENZIMAS

HISTORIA
En el siglo XIX, Louis Pasteur descubri una fuerza vital a la que llam fermentos. En 1878, Wilhelm Khne acuo el trmino enzima. En 1897, Eduard Buchner concluy que la enzimas actuaban inclusive aunque no hubiera elementos vivos en las clulas. J. H. Northrop y W. M. Stanley, demostraron que las protenas puras podan ser enzimas.

CATALIZADORES
Las clulas poseen compuestos qumicos que controlan las reacciones que ocurren en su interior. La sustancia que controla la velocidad a la que ocurre una reaccin qumica sin que la clula sufra dao alguno ni se destruya se conoce como un catalizador. Las enzimas son protenas que actan como catalizadores en las clulas.

Enzimas
Hacen posibles las reacciones, disminuyendo la cantidad de energa de activacin que se necesita. Controlan la velocidad a la que ocurre la reaccin, para que la energa se libere lentamente. Permiten que las reacciones ocurran a unas temperaturas que no hagan dao al organismo. Cuntas enzimas habrn en un organismo?

Enzimas y sustratos
La sustancia sobre la cual acta una enzima se conoce como sustrato. El sustrato se convierte en uno o ms productos nuevos. Las enzimas son reutilizables y cada una puede catalizar de 100 a 30,000,000 de reacciones por min. Pero, una enzima particular acta solo sobre un sustrato especfico. Cada enzima particular puede controlar solo un tipo de reaccin.

Enzimas y coenzimas
Una enzima recibe el nombre del sustrato sobre el cual acta. A una parte del nombre del sustrato se le aade el sufijo asa. Cul ser el sustrato de una proteasa? En algunas reacciones, pequeas molculas, llamadas coenzimas, se unen a las enzimas para controlar las reacciones. Las coenzimas no son protenas pero no sufren cambios durante las reacciones. Algunas vitaminas son coenzimas. B1, B2, B6, K. Una reaccin no ocurrir si la coenzima no est presente.

Los modelos de enzimas

La forma y la estructura de una enzima determinan la reaccin que puede catalizar. La enzima se une al sustrato (S) mediante un rea especial, el sitio activo, para formar un complejo enzimasustrato o E-S. En el sitio activo, la enzima y el sustrato se ajustan perfectamente.

Los modelos de enzimas

Modelo de la llave y la cerradura. Modelo del ajuste inducido.

Las clulas regulan la cantidad y la actividad de sus enzimas

Inhibicin por retroalimentacin

Los factores que afectan la actividad enzimtica

La temperatura (desnaturalizacin) (Ej: albmina)

Los factores que afectan la actividad enzimtica

El pH (desnaturalizacin) (Ej: pepsina) La concentracin del sustrato Sustancias qumicas (inhibidores)

Clasificacin y nomenclatura de enzimas Reacciones enzimticas

Nombre sistemtico:

Grupo transferido

ATP: hexosa fosfotransferasa

Donador Aceptor

Nmero sistemtico

Grupo

Subgrupo

Enzyme Comission

EC 2.7.1.1 Sub-subgrupo

Enzima

Nombre comn:

Hexokinasa

1. Oxidorreductasas 2. Transferasas 3. Hidrolasas

4. Liasas 5. Isomerasas
Clasificacin de enzimas: Grupos

GRUPO 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreduccin

Ared + Aox + Box Bred A : es el reductor o dador electrnico; en el curso

de la reaccin se oxida (pierde electrones)

B : es el oxidante o aceptor electrnico; en el curso

de la reaccin se reduce (gana electrones) En las reacciones redox, siempre tienen que estar presentes a la vez el aceptor y el dador electrnico.

Dador: Aceptor oxidorreductasa Glucosa : O2 oxidorreductasa

Dador Aceptor

EC 1.1.3.4
Nombre comn: Glucosa oxidasa

Los subgrupos se forman segn la naturaleza del dador: 1.1.-.1.2.-.1.3.-.etc. Sobre grupos alcohol Sobre grupos aldehido Sobre grupos -CH-CH-

Nomenclatura alternativa en oxidorreductasas:

1. Deshidrogenasas 2. Oxidasas 3. Peroxidasas 4. Oxigenasas 5. Hidroxilasas

6. Reductasas

GRUPO 2: TRANSFERASAS
Catalizan reacciones de transferencia de grupo:

A-X + B

A + B-X

Dador: Aceptor - Grupo transferido transferasa ATP: D-Hexosa EC Fosfotransferasa hexokinasa 2.7.1.1 Nombre comn:

Clasificacin de las transferasas

2.1.-.Grupos monocarbonados 2.2.-.Grupos aldehido o ceto 2.3.-.Aciltransferasas 2.4.-.Glicosiltransferasas 2.5.-.Alquil- o Ariltransferasas 2.6.-.Grupos nitrogenados

GRUPO 3: HIDROLASAS
Catalizan reacciones de hidrlisis

A-B + H2O

A-OH + HB

No se suelen utilizar nombres sistemticos en las hidrolasas. Muchas de ellas conservan el nombre primitivo: Tripsina, Pepsina, Papana, etc.

Clasificacin de las hidrolasas

3.1.-.Esterasas (carboxilesterasas, fosfoesterasas, sulfoesterasas) 3.2.-.Glicosidasas 3.3.-.ter hidrolasas 3.4.-.Pptido hidrolasas 3.5.-.Acil anhdrido hidrolasas etc.

Pptido hidrolasas: clasificacin comn (no sistemtica)

I. Segn la situacin del enlace atacado:

- Exopeptidasas (en los extremos de la cadena) (Peptidasas) - Endopeptidasas (en el interior de la cadena) (Proteinasas) II. Segn el mecanismo cataltico: - Serin proteinasas - Tiol proteinasas - Aspartil proteinasas - Metaloproteinasas

GRUPO 4: LIASAS
Catalizan reacciones reversibles de adicin de un grupo a un doble enlace:

A=B + X

AXB

Algunas reacciones lisicas:

- Descarboxilasas - Aldolasas - Anhidrasa carbnica - Adenilato ciclasa

Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacin Algunas reacciones isomersicas: - Racemasas - Oxidorreductasas intramoleculares - Mutasas o transferasas intramoleculares

Grupo 6: Ligasas
Catalizan la unin de dos grupos qumicos a expensas de la hidrlisis de un enlace de alta energa.

A+B+ ATP
O bien

A-B + ADP + Pi

C+D+ ATP

C-D + AMP + PPi

Algunas reacciones ligsicas:

- Aminoacil-tRNA sintetasas - Glutamina sintetasa - Carboxilasas

3.1. ACTIVIDAD ENZIMTICA

La accin cataltica o actividad enzimtica se mide cuantificando la velocidad de la reaccin en condiciones perfectamente definidas. Se mide la diferencia de recambio entre una reaccin catalizada y una no catalizada La velocidad de reaccin se expresa como cambios de concentracin por unidad de tiempo. La actividad enzimtica se expresa como Katal (Kat, mol. S )

ENZIMAS

CINTICA ENZIMTICA

Protenas con actividad cataltica de los seres vivos. Unidades del Metabolismo Regulan la vel. de las reac. qum. espontneas (G-). No promueven reacciones no-espontneas (G +). Incrementan la Vel. De reaccin 103 a 1012 veces sin afectar el sentido de la reaccin. No forman parte del producto de la reaccin.

PROPIEDADES GENERALES
AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIN
De 106 to 1012 veces vs sin enzima. An ms rpido que los catalizadores qumicos.

CONDICIONES DE REACCIN
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC) pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5 Presin atmosfrica normal

CAPACIDAD DE REGULACIN

Por concentracin de sustrato Por concentracin de enzima Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato) Por inhibidores no competitivos (modificacin covalente de la enzima) Por regulacin alostrica

ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN

Interaccin estereoespecfica con el sustrato No hay productos colaterales

ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN

INTERACCIN ESTEREO ESPECFICA CON SU SUSTRATO

Los Substratos se acercan a la Enzima (sitio Activo)

Substratos HO-

H-

Enzima

Los reactivos interaccionan con la enzima (sitio activo)

Cambia la configuracin de la

enzima

Substrato de glucosa

Sitio de enlace

La unin del sustrato produce un cambio conformacional de la enzima hexoquinasa (cinasa), la cual es monomrica.

Se realiza la reaccin cataltica

Leonor Michelis y Maud Menten (1913) Concent.

Tiemp o

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
Vo = V
max

[S]

Km + [S]

Cintica enzimtica en funcin de la concentracin de sustrato

Vma
x

K
M

ENZIMA Catalasa Hexoquinasa

Km de algunas enzimas SUSTRATO

H2O2 ATP D-Glucosa D-Fructosa

Km (mM) 25.0 0.4 0.05 1.5 9.0 108.0 2.5 4.0 5.0

Anhidrasa carbnicoa Quimotripsina -Galactosidasa Treonina deshidrogenasa

HCO3

Gliciltirosinilglicina D-Lactosa L-Treonina

N-Benzoiltirosinamida

La KM es un parmetro de Actividad Enzimtica

La KM es inversamente proporcional con la actividad de la enzima. Valor de KM grande, baja actividad
Valor de KM pequeo, alta activida

Enzimas: pueden catalizar reacciones donde hay 2 S =

Hexocinasa
ATP + Glucosa ADP + 6-fosfato de glucosa

2 Rutas

Desplazamiento Simple, los 2 S se unen a la E

A + B + E EAB C + D

Doble desplazamiento o ping-pong

A + B + E AE BE + C D

Determinacin Cuantitativa de la Cintica Enzimtica

1. 2. 3. 4. 5. 6.

La reaccin global Procedimeinto analtico para determinar elS que desaparece o el P que aparece S el E requiere Cofactores (ines o coenzimas) La dependencia de la actividad enzimtica con la [S] o se la KM del S. El pH ptimo Un intervalo de temperatura en la que la E es estable y muestra actividad elevada.

Actividad enzimtica y variacin del pH

Enzima

pH ptimo 1.5 7.7 7.6 9.7 7.8 7.8

V o

3 pH

11

14

Pepsina Tripsina Catalasa Arginasa Fumarasa Ribonucleasa

V o
4 37 85 Temperatura oC)

V o
10 100 50 Coenzima

V o
10 30 50 70 100 Tiempo (min)

1.0 Unidad de Actividad Enzimtica (U): La cantidad que transforma 1.0 mol (10-6 M) de S /min, a 25 0C, en las condiciones de medida ptima. Actividad especfica:

Es el no. de U de una E / mg de protena. Es decir: una medida de la pureza de la E. Al purificarla, el valor llega a un mximo y es estable.
Nmero de recambio No. de molculas de S transformadas /unidad de tiempo, por una molcula de E ( o por un solo sitio cataltico) Enzima No. de Recambio 36 000 000 1 000 12 000 1 240

Anhidrasa carbnica B-Amilasa 000 B-Galactosidasa Fosfoglucomutasa

Vmax ?

KM?

Transformacin de los Dobles Recprocos

(Lineweaver-Burk)

pendiente

Grfica de Eadie-Hofstee
Vmax

V o

V max
KM

Vo [S ]

Cuando: Vo= Vmax Todos los sitios activos estn ocupados y no hay molculas de E libre. KM= [S] S... Vmax KM representa la cantidad de sustrato necesaria para fijarse a la mitad de la E disponible y producir la mitad de la Vmax KM representa la concentracin del sustrato en una clula

Inhibidores
Reactivos qumicos especficos que pueden inhibir a la mayor parte de las enzimas.
Irreversibles

INHIBIDORES Reversibles

Inhibidor Irreversible
Inhibicin permanente Unin irreversible por medio de enlaces covalentes.

Modificaciones qumicas de los gps. catalticos.

Modificada la enzima, est siempre inhibida.

Para distinguirlo de los reversible se someten a dilisis y si no se separan enzima e inhibidor, ste es permanente.

Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo (DFP) Acetilcolina

Acetilcolinesterasa

Acetato + Colina

Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo (DFP)

Acetilcolinesterasa
Tripsina

Elastasa
Fosfoglucomutasa

Cocoonasa (larvas de gusanos de seda

Malatin

Fluorofosfato de diisopropilo (DFP)

Serina

Iodoacetamida

Cistena

Histidina

Inhibidor Reversible
La unin del inhibidor y la enzima es reversible.
Al quitar el inhibidor del medio, se recupera la actividad.
Hay 3 tipos: Competitiva No Competitiva Acompetitiva (Alostrica)

Antibiticos Insecticidas Hervicidas Venenos Diferentes Medicamentos Inhibicin enzimtica

Dolor Inflamacin Infecciones virales

Cncer

Inhibicin Competitiva

Vmax igual KM diferente

Inhibidores Competitivos
Malonato Deshidrogenasa del cido succnico

Sulfas

Infecciones microbianas

Antihipertensores: Captopril y Enalopril Alopurinol Fluoruracilo Controla la gota Cncer

Inhibicin No Competitiva
El inhibidor NO se une al sitio activo

NO se puede revertir con un exceso de sustrato

Vmax diferente KM igual

Cinticas de Inhibicin
1 V
No competitivo Vmax diferente KM igual Competitivo Vmax igual KM diferente

No inhibitor

1/[S

Inhibicin acompetitiva
El inhibidor se une a una SUBUNIDAD reguladora

La subunidad cataltica une al sustrato y cataliza la reaccin