INTRODUCCION

Se cultiv H. pylori en Australia en los aos 80.

El descubrimiento por los mdicos australianos Barry Marshall y Robin Warren en 1982. En la actualidad se tiene la secuenciacin completa del genoma para determinar factores de virulencia, los mecanismos por los que la bacteria coloniza la mucosa gstrica y produce dao celular.

Robin Warren (izquierda) y Barry Marshall en su laboratorio de Perth, Australia a mediados de los aos 80.

ORIGEN
Por la acidez del estmago pareca inconcebible que all pudieran sobrevivir bacterias. En 1984 fue aislada de la mucosa gstrica humana una bacteria espiralada . Las modernas tcnicas de biologa molecular se pudieron secuenciar las bases nitrogenadas de la molcula 16S del RNA ribosomial de esta bacteria, determin un nuevo gnero: Helicobacter; entonces se le dio a esta bacteria el nombre Helicobacter pylori.

TAXONOMA
Desde su cultivo ha recibido diferentes denominaciones hasta adquirir el nombre definitivo:
CLO (Campylobacter like organism). GCLO (Gastric Campylobacter like organism). Campylobacter pyloridis. Campylobacter pyloric. Campylobacter pylori. Helicobacter pylori: (1989).

Infeccin por Helicobacter pylori

IARC y OMS

carcingeno de clase I.
INFANCIA persona persona Via fecal-oral y la oraloral Dolor abdominal Nuseas Vmitos mucosos Malestar general Despus ADULTO La bacteria coloniza el aparato gastrointestinal: Gastritis aguda crnica Ulcera peptdica Adenocarcinma gstrico.

CARACTERSTICAS DE VIRULENCIA
Bacilo Gram negativo y tiene un ph de 6.0 7.0. 4 a 6 flagelos movilidad mucosa y no ser eliminado mecanismos de defensa del husped. Variedad de adhesinas se unen receptores de la mucosa gstrica la colonizacin

Estructura espiral introducirse moco gstrico - clulas epiteliales gstricas.

Enzimas metablicas producir dao tejidos - medio de defensa.

CARACTERSTICAS BIOQUMICAS
Helicobacter pylori posee diferentes enzimas para obtener energa o defenderse del ambiente : Ureasa: Enzima hidroliza Urea Amonio y bixido de carbono alcalinizacin Oxidasa: Enzima oxida sustrato compuesto coloreado (prpura) en presencia de oxgeno.

Catalasa: Enzima descompone Agua oxigenada Agua Liberando oxgeno Burbujas.

Cambio de color (rosa) al variar el pH del medio que tiene urea.

CULTIVO
Contienen suplementos : Diferentes medios : Agar caldo cerebro-corazn Columbia Brucella. Agar de Wilkins -Chalgren 5-10 % de sangre de caballo, carnero o humana Combinacin de al menos 4 antibiticos selectivos. Otros aditivos

AGAR COLUMBIA suplementada con 7 % de sangre antibiticos : trimetoprina, vancomicina, cefsulodina y anfotericina B, para el aislamiento de H. pylori Se recoge muestras de biopsia gstrica recientes (antro y del cuerpo). Durante la manipulacin, evitar la exposicin prolongada al aire porque el organismo es muy sensible al oxgeno. Las muestras de biopsia deben triturarse o pulverizarse con una pequea cantidad de solucin salina fisiolgica antes de aplicarse al medio de cultivo.

Columbia Agar Base.

Es una excelente base para el crecimiento de microorganismos exigentes. Con el agregado de 5-10 % de sangre (de carnero, de caballo), se logra una buena observacin de las reacciones hemolticas.

Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Peptona Triptena Extracto de levadura Extracto de corazn Almidn soluble Cloruro de sodio Agar

5.0 12.0 3.0 3.0 1.0 5.0 13.5

Suspender 42,5 g de polvo por litro de agua destilada.

Calentar con agitacin frecuente y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.

Suplementos requeridos por H. pylori para su crecimiento en medios artificiales

Requiere suplementos para su crecimiento como sangre de carnero o caballo o suero fetal bovino.

Periodo de incubacin de 7 a 10 das a 35

Jarra de anaerobiosis
Permiten una atmsfera adecuada para el crecimiento de H. pylori , La jarra debe cerrarce hermticamente

Condiciones de cultivo
Estufa de CO2 para el crecimiento de H. pylori
Una temperatura entre 35 y 37C, una atmsfera con 5 al 10% de CO2 y una humedad relativa del 90 al 95%.

Imagen de colonias de H. pylori en cultivo

Aspecto brillante y transparente, de aprox.1 mm de dimetro, 0,5 a 1,0 m de ancho y de 3 m de largo, colonias pequeas

Contaminacin del cultivo con microorganismos

Siembra de una biopsia gstrica es recomendable medios selectivos que contengan antibiticos. Este es un cultivo no selectivo con crecimiento masivo de diferentes microorganismos impide el crecimiento de H. pylori.

Visin microscpica
Tincin de Gram : Cuando crece en medios artificiales pierde su forma espiralar y adquiere forma ms recta de color rosa por ser bacilo gramnegativo. Tincin con bromuro de etidio a partir de biopsia gstrica: Emite fluorescencia con morfologa espiral, se observa en microscopio de fluorescencia.

Consecuencias de su colonizacin:
Helicobacter pylori y Gastritis La gastritis crnica es uno de los procesos inflamatorios ms frecuentes del ser humano y actualmente H. pylori es considerado como el agente causante de esta enfermedad.

LCERA DUODENAL Y GSTRICA

La infeccin por H. pylori est presente en el 95 al 97% de los pacientes con lcera duodenal y en el 83% de pacientes con lcera gstrica.

Mucosa del duodeno en una endoscopia digestiva

Mucosa de estomago en una endoscopia digestiva

CNCER GSTRICO:

H. pylori es considerado un factor de riesgo en el desarrollo del cncer de estmago, con una prevalencia entre el 69 y el 94% en pacientes con cncer gstrico.
HELICOBACTER PYLORI, LCERA PPTICA Y ESTRS PSQUICO

El estrs puede facilitar la evolucin de la infeccin por Hp hacia una lcera a causa de la hiperclorhidria gstrica y reducir las defensas mucosas del estmago.
HELICOBACTER PYLORI Y ESTADO NUTRICIONAL

Mayor infeccin con Hp en los nios con una baja estatura y reducido peso corporal.

En nios absorcin deteriorada de nutrientes sufren absorcin disminuida de cido flico y cobalamina (anemia)

DIAGNSTICO
Principales mtodos de diagnstico utilizados en la infeccin por H. pylori.
Agresivos (biopsia gstrica) Directos No agresivos

Indirectos

DIRECTOS AGRESIVOS
CULTIVOS :

Determina la sensibilidad a los antimicrobianos y para caracterizar o tipar estas bacterias.

HISTOLOGA:

Ver la densidad de la colonizacin, gravedad de la gastritis, leucocitos polimorfonucleares, metaplasia y/o atrofia.
TCNICAS MOLECULARES:

Para detectar el ADN de H. pylori , bsqueda de factores de patogenicidad, mutaciones en los genes que codifican la resistencia a los antimicrobianos, infecciones mixtas por diferentes cepas de H. pylori .

DIRECTOS-NO AGRESIVOS
TCNICAS MOLECULARES:

Con el jugo gstrico, saliva o heces, el ADN de Helicobacter pylori se puede encontrar en la cavidad oral o en las heces.
ANTGENO EN HECES:

La deteccin del antgeno en heces es un mtodo en investigacin que parece presentar una muy buena sensibilidad y especificidad.

INDIRECTOS Y AGRESIVOS
UREASA RPIDA:

Permite detectar la presencia de la ureasa de H. pylori, directamente de la biopsia en poco tiempo.

INDIRECTOS-NO AGRESIVOS
PRUEBA DEL ALIENTO CON UREA (UBT):

Se basa en la capacidad del H. pylori de hidrolizar urea gracias a su ureasa. Despus de ingerir urea, con carbono 14 o 13 se mide la cantidad de CO2 marcado liberado, se da cuando el paciente est infectado con H. pylori.
SEROLOGA:

Detectar la presencia de anticuerpos anti-H. pylori en el suero. Destacan mtodos de ELISA y los inmunoblot

TRATAMIENTO
Es necesario el conocimiento de la sensibilidad o resistencia a distintos antibiticos. H. pylori es resistente debido a diversos factores:
El antibitico no llega a las zonas profundas de la mucosa

gstrica donde se encuentra H. pylori. El antibitico es inactivado por el pH cido del estmago Las condiciones en las que la bacteria se encuentra en el estmago, no son fcilmente reproducibles en el laboratorio. Se pueden desarrollar resistencias durante el tratamiento

Compuestos utilizados en el tratamiento

Compuestos no antibiticos:
Sales de bismuto.

Inhibidores de la bomba de protones de las clulas parietales

gstricas (Omeprazol, Lansoprazol, Pantoprazol, Rabeprazol).

Antagonistas de los receptores H2 (Ranitidina, Famotidina,

Cimetidina).

Ranitidina citrato de bismuto (RBC).

Compuestos Antibiticos:
Betalactmicos: Amoxicilina.

Macrlidos: Azitromicina, Claritromicina y Roxitromicina.

Nitroimidazoles: Metronidazol, Tinidazol. Tetraciclina.

Es mas utilizado en ulceracion gastrica y ulceracion duodenal

SON LOS MAS UTILIZADOS , AMBOS AL MISMO TIEMPO

ES MAS UTILIZADO EN ULCERACION GASTRICA Y ULCERACION DUODENAL

MTODOS DE DETECCIN DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIBITICOS

Se han utilizado mtodos de dilucin (en agar o en caldo) y de

difusin (con disco o con epsilmetro: E-test). Los mtodos es de difusin util para determinar la sensibilidad el mtodo recomendado es dilucin en agar. Mtodo de dilucin en agar se incluye el antibitico diluido de 25 a 45 gotas de la suspensin bacteriana y se puede hacer con diferentes cepas.

Mtodo de E-test en una cepa sensible

Es una tira de plstico que tiene un antibitico de diferentes concentraciones en forma de gradiente. Cuando se pone en contacto con el medio de cultivo, el antibitico se difunde. El crecimiento de la bacteria cerca a la tira sirve para determinar si es sensible o resistente.

Uhm m..

GRACIAS POR SU ATENCIN