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Hemoprotenas:

Hemoglobina y Mioglobina

Hemoprotenas
Son protenas conjugadas cuyo grupo prosttico es una porfirina
coordinada a un ion metlico. Suelen estar relacionadas con todos los
aspectos del metabolismo aerbico
- Transportadores de oxgeno como la hemoglobina y la mioglobina
- Clorofilas: porfirinas coordinadas a un ion Mg++
- Transportadores electrnicos como los citocromos
- Enzimas relacionadas con el transporte electrnico como la
citocromo oxidasa
- Enzimas relacionadas con el stress oxidativo, como las peroxidasas
- Coenzimas cobamdicas o corrinoides (vit. B12)

CH2
CH

H3 C

N
Fe++ N

HO
CH3

Hemo a:
citocromo oxidasa

CH3

CH2 CH2 COO-

O C
H

CH2
CH2
COO-

CH2 CH2 S Cys 17

H3C

Cys 14 S CH2

CH2
N
CH3

Hemo c:
citocromo c

CH3

Fe++ N
CH2 CH2 COO-

H3C

CH2
CH2
COO-

Citocromo c

Met 80
Fe
Cys 14

Entorno del grupo


hemo
en el citocromo c

Cys 17
His 18

Hemo c

CH2
CH

H3 C

R:

CH3

en clorofila a
N

CHO en clorofila b
N

R
++

Fe
Mg++
N

O
O
CH3

O C
O

Clorofilas

CH2 CH3

C
O

CH3

Bacterioclorofila

Transporte en sangre de O2
1 L de sangre arterial desprende 200 mL de O2 STP. Dada su poca
solubilidad, es de suponer que la mayora circula en forma de alguna
combinacin qumica.
En efecto, el oxgeno circula en combinacin con la hemoglobina,
presente a la concentracin de 145 g/L en sangre, toda ella en el
interior del hemate (eritrocito, gbulo rojo), a su vez en cantidad
de unos 5 x 106 por l.
El peso molecular de la hemoglobina es de 64000 (2.2 mmoles.L-1);
los 200 mL de O2 suponen 8.8 mmoles.L-1; por tanto, el transporte
se hace en razn de 8.8/2.2 = 4 moles de oxgeno por mol de hemoglobina.

Teniendo en cuenta que en la molcula de hemoglobina hay cuatro


tomos de hierro, podemos decir que el transporte tiene lugar en
una proporcin de un mol de oxgeno por mol de hierro.
La sangre arterial est equilibrada con una presin parcial de
oxgeno de aproximadamente 95-100 mm Hg. La sangre venosa
est equilibrada con una presin parcial de oxgeno de
aproximadamente 40 mm Hg.
La sangre arterial est saturada prcticamente a 100 %; la venosa,
un 70 %. Por tanto, el paso por los tejidos perifricos desprende un
30 % del oxgeno combinado con la hemoglobina.

Hemoglobina: protena globular, conjugada y oligomrica


- Grupo prosttico: hemo
hemo: protoporfirina IX + ion ferroso Fe2+
- Cuatro subunidades, iguales dos a dos:
Hemoglobina A1 (HbA1):
Hemoglobina A2 (HbA2):
Hemoglobina fetal (HbF):
Hemoglobina Gower 1:
Hemoglobina Gower 2:
Hemoglobina Portland:
- Se conoce, adems, un gran nmero de hemoglobinas
mutantes.

CH2
CH

H 3C

H2C CH
N
CH3

CH3

Fe++ N
CH2 CH2 COO-

H 3C

CH2
CH2
COO-

Grupo Hemo b:
Protoporfirina IX + Fe

Hlice F

Entorno del
grupo hemo
en la
mioglobina

Fe++

His 93

Hlice E

Tanto en la hemoglobina como en la mioglobina,


el hierro siempre est en estado ferroso, Fe ++
Cuando el ion ferroso, Fe++ se oxida a frrico, Fe +++,
la hemoglobina se convierte en metahemoglobina, que
no es funcional
Conviene no confundir metahemoglobina con
oxihemoglobina, que es la forma oxigenada (pero no
oxidada) de la hemoglobina
Desoxihemoglobina + 4O2

Oxihemoglobina

Homologa de secuencia - - Mioglobina


Cadena
Cadena
Mioglobina

V-LSPADKTNVKAAWGKVGAHAGEYGAEALERMFLSFPTTKTYFPHF-DLSH-----GSA 53
VHLTPEEKSAVTALWGKV--NVDEVGGEALGRLLVVYPWTQRFFESFGDLSTPDAVMGNP 58
-GLSDGEWQLVLNVWGKVEADIPGHGQEVLIRLFKGHPETLEKFDKFKHLKSEDEMKASE 59
*: :
*
**** .
* *.* *:: .* *
* * .*.
..

Cadena
Cadena
Mioglobina

QVKGHGKKVADALTNAVAHVDDMPNALSALSDLHAHKLRVDPVNFKLLSHCLLVTLAAHL 113
KVKAHGKKVLGAFSDGLAHLDNLKGTFATLSELHCDKLHVDPENFRLLGNVLVCVLAHHF 118
DLKKHGATVLTALGGILKKKGHHEAEIKPLAQSHATKHKIPVKYLEFISECIIQVLQSKH 119
.:* ** .* *: . : : ..
: .*:: *. * ::
:.::.. :: .* :

Cadena
Cadena
Mioglobina

PAEFTPAVHASLDKFLASVSTVLTSKYR------ 141
GKEFTPPVQAAYQKVVAGVANALAHKYH------ 146
PGDFGADAQGAMNKALELFRKDMASNYKELGFQG 153
:* . .:.: :* : . . :: :*:

Hlice C
C
Hlice F

Hlice D

l
H
H

eG
lic

ce

E
e
ic

N
ce
i
l

Hlice B

Subunidad

Subunidad

Mioglobina

Situacin del
grupo hemo

1
1

Hemoglobina A1
(forma T, desoxi-)

Hemoglobina A1
(forma R, oxi-)

Hlice F

His 87
His 92

Entorno del
grupo hemo en la
desoxihemoglobina

Hlice E

Entorno del
grupo hemo en la
oxihemoglobina

O2
Hlice F

His 87
His 92

Hlice E

Saturacin de O2 en Mioglobina y Hemoglobina


100

Mioglobina

Saturacin de O2, %

80

60

40

Hemoglobina
20

0
0

20

40

60

PO2, mmHg

80

100

100

Vol., Mb
Saturacin de O2, %

80

Vol., Hb

60

40

20

0
0

20

40

60

PO2, mmHg

80

100

Concepto de P50
100

Saturacin de O2, %

80

60

40

20

0
0

20

P50 Mb

40

P50 Hb

60

PO2, mmHg

80

100

Efecto del pH sobre la saturacin de la hemoglobina


(Efecto Bohr)
100

pH 7.0

Saturacin de O2, %

80

pH 7.4
60

pH 6.6
40

20

0
0

20

40

60

PO2, mmHg

80

100

Efecto de la presin parcial de CO2


100

Saturacin de O2, %

80

60 mmHg
40 mmHg

60

80 mmHg
40

20

0
0

20

40

60

PO2, mm Hg

80

100

Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)


sobre la saturacin de la hemoglobina
100

Saturacin de O2, %

80

0
60

0.1 mM
1 mM

40

20

0
0

20

40

60

PO2, mmHg

80

100

Modelo MWC

Forma R, oxis

s s

s s
s

s s
s s

i
i

i
Forma T, desoxi-

i
i

Contacto , desoxihemoglobina

Arg 141
C

H 2N

(CH2)3

C NH2+
NH

COO-

H3 N

H 3N C

OOC CH2 C Asp 126

(CH2)4
Val 1

Lys 127

Contacto
Arg 141 (C-t)

Asp 126
Arg 141 (C-t)

Asp 126
Lys 127

Lys 127

Desoxi-

Oxi-

Contacto , desoxihemoglobina

H2N

Arg 92
C

Lys 40

(CH2)3

C NH2+
NH

(CH2)4 NH3+

OOC CH2

OOC
CH CH2

CH2 C Glu 43

HN
NH

His 146 (C-t)

Contacto
His 146 (C-t)

His 146 (C-t)


Lys 40

Glu 43

Arg 92

Desoxi-

Lys 40

Glu 43
Arg 92
Oxi-

Contacto

Asp 99

Asp 99

Tyr 42

Forma T, desoxi-

Tyr 42
Forma R, oxi-

Contacto , desoxihemoglobina

Asp 94
-

C CH2 COO

HN

NH
CH2 C
His 146

Contacto
His 2

His 2
His 143
Val 1

Val 1
His 143

Lys 82

Lys 82
Lys 82
Val 1

His 143

Lys 82

His 143

Val 1

His 2
2,3-BPG
Forma T, desoxi-

His 2
Forma R, oxi-

Forma T, desoxiHb

Forma R, oxiHb

Movimiento del
ion Fe++ en la
oxigenacin de la
hemoglobina

Inmunoglobulinas

Todos los organismos vivientes tienen mecanismos


para distinguir lo propio de lo extrao
- Hongos y plantas, por ejemplo, mediante la produccin de
metabolitos secundarios potencialmente txicos para otros
organismos: antibiticos, alcaloides, etc.
- Bacterias, mediante el sistema de restriccin de DNA: DNAs
extraos son degradados especficamente por las enzimas de
restriccin
- Vertebrados, mediante el sistema inmune.

El sistema inmune consta de dos tipos de respuesta:


- La inmunidad celular, mediante la cual clulas inmunocompetentes ( linfocitos T) eliminan clulas extraas introducidas en
el organismo (p.e. un injerto, un tumor, una clula transformada por un virus, etc.)
- La inmunidad humoral, en la que otras clulas inmunocompetentes (linfocitos B) producen protenas especficas dirigidas
contra lo extrao, llamadas anticuerpos.
- Todos los anticuerpos pertenecen a una superfamilia de protenas
conocidas como inmunoglobulinas

Llamamos antgeno a la molcula que, introducida en un organismo, produce una respuesta inmune, sea humoral o celular.
En la inmunidad humoral, el antgeno se une especficamente a
un linfocito B que produce un anticuerpo complementario. Este
linfocito se multiplica (clon celular) y se transforma en clula
plasmtica o plasmocito, que es la clula encargada de la
produccin de anticuerpos.
Cada linfocito B produce un solo y nico tipo de anticuerpo. Por
esa razn, los anticuerpos obtenidos de un nico clon de
linfocitos B reciben el nombre de anticuerpos monoclonales.

El estudio de las inmunoglobulinas se vio facilitado por la


naturaleza de los mielomas, tumores malignos de clulas
plasmticas, que producen un solo tipo de anticuerpo (anticuerpo monoclonal).
En algunos mielomas humanos se produce la llamada protena
de Bence-Jones, que es excretada en la orina, a partir de la que
se puede purificar.
Es fcil inducir mielomas en ratn.
A partir de todas estas circunstancias se pueden obtener anticuerpos qumicamente puros (monoclonales) lo cual facilita
el estudio qumico de las inmunoglobulinas

Porter, 1959:
El tratamiento con papana escinde la molcula de
inmunoglobulina (Ig) en tres fragmentos, dos de ellos
idnticos: dos Fab y un Fc
Fab: Antigen Binding (fijador de antgeno)
Fc: Crystallizable (cristalizable)
Edelman, 1959:
El tratamiento con mercaptoetanol y guanidina 8M, seguido
de cromatografa, disocia la Ig en dos componentes de pesos
moleculares 50 kDa (H, de heavy, pesado) y 25 kDa (L, de
light, ligero). Como el peso molecular de la Ig nativa es de
150 kDa, se deduce que su estructura es H2L2

Por estudios inmunolgicos, se detectan los siguientes isotipos:


- Cadena ligera:
- Cadena pesada:
En los dominios constantes puede haber una ligera variabilidad
en cada cadena (afecta a uno o dos aminocidos) dando lugar a
las variantes conocidas como alotipos
En los dominios variables hay muy poca homologa de secuencia;
cada anticuerpo es nico hacia su antgeno: los idiotipos
En cualquier caso, en cada anticuerpo las dos cadenas ligeras y las
dos pesadas son iguales entre s.

Cadena pesada o H:
VL

Cadena ligera o L:
CL
C

CH3

CH2

CH3

CH2
C

Puente disulfuro

Inmunoglobulinas

L
N

VH

1
CH

CH
1

CL

VH
VL

N
N

Cadenas ligeras
212 aminocidos
2 dominios:
VL, N-t (108aa)
CL, C-t (104 aa)
Cadenas pesadas
Variable; 450 aminocidos en IgG
Cuatro o cinco dominios:
VH, N-t (108 aa)
CH1, CH2, CH3 (y CH4)
En los dominios constantes hay posibilidad de
variaciones alotpicas (uno o dos aminocidos solamente)

Regiones hipervariables (CDR) en el dominio


variable de las cadenas H y L en las Ig

N
1

30

50

60

93

N
35

87

105

Dominio de
Inmunoglobulina

Cadena ligera, L

C
N
CL

VL

VH

Cadena pesada, H

C
CH1
CH3

Oligosacrido
CH2

L
Cys H128

Cys L 214 (C-t)

Puente disulfuro entre cadenas pesada y ligera

Fab

Inmunoglobulina G
H1
H2

Oligosacrido

L1

Fab

L2
Fc

Inmunoglobulina G

- Constituye el 70-80 % de las Ig sricas


- Contingente mayoritario de la respuesta inmune secundaria
- Cuatro tipos distintos: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4
- Monomrica
- Bajo contenido en carbohidrato (2-3 %)

Inmunoglobulina A

- Constituye el 10-20 % de las Ig sricas


- Es la Ig propia de las secreciones (jugo gstrico, saliva, leche)
- Dos tipos: IgA1, IgA2
- Normalmente dimrica: unin covalente por el pptido J
- Alto contenido en carbohidrato (7-12 %)

Inmunoglobulina M

- Constituye el 5-10 % de las Ig sricas


- Es la respuesta inmune primaria
- Cinco dominios en la cadena pesada
- Elevada proporcin de carbohidrato (12 %)
- Pentmero unido por disulfuros y un pptido J

Inmunoglobulina D

- Muy baja concentracin en suero (1 %)


- Posiblemente relacionada con el receptor de antgeno
- Alto contenido en carbohidrato (9-14 %)

Inmunoglobulina E

- La ms minoritaria
- Cinco dominios en la cadena H
- Membrana de mastocitos y basfilos
- Relacionada con inmunidad a parsitos helmnticos
- Relacionada con fenmenos de hipersensibilidad
(alergia) inmediata: fiebre del heno, asma.
- Alto contenido en carbohidrato

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