GENETIC

AN I N T E G R AT E D AP P R O AC H

A N A LY S I S

Chapter 8
Molecular Biology of
Transcription and
RNA Processing

Lectures by Kathleen Fitzpatrick

Simon Fraser University

Mark F. Sanders

John L. Bowman

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Genetics Analysis: An Integrated Approach

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Nucleotidos y Estructura del RNA

Nucletidos
DNA
bases A, G, C, T
Azcar deoxiribosa
Grupo fosfato
RNA
bases A, G, C, U
Azcar ribosa
Grupo fosfato

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Estructura del RNA

Los azcares similares de RNA y ADN conducen a la
formacin de enlaces de azcar-fosfato casi idntico
en las molculas de RNA y DNA por la formacin de
enlaces fosfodister entre el terminal 5 fosfato de
un nucletido y el hidroxilo 3 del otro nucleotido.
La molecula de RNA (transcripcion) se sintetiza a
partir de una plantilla de ADN, por
complementaridad. (AU y CG)

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Sintesis RNA
RNA polimerasa
Cataliza la adicion de cada ribonucleotido al terminal
3 de la cadena en crecimiento y forma los enlaces
fosfodiester entre los nucleotidos
Se liberan dos grupos fosfatos en el proceso, como
en la sintesis de DNA

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RNAs
mRNA- Messenger RNA
es producida por los genes que codifican para protenas y es un
intermediario de vida corta entre el ADN y la protena
Se traduce
generalmente sufre procesamiento post-transcripcional.

tRNAs- Transfer RNAs

No se traduce, tiene rol funcional
se codifican en docenas de formas y transportan aa para su inclusin
durante la sntesis de la protena.

rRNA- Ribosomal RNA

No se traduce, tiene rol funcional
Se combina con numerosas proteinas para formar los ribosomas
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Otros RNAs
Small nuclear RNA (snRNA)
Son de varios tipos
se encuentra en el ncleo de los eucariotas y
desempea un papel en el procesamiento del
mRNA

Micro RNA (miRNA)

es activo en las clulas animales y vegetales
est involucrado en la regulacin postranscripcional
del mRNA
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8.2 Transcripcin bacteriana

La transcripcin es la sntesis de una molcula de
RNA por parte de la RNA polimerasa
Molde es DNA (template strand)
Sintesis de cadena de ribonucleotidos (RNA) a base de
complementaridad y antiparalela
la hebra codificante de DNA es la cadena nontemplate,
es complementaria a la hebra molde
cadena nontemplate/ / cadena molde (template)

cadena RNA/ / cadena molde (template)

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Estructura del Gen

El gen contiene varios segmentos con distintas
funciones.
El promotor es una secuencia consenso en el DNA que
esta inmediatamente upstream (5) hasta el lugar de
inicio de la transcripcin, conocida como el nucletido
1
El promotor controla el acceso de la ARN polimerasa al
gen

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Estructura del Gene, cont.

La regin codificante del gen es la porcin que
contiene la informacin necesaria para sintetizar el
producto de la protena
La regin de terminacin del gene regula el cese de
la transcripcin.
la regin de terminacin esta inmediatamente en el
terminal 3 de la region codificadora (segmento de
codificacin del gene- downstream terminacion)

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Pasos esenciales transcripcin en E. coli

Reconocimiento del promotor
Iniciacin
Alargamiento de la cadena
Terminacin

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RNA Polimerasa
Holoenzima
polimerasa del RNA bacteriano,
enzima pentamrica, core enzyme (2 subunidades,
& ) que se une a una sexta subunidad (sigma (),

Core: transcribe RNA usando el templado de DNA,

pero no se puede enlazar al promotor ni iniciar la
sintesis de RNA sin la subunidad sigma (
Sigma: existen diferentes subunidades de sigma,
alternative sigma subunits. que ocasionan
cambios en la conformacion de core y facilitan su
asociacion a diferentes regiones del promotor.
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Iniciacion Transcripcion
Dos pasos
1.La holoenzima se asocia debilmente (loose
attachment) a la secuencia del promotor para formar
un complejo cerrado (closed promoter complex). La
holoenzima desenrrolla aproximadamente 18 bp de
DNA alrededor de la posicin -10 para formar el
promotor abierto (the open promoter complex).
2. La holoenzima se mueve (downstream) para iniciar
la sintesis de RNA en la posicin 1
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Alargamiento y Terminacion Transcripcion

La holoenzima inicia la sntesis de ARN en el sitio +1
y permanece intacta hasta que se han incorporado
los primeros 8 a 10nucletidos de RNA. La
subunidad sigma se disocia de la enzima.
El ADN se desenrolla por delante de la enzima para
mantener ~ unos 18 nucletidos del ADN
desenrollado. Se restablece la doble hlice detrs de
la ARN polimerasa.

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Terminacion de la Transcripcion
Cuando termina la transcripcin del gen la
holoenzima se disocia del ADN y poco despus se
inicia una segunda ronda.
La terminacin de la transcripcin en bacterias es
sealizada por una secuencia de terminacin de
ADN que generalmente contiene una secuencia de
repeticin, seal de terminacin.

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Mecanismos TerminacionTranscripcion
Terminacion intrinseca
Comun en bacterias

mecanismo dependiente de la prescencia de una secuencia (repeat)

que induce la formacion de una estructura secundaria que provoca la
terminacion

El mRNA que se transcribe forma estructura en forma de pinche

(stem-loop structure) que provoca la desestabilizacion de la
holoenzima.

Terminacion dependiente de rho (rho-dependent)

requiere una secuencia de terminacion diferente y la presencia de una
proteina, rho.
rho se enlaza al mRNA y cataliza la separacion del mRNA de la RNA
polimerasa.
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