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ADN recombinante
Definicin Clonacin Vectores Biblioteca genmica y complementaria Identificacin y secuenciacin de AND clonado Marcadores PCR Aplicacin de la tcnica ADN recombinante
ADN
Definicin:
ACIDOS NUCLEICOS
Polmeros lineales de un monmero llamado NUCLETIDO
Nuclesido
Acido fosfrico Base nitrogenada
Purina ADENINA y GUANINA Pirimidinas CITOSINA TIMINA(ADN) URACILO(ARN)
Pentosa
D-ribosa 2-desoxi-D-ribosa
ARN ADN
GENOMA VEGETAL
Molcula que contiene la informacin gentica Unidad funcional del ADN ADN total de un organismo
Mitocondrial
Circular Regiones no codificantes
Cloroplstico
Circular (120-160 kPB)
Codifica 120-140 genes
ADN
ARNm
Protenas
FENOTIPO
ADN recombinante
Definicin: cualquier molcula de ADN formada de la unin de fragmentos de ADN de fuentes diferentes. Generalmente se cortan las molculas de ADN con enzimas de restriccin y se unen con ADN ligasa
Enzimas de restriccin
Cualquier enzima que reconoce y corta una secuencia especfica corta, sitio de restriccin, en una molcula de ADN de doble cadena
EcoRI 5' 3'
G A A T T C C T T A A G
3' 5'
5' 3'
G C T T A A
A A T T C G
3' 5'
A A T T C ATP
3'
A A T T C
3'
Clonacin
Clon: una poblacin de clulas idnticas o de molculas de ADN descendientes de un mismo progenitor Pasos: Insercin de un fragmento de ADN dentro de la molcula de ADN del vector (Enzimas) Introduccin de la molcula recombinante dentro de una clula husped para su replicacin (choque de calor o electroporacin) Seleccin de clulas transformadas (medio + antibitico)
VECTORES
Plsmidos: molculas circulares de ADN extracromosmico con auto replicacin (Origen de replicacin, gen de resistencia a antibiticos, regin de insercin de ADN forneo) (20kb) Fagos: virus que infecta bacteria, se replica como virus ltico (25 kb) Cosmidos: insercin de secuencia COS del fago dentro de plsmidos de Escherichia coli. (45 kb) BAC:(Cromosoma artificial de bacteria) (300kb) YAC: (Cromosoma artificial de levadura) (1000 kb)
Biblioteca genmica
Conjunto de molculas de ADN clonadas que contienen fragmentos de todo el ADN genmico
Biblioteca c-ADN
Conjunto de clones provenientes de m-ARN producidos por un tipo de clulas, el nmero de clones debe ser suficientemente grande para incluir la secuencia de cada uno de los m-ARN expresados en ese tejido Transcriptasa reversa: m-ARNc-ADNADN-cdclonacin Columnas de oligos d-T (eucariotes)
Enzimas de restriccin
Sonda marcada
Solucin alcalina
+ Electroforesis gel
Transferencia
Membrana
Autoradiograma
'
1, 9: Muestra 57-v (control positivo 1:10) 2, 10: H2O (control negativo) 3, 11: Muestra 103-v (Lara) 4, 12: Muestra 117-v (Zulia) 5, 13: Muestra 261-v (Aragua) 6, 14: Muestra 297-v (Gurico) 7, 15: Muestra 307-v (Gurico) 8: Marcador molecular 100 pb
'
Desoxiribosa
Una cadena de ADN que termine en un didesoxinucleotido no puede extenderse porque se requiere un 3-OH para la polimerizacion Didesoxiribosa
Marcadores
Morfolgicos Citolgicos Bioqumicos
Moleculares
PCR
Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase chain reaccion)
Pasos: Desnaturalizacin Hibridizacin de ADN complementario Extensin
PCR
Reactivos: Cebadores o Primers Taq polimerasa (Thermus aquaticus) Cl2Mg Desoxirribonucleotidos ADN patrn (Template)
Transferencia de genes (caracteres) entre organismos no relacionados genticamente Introducir nuevos caracteres de herencia simple
Introducir copias adicionales de un gen existente
Diferentes niveles de expresin En distintos tejidos u rganos Patrones de regulacin diferentes
CULTIVOS TRANSGNICOS
PRESENTE
Resistentes a herbicidas Resistentes a insectos
Otros
Soya transgnica
CULTIVOS TRANSGNICOS
FUTURO
Principales cultivos
Maz Patata Papa Soya Tomate Algodn Colza Tabaco Meln Remolacha Trigo Arroz Otros
10
15
20
25
30
35
40
45
Caractersticas agronmicas
Tolerancia a herbicidas Resistencia a insectos Calidad de productos Resistencia a virus Resistencia a hongos Propiedades agronmicas Otras Genes marcadores Resistencia a bacterias
10
15
20
25
30