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nikmuniv@hotmail.

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ENZIMIOLOGA
ENZIMIOLOGA
La enzimologa es una disciplina bioqumica centrada en el
estudio y caracterizacin de las enzimas, que son
biomolculas proteicas o ribonucleicas que
catalizan reacciones qumicas en los sistema biolgicos.
Estudia, por ello: la implicacin de las enzimas en el
metabolismo; su estructura; su cintica; su posible
aplicacin en la biotecnologa; su variabilidad en
la filogenia; los adyuvantes enzimticos, como
los cofactores y las coenzimas; etc.
ENZIMAS
ASPECTOS
GENERALES
CLASIFICACIN
CINTICA
ENZIMTICA
Propiedades
Modo de
accin
Regulacin de
la actividad
enzimtica
Nomenclatura
Ajuste
inducido
Llave
cerradura
Oxidorreductasas
Transferasas
Hidrolasas
Liasas
Isomerasas
Ligasas
Cintica qumica
Cintica enzimtica
Modelo cintico Michaelis - Menten
Clculo de la Km y Vmax de una enzima
Actividad enzimtica

ENZIMAS


Las enzimas son protenas que catalizan todas las reacciones
bioqumicas. Adems de su importancia como catalizadores
biolgicos, tienen muchos usos mdicos y comerciales.

Un catalizador es una sustancia que disminuye la energa de
activacin de una reaccin qumica. Al disminuir la energa de
activacin, se incrementa la velocidad de la reaccin.

La mayora de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles,
es decir, que en ellas se establece el equilibrio qumico. Por lo
tanto, las enzimas aceleran la formacin de equilibrio qumico,
pero no afectan las concentraciones finales del equilibrio.


Que es un catalizador?
Catalizadores biolgicos. Protenas de forma globular
Especficas para un substrato particular (Estreo especificidad)
Aceleran reacciones especficas qumicas(10
3
-10
20
)
Actan en disolucin acuosa, a pH y temp. ptimos
Son las unidades funcionales del metabolismo celular
Reacciones acopladas (catabolismo anabolismo)
Reguladoras de rutas metablicas (Oligomricas)

FUNCIONES ENZIMTICAS

Las enzimas son protenas globulares


El sitio activo tiene una
forma especfica debido a
la estructura terciaria de
la protena.

Un cambio en la forma de
la protena afecta a la
forma del sitio activo y a
la funcin de la Enzima.
La alta especificidad se debe a
que su estructura terciaria le
permite formar cavidades
llamadas sitios activos, lugar
donde se ubica el sustrato
durante el proceso de catlisis.

La enzima se une especficamente
a las molculas denominadas
sustratos, formando un complejo
enzima-sustrato y favoreciendo su
transformacin en productos
ESPECIFICIDAD
ENZIMAS
Caractersticas de las ENZIMAS
Las enzimas Slo cambian la tasa de reaccin. Ellas no
cambian el equilibrio ni los productos finales.

Son especficas para una reaccin en particular

Actan en muy pequeas cantidades debido a su alta
actividad molecular:

Actividad molecular (N de recambio)= nmero de molculas
de Sustrato transformadas por minuto por una enzima.

Actividad molecular de la Catalasa = 6 x10
6
/min

La sustancia sobre la cual acta una enzima se llama sustrato.
Los sustratos son especficos para cada enzima:
Es as que la sacarosa es el sustrato de la sacarasa que acta rompindola
en sus componentes; al mencionado sustrato, de tal manera que sean
fcilmente asimilable como producto.
Las enzimas actan de acuerdo con la siguiente secuencia:
La enzima (E) y el sustrato (S) se combinan para formar un complejo
intermedio enzima sustrato (E-S), el cual se descompone formando un
producto y regenerando la enzima.
La enzima queda en estado libre y estatico, para luego ser nuevamente
activada y repetir la misma secuencia o ciclo funcional.

ACTIVIDAD ENZIMATICA
ENZIMAS
ENZIMAS
ETAPAS DE ACTUACIN DE LAS ENZIMAS
ETAPAS DE ACTUACIN DE LAS ENZIMAS
Caractersticas de las ENZIMAS
La tasa de accin enzimtica es dependiente del N de
molculas de Sustrato presentes
V
max =
Tasa de reaccin mxima
V
max
alcanzada cuando
todos los sitios activo se
llenan.
Algunos sitios activos
libres a bajas
concentraciones de
Sustrato
Concentracin de Sustrato
T
a
s
a

d
e


r
e
a
c
c
i

n
(
M
)

MECANISMO DE ACTIVIDAD ENZIMATICA
Concentracin del sustrato.- A mayor concentracin del sustrato, a una
concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus
de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del
sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reaccin.
Concentracin de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible,
un aumento en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad
enzimtica hacia cierto lmite.
Temperatura.- Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin,
hasta ciertos lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas
por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su
actividad.
pH.- El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las enzimas del
estmago cuyo pH ptimo es cido.
Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores,
sean activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las
enzimas que tienen cofactores, la concentracin del cofactor debe ser
igual o mayor que la concentracin de la enzima para obtener una
actividad cataltica mxima.

FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD
ENZIMATICA
Clasificacin de las enzimas de acuerdo a su complejidad
De acuerdo a su complejidad las enzimas se clasifican como:





CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

En las protenas conjugadas podemos distinguir dos partes:

Apoenzima: Es la parte poli peptdica de la enzima.
Cofactor: Es la parte no proteica de la enzima.

La combinacin de la apoenzima y el cofactor forman la holoenzima.
Los cofactores pueden ser:

*Iones metlicos: Favorecen la actividad cataltica general de la enzima, si
no estn presentes, la enzima no acta. Estos iones metlicos se denominan
activadores. Ejemplos: Fe2+, Mg2+, Cu2+, K+, Na+ y Zn2+
*La mayora de los otros cofactores son coenzimas las cuales generalmente
son compuestos orgnicos de bajo peso molecular, por ejemplo, las
vitaminas del complejo B son coenzimas que se requieren para una
respiracin celular adecuada.

ESTRUCTURAS FUNCIONALES DE LAS ENZIMAS
CONJUGADAS
EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Una enzima requiere para su funcin la
presencia de sustancias no proteicas que
colaboran en la catlisis:
COFACTORES COENZIMAS
Los cofactores pueden ser
iones inorgnicos como el
Fe
++
, Mg
++
, Mn
++
, Zn
++
etc.
Casi un tercio de los
enzimas conocidos
requieren cofactores.
Cuando el cofactor es una
molcula orgnica se
llama coenzima. Muchos
de estos coenzimas se
sintetizan a partir de
vitaminas.
APOENZIMA + GRUPO PROSTTICO= HOLOENZIMA
Los factores que influyen de manera ms
directa sobre la actividad de un enzima son:
Las propiedades de los enzimas
derivan del hecho de ser protenas y
de actuar como catalizadores. Como
protenas, poseen una conformacin
natural ms estable que las dems
conformaciones posibles.
Los cambios en la conformacin
suelen ir asociados en cambios en
la actividad cataltica.
EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
Los enzimas poseen grupos qumicos
ionizables (carboxilos -COOH; amino -
NH
2
; tiol -SH; imidazol, etc.) en las
cadenas laterales de sus aminocidos
La mayora de los enzimas son muy
sensibles a los cambios de pH.
El pH afecta la formacin de puentes de H y de S en las
protenas y as afectan a su forma.
pepsina
tripsina
colinesterasa
2 4 8 10 6
pH
T
a
s
a

d
e

r
e
a
c
c
i

n

(
M
)

Pepsina 1.5
Tripsina 7.7
Catalasa 7.6
Arginasa 9.7
Fumarasa 7.8
Ribonucleasa 7.8
Enzima pH ptimo
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
En general, los aumentos de
temperatura aceleran las reacciones
qumicas: por cada 10C de
incremento, la velocidad de reaccin
se duplica.
La temperatura a la cual la actividad
cataltica es mxima se llama
temperatura ptima .
La prdida de actividad cataltica debida a
la desnaturalizacin trmica.
Las ENZIMAS se desnaturalizan a 60
o
C
Temperatura
T
a
s
a

d
e

r
e
a
c
c
i

n

La tasa de
duplica cada
10
o
C
La Enzima se
desnaturaliza y pierde su
capacidad cataltica
Temperatura ptima
Algunas bacteria termfilas tienen
ENZIMAS con T ptimas de 85
o
C
Mamferos 37
Bacterias y algas aprox. 100
Bacterias rticas aprox. 0
Enzima Temp. pt.
(
o
C)
Bacterias en muestra de hielo antigua
En Reacciones anablicas
las enzimas facilitan la unin
de molculas sustrato.
En Reacciones catablicas
el sitio activo de la Enzima
afecta a los enlaces de los
Sustratos de modo que estos
son ms fciles de romper

Reacciones Enzimticas
La actuacin del enzima (1) permite que
los reactantes (sustratos) se unan a su
centro activo con una orientacin
ptima para que la reaccin se produzca
y (2) modifica las propiedades qumicas
del sustrato unido a su centro activo,
debilitando los enlaces existentes y
facilitando la formacin de otros nuevos
MODELO LLAVE-CERRADURA
El modelo llave-cerradura supone
que la estructura del sustrato y la del
centro activo son complementarias,
de la misma forma que una llave
encaja en una cerradura. Este modelo
es vlido en muchos casos, pero no es
siempre correcto.
La hiptesis Llave-cerradura postula que el sitio activo de una
Enzima tiene una forma rgida
Sin embargo, los estudios cristalogrficos indican que las
protenas son flexibles.
MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO
En algunos casos, el centro activo
adopta la conformacin idnea
slo en presencia del sustrato. La
unin del sustrato al centro activo
del enzima desencadena un
cambio conformacional que da
lugar a la formacin del producto.
Una molcula de enzima no tiene por qu
actuar siempre a la misma velocidad. Su
actividad puede estar modulada por:
pH
T
Cofactores
[Sustrato]
Modificacin
Alostrica
Modificacin
Covalente
Protelsis
Isoenzimas
MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
EFECTO DE LA MODIFICACIN COVALENTE
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
Hay varias formas mediante las cuales se
asigna un nombre a una enzima:
NOMBRES
PARTICULARES
Antiguamente, los enzimas
reciban nombres
particulares, asignados por
su descubridor. Al ir
aumentando el nmero de
enzimas conocidos, se hizo
necesaria una
nomenclatura sistemtica
que informara sobre la
accin especfica de cada
enzima y los sustratos
sobre los que actuaba.
NOMBRE SISTEMTICO
El nombre sistemtico de un enzima
consta actualmente de 3 partes:
- El sustrato preferente
- El tipo de reaccin realizado
- Terminacin "asa"
Un ejemplo sera la glucosa fosfato
isomerasa que cataliza la isomerizacin
de la glucosa-6-fosfato en fructosa-6-
fosfato.
NOMENCLATURA DE LA
COMISIN ENZIMTICA
El nombre de cada enzima puede ser
identificado por un cdigo numrico,
encabezado por las letras EC (enzyme
commission), seguidas de cuatro
nmeros separados por puntos.
la ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa) se define
como EC 2.7.1.2. El nmero 2 indica que es una transferasa,
el 7 que es una fosfotransferasa, el 1 indica que el aceptor es
un grupo OH, y el ltimo 2 indica que es un OH de la D-
glucosa el que acepta el grupo fosfato.
Nombrando a las ENZIMAS:
Enzimas intracelulares:


Enzimas extracelulares:



Nombre recomendado:


Nombre sistemtico:


Actan dentro de la clula; Ej. DNA
polimerasa
Secretadas por clulas y actan fuera de
ellas; ej. pepsina, amilasa
Corto, de preferencia terminado en
asa ej,. creatin kinasa
Describe el tipo de reaccin que est
siendo catalizada; ej. ATP:CREATIN
FOSFOTRANSFERASA.
ATP + CREATINA ADP + FOSFOCREATINA
ATP: hexosa fosfotransferasa
Nombre sistemtico:
Donador
Aceptor
Grupo transferido
EC 2.7.1.1
Nmero sistemtico
Enzyme
Comission
Grupo
Subgrupo
Sub-subgrupo
Enzima
Nombre comn: Hexokinasa
No. Clase Tipo de reaccin que
catalizan
Ejemplo

1

Oxidorreductasas


De xido reduccin (transferencia de e-)

Deshidrogenasas
Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas
2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas
Transaminasas
3 Hidrolasas Hidrlisis, con transferencia de grupos
funcionales del agua
Pirofosfatasa
Tripsina
Aldolasa
4 Liasas Lisis de un substrato, generando un
doble enlace, o
Adicin de un substrato a un doble
enlace de un 2o. substrato
(Sintasa)
(Sintasas)
Descarboxilasa pirvica
5 Isomerasas
Transferencia de grupos en el
interior de las molculas para
dar formas ismeras
Mutasas
Epimerasas
Racemasas
6 Ligasas Formacin de enlaces C-C,
C-S, C-O y C-N. Mediante
reacciones de condensacin,
acopladas a la ruptura del ATP

Sintetasas
Enzimas:
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de
oxidorreduccin, es decir,
transferencia de hidrgeno (H) o
electrones (e
-
) de un sustrato a
otro, segn la reaccin general:
Ejemplos son la succinato deshidrogenasa
o la citocromo c oxidasa.
AH
2
+ B A + BH
2

A
red
+ B
ox

A
ox
+ B
red

Si una molcula se reduce, tiene que haber otra que se oxide
Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo
qumico (distinto del hidrgeno) de un
sustrato a otro, segn la reaccin:
Un ejemplo es la
glucoquinasa, que cataliza
la reaccin representada en
la Figura de la derecha:
glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato
A-B + C A + C-B
Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis:
A-B + H
2
O AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la
reaccin:
lactosa + agua
glucosa + galactosa
Transforman polmeros en monmeros.
Actan sobre:
enlace ster
enlace glucosdico
enlace peptdico
enlace C-N
Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o
soldadura de sustratos:
A-B A + B
Un ejemplo es la acetacetato descarboxilasa, que
cataliza la reaccin:
cido acetactico CO
2
+ acetona
(Adicin a los dobles enlaces)
Entre C y C
Entre C y O
Entre C y N
Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros:
Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y
la fosfoglucosa isomerasa, que catalizan
las reacciones representadas en la tabla
inferior:
A B
(Reacciones de isomerizacin)
Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unin de dos sustratos con
hidrlisis simultnea de un nucletido
trifosfato (ATP, GTP, etc.):
Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que
cataliza la reaccin:
piruvato + CO
2
+ ATP
oxaloacetato + ADP + P
i

A + B + XTP A-B + XDP + P
i

Entre C y O
Entre C y S
Entre C y N
Entre C y C
(Formacin de enlaces, con aporte de ATP)
Los principios generales de las reacciones
qumicas se aplican tambin a las
reacciones enzimticas.
Cintica
enzimtica
Modelo cintico
Michaelis - Menten
Clculo de la Km y
Vmax de una enzima
Actividad
enzimtica
La medida se realiza
siempre en las
condiciones ptimas
de pH, temperatura,
presencia de
cofactores, etc.
En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la
velocidad mxima (V
max
). La velocidad puede determinarse bien
midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los
reactivos.
En este esquema, k
1
, k
2
y k
3
son las
constantes cinticas individuales de
cada proceso y tambin reciben el
nombre de constantes microscpicas
de velocidad.
v
1
= k
1
[E] [S]
v
2
= k
2
[ES]
v
3
= k
3
[ES]
V
max
= k
3
[E
T
]
[E
T
] = [E] + [ES]
Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la
cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de
sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero
de unidades de enzima por miligramo de protena (U/mg
prot)
Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha
definido la unidad de actividad enzimtica como la cantidad
de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo.
Esta unidad se llama katal
Inhibidor:

Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).

Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica.

Inhibicin Enzimtica
I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo
II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la molcula,
causando un cambio conformacional con repercusin negativa en
la actividad enzimtica.
Activador alostrico:
favorece la unin del
sustrato
Inhibidor alostrico:
impide la unin del
sustrato
Inhibicin Enzimtica
De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:
Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:
1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,
con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E + I EI
2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:
E + I
E
ES + I
ESI
Inhibicin Enzimtica
Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva

(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-
substrato una vez formado, impidiendo la accin cataltica;
este tipo se conoce como Inhibicin Anticompetitiva
(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que
lo haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin
cataltica: Inhibicin No Competitiva
E ES
EI
I
S
E + P
Inhibicin
Competitiva
Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas;
el complejo EI no es productivo.
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato.
E ES
EI
I
S
E + P
I
ESI
S
Inhibicin
No Competitiva
El inhibidor se fija
indistintamente a la enzima
libre E y al complejo
enzima-substrato ES; ni el
complejo EI ni el complejo
ESI son productivos
Ejemplo: reactivos que se unen
a grupos SH de cistena,
indispensables para algunas
enzimas, iones metlicos (Cu
2
+,
Hg
2
+ y Ag
2
+).
E ES
S
E + P
I
ESI
Inhibicin
Anticompetitiva
El inhibidor slo puede
fijarse al complejo ES;
el complejo ESI no es
productivo
Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente

- Su accin no se describe por una constante de equilibrio K
i
,
sino por una constante de velocidad k
i
:
E + I E
- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.
Algunos tipos de inhibidores irreversibles
1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos

3. Ligandos de metales

4. Metales pesados
Amilasa Pancreatitis Aguda
Creatinacinasa
Trastornos musculares e
infarto del miocardio
Fosfatasa cida
Lipasa
Cncer de Prstata
Pancreatitis Aguda
Lactato
deshidrogenasa
Infarto del miocardio
PRINCIPALES ENZIMAS USADAS EN EL DIAGNOSTICO CLINICO
v
Definiendo los siguientes trminos:
1. Reacciones anablicas:

2. Reacciones catablicas:

3. Metabolismo:

4. Catalizador:

5. Va metablica:

6. Especificidad:

7. Sustrato:

8. Producto:
Reacciones que construyen molculas
Reacciones que descomponen molculas
Combinacin de reacciones anablicas y
catablicas
Secuencia de reacciones controladas por
enzimas
Slo pueden catatizar reacciones
especficas
La molcula(s) donde opera la enzima
Molcula(s) producida por ENZIMAS
Una Sustancia que acelera las reacciones
sin cambiar las sustancias producidas
nikmuniv@hotmail.com

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