Msc.

Galia Manyari Cervantes

Dos Grandes Grupos De Celulas Existen dos tipos de clulas: las procariotas, que se encuentran en los organismos agrupados en el reino Moneras (bacterias) y se caracterizan, sobre todo, por la ausencia de un ncleo, es decir, no poseen una membrana nuclear que encierre la informacin gentica de la clula, y las clulas eucariota, que estn presentes en todos los seres vivos, excepto en las bacterias, y poseen un ncleo verdadero. Adems de la membrana nuclear, las clulas eucariota poseen compartimientos y sistemas de transportes internos, formados por una compleja red de membranas.

Ncleo Celular Es un corpsculo contenido en el citoplasma de las clulas animales y vegetales, que contiene los cromosomas y es centro de informacin que dirige la sntesis proteica . Su forma es variable, ocupa una posicin central en la clula, pero puede estar situado parietalmente. En todas las clulas existe un ncleo, pero tambin hay clulas binucleadas y plurinucleadas. En perodo de reposo se observan en su interior nucleolos. Su composicin qumica es compleja (protenas, lpidos, compuestos inorgnicos, ADN, ARN, protaminas e histonas).

Situacin del ADN dentro de una clula. El cido desoxirribonucleico, es un tipo de cido nucleico, una macromolcula que forma parte de todas las clulas. Contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, siendo el responsable de su transmisin hereditaria. En el ADN, cada vagn es un nucletido, y cada nucletido, a su vez, est formado por un azcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adeninaA, timinaT, citosinaC o guaninaG) y un grupo fosfato que acta como enganche de cada vagn con el siguiente, es la que codifica la informacin gentica: por ejemplo, una secuencia de ADN puede ser ATGCTAGATCGC...

Las secuencias de ADN que constituyen la unidad fundamental, fsica y funcional de la herencia se denominan genes. Cada gen contiene una parte que se transcribe a ARN y otra que se encarga de definir cundo y dnde deben expresarse. La informacin contenida en los genes (gentica) se emplea para generar ARN y protenas, que son los componentes bsicos de las clulas, los "ladrillos" que se utilizan para la construccin de los orgnulos celulares, entre otras funciones. Dentro de las clulas, el ADN est organizado en estructuras llamadas cromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la clula se divida.

Historia El ADN fue aislado por vez primera durante el invierno de 1869 por el mdico suizo Friedrich Miescher mientras trabajaba en la Universidad de Tubinga. Miescher realizaba experimentos acerca de la composicin qumica del pus de vendas quirrgicas desechadas cuando not un precipitado de una sustancia desconocida que caracteriz qumicamente ms tarde, Lo llam "nuclena", En 1930 Levene y su maestro Albrecht Kossel probaron que la nuclena de Miescher es un cido desoxirribonucleico (ADN) formado por cuatro bases nitrogenadas (citosina (C), timina (T), adenina (A) y guanina (G)), En 1937 William Astbury produjo el primer patrn de difraccin de rayos X que mostraba que el ADN tena una estructura regular.

La funcin biolgica del ADN comenz a dilucidarse en 1928, con una serie bsica de experimentos de la gentica moderna realizados por Frederick Griffith, quien estaba trabajando con cepas "lisas" (S) o "rugosas" (R) de la bacteria Pneumococcus (causante de la neumona), segn la presencia (S) o no (R) de una cpsula azucarada que es la que confiere virulencia Finalmente, el papel exclusivo del ADN en la heredabilidad fue confirmado en 1952 mediante los experimentos de Alfred Hershey y Martha Chase, en los cuales comprobaron que el fago T2 transmita su informacin gentica en su ADN, pero no en su protena.

En cuanto a la caracterizacin qumica de la molcula, en 1940 Chargaff realiz algunos experimentos que le sirvieron para establecer las proporciones de las bases nitrogenadas en el ADN. Con esta informacin y junto con los datos de difraccin de rayos X proporcionados por Rosalind Franklin; James Watson y Francis Crick propusieron en 1953 el modelo de la doble hlice de ADN para representar la estructura tridimensional del polmero.

Propiedades fsicas y qumicas

Estructura qumica del ADN: dos cadenas de nucletidos conectadas mediante puentes de hidrgeno , que aparecen como lneas punteadas.

El ADN es un largo polmero formado por unidades repetitivas, una doble cadena de ADN mide de 22 a 26 angstroms (2,2 a 2,6 nanmetros) de ancho, y una unidad (un nucletido) mide 3,3 (0,33 nm) de largo. En los organismos vivos, el ADN no suele existir como una molcula individual, sino como una pareja de molculas estrechamente asociadas. Las dos cadenas de ADN se enroscan sobre s mismas formando una especie de escalera de caracol, denominada doble hlice.

Componentes Estructura de soporte: La estructura de soporte de una hebra de ADN est formada por unidades alternas de grupos fosfato y azcar. El azcar en el ADN es una pentosa, concretamente, la desoxirribosa. cido fosfrico:

Enlace fosfodister. El grupo fosfato une el carbono 5' del azcar de un nuclesido con el carbono 3' del siguiente. Desoxirribosa: Es un monosacrido de 5 tomos de carbono (una pentosa) derivado de la ribosa, que forma parte de la estructura de nucletidos del ADN. Su frmula es C5H10O4. Una de las principales diferencias entre el ADN y el ARN es el azcar, pues en el ARN la 2desoxirribosa del ADN es reemplazada por una pentosa alternativa, la ribosa

Bases nitrogenadas: Las cuatro bases nitrogenadas mayoritarias que se encuentran en el ADN son la adenina (abreviado A), citosina (C), guanina (G) y timina (T). Cada una de estas cuatro bases est unida al armazn de azcar-fosfato a travs del azcar para formar el nucletido completo (base-azcar-fosfato).

Timina: 2, 4-dioxo, 5-metilpirimidina.

Timina: En el cdigo gentico se representa con la letra T. Es un derivado pirimidnico con un grupo oxo en las posiciones 2 y 4, y un grupo metil en la posicin 5. Forma el nuclesido timidina (siempre desoxitimidina ya que slo aparece en el ADN) y el nucletido timidilato o timidina monofosfato (dTMP). En el ADN, la timina siempre se empareja con la adenina de la cadena complementaria mediante 2 puentes de hidrgeno, T=A. Su frmula qumica es C5H6N2O2 y su nomenclatura 2, 4-dioxo, 5-metilpirimidina.

Citosina: 2-oxo, 4-aminopirimidina.

Citosina: En el cdigo gentico se representa con la letra C. Es un derivado pirimidnico, con un grupo amino en posicin 4 y un grupo oxo en posicin 2. Forma el nuclesido citidina (desoxicitidina en el ADN) y el nucletido citidilato o (desoxi)citidina monofosfato (dCMP en el ADN, CMP en el ARN). La citosina siempre se empareja en el ADN con la guanina de la cadena complementaria mediante un triple enlace, CG. Su frmula qumica es C4H5N3O y su nomenclatura 2-oxo, 4 aminopirimidina. Su masa molecular es de 111,10 unidades de masa atmica. La citosina fue descubierta en 1894 cuando fue aislada en tejido del timo de carnero.

Adenina: 6-aminopurina.

Adenina: En el cdigo gentico se representa con la letra A. Es un derivado de la purina con un grupo amino en la posicin 6. Forma el nuclesido adenosina (desoxiadenosina en el ADN) y el nucletido adenilato o (desoxi)adenosina monofosfato (dAMP, AMP). En el ADN siempre se empareja con la timina de la cadena complementaria mediante 2 puentes de hidrgeno, A=T. Su frmula qumica es C5H5N5 y su nomenclatura 6-aminopurina. La adenina, junto con la timina, fue descubierta en 1885 por el mdico alemn Albrecht Kossel.

Guanina: 6-oxo, 2-aminopurina.

Guanina: En el cdigo gentico se representa con la letra G. Es un derivado prico con un grupo oxo en la posicin 6 y un grupo amino en la posicin 2. Forma el nuclesido (desoxi)guanosina y el nucletido guanilato o (desoxi)guanosina monofosfato (dGMP, GMP). La guanina siempre se empareja en el ADN con la citosina de la cadena complementaria mediante tres enlaces de hidrgeno, GC. Su frmula qumica es C5H5N5O y su nomenclatura 6-oxo, 2aminopurina.

Estructura 1.Estructura primaria: 1.Secuencia de nucletidos encadenados. Es en estas cadenas donde se encuentra la informacin gentica, y dado que el esqueleto es el mismo para todos, la diferencia de la informacin radica en la distinta secuencia de bases nitrogenadas. Esta secuencia presenta un cdigo, que determina una informacin u otra, segn el orden de las bases. 2.Estructura secundaria: 1.Es una estructura en doble hlice. Permite explicar el almacenamiento de la informacin gentica y el mecanismo de duplicacin del ADN. Fue postulada por Watson y Crick. 2.Es una cadena doble, dextrgira o levgira, segn el tipo de ADN. Ambas cadenas son complementarias, pues la adenina y la guanina de una cadena se unen, respectivamente, a la timina y la citosina de la otra. 3.Existen tres modelos de ADN. El ADN de tipo B es el ms abundante y es el descubierto por Watson y Crick.

1.Estructura terciaria: 1.Se refiere a cmo se almacena el ADN en un espacio reducido, para formar los cromosomas. Vara segn se trate de organismos procariotas o eucariotas: 2.En procariotas el ADN se pliega como una sper-hlice, generalmente en forma circular y asociada a una pequea cantidad de protenas. Lo mismo ocurre en orgnulos celulares como las mitocondrias y en los cloroplastos. 3.En eucariotas, dado que la cantidad de ADN de cada cromosoma es muy grande, el empaquetamiento ha de ser ms complejo y compacto; para ello se necesita la presencia de protenas, como las histonas y otras protenas de naturaleza no histnica (en los espermatozoides estas protenas son las protaminas).33

Estructuras en doble hlice

De izquierda a derecha, las estructuras de ADN A, B y Z.

El ADN existe en muchas conformaciones. Sin embargo, en organismos vivos slo se han observado las conformaciones ADN-A, ADN-B y ADN-Z. La conformacin que adopta el ADN depende de su secuencia, la cantidad y direccin de superenrollamiento que presenta, la presencia de modificaciones qumicas en las bases y las condiciones de la solucin, tales como la concentracin de iones de metales y poliaminas. De las tres conformaciones, la forma "B" es la ms comn en las condiciones existentes en las clulas. Las dos dobles hlices alternativas del ADN difieren en su geometra y dimensiones.

Giros

Doble hlice: a) Dextrgira, b) Levgira La doble hlice es una espiral dextrgira, esto es, cada una de las cadenas de nucletidos gira a derechas; esto puede verificarse si nos fijamos, yendo de abajo a arriba, en la direccin que siguen los segmentos de las hebras que quedan en primer plano. Si las dos hebras giran a derechas se dice que la doble hlice es dextrgira, y si giran a izquierdas, levgira .Pero en la conformacin ms comn que adopta el ADN, la doble hlice es dextrgira, girando cada par de bases respecto al anterior unos 36.

Funciones biolgicas Las funciones biolgicas del ADN incluyen el almacenamiento de informacin (genes y genoma), la codificacin de protenas (transcripcin y traduccin) y su autoduplicacin (replicacin del ADN) Genes y genoma El conjunto de informacin que cumple esta funcin en un organismo dado se denomina genoma, y el ADN que lo constituye, ADN genmico. El ADN genmico (que se organiza en molculas de cromatina que a su vez se ensamblan en cromosomas) se encuentra en el ncleo celular de los eucariotas, adems de pequeas cantidades en las mitocondrias y cloroplastos.

Clases de ADN Acorde a las evidencias, slo una pequea parte del ADN constituye genes (menos del 10 %). Existen diferentes tipos que los podemos dividir en: -ADN de copia nica(el 57 % del total) formados por segmentos de aproximadamente 1000 pares de nucletidos del longitud, una pequea parte de este ADN contiene los genes. -ADN repetitivo(20 %)son unidades de aproximadamente 300 pares de nucletidos* que se repiten en el genoma unas 105 veces(unidades de repeticin). Se intercalan con el ADN de copia nica. -ADN satlite(altamente repetitivo: 28 %)son pares de nucletidos que se repiten en caractersticos en cada especie y pueden centrifugacin. Constituyen la heterocromatina funcin. unidades cortas de el genomio. Son ser separados por y no se le conoce

Replicacin del ADN

Esquema representativo de la replicacin del ADN. La replicacin del ADN es el proceso por el cual se obtienen copias o rplicas idnticas de una molcula de ADN. La replicacin es fundamental para la transferencia de la informacin gentica de una generacin a la siguiente y, por ende, es la base de la herencia.

La vida de los seres vivos es muy variable , por tanto para que esta no se extinga ha de haber un momento en se reproduzcan, lo cual lleva implicito la formacin de copias del ADN del progenitor o progenitores Se dieron muchas hiptesis sobre como se dupllicaba el ADN hasta que Watson y Crick propusieron la hiptesis semiconservativa (posteriormente demostrada por Meselson Y Stahl en 1957), segn la cual, las nuevas molculas de ADN formadas a partir de otra antigua, tienen una hebra antigua y otra nueva.

MECANISMOS DE DUPLICACION DEL ADN EN PROCARIOTES Hay que recordar que es circular y ocurre en tres etapas: 1 etapa: desenrrollamiento y apertura de la doble hlice.en el punto ori-c. Intervienen un grupo de enzimas y proteinas, a cuyo conjunto se denomina replisoma * Primero: intervienen las helicasas que facilitan en desenrrollamiento * Segundo: actuan las girasas y topoisomerasas que eliminan la tensin generada por la torsin en el desenrrollamiento. * Tercero: Actuan las proteinas SSBP que se unen a las hebras molde para que no vuelva a enrollarse.

2 etapa. sntesis de dos nuevas hebras de ADN. * Actuan las ADN polimerasas para sintetizar las nuevas hebras en sentido 5-3, ya que la lectura se hace en el sentido 3-5. * Intervienen las ADN polimerass I y III, que se encargan de la replicacin y correccin de errores. La que lleva la mayor parte del trabajo es la ADN polimerasa III * Actua la ADN polimerasa II, corrigiendo daos causados por agentes fsicos. La cadena 3-5es leida por la ADN polimerasa III sin ningn tipo de problemas ( cadena conductora). En la cadena 5-3 no puede ser leida directamente, esto se soluciona leyendo pequeos fragmentos ( fragmentos de Okazaki ) que crecen en el sentido 5-3y que ms tarde se unen . Esta es la hebra retardada,llamada de esta forma porque su sntesis es ms lenta.

La ADN polimerasa III es incapaz de iniciar la sntesis por s sola, para esto necesita un cebador (ARN) que es sintetizado por una ARN polimerasa (=primasa). Este cebador es eliminado posteriormente. 3 etapa: correccin de errrores. El enzima principal que actua como comadrona (R. Shapiro) es la ADN polimerasa III, que corrige todos los errores cometidos en la replicacin o duplicacin. Intervienen otros enzimas como: * Endonucleasas que cortan el segmento erroneo. * ADN polimerasas I que rellenan correctamente el hueco. * ADN ligasas que unen los extremos corregidos

DUPLICACIN DEL ADN EN EUCARIONTES Es similar a la de los procariontes, es decir, semiconservativa y bidireccional Existe una hebra conductora y una hebra retardada con fragmentos de Okazaki. Se inicia en la burbujas de replicacin (puede haber unas 100 a la vez)

Intervienen enzimas similares a los que actuan en las clulas procariontes y otros enzimas que han de duplicar las histonas que forman parte de los nucleosomas. Los nucleosomas viejos permanecen en la hebra conductora.

Enzimas que modifican el ADN Nucleasas y ligasas Las nucleasas son enzimas que cortan las hebras de ADN mediante la catlisis de la hidrlisis de los enlaces fosfodister. Las nucleasas que hidrolizan nucletidos a partir de los extremos de las hebras de ADN se denominan exonucleasas, mientras que las endonucleasas cortan en el interior de las hebras. Las nucleasas que se utilizan con mayor frecuencia en biologa molecular son las enzimas de restriccin, ejemplo, la enzima EcoRV, que se muestra a la izquierda, reconoce la secuencia de 6 bases 5-GAT|ATC-3. Las enzimas denominadas ADN ligasas pueden reunir hebras de ADN cortadas o rotas. Las ligasas son particularmente importantes en la replicacin de la hebra que sufre replicacin discontinua en el ADN.

Topoisomerasas y helicasas son enzimas que poseen a la vez actividad nucleasa y ligasa. Estas protenas varan la cantidad de ADN superenrollado. Algunas de estas enzimas funcionan cortando la hlice de ADN y permitiendo que una seccin rote, de manera que reducen el grado de superenrollamiento. Una vez hecho esto, la enzima vuelve a unir los fragmentos de pertenecen al grupo de los motores moleculares. Utilizan energa qumica almacenada en los nuclesidos trifosfatos, fundamentalmente ATP, para romper puentes de hidrgeno entre bases y separar la doble hlice de ADN en hebras simples.

Expresin del Transcripcin

mensaje

gentico.

La informacin contenida en la secuencia de nucletidos del ADN poda generar proteinas; sin embargo el ADN est en el ncleo y las proteinas se sintetizan en los ribosomas, los cuales estn situados en el citoplasma. El intermediario result ser un ARNm

TRANSCRIPCIN EN PROCARIONTES.
En ella podemos distinguir las siguientes fases: a) Iniciacin: la ARN polimerasa se une a un cofactor
que permite su unin a una regin del ADN llamada promotor, la cual posee una secuenciaa TATAAT TTGACA. b) Elongacin: la ARN polimerasa recorre la hebra de ADN hacia su extremo 5 sintetizando una hebra de ARNm en direccin 5-3 c) Finalizacin: presenta dos variantes. En una interviene un cofactor "p" y en otra no interviene dicho cofactor. El proceso fiinaliza al llegar a una secuencia rica en G y C (zona llamada operador). El ADN vuelve a su forma normal y el ARNm queda libre. d) Maduracin: si lo que se forma es un ARN m no hay maduracin, pero si se trata de un ARNt o ARNr hay procesos de corte y empalme.

TRANSCRIPCIN EN EUCARIONTES Hay que tener en cuenta dos cosas: - Existen tres tipos de ARN polimerasa I, II y III. - Los genes estn fragmentados en zonas sin sentido o intrones y zonas con sentido o exones. Antes ha de madurar y eliminar los intrones. - Desempaquetamiento de las histonas.

En la trascripcin de eucariontes se distinguen las siguientes fases: a) Iniciacin: la ARN polimerasa II se une a una zona del ADN llamada promotor (posee secuencias CAAT y TATA) b) Elongacin: la sntesis continua en sentido 5-3. Al poco se aade una caperuza (metil-guanosn trifosfato) al extremo 5. c) Finalizacin: parece que est relacionado con la secuencia TTATTT. Ahora interviene un poli-A polimerasa que aade una cola de poli-A al pre-ARNm(ARNhn). d) Maduracin: se produce en el ncleo y la hace un enzima llamada RNPpn, que elimina los nuevos intrones (I) formados. Posteriormente las ARN ligasas empalman los exones (E) y forman el ARNm

Tecnologa del ADN recombinante La tecnologa del ADN recombinante, piedra angular de la ingeniera gentica, permite propagar grandes cantidades de un fragmento de ADN de inters, el cual se dice que ha sido clonado. Para ello, debe introducirse dicho fragmento en otro elemento de ADN, generalmente un plsmido, que posee en su secuencia los elementos necesarios para que la maquinaria celular de un hospedador, normalmente Escherichia coli, lo replique. De este modo, una vez transformada la cepa bacteriana, el fragmento de ADN clonado se reproduce cada vez que aquella se divide.

Secuenciacin de ADN La secuenciacin del ADN consiste en dilucidar el orden de los nucletidos de un polmero de ADN de cualquier longitud, si bien suele dirigirse hacia la determinacin de genomas completos, debido a que las tcnicas actuales permiten realizar esta secuenciacin a gran velocidad, lo cual ha sido de gran importancia para proyectos de secuenciacin a gran escala como el Proyecto Genoma Humano. Otros proyectos relacionados, en ocasiones fruto de la colaboracin de cientficos a escala mundial, han establecido la secuencia completa del ADN de muchos genomas de animales, plantas y microorganismos.

El ARN: Otro Acido Importante Este cido, al igual que el ADN, est compuesto por tres sustancias: cido fosfrico, un monosacrido del tipo pentosa (la ribosa) y una base nitrogenada cclica que puede ser prica (uracilo) o pirimidnica (adenina o citosina). La unin de la base nitrogenada con la pentosa forma un nuclesido, el cual al unirse con el cido fosfrico da un nucletido; la unin entre s en enlace diester da el polinucletido, en este caso el cido ribonucleico. En algunos virus el ARN es el material de la herencia y experimenta autoduplicacin; pero bsicamente se encuentra en los ribosomas (cido ribonucleico ribosmico) y como cido de transferencia y mensajero.

Ingeniera gentica La ingeniera gentica es la tecnologa de la manipulacin y transferencia de ADN de un organismo a otro, que posibilita la creacin de nuevas especies, la correccin de defectos genticos y la fabricacin de numerosos compuestos.

Planta de tabaco en la que estn clonados los genes de la Luciferasa.

Aparicin de la Ingeniera Gentica

Semillas de trigo tratadas con bacterias como las colonizadas en esta placa de Petri son practicamente inmunes a enfermedades fngicas que destruyen su raz. El gel de secuenciacin en el fondo muestra el cdigo gentico de las enzimas bacterianas que sintetizan antibiticos naturales. En 1953 se descubri el fenmeno llamado de restriccin: ciertos fagos (virus bacterianos) que parasitan a E. coli podan desarrollarse en ciertas cepas de esta bacteria, pero no podan hacerlo en otras (se dice que estn "restringidos" en determinadas cepas). Esto nos lleva ya a la idea de lo que es la Ingeniera Gentica: la formacin in vitro de nuevas combinaciones de material gentico, por medio de la insercin de un ADN de inters en un vehculo gentico (vector), de modo que tras su introduccin en un organismo hospedero el ADN hbrido (recombinante) se pueda multiplicar, propagar, y eventualmente expresarse.

Experimento de Ingeniera Gentica Un experimento de Ingeniera Gentica podra ser: 1.Se corta por separado el ADN del organismo a estudiar y el ADN del vector con la misma restrictasa, de modo que se generan extremos compatibles entre s (mutuamente cohesivos). 2.Se juntan ambos ADN y se les aade ADN-ligasa: de esta forma, las uniones entre ADN pasajero y ADN del vector se sellan mediante un enlace covalente, generndose molculas hbridas (quimricas o recombinantes). 3.Ahora hay que introducir las molculas generadas en los organismos husped. En el caso de bacterias se recurre a una tcnica sencilla denominada transformacin, que permite la entrada del ADN a travs de las envueltas del microorganismo.

En 1973 los investigadores Stanley Cohen y Herbert Boyer producen el primer organismo recombinando partes de su ADN en lo que se considera el comienzo de la ingeniera gentica. En 1997 se clona el primer mamfero, la Oveja Dolly. Los genes controlan todos los aspectos de la vida de cada organismo, incluyendo metabolismo, forma, desarrollo y reproduccin. Por ejemplo, una protena X har que en el individuo se manifieste el rasgo de "pelo oscuro", mientras que la protena Y determinar el rasgo de "pelo claro". Otra particularidad de esta molcula es su universalidad. A raz del concepto de gen, surgen algunas incgnitas: Son compatibles las cargas genticas de especies distintas? Puede el gen de una especie funcionar y manifestarse en otra completamente distinta? Se puede aislar y manipular el ADN?

Tcnicas La ingeniera gentica incluye un conjunto de tcnicas biotecnolgicas, entre las que destacan: La tecnologa del ADN recombinante; La secuenciacin del ADN; La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).

La tecnologa del ADN recombinante Con la que es posible aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo para introducirlo en otro. Si se quieren unir dos ADNs, cada uno de los cuales procede de una especie diferente podemos utilizar dichas enzimas como herramientas. Cada ADN se trata con una endonucleasa de restriccin que origina en este caso un corte escalonado en las dos hebras dobles de ADN. Los extremos escalonados del ADN1 y el ADN2 son complementarios, con lo cual, una condicin que tiene que tener los dos ADNs que se quiere unir es que tengan un pequeo fragmento igualen sus secuencias. Los dos DNAs as cortados se mezclan, se calientan y s enfran suavemente.

La secuenciacin del ADN Tcnica que permite saber el orden o secuencia de los nucletidos que forman parte de un gen. Abreviadamente, ste sera el mtodo a seguir: Como la tcnica se basa en la sntesis de ADN, para hacer la reaccin de secuenciacin se necesita: Como "molde" se utiliza una de las cadenas del fragmento de ADN que se va a secuenciar. Como "cebador" para iniciar la sntesis, se necesita un corto oligonucletido complementario del extremo de la cadena. Desoxinucletidos de las cuatro bases: dAMP, dTMP, dGMP, dCMP. Didesoxinucletidos de una base en cada una de las cuatro reacciones de secuenciacin.

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) La tcnica de la PCR consiste en: 1.En un tubito se mezcla el ADN molde, los dos cebadores (oligonucletidos), los cuatro dNTPs y la ADN-polimerasa termorresistente. 2.Se calienta a 94 C durante 5 min, con lo que se separan las cadenas del ADN molde a amplificar, generndose las correspondientes cadenas sencillas. 3.Se baja la temperatura en torno a los 60 C, de modo que cada cebador se empareja con el extremo correspondiente de una de las cadenas del molde. Se dice que ahora tenemos los moldes cebados.

4.Se sube la temperatura hasta 72 C (la ptima de funcionamiento de la Taq), y se deja durante 5 min, tiempo durante el que se est produciendo la sntesis in vitro de las cadenas complementarias de cada hebra molde. 5. Se sube la temperatura a 94 C durante 20 segundos, suficientes para separar la cadena recin sintetizada respecto del molde original. 6. Las cadenas sencillas generadas entran ahora en un nuevo ciclo (pasos 1 al 5), y as sucesivamente, de modo que tras 30-60 ciclos obtenemos una amplificacin del ADN original de millones o miles de millones de veces. 7. Las aplicaciones de la ingeniera gentica: Son numerosas las aplicaciones prcticas y comerciales de la estudios de la ingieneria, entre otras cosas, se emplea para organismos transgnicos.

Biotecnologa gentica Su objetivo es la manipulacin in Vitro del ADN, la introduccin de este ADN as modificado en clulas viva y la incorporacin del mismo como parte del material hereditario de dichas clulas. Terapia gentica La terapia gentica consiste en sustituir o aadir, segn el caso, una copia normal de la regin defectuosa del ADN para poder solucionar y restablecer la funcin alterada, evitando el desarrollo de enfermedades de origen gentico, como por ejemplo la facultad defensiva ante las enfermedades infecciosas.

Implicaciones ticas La ingeniera tiene aplicaciones en campos muy diversos; dos de los ms importantes son la medicina y la creacin de nuevas especies o mejora de las existentes. El progreso en estos mbitos puede aportar resultados capaces de aliviar algunos problemas de gran importancia, pero no se debe olvidar que la explotacin comercial de las tecnologas requeridas slo est al alcance de unas pocas empresas multinacionales. Como era de esperar, la tradicional dependencia econmica de los pases subdesarrollados tiene en la ingeniera gentica un nuevo elemento de desequilibrio. En otro orden de cosas, la ingeniera gentica puede plantear graves problemas ticos. Hay opiniones muy diversas sobre dnde han de situarse los lmites de manipulacin del material que est en la base de todos los procesos vitales.

Ingeniera gentica en seres vivos La ingeniera tiene aplicaciones en campos muy diversos; dos de los ms importantes son la medicina y la creacin de nuevas especies o mejora de las existentes. El progreso en estos mbitos puede aportar resultados capaces de aliviar algunos problemas de gran importancia, pero no se debe olvidar que la explotacin comercial de las tecnologas requeridas slo est al alcance de unas pocas empresas multinacionales. Como era de esperar, la tradicional dependencia econmica de los pases subdesarrollados tiene en la ingeniera gentica un nuevo elemento de desequilibrio

Ingeniera gentica en levaduras y hongos Son junto con las bacterias los sistemas ms utilizados. El Saccharomyces cerevisiae fue el primer sistema eucariota secuenciado completamente. Otra levadura importante es P. pastoris, utilizada para conseguir proinsulina en cultivo discontinuo y quitinasa en cultivo continuo. En el campo de los hongos destaca por su labor mdica el Penicillium.

Ratones knockout.

Ingeniera Gentica en animales La manipulacin gentica de los animales persigue mltiples objetivos: aumentar el rendimiento del ganado, producir animales con enfermedades humanas para la investigacin, elaborar frmacos, etc. Ingeniera Gentica en plantas Actualmente se han desarrollado plantas transgnicas de ms de cuarenta especies. Mediante ingeniera gentica se han conseguido plantas resistentes a enfermedades producidas por virus, bacterias o insectos. Estas plantas son capaces de producir antibiticos, toxinas y otras sustancias que atacan a los microorganismos.

Ingeniera gentica en humanos Terapia somtica celular. Uno o ms tejidos son sometidos a la adicin de uno o ms genes teraputicos, mediante tratamiento directo o previa extirpacin del tejido. Esta tcnica se ha utilizado para el tratamiento de cnceres o enfermedades sanguneas, hepticas o pulmonares.

Aplicaciones de la Ingeniera Gentica en medicina e industria farmacetica Obtencin de protenas de mamferos Una serie de hormonas como la insulina, la hormona del crecimiento, factores de coagulacin, etc... tienen un inters mdico y comercial muy grande. Antes, la obtencin de estas protenas se realizaba mediante su extraccin directa a partir de tejidos o fluidos corporales. En la actualidad, gracias a la tecnologa del ADN recombinante, se clonan los genes de ciertas protenas humanas en microorganismos adecuados para su fabricacin comercial. Un ejemplo tpico es la produccin de insulina que se obtiene a partir de la levadura Sacharomyces cerevisae, en la cual se clona el gen de la insulina humana.

Obtencin de vacunas recombinantes El sistema tradicional de obtencin de vacunas a partir de microorganismos patgenos inactivos, puede comportar un riesgo potencial. Muchas vacunas, como la de la hepatitis B, se obtienen actualmente por ingeniera gentica. Como la mayora de los factores antignicos son protenas lo que se hace es clonar el gen de la protena correspondiente.

Diagnstico de enfermedades de origen gentico Conociendo la secuencia de nucletidos de un gen responsable de una cierta anomala, se puede diagnosticar si este gen anmalo est presente en un determinado individuo Obtencin de anticuerpos monoclonales Este proceso abre las puertas para luchar contra enfermedades como el cncer y diagnosticarlo incluso antes de que aparezcan los primeros sntomas.

Logros El 7 de marzo de 2010 fue publicado en lnea y rectificado el 25 de marzo del mismo ao en la revista Nature, una de las revistas cientficas ms prestigiosas del mundo, una investigacin del cinvestav Irapuato en colaboracin con cientficos de Estados Unidos y Francia en la cual hallaron una protena llamada argonauta 9 con la que se podra llegar a inducir la clonacin natural de las plantas, esto tendra un fuerte impacto en la industria de semillas, y algunos dicen que podra revolucionar la produccin agrcola internacional.

Agricultura. Mediante la ingeniera gentica han podido modificarse las caractersticas de gran cantidad de plantas para hacerlas ms tiles al hombre, son las llamadas plantas transgnicas. Las primeras plantas obtenidas mediante estas tcnicas fueron un tipo de tomates, en los que sus frutos tardan en madurar algunas semanas despus de haber sido cosechados. Vamos a ver las tcnicas de modificacin gentica en cultivos celulares. Estas clulas pueden someterse a tratamientos que modifiquen su patrimonio gentico. Las tcnicas se clasifican en directas e indirectas. Entre las tcnicas indirectas cabe destacar la transformacin de clulas mediada por Agrobacterium tumefaciens.

Entre los principales caracteres que se han transferido a vegetales o se han ensayado en su transfeccin, merecen destacarse: Resistencia a herbicidas, insectos y enfermedades microbianas. Ya se dispone de semillas de algodn, que son insensibles a herbicidas. Para la resistencia a los insectos se utilizan cepas de Bacillus thuringiensis que producen una toxina (toxina - Bt) daina para las larvas de muchos insectos, de modo que no pueden desarrollarse sobre las plantas transgnicas con este gen. Respecto a los virus se ha demostrado que las plantas transgnicas con el gen de la protena de la cpsida de un virus, son resistentes a la invasin de dicho virus.

Incremento del rendimiento fotosinttico. Para ello se transfieren los genes de la ruta fotosinttica de plantas C4 que es ms eficiente. Mejora en la calidad de los productos agrcolas. Tal es el caso de la colza y la sojatransgnicas que producen aceites modificados, que no contienen los caracteres indeseables de las plantas comunes. Sntesis de productos de inters comercial. Existen ya plantas transgnicas que producen anticuerpos animales, interfern, e incluso elementos de un polister destinado a la fabricacin de plsticos biodegradables Asimilacin de nitrgeno atmosfrico. Aunque no hay resultados, se ensaya la transfeccin del gen nif responsable de la nitrogenasa, existente en microorganismos fijadores de nitrgeno,