Tcnicas de Diagnstico Parasitolgico - Enteroprotozoos

Martinez Ral Enrique REMS

IMPORTANCIA

Diagnstico de enteroparasitosis sintomticas, asintomticas.

Diagnstico diferencial de infecciones entricas.

Diagnstico diferencial con otras patologas del aparato digestivo.

Tratamiento especfico.

Valoracin de respuesta al tratamiento.

Prevencin.

DIAGNSTICO DE ENTEROPARASITOSIS
ETAPAS DEL DIAGNSTICO

Pre-analtica
Analtica Post-analtica

DIAGNSTICO DE ENTEROPARASITOSIS
MTODOS DIRECTOS:

Coproparasitario Coloraciones Mtodo de Graham - Esptula adhesiva Sondeo Duodenal Biopsia duodenal Coproantgenos

MTODOS INDIRECTOS:

En suero: anticuerpos sricos Amibiasis invasiva, estrongiloidiasis,fasciolosis,esquistosomiasis, etc

ETAPA PRE-ANALTICA
Indicaciones del examen parasitario

Pacientes con sintomatologa sugestiva; pacientes asintomticos con antecedentes epidemiolgicos relevantes; control o control posttratamiento

Solicitud del examen parasitario

Datos filiatorios del paciente

Datos clnicos (sntomas y signos, diagnstico clnico presuntivo) Antecedentes personales: inmunosupresin, viajes al exterior

Antecedentes familiares
Antecedentes ambientales (agua potable, saneamiento) Tratamientos previos anti diarreicos, antiparasitarios, antibiticos etc.

ETAPA PRE-ANALTICA
Indicacin de Rgimen alimentario

48 a 72 hs antes de realizarse el estudio (libre de frutas, verduras y grasas dado que estas preparaciones obstaculizan la visualizacin microscpica lo que puede conducir a resultados Falsos Negativos o Falsos Positivos).
Necesario?

Emisin

Espontanea. No en periodo menstrual, ni posterior a realizacin de estudio radiolgico con bario.

ETAPA PRE-ANALTICA
Muestra de materia fecal

Aproximadamente 50 grs (tamao de una nuez) si heces formadas o 10 a 15 ml si heces lquidas. Rotular adecuadamente.

En recipiente de boca ancha, transparente y con tapa de rosca.

Emitidas recientemente o conservadas en heladera hasta 24 horas. Evitar contaminacin con orina para evitar deterioro de los parsitos.

ETAPA ANALTICA

COPROPARASITARIO
DEFINICIN

Conjunto de tcnicas diagnsticas complementarias que permiten la identificacin de la mayora de las enteroparasitosis causadas por protozoarios y helmintos intestinales o de aquellos que si bien tienen una localizacin tesidual sus huevos se eliminan en las materias fecales. Se debe tener en cuenta a la hora de su indicacin que esta metodologa es til para protozoarios y helmintos cuyas formas evolutivas se eliminan con las materias fecales:

Trofozotos
Quistes Ooquistes Huevos

Larvas
Adultos

EXAMEN COPROPARASITARIO SERIADO

Se considera que muestras nicas solo permiten un diagnstico positivo en un 40%-60% aprox. de las materias fecales con parsitos (ciclos de los parsitos alternan perodos negativos de eliminacin de quistes) * Existen diferentes esquemas sobre la secuencia de recoleccin de materia fecal para realizar el examen coproparasitario. Los ms usados son:

3 muestras seriadas en das alternos 3 muestras separadas por intervalos de una semana entre si

* Manual de Toma de muestras para estudio Bacteriolgico y Micolgico.

Departamento de Laboratorio Clnico. Hospital de Clnicas. 2004

EXAMEN MACROSCPICO

Consistencia: moldeada, pastosa, semilquida, inhomognea Color: marrn, amarillo, macilla, negruzco, verdoso Olor: sui generis, ftido, butrico Presencia de elementos anormales: sangre, mucus, pus Presencia de seudoparsitos Bsqueda de parsitos macroscpicos

EXAMEN MACROSCPICO

EXAMEN MICROSCPICO

Examen directo de una pequea porcin de heces frescas Examen despus de aplicar un mtodo de concentracin Examen de frotis o preparaciones permanentes

EXAMEN DIRECTO

Suero Fisiolgico

Lugol

Objetivo 10 x Objetivo 25-40 x

Habitualmente no se emplea objetivo de inmersin

Importante: No diluir demasiado las muestras

EXAMEN MICROSCPICO
DIRECTO EN FRESCO CON SUERO FISIOLGICO Y LUGOL
Inconvenientes:

Escaso material, por lo que es necesario la realizacin de tcnicas de Enriquecimiento o Concentracin (Ritchie, Faust, Sheater)

Ventajas:

Movilidad de trofozotos, clulas intestinales, clulas inflamatorias, mala absorcin.

MTODOS DE ENRIQUECIMIENTO O CONCENTRACIN

Aumentan el nmero de parsitos a partir de un volumen conocido.

Procedimientos por Sedimentacin

Procedimientos por Flotacin

TCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO O CONCENTRACIN

MTODOS FSICOS

o Dilucin minuciosa de heces en lquido o solucin de densidad:

o Inferior a la de los parsitos (Tcnicas de sedimentacin) o Superior a la de los parsitos (Tcnicas de flotacin) o Ventajas: o Realizacin muy simple o Precisan poco material o Inconvenientes: o Procesos largos o Exigen mucha manipulacin o No aplicables a series grandes de muestras

TCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO POR SEDIMENTACIN

Basados en la utilizacin de suero fisiolgico

(SF) y otras soluciones de baja densidad.

Se recuperan huevos, larvas, ooquistes y

quistes del fondo de un tubo en el que se depositan por ser ms densos.

SEDIMENTACIN SIMPLE

Lentos y poco prcticos

Mayor utilidad para huevos de trematodos

TCNICAS DE CONCENTRACIN FLOTACIN

Los elementos parasitarios se recogen de la superficie de un lquido denso al cual ascienden por su menor peso especfico. Caractersticas a considerar: Densidad solucin empleada, densidad de parsitos, concentracin en superficie. Importante: Manipular rpidamente Posible alteracin en la morfologa de los huevos
Pelcula superficial

Sulfato Zinc

Sedimento

COLORACIONES
Coloraciones temporarias
Lugol, Negro de Clorazol, Azul de Tionina

Coloraciones permanentes (Frotis)

Ziehl Neelsen modificado o Kinyoun para diagnstico de

coccidiosis intestinales (Criptosporidiosis, Isosporosis, Ciclosporosis)

Hematoxilina Frrica para amibiasis Tricrmica y Gram Cromotrope para microsporidiosis

ELEMENTOS NO PARASITARIOS EN LAS HECES

o Restos alimenticios semi-digeridos
o Clulas epiteliales (mucosa intestinal)

o Clulas sanguneas Leucocitos (lceras intestinales) Macrfagos amebas patgenas Hemates

o Bacterias o Hongos

ELEMENTOS NO PARASITARIOS EN LAS HECES

Restos alimenticios
o Tejido conjuntivo

o Fibras musculares estriadas (carne) o Grasas neutras Glbulos refringentes tamao variable o cidos grasos Agujas finas o Almidn o Crudo: Granos en capas concntricas o Clulas reserva amilcea o Celulosa o Digerible: Masas celulsicas (clulas reserva) o No digerible: Traqueadas, pelos vegetales, polen etc.

ELEMENTOS NO PARASITARIOS EN LAS HECES

Cristales
o Origen alimentario (oxalato de calcio) o Endgeno: o Oxalato de calcio o Fosfato amnico-magnsico o de Charcot-Leyden o Medicamentos

ETAPA POST-ANALTICA

Validacin Informe de resultados Importancia de relacin con el mdico clnico Observaciones, orientaciones y sugerencias