UNIVERSIDAD JUAREZ DEL ESTADO DE DURANGO FACULTAD DE MEDICINA Y NUTRICIN LICENCIATURA EN NUTRICIN

Chidez Flores Daniela Mat. 1011071

EQUIPO 6

Flores Garca Carlos E. Mat. 1010998 Mat. 1011099

Urbina Ortega Elsa Pedro Cisneros Guzmn Mat. 1012001 Herrera Gonzalez G. Miroslava Mat. 09C5273

CATEDRATICA: D.C. ELVIA GUADALUPE MUOZ REYES.

Victoria de Durango, Dgo. A 08 Octubre 2013

DESNATURALIZACIN

La desnaturalizacin de cidos nucleicos como el ADN produce una separacin de la doble hlice, que ocurre porque los puentes de hidrgeno se rompen, las cadenas del cido nucleico vuelven a unirse una vez que las condiciones "normales" se restauran.

FACTORES DESNATURALIZANTES
La forma ms fcil de desnaturalizar el ADN es por calentamiento. Otro agente desnaturalizante es el pH elevado porque cambia la carga de algunos grupos que forman parte de los puentes de hidrgeno. En agua destilada (con una fuerza inica muy reducida) se produce la separacin de las hebras.

HIBRIDACIN DEL DNA

Cuando el DNA renaturalizado se forma a partir de molculas de DNA de distinto origen la renaturalizacin se conoce como hibridacin. Una caracterstica importante de la hibridacin es que no slo se puede producir entre dos DNA distintos, sino tambin entre DNA y RNA

DNA-SUPERENRROLLADO

Los DNAs circulares suelen adoptar una conformacin superenrollada En estos DNAs, el nmero de vueltas no puede alterarse sin romper al menos un enlace covalente de una hebra.

La topologa de una superhlice puede expresarse como L = T + W

nmero de enlace o linking number Nmero de veces que una hebra de DNA se enrolla sobre la otra Permanece inalterado siempre que no se rompan los enlaces covalentes Es una propiedad topolgica de la molcula

nmero de giro o twist Nmero total de vueltas de una hebra de DNA sobre el eje del dplex en una determinada conformacin

nmero de torsin o writhing number Nmero de vueltas que el eje dplex realiza sobre el eje de la hlice en una determinada conformacin

TRENZADO = sobre el propio eje dplex. TOROIDAL =el eje dplex se enrolla sobre otra estructura cilndrica. Ejemplo: sobre una estructura proteica

Superenrollamiento hacia la derecha = negativo Ayuda a abrir la hlice a relajarla Superenrollamiento hacia la izquierda = positivo Aumenta la torsin.

Topoismeros

EXISTEN CONFORMACIONES TOPOLGICAMENTE EQUIVALENTES

Conformaciones del DNA topolgicamente equivalentes Por ejemplo: desenrollar una vuelta el DNA introducir un superenrollamiento negativo disminuyen el numero de enlace en una unidad.

Enzimas que eliminan introducen superenrollamientos Determinan el grado de superenrollamiento del DNA Alteran el estado topolgico, pero no la estructura covalente Accin imprescindible para que la replicacin y la transcripcin tengan lugar

Rotura de una sola cadena de DNA.

Roturas en las dos cadenas de DNA Hidrlisis de ATP

Topoisomerasas tipo I
Relajan el DNA superenrollado - catalizan la introduccin de superenrollamientos negativos - reducen el nmero L (nmero de enlace en una vuelta) en una vuelta unidad por ciclo, hasta que el superenrollamiento est completamente relajado - no necesitan de aporte
2.Unin de la cadena de DNA a la protena a travs de un enlace fosfodister con un residuo de Tyr (ataque nucleoflico del OH de la Tyr a un enlacefosfodister y posterior transesterificacin) y un grupo OH libre en el DNA se preserva la almacenada en el enlace fosfodister

1. La enzima rompe un enlace covalente en una de las cadenas

2. Paso de una vuelta de la cadena intacta por la rotura.

3. La enzima repara el enlace

ESTRUCTURA DE LAS TOPOISOMERASAS TIPO I

MONMEROS DE 100 KDA Presentes en procariontes y eucariontes ESTRUCTURA - formada por 4 dominios - forma de pinza - una cavidad central que permite acomodar una doble hlice de DNA - la superficie interna de dicha cavidad presenta cargas Q+, lo que permite la estabilizacin del DNA

TOPOISOMERASAS TIPO II O DNA GIRASAS

Heterodmero de 375 KDa (subunidad A -105 KDa- & B -95 KDa-) Cataliza superenrollamientos negativos acoplados a la hidrlisis de ATP la DNA girasa convierte la del ATP en de torsin del superenrollamiento Estructura Los extremos C-terminales presentan gran cantidad de residuos de Arg que actuan como superficie de unin al DNA En procariontes: genera superenrollamientos negativos (9 Kcal/mol) En eucariontes: relaja superenrollamientos positivos (importancia en la replicacin) Importancia de la DNA girasa - La replicacin del DNA implica la apertura de la doble hlice, por lo que se producen superenrollamientos en otras partes de la molcula - Estos superenrollamientos han de ser eliminados por medio de la DNA girasa con gasto de ATP

MECANISMO DE INVERSIN DE SIGNO

Conversin de un superenrollamiento toroidal hacia la derecha en otro enrollado hacia la izquierda El nmero de enlace disminuye en dos unidades= se introducen dos vueltas por reaccin

1.Se unen dos heterodmeros y 200bp del DNA se enrollan sobre la DNA girasa

2. Unin del ATP y corte en las dos cadenas Se producen roturas en las dos cadenas del DNA

3. Unin covalente a residuos de Tyr de la subunidad A este anclaje evita la libre rotacin de la hlice de DNA

4. Sellado de la rotura

5. Hidrlisis del ATP y separacin de la girasa del DNA

TOPOISOMERASAS TIPO II O DNA GIRASAS

Dianas farmacolgicas para antibiticos: se inhibe la replicacin y la transcripcin

- Novobiocina
se une a la subunidad B de la DNA girasa y evita la unin del ATP a la enzima - Acido oxolnico se une a la subunidad A de la DNA girasa y parece que bloquea el sellado de la rotura - Acido nalidxico: bloquea el corte y religacin de las cadenas de DNA - Ciprofloxacina

Dianas farmacolgicas en quimioterapia -Doxorubicina Inhibidor de la Topo II Se intercala en el DNA e impide la progresin de la enzima

MECANISMO DE LA TOPOISOMERASA DE TIPO II

REPLICACIN
La replicacin es un fenmeno de duplicacin del material gentico, y tiene como producto una nueva copia de ADN.

Sucede antes de la divisin celular

REGLAS

El proceso de replicacin es muy complejo y debe cumplir 3 aspectos importantes.

1
3

Separar las dos cadenas de ADN Evitar errores de replicacin.

Sntesis en direccin 5 3

MODELOS DE REPLICACIN
ADN ORIGINAL ADN NUEVO

REPLICACIN SEMICONSERVADORA
Fue establecida a finales de la dcada de 1950 , por medio de experimentos realizados por Matthew Meselson y Franklin Stahl. Hicieron crecer bacterias (E. coli) durante varias generaciones en un medio que contena 15 N Isotopo pesado o 14 N Isotopo liviano. Luego pasaron a un proceso de centrifugacin con Cloruro de cesio.

PROCESO DE REPLICACIN
Es conformado por distintas etapas, adems participan algunas enzimas como:

PROCESO DE REPLICACIN

Separacin de hebras de ADN por ruptura de PASO 1 puentes de HIDROGENO entre las bases. Surgen las horquillas de replicacin (HELICASA). PASO 2 Direccional o Bidireccional.
Entrada de la DNA polimerasa para sntesis de PASO 3 ADN.

PROCESO DE REPLICACIN
En la cadena con direccin 5 3 se coloca un cebador o primer de ARN gracias a la enzima PRIMASA para que la ADN polimerasa ubique donde debe comenzar.
Sera eliminado y sustituido despus.

PROCESO DE REPLICACIN
Para la cadena discontinua 3 5 el proceso es el siguiente:

PRIMER DE ARN EN INICIO DE SECCIN

SINTESIS ADN EN DIRECCIN APROPIADA

DEGRADACIN Y SUSTITUCIN DE PRIMER

ADN REPLICADO

Los nuevos segmentos de ADN son unidos por la ADN Ligasa.

En resumen
SEPARACIN DE CADENAS

NUEVO ADN

FORMACIN DE HORQUILLAS

IMPORTANTE
Las cadena del DNA siempre se

SINTESIS DE CADENA 35 SINTESIS DE CADENA 53

CEBADORES O PRIMER DE ARN

replican porque la DNA POLIMERASA solo reconoce esa direccin.

5-3

FRAGMENTOS DE OKAZAKI

VIDEO

El video lo publicare en el grupo de facebook, para que el archivo no sea tan pesado (:

Un tipo de dao del DNA particularmente peligroso, se produce cuando ambas cadenas de la doble helice se rompen y no queda cadena molde intacta que guie la reparacion
Producen rupturas de este tipo.

Radiacion ionizante Algun percanse en la horquilla de replicacion Agentes oxidantes fuertes Metabolitos producidos en la celula.

Si estas lesiones continuan sin ser reparadas, podrian conducir rapidamente a la gragmentacion de los cromosomas y causar perdida de genes cuando la celula se divida.

Formas de reparacin de rotura bicatenaria.

MAS COMUN

Union de extremos no homologos.

Los dos extremos rotos son aproximados a travez de un grupo de enzimas y vueltos a unir por la ligacion de ADN

Recombinacion homologa.

R E P A R A C I O N
D E L D N A

Resulado neto: Rotura de cadena doble reparada, con delecin de nucleotidos en el sitio

REPARACIN DEL ADN

La reparacin del ADN es el conjunto de procesos involucrados en la correccin del dao en el ADN. Los procesos pueden ser pre-replicativos o post-replicativos. Los procesos de reparacin del ADN se pueden clasificar en:

REPARACIN DIRECTA:
Es un sistema de reparacin que no requiere eliminacin de nucletidos o bases nitrogenadas, sino que se emplean enzimas para reparar directamente alteraciones nucleotdicas. Los principales enzimas empleados son la fotoliasa (separa los dmeros de timinas formados por radiacin UV) y la metiltransferasa (retira grupos metilo aadidos al ADN).

REPARACIN POR ESCISIN DE NUCLETIDOS (REN):

Este proceso repara el ADN que se encuentra distorsionado espacialmente debido a la presencia de bases modificadas con grandes grupos qumicos, dmeros de pirimidina o uniones intracadena. Este tipo de dao suele producirse por agentes qumicos o por radiacin ultravioleta. En este proceso de reparacin intervienen endonucleasas que cortan de 24 a 29 nucletidos alrededor del o de los nucletidos mutados.

REPARACIN POR ESCISIN DE BASES (REB)

Son sistemas de reparacin dependientes de homologa. Reparan los daos causados por metilacin,desaminacin, oxidacin o prdida espontanea de bases (Glicosilasas DNA + Endonucleasas AP)

REPARACIN POR RECOMBINACIN Y RESPUESTA SOS

Evita el bloqueo en la replicacin mediante la adicin de bases no especficas .

BIBLIOGRAFA
CURSO DE BIOMOLECULAS. (s.f.). Obtenido de CURSO DE BIOMOLECULAS: http://www.ehu.es/biomoleculas/an/an42.htm SELECTIVIDAD. (1 de Mayo de 2013). YOUTUBE. Obtenido de YOUTUBE: http://www.youtube.com/watch?v=4-bY3bmHQQc wikipedia. (20 de septiembre de 2013). Obtenido de wikipedia: http://es.wikipedia.org/wiki/Desnaturalizaci%C3%B3n_(bioqu %C3%ADmica) Voet., Voet JG., Pratt, CW. Fundamentos de Bioquimica. 2da Edicion. Editorial Medica Panamericana,200 Mc Kee Bioqumica, las bases moleculares de la vida 3era edicin. Editorial Mc Graw Hill pg. 678 - 682