Un protocolo de aislamiento

La historia de como gastamos 40 horas hombre para aislar la bacteria ms comn sobre la faz de la tierra

Por Ariel Aptekmann y Francisco Dur

Enterobacterias Toma de muestra Parque Centenario Caldo McConkey Agar EMB

Pseudomonas Parque Centenario

Bacilos Arroz

Lactobacilos Yogurisimo

Enriquecimiento

Caldo M9

Calor
Agar Mossel Agar Nutritivo

de fabrica

Aislamiento

Agar Cetrimida

Agar MRS

Purificacin

Agar Nutritivo

Agar Nutritivo

No realizado

Enterobacterias

Pseudomonas

Bacilos Bacilos GRAM + con Espora Subterminal No Deformante NR NR + + NR

Latobacilos

Caracterizacin microscopica

Cocobacilos GRAM -

Bacilos GRAM -

Bacilos GRAM +

Catalasa Oxidasa Agar Hierro Kligler Amilasa Proteasa Lipasa API 20 E

+ Ac/Ac G+ SHNR NR Suspenso

+ NR NR NR NR NR NR

+ Alk/SC G- SH+ + NR

Parque Centenario

Posible fuente de enterobacterias y Pseudomonas sp

Columba livia (Paloma) Anas platyrhynchos (Pato) Homo sapiens (Vagabundo) Agua, Suelo?

Bacillus y sus amigus

Fuente de los lactobacilos

Fuente de Bacillus sp

Contiene Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus termophilus, Lactobacillus cassei y una bifidobacteria no especificada

Enriquecimiento
Enterobacterias Caldo McConkey: -Bilis de Buey desecada -Purpura de Bromocresol

Pseudomonas
-Glicerol

Caldo M9:

Bacillus -Esporas

Calor

Lactobacilos - El medio acido del yogurt

Aislamiento
Enterobacterias Agar EMB: Pseudomonas sp - Cetrimida Agar Cetrimida: - Lactosa + Peptona de carne + Azul de Metileno + Eosina Yellow

Bacillus sp

Agar Mossel:

Lactobacilos -Tween 80

Agar MRS:

- Peptona de carne + Manitol + Rojo de fenol

Enterobacterias

Pseudomonas sp

Bacillus sp

Lactobacilos

Catalasa y Oxidasa
Reaccion de la Catalasa : 2 H2O2 H2O + O2 (burbujas)

Oxidasa: Reactivo de Kovacs diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina ( rojo es positivo)

Agar Hierro Kligler

Como interpretarlo:
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares. 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.

Enterobacterias: Ac/Ac G+ SH-

Pseudomonas sp Alk/SC G- SH-

Amilasa, Proteasa y Lipasa

proteasa

amilasa

Lo que se puede observar es el halo de degradacin o su ausencia, para protenas, almidn, o lipasas. El halo es indicador de enzimas lticas.
lipasa

API 20 E

El API 20 E es una batera de pruebas identificatorias, especifico para enterobacterias, se usa en conjunto con un manual que permite identificar una especie en base a los resultados.

NMERO DE IDENTIFICACIN 5 144 572 1

Escherichia coli con excelente nivel de identificacin

Sobre Bacillus, Pseudomonas y Lactobacillus

Aunque no hicimos una identificacion completa para estos ultimos, obtuvimos algunos datos, catalasa, oxidasa, recuento, etc Pero no son suficientes para identificar a nivel de especie.

MUCHAS GRACIAS POR NO TIRAR TOMATES!

Y si lo hicieron, gracias por la salsa gratis!

Ecolini, mascota oficial del equipo.