Descripcin Tcnicas de bandeo. Hibridacin in situ (FISH) -Tipos de sondas - Multifish (SKY), (CGH). Tema 14 Citogentica humana Estudia el conjunto de cromosomas de un individuo Cromosomas metafsicos 1956 Tjio y Levan Demuestran que el ncleo de las clulas humanas hay 46 cromosomas 1959 Lejeune & cols Asocian una alteracin cromosmica con un Sndrome clnico: Trisoma 21- Sndrome de Down Desde entonces se han descrito muchas alteraciones cromosmicas como responsables de la etiologa de muchos sndromes polimalformativos Cromosomas metafsicos Son cromosomas formados por dos cromtidas hermanas = dos molculas de ADN idnticas Pedculos Cariotipo: conjunto de cromosomas que caracteriza a una especie. Cariotipo humano 46 cromosomas 23 pares de homlogos 22 pares de autosomas 1 par de gonosomas 24 tipos cromosmicos 24 tipos cromosmicos Se clasifican de mayor a menor tamao y segn su morfologa en 8 grupos Sembrar en 125 ml de RPMI + fitohemaglutinina Incubar a 37 C durante 3 das Aadir colchicina Solucin hipotnica salina Fijacin de las clulas S Dispersin celular sobre un portaobjetos por goteo Tincin Fotografa Cariotipo ClK 0,075M Carnoy Criterios de clasificacin Denver 1960 -Tamao -Posicin del centrmero -Presencia o ausencia de satlites Pars 1971 -Patrn especfico de bandas Bandas Q: (Casperson y cols., 1970) Tratamiento con Quinacrina Regiones ricas en AT, cromosoma Y Bandas G: (Seabright, 1971) Tratamiento con tripsina + Giemsa Regiones ricas en AT (bandas oscuras) Patrn de Bandas Q y G (1971) Frmula cromosmica: 46, XY Idiograma con bandas G Bandas R: (Dutrillaux y Lejeune, 1971) Patrn reverso al de bandas Q y G Regiones ricas en CG (bandas oscuras) Bandas: G R (Reverso) Par 3
Par 16 Bandas C: (Arrighi y Hsu, 1971) Heterocromatina constitutiva Bandas C Patrn de Bandas C (1971) Idiograma con bandas C Frmula cromosmica: 47, XY, +13 Limitaciones de la Citogentica Convencional : Alternativa : Citogentica Molecular 1. FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia) Requiere saber lo que se busca Tener la sonda adecuada 2. Otras tcnicas: Requieren equipos muy sofisticados y apoyo informtico SKY (Cariotipo espectral multicolor, multifish) CGH (Hibridacin Genmica Comparada) Requiere metafases No siempre la calidad de las metafases es optima Resolucin limitada (en el mejor de los casos 2-5 Mb ) FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia) Se puede realizar en ncleos interfsicos o en divisin Se suelen utilizar simultneamente distintas sondas, marcadas con flurorocromos de diferentes colores : Rojo: rodamina Verde: fluorescena Azul: dapi Tipos de sondas Especificas de regiones: Sondas telomricas Sondas centromricas
Especificas de cromosomas: Pintados cromosmicos
Especificas de secuencia: Sondas nicas, Sondas gnicas Sondas telomricas Especificas de regiones Sondas centromricas
Repeticiones Alfoides: (secuencias repetidas del centrmero que son especficas de cromosomas) tiles para localizar cromosomas concretos Centrmero del cromosoma 21 Pintados cromosmicos
Especificas de cromosomas
Pintan completamente el cromosoma elegido tiles en la deteccin de reorganizaciones cromosmicas t (2;8) cromosoma 8 rosa cromosoma 2 verde Pintados cromosmicos
Especificas de cromosomas pintado del cromosoma Y en rosa, el resto con dapi Pintado del cromosoma X Pintados cromosmicos
Especificas de cromosomas Pintados cromosmicos
Especificas de cromosomas cromosoma X rosa cromosoma Y verde Pintados cromosmicos
Especificas de cromosomas Pintado del cromosoma 22 Sndrome de Williams (del 7q11.23) 7q11.23 rojo, centrmero cromosoma 7 verde Sondas especficas de secuencia
Dirigidas a una regin concreta tiles para detectar sndromes por microdeleccin Cariotipo Espectral Multicolor (SKY) Hibridacin in situ con sondas especficas de cada cromosoma (El aparato es capaz de diferenciar 24 colores).
Identificacin unvoca del material cromosmico reordenado en translocaciones y marcadores complejos Hibridacin Genmica Comparada (CGH) Deteccin de prdidas y ganancias genmicas por hibridacin competitiva de ADN tumoral y normal de referencia Utilidad clnica de la citogentica Uno de cada 150 o 160 recin nacidos tiene una anomala cromosmica
Al menos el 50% de los abortos espontneos durante el primer trimestre tiene una anomala cromosmica
Aproximadamente el 2% de los embarazos en mujeres de ms de 35 aos tiene una anomala cromosmica