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Citogentica

Estudio del cariotipo humano.


Descripcin
Tcnicas de bandeo.
Hibridacin in situ (FISH)
-Tipos de sondas
- Multifish (SKY), (CGH).
Tema 14
Citogentica humana
Estudia el conjunto de cromosomas de un individuo
Cromosomas metafsicos
1956 Tjio y Levan Demuestran que el
ncleo de las clulas humanas hay 46
cromosomas
1959 Lejeune & cols Asocian una
alteracin cromosmica con un Sndrome
clnico: Trisoma 21- Sndrome de Down
Desde entonces se han descrito muchas
alteraciones cromosmicas como
responsables de la etiologa de muchos
sndromes polimalformativos
Cromosomas metafsicos
Son cromosomas formados por dos cromtidas
hermanas = dos molculas de ADN idnticas
Pedculos
Cariotipo: conjunto de cromosomas que caracteriza a una especie.
Cariotipo humano
46 cromosomas
23 pares de homlogos
22 pares de autosomas
1 par de gonosomas
24 tipos cromosmicos
24 tipos cromosmicos
Se clasifican de mayor a
menor tamao y segn su
morfologa en 8 grupos
Sembrar en 125
ml de RPMI +
fitohemaglutinina
Incubar a 37 C
durante 3 das
Aadir colchicina
Solucin
hipotnica
salina
Fijacin de
las clulas
S
Dispersin celular
sobre un portaobjetos
por goteo
Tincin
Fotografa
Cariotipo
ClK 0,075M
Carnoy
Criterios de clasificacin
Denver 1960
-Tamao
-Posicin del centrmero
-Presencia o ausencia de satlites
Pars 1971
-Patrn especfico
de bandas
Bandas Q:
(Casperson y cols., 1970)
Tratamiento con Quinacrina
Regiones ricas en AT, cromosoma Y
Bandas G:
(Seabright, 1971)
Tratamiento con tripsina + Giemsa
Regiones ricas en AT (bandas oscuras)
Patrn de
Bandas Q y G
(1971)
Frmula cromosmica: 46, XY
Idiograma con bandas G
Bandas R:
(Dutrillaux y Lejeune, 1971)
Patrn reverso al de bandas Q y G
Regiones ricas en CG (bandas oscuras)
Bandas: G R (Reverso)
Par 3





Par 16
Bandas C:
(Arrighi y Hsu, 1971)
Heterocromatina constitutiva
Bandas C
Patrn de
Bandas C
(1971)
Idiograma con bandas C
Frmula cromosmica: 47, XY, +13
Limitaciones de la Citogentica Convencional :
Alternativa : Citogentica Molecular
1. FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia)
Requiere saber lo que se busca
Tener la sonda adecuada
2. Otras tcnicas:
Requieren equipos muy sofisticados y apoyo
informtico
SKY (Cariotipo espectral multicolor, multifish)
CGH (Hibridacin Genmica Comparada)
Requiere metafases
No siempre la calidad de las metafases es optima
Resolucin limitada (en el mejor de los casos 2-5 Mb )
FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia)
Se puede realizar en
ncleos interfsicos o
en divisin
Se suelen utilizar
simultneamente
distintas sondas,
marcadas con
flurorocromos de
diferentes colores :
Rojo: rodamina
Verde: fluorescena
Azul: dapi
Tipos de sondas
Especificas de regiones: Sondas telomricas
Sondas centromricas

Especificas de cromosomas: Pintados cromosmicos

Especificas de secuencia: Sondas nicas, Sondas gnicas
Sondas telomricas
Especificas de regiones
Sondas centromricas

Repeticiones Alfoides:
(secuencias repetidas del
centrmero que son
especficas de cromosomas)
tiles para localizar
cromosomas concretos
Centrmero del
cromosoma 21
Pintados
cromosmicos

Especificas de cromosomas

Pintan completamente el
cromosoma elegido
tiles en la deteccin
de reorganizaciones
cromosmicas
t (2;8)
cromosoma 8 rosa
cromosoma 2 verde
Pintados cromosmicos

Especificas de cromosomas
pintado del cromosoma Y
en rosa, el resto con dapi
Pintado del
cromosoma X
Pintados cromosmicos

Especificas de cromosomas
Pintados cromosmicos

Especificas de cromosomas
cromosoma X rosa
cromosoma Y verde
Pintados cromosmicos

Especificas de cromosomas
Pintado del
cromosoma 22
Sndrome de Williams
(del 7q11.23)
7q11.23 rojo, centrmero
cromosoma 7 verde
Sondas especficas
de secuencia

Dirigidas a una regin
concreta
tiles para detectar
sndromes por
microdeleccin
Cariotipo Espectral Multicolor (SKY)
Hibridacin in situ con sondas especficas de
cada cromosoma (El aparato es capaz de
diferenciar 24 colores).

Identificacin unvoca del material cromosmico
reordenado en translocaciones y marcadores
complejos
Hibridacin Genmica Comparada (CGH)
Deteccin de prdidas y ganancias genmicas por
hibridacin competitiva de ADN tumoral y normal de
referencia
Utilidad clnica de la citogentica
Uno de cada 150 o 160 recin nacidos
tiene una anomala cromosmica

Al menos el 50% de los abortos
espontneos durante el primer trimestre
tiene una anomala cromosmica

Aproximadamente el 2% de los
embarazos en mujeres de ms de 35
aos tiene una anomala cromosmica

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