CINETICA MICROBIANA

VELOCIDAD DEL CRECIMIENTO MICROBIANO r

x
VELOCIDAD DEL CONSUMO DE SUSTRATO r
s
VELOCIDAD DE LA FORMACION DE PRODUCTOS r
p
DR. BLGO. CARLOS E. VILLANUEVA AGUILAR

MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL Y BIOTECNOLOGIA MICROBIANA
CINETICA MICROBIANA : conceptos
Con qu velocidad se lleva a cabo el Bioproceso ?

Mecanismos de Reacciones Biolgicas Bsicas
en un Proceso Fermentativo
VELOCIDAD CRECIMIENTO MICROBIANO rx (
REPRODUCCIN ),
VELOCIDAD CONSUMO DE SUBSTRATO rs
(ALIMENTACION)
VELOCIDAD FORMACIN DE PRODUCTOS rp EXCRETA
DE SUSTANCIAS)



RESPECTO
AL

TIEMPO
O
CONDICIONES
QUE LO
MODIFICAN
Velocidades volumetricas Velocidades especificas
(CLCULOS DE CONSTANTES DE VELOCIDAD)
rx, rs, rp u , qp , qs
I. ESTUDIA LA:
LA CINTICA DE LA FERMENTACIN :
II. SE RELACIONA FUNDAMENTALMENTE CON LA MEDICION DE:

III. SE DESCRIBE LA CINTICA MICROBIANA EN CULTIVO BATCH.



CINETICA DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO
2.1. DESCRIPCION QUIMICA
2.2. DESCRIPCION BIOLOGICA
2.3. DESCRIPCION MATEMATICA
2.4. TIPOS DE MODELOS MATEMATICOS






CRECIMIENTO MICROBIANO
DESCRIPCION QUIMICA

ACaHbOc + BO2 + DNH4OH E CH O N + FCO2 + GH2O

Se traduce en una reaccin qumica estequiomtrica generalizada para
el crecimiento:
ACaHbOc + BO
2
+ DNH
4
OH E CH O N + FCO
2
+ GH
2
O

Fuente de Fuente de Frmula bruta
Carbono Nitrgeno de la materia
y energa celular seca.

A, B, D, E, F y G: moles de los compuestos respectivos

Se aplica cuando la biomasa es el nico producto formado

DEFINICIN QUMICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
Serie de reacciones qumicas en cadena que conducen a la sntesis de
masa celular (biomasa) obtenida al final del proceso
Globalmente el bioproceso obedece al:

Principio de la conservacin de la materia

BIOMASA MICROBIANA: C H O N

Deriva del anlisis elemental de la MASA MICROBIANA producida
Variable segn: tipo de cepa microbiana y composicin del medio de cultivo
Frmulas brutas propuestas:

Levaduras C
6
H
11
O
3
N ; C
6
H
1O
O
3
N ; C
5
H
7
O
2
N ; C
6
H
10,9
O
3,6
N
1,03



Representa; 90% de la biomasa efectivamente producida en la reaccin.

NO incluye cenizas, de aprox. 10% de la materia seca.

C
6
H
11
O
3
N Peso molecular (fraccin orgnica ) = 145

Si la clula tiene 90% orgnica y 10% cenizas
El peso de la frmula total de una unidad celular ser:

145 / 0.9 = 161 .
De la relacin estequiomtrica

A CaHbOc + B O
2
+ D NH
4
OH E CH O N + F CO
2
+ G H
2
O
S O x
Se establece las relacines:

X / S = coeficiente rendimiento celular
[ rendimiento de clulas sobre el sustrato carbonado ]

x masa celular formada
s masa de sustrato consumido

X / O = [ rendimiento de clulas sobre el requerimiento de oxgeno ]

O masa de oxigeno consumido



CRECIMIENTO MICROBIANO

DESCRIPCION BIOLOGICA
Crecimiento a nivel de individuos
(Ciclo celular o Crecimiento celular)

Aumento en el tamao
de la clula, seguido
de su divisin

Los microorganismos
unicelulares aumentan
de tamao y luego se
dividen en dos por
fisin binaria o gemacin
En cualquier sistema biolgico: es el aumento ordenado
de todos los componentes qumicos de un organismo

En los organismos unicelulares: es el aumento en el
nmero de individuos en la poblacin

La mayor parte del estudio sobre crecimiento microbiano
se refiere a:
crecimiento poblacinal ms que a crecimiento celular
Crecimiento a nivel de poblacin
(Ciclo de crecimiento o Crecimiento
poblacional)
Aumento en la cantidad
de clulas

Los microorganismos
unicelulares se
desarrollan principalmente
como poblaciones de
clulas.

DEFINICIN BIOLOGICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
Puede darse en:
1. Sistemas cerrados
No se aade al cultivo nuevas sustancias nutritivas,
ni se extrae para eliminar algn producto terminal
del metabolismo.
Cultivo discontinuo
(batch, esttico, cultivo por lote
o intermitente)
2. Sistemas abiertos






Cultivo lote alimentado Cultivo continuo


















Crecimiento Poblacional

Ciclo de crecimiento y Curva de Crecimiento

Ciclo de crecimiento
Secuencia de eventos caractersticos
de la poblacin microbiana

Se inicia cuando una solucin nutritiva
se inocula con un microorganismo.


Curva de crecimiento

Grfica que describe el ciclo de crecimiento
Se obtiene:
graficando el peso celular seco (X, g L
-1
)
o concentracin celular viable (N, clulas L
-1
)
respecto al tiempo de incubacin ( t, horas )
CRECIMIENTO POBLACIONAL EN SISTEMA CERRADO
( CULTIVO DISCONTINUO O BATCH )



CRECIMIENTO MICROBIANO


DESCRIPCION MATEMATICA
La velocidad de aumento
de microorganismos en un
tiempo dado es
proporcional a la masa de
bacterias ( X ) o al nmero
de bacterias ( N ) o a
cualquier otro componente
( Z ) presentes en ese
tiempo
DEFINICIN MATEMATICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
1. Como se define el crecimiento?

Se define como un incremento en el nmero de clulas microbianas [dN ] en una poblacin, lo cual
tambin puede ser medido como un incremento en la masa microbiana [dX ] .

2. Como se define la velocidad de crecimiento?

Es el cambio en el nmero de clulas o masa celular por unidad de tiempo:

rx = dN/dt o rx = dX/dt

MEDICION DEL
CRECIMIENTO MICROBIANO
COMO PUEDE MEDIRSE EL CRECIMIENTO POBLACIONAL ?
MEDICION DEL CRECIMIENTO
COMO PUEDE MEDIRSE EL CRECIMIENTO POBLACIONAL ?
CAMBIO

PROCEDIMIENTO GENERAL:


2. Determinar:
Numero de clulas N ( ufc/ml )
Masa celular X ( g/ml )
3. Determinar los parmetros
1. Tomar muestras del caldo de fermentacin
(suspensiones homogneas de clulas)
Hay varios mtodos para:
contar clulas N o
estimar su masa X
Mtodos de Medicin de Poblaciones Microbianas
CMO DETERMINAR EL NMERO DE CLULAS (N) O LA MASA CLULAR (X) ?

NMERO DE CLULAS


NUMERO TOTAL DE CELULAS


NUMERO DE CELULAS VIABLES




MASA CELULAR


METODOS DIRECTOS


METODOS INDIRECTOS



Mtodos
para contar clulas y
estimar masa celular
RECUENTO TOTAL EN PLACA (ufc)
CONTEO DEL NUMERO DE COLONIAS (UFC)
METODO DE LA PLACA ESTRIADA
METODO DE LA PLACA VERTIDA
METODO DE LAS DILUCIONES
Parmetros de Medicin de Poblaciones Microbianas


DEFINICIONES
Numero clulas

(RECUENTO)
Masa celular

(PESO SECO)

Por unidad de volumen
(ml)

Concentracin celular
N
(n
o
clulas / ml)

Densidad celular
X
(g / ml)


Duplicaciones
por unidad de tiempo

Tasa de Divisin
v
(horas
-1
)
Tasa de Crecimiento

(horas
-1
)


Intervalo de tiempo
entre dos duplicaciones

Tiempo de generacin
g
(horas)
Tiempo de duplicacin
td
(horas)

NATURALEZA Y EXPRESION CUANTITATIVA

DE LOS PARAMETROS DE MEDICION

Tasa de Divisin (v) y Tiempo de Generacin (g)
No N
n



v = log N - log No / log 2 (t - to)

= log 10
9
- log 10
3
/ 0.3010 (10)

= 6 / 3
= 2 h
-1

g = 1 / v

= 1 / 2
= 0.5 h

EJERCICIO 1:

Si una suspensin celular pasa en 10 horas de crecimiento de 10
3
a
10
9
clulas, la tasa de divisin (v) y tiempo de generacin (g) ser:
Datos:

No = 10
3
clulas
N = 10
9
clulas
t = 10 horas
EJERCICIO 2

Calcular el tiempo de generacin de un microorganismo en un cultivo
que pasa de 2 x 10
4
ufc/ml a 7 x 10
5
ufc/ml en 2.5 h.
v = log N - log No / log 2 (t - to)

= log 7 x 10
5
- log 2 x 10
4
/ 0.3010 (2.5 )
= 5.85 4.30 / 0.7525
= 1.52 / 0.7525
= 2 duplicaciones x hora

g = 1 / v
= 1 / 2
= 0.5 h

Datos:

No = 2 x 10
4
ufc/ml
N = 7 x 10
5
ufc/ml
t = 2.5 horas
g = ?
EJERCICIO 3

Si partimos de 10
4
ufc/ml en un cultivo que tiene un tiempo de generacin (g) de 2 h
cuntas clulas tendremos al cabo de 4, 24 y 48 h de cultivo ? Grafique la curva de
crecimiento
Datos:

No = 10
4
ufc/ml
g = 2 horas
N = ?
t = 4 , 24, 48 horas
Calculo de N a 4 horas

log N = log No / t / g (log 2)
= 10
4
/ 4/2 (log 2)
= 4 / 2 (0.3010)
= 4 / 0.602
= 6.65
N = antilog 6.65
N = 4.4 x 10
6
ufc/ml

Formula

log N = log No / n log 2
g = t / n
Reemplazando n por t / g :
log N = log No / t / g (log 2)
Calculo de N a 24 horas

log N = log No / t / g (log 2)
= 10
4
/ 24/2 (log 2)
= 4 / 12 (0.3010)
= 4 / 3.612
= 1.11
N = antilog 1.11
N = 12 x 10
6
ufc/ml

Calculo de N a 48 horas

log N = log No / t / g (log 2)
= 10
4
/ 48/2 (log 2)
= 4 / 24 (0.3010)
= 4 / 7.224
= 0.546
N = antilog 0.546
N = 35 x 10
6
ufc/ml

TASA DE CRECIMIENTO () :
Esta ecuacin es la forma diferencial de la ecuacin de
crecimiento Se puede usar para describir el
crecimiento en cualquier etapa durante el ciclo de este.
La velocidad de crecimiento, rx es proporcional a
la densidad celular X, ya presente y sigue la
cintica de una reaccin de primer orden.
rx = X
ECUACIN DIFERENCIAL
dx / dt = X

= dx/dt . 1 / x
La poblacin microbiana en crecimiento
es un sistema que se multiplica
autocatalticamente de modo que:
Describe la velocidad de crecimiento, rx durante
la fase exponencial ( y fase de declinamiento)
Tasa de Crecimiento () y Tiempo de Duplicacin (td)
Despejando :
ECUACIN INTEGRAL
dx/dt = x
Integrando:
dx / x = dt
dx / x = dt
ln X - ln Xo = ( t to )
Despejando

= ln x - lnx
o
/ (t - to )
Esta ecuacin es la forma integral de la ecuacin de crecimiento Solo se aplica en el crecimiento exponencial
(donde es constante). Se adapta muy bien a los datos experimentales de la fase exponencial.
Antilogaritmo

x = xo . e
t

ln X = ln Xo + ( t to )
x
xo
x = xo . e
t
velocidad especfica de crecimiento rapidez de
aumento de la densidad celular por unidad de tiempo (h
-1
)
TASA DE CRECIMIENTO () :
xo
x
to t
t
to
x = x
o
. e
t
2 x
o
= x
o
. e
td
2 = e
td
x = 2 xo Para una duplicacin de la masa celular inicial
logaritmo natural
ln 2 = td
td = ln 2 /
= ln 2 / td
TASA DE CRECIMIENTO
= 0.693 / td
= 2.303 log 2 / ( td )
= 0.693 / td
= 2.303 (0.301) / ( td )
Intervalo de tiempo entre dos duplicaciones de la
densidad celular
Nmero de duplicaciones de densidad celular por hora
TIEMPO DE DUPLICACION (td) :
x = x
o
. e
t
EJERCICIO 4

Deducir la relacin que hay entre el tiempo de duplicacin (td) y la tasa
de crecimiento () de un cultivo a partir del modelo matemtico del
crecimiento exponencial.microbiao


= Velocidad especfica de crecimiento

Se calcula a partir de las densidades X
o
y X medidas en los tiempos to
y t segn la ecuacin (1) o sus equivalencias (2) y (3):

(1) = ln x - ln x
o
/ ( t to )

(2) = log x - log x
o
/ log e ( t to )

(3) = ( log
10
x - log
10
x
o
) 2.303 / ( t to )

donde: log e = 0.43429.
Es una medida de la velocidad del crecimiento celular durante la fase de
crecimiento exponencial.
Para un tipo de microorganismo dado depende principalmente de la composicin y
concentracin del medio de cultivo, inhibidores, temperatura y pH.
Calculo de la Tasa de Crecimiento ( )


EJERCICIO 5

Calcular la tasa de crecimiento (, expresada en h
-1
) de un cultivo bacteriano que pasa
de producir 3.0 g/l de biomasa total a producir 10 g/l en 50 min.

Solucin
Mtodo Ecuaciones


= lnX - ln Xo / (t -to) = log X - log Xo / log e (t -to) = (log
10
X - log
10
Xo) 2.303/ (t -to)


= ln 10 - ln 3 / ( 0.833 ) = log 10 - log 3 / 0.434 (50 ) = (log
10
10 - log
10
3) 2.303/(50)


= 2.30 - 1.1 / (50) = - / 0.434 (50) = ( - ) 2.303 / (50)


= / 50 = / = ( ) 2.303 / 50


= h
-1
= h
-1
= h
-1



Tambin relaciona la velocidad de incremento de N y
cualquier componente celular dado (Z):

En trminos matemticos:
dN / dt = N
dZ / dt = Z

donde:
N numero de clulas / ml
Z Cantidad de cualquier componente dado / ml
EJERCICIO 6

El cultivo tiene 10
4
clulas/ml en el tiempo to y 10
8
clulas/ml 4 horas mas tarde en
un sistema de cultivo batch con agitacin. Determine la velocidad especfica de
crecimiento
Solucin
Mtodo Ecuaciones


= lnN - ln No / (t -to) log N - log No / log e (t -to) (log10N - log10No) 2.303/ (t -to)


= ln10
8
- ln 10
4
/ (4 h) log 10
8
- log 10
4
/ 0.434 (4 h) (log
10
10
8
- log
10
10
4
) 2.303/(4h)


= 20.7 - 11.5 / 4 9 - 5 / 0.434 (4 h) (8 - 4) 2.303 / 4


= 9.2 / 4 9.5 / 1.736 (4 ) 2.303 / 4


= 2.303 h -1 = 2.303 h -1 = 2.303 h -1
EJERCICIO 7
Relacin Tasa de Crecimiento ( ) y Tasa de Divisin ( v )

(1) g = 1 / v

(2) td = ln 2 /








g = td

Esto es: (1) = (2) 1 / v = ln 2 /

Despejando :
= ln2 . V

Al comparar la tasa de crecimiento con la tasa de divisin v
el nmero de clulas (N) y la masa celular (X) no coinciden y la relacin entre ambas
medidas se altera en el curso del crecimiento de un cultivo esttico.

Sin embargo, si se determina X o N y se comparan en condiciones que el incremento
de N sea exactamente igual al incremento de X (clulas estndar)) se tiene:
PROBLEMA

Deducir la relacin que hay entre el tiempo de generacin (g) y la
tasa de crecimiento () de un cultivo a partir de las ecuaciones de
crecimiento.

(1) g = 1 / v

(2) td = ln 2 /

g = td

(1) y (2) 1 / v = ln 2 /

Entonces :
g = ln2 /

REPRESENTACION GRAFICA
DEL CRECIMIENTO EXPONENCIAL
La Fase exponencial

constituye el periodo mas
adecuado para determinar la
tasa de divisin, (v) y la tasa
de crecimiento, ();
debido a la constancia relativa
de la tasa de divisin.
Se le llama crecimiento exponencial o geomtrico
a aquella progresin que aumenta por multiplicacin de una
cantidad constante llamada razn.

Representacin Aritmtica

Cuando en el eje de ordenadas se
representa el nmero de clulas o la
masa celular, y en el eje de abscisas el
tiempo, expresadas ambas magnitudes
en unidades aritmticas.

El crecimiento exponencial queda
representado por una curva
exponencial.

No es adecuada para expresar un
numero grande de divisiones celulares,
ya que segn sea la medida elegida
solo pueden reconocerse las primeras
o solo las ultimas divisiones celulares.
X (g/L)
t (horas)

Representacin
semi-logartmica
Cuando en el eje de ordenadas se
representa el logaritmo del nmero de
clulas o de la masa celular y en el eje de
abscisas el tiempo, este expresado en
unidades aritmticas
El crecimiento exponencial queda
representado por una lnea recta.

La velocidad de crecimiento (u) viene
dada por la pendiente de dicha recta; es
tanto mayor cuanto mayor sea la
pendiente de la recta.

Debido a que el crecimiento exponencial
se caracteriza por la relacin lineal entre
el log del nmero de clulas y el tiempo
se habla tambin de crecimiento
logartmico.
Grafico:
Velocidades de crecimiento
representadas sobre
escalas aritmtica y logartmica.
Ln x
x
METODO GRAFICO PARA CALCULAR EL VALOR DE

1. Se calcula a partir de la ecuacin: ln X - ln Xo = ( t to )
2. Reordenando a una lnea recta: y = a x
Resulta: ln X / XO = ( t )
3. Graficando ln X/ Xo Vs t (tiempo)
y


ln X / XO

= a = Pendiente



( t ) x

Cuando es constante dar una lnea recta de pendiente (h -1)
En este caso la velocidad especifica de crecimiento ser la pendiente (a) de la lnea
recta obtenida segn se observa en el grafico.
El valor de

es suficiente para definir la velocidad de crecimiento de un cultivo .
Mtodo Grfico:

Grafique: ln N/No vs t


ln N/ No = ( t )
ln N/ No y = a x

= a = Pendiente


t

Para : ln N/ No = 9.21 t = 4 horas
Aplicando la ecuacin de lnea recta ( y = a x) : ln N/ No = t
= 9.21 / 4
= 2.30 h
-1
La pendiente: es igual a 2.30 h -1
EJERCICIO 2:
El cultivo tiene 10
4
clulas/ml en el tiempo to y 10
8
clulas/ml 4 horas mas tarde en un
sistema de cultivo batch con agitacin. Determine la velocidad especfica de crecimiento
Solucin:

Rendimiento


Rendimiento (X):

Es igual a la diferencia entre la biomasa mxima y la biomasa inicial:

X = X m - Xo (en gramos de peso seco/ L)

Coeficiente de rendimiento ( Y = X / S ) :

La relacin entre el rendimiento y el consumo de sustrato (X / S) tiene un
inters especial.

Si ambas magnitudes se expresan en unidades de peso, se denomina el cociente
coeficiente econmico o coeficiente de rendimiento

Y = X / S ( g masa celular / g sustrato consumido)

De los resultados experimentales del estudio del crecimiento se puede
deducir el valor del coeficiente de rendimiento celular Y
x/s
.


Y
x/s
= Xm - Xo / So S


S : Concentracin residual de sustrato, casi siempre tiende a cero y
despreciable con respecto a So

So : Cconcentracin inicial de sustrato

Y
x/s
: Se expresa en gramos de masa celular producido /
por gramo de sustrato metabolizado (rendimiento ponderal)
o por mol de sustrato metabolizado (rendimiento molecular)

Coeficiente de Rendimiento Molar ( Ym = g / mol )

Cuando el coeficiente de rendimiento se expresa en:

gramos de masa celular / moles de sustrato.

Coeficiente de Rendimiento Energtico (Y
ATP
= g /mol ATP)

Cuando el coeficiente de rendimiento se expresa en:

gramos de masa celular / moles de ATP


Puede calcularse cuando se conocen tanto la va de degradacin de un
sustrato como la energa (ATP) obtenida de dicha degradacin.




TIPOS DE MODELOS MATEMATICOS

DEL

CRECIMIENTO MICROBIANO


Ks
S = concentracin del
sustrato limitante
max = velocidad de
crecimiento
especifica mxima
Ks = constante de
saturacin
TASA DE CRECIMIENTO VS CONCENTRACIN DE
NUTRIENTES
Existen diversas expresiones para . La mas difundida es :
S
Cuando S Ks toma el valor de max y rx solo depende de X


El Valor de Ks esta inversamente relacionado con la
afinidad del microorganismo por el sustrato.



En general Ks tiene valores muy bajos (mgL
-1
) por tanto
concentraciones bajas de S son suficientes para hacer
que =
max

Las bacterias poseen valores de
max
cercanos a 0.9 h-1
Las levaduras 0.45 h-1 y los hongos filamentosos 0.25
h-1;

De todos modos debe ser determinado
experimentalmente para cada caso en particular.





CRECIMIENTO MICROBIANO

Y SU

RELACION CON EL AMBIENTE






EFECTO DE TEMPERATURA




EFECTOS DEL PH




EFECTO DE ALTA CONCENTRACIN DE NUTRIENTES





EFECTO DE NUTRIENTES INSOLUBLES EN AGUA