ACTIVIDAD ANTIMICOTICA IN

VITRO Y METABOLITOS DEL

ACEITE ESCENCIAL DE LAS HOJAS
DE Minthostachys mollis (MUA)

EXTRACCION DE ACEITE ESENCIAL

(Met. Arrastre con vapor de agua)

RECEPCIN DE
MATERIA PRIMA
Se utilizo 10 kg de
Mula fresca y
esterilizada.

AUTOCLAVADO
Se coloc 1,5 kg de mua
en cada canastilla de una
autoclave, asegurando que
no est en contacto directo
con el agua
Se calent hasta el
desprendimiento de vapor
de agua conteniendo el
aceite esencial a travs de
los refrigerantes de vidrio,
recolectados en una pera de
decantacin.

ENVASADO Y
ALMACENAMIENTO
El aceite se deposit
en frasco oscuro
cerrado
hermticamente que
fue almacenado en
refrigeracin hasta su
uso.

FILTRADO
Con ayuda de una
bomba de vaco.

REPOSO Y
DECANTACIN
hasta observar la
separacin del agua
y del
aceite,
procedindose
luego a su
decantacin
DESECACION
El aceite obtenido
fue sometido a
desecacin con
sulfato de sodio
anhidro.

ANALISIS CROMATOGRAFICO DE GASES

El aceite esencial obtenido fue analizado en
marzo de 2006 en el Lab. de Investigacin y
Qumica Aplicada de la Facultad de Ing.
Qumica de la UNI, por cromatografa de
gases.
Basado en el tiempo de retencin de
algunos de los componentes, luego
mediante estndares conocidos se
determin la composicin cuali-cuanti
centesimal de cuatro monoterpenos
(limoneno, mentona, pulegona y mentol)
del aceite esencial de la mua.

DETERMINACION IN VITRO
DE LA ACTIVIDAD
ANTIFUNGICA DEL A .E.

Se us cepas de Microsporum canis,

Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton
tonsurans obtenidas de muestras clnicas y
proporcionadas por el Departamento de
Micologa del Instituto de Medicina Tropical
Daniel A. Carrin de la UNMSM.
as como la cepa Candida albicans ATCC
32148 proporcionada por el Instituto de
Microbiologa Simn Prez Alva de la
Facultad de Farmacia y Bioqumica de la
UNMSM.

METODO DE AGAR EN DIFUSIN

Fundamento
Esta prueba se basa en la inhibicin del
crecimiento fngico, mediante la difusin
de las sustancias activas en un medio
slido, y posteriormente se evidencia por
la formacin de halos claros
Microorganismos
Candida albicans
Microsporum canis
Trichophyton mentagrophytes
Trichophyton tonsurans

PREPARACIN DE LAS PLACAS

Se utilizar 20 mL del medio agar dextrosa Sabouraud, fundido a

45 c que sern aspticamente mezclados con 1 mL de la
suspensin fngica (1 x 104 UFC/mL) en placas petri de 100 mm x
15 mm se deja solidificar y se rotula con el nombre del
microorganismo testigo. Luego se hizo pozos con la ayuda de un
sacabocado (tapn horadador) de 11 mm de dimetro.
PREPARACIN DE LA SUSPENSIN DEL INCULO

Las soluciones de hongos se suspenden en solucin salina estril

ajustado a 0,5 de la escala de McFarland para Candida albicans y
por cmara contadora de clulas hemacitmetro para otros
hongos (se corrobora por conteo de diluciones seriales en placa).
INOCULACIN DE LAS MUESTRAS

Se proceder a colocar 0,1 mL del aceite esencial al 100 %, y 50

%, en los pozos previamente hechos. Se deja reposar por un
periodo de 30 minutos a 24 temperatura ambiente y luego se llev
a una temperatura de incubacin de 28 C de 14 a 21 dias
dependiendo del hongo.
Las pruebas se realizaron por triplicado.
LECTURA E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

Luego de transcurrir el tiempo de incubacin se procedi a realizar

la lectura correspondiente con la observacin de las zonas claras
de inhibicin del crecimiento, mediante el registro de los dimetros
en mm de estas zonas.

METODO DE DILUCION EN TUBO

Fundamento
Esta prueba se basa en la inhibicin del
crecimiento fngico, mediante la dilucin del
aceite esencial en tubos con agar, y se evidencia
por la ausencia de crecimiento en los tubos.
Microorganismos
Microsporum canis
Trichophyton mentagrophytes
Trichophyton tonsurans
Agar usado
Agar selectivo para dermatofitos (DTM) segn
Taplin

PREPARARON LAS SUSPENSIONES DE

LOS DERMATOFITOS
a partir de la mezcla resultante de conidias y
fragmentos hifales de cultivos obtenidos en cultivos
previos, que fueron mezclados con 10 mL de agua
destilada, se les separ de las partculas pesadas
por sedimentacin y fueron homogeneizadas con un
mezclador de vrtice.
Su densidad fue ajustada con un espectrofotmetro
en una longitud de onda de 530 nm para obtener
inculos estandartizados (0,6 a 3 x 106 UFC/mL).
PREPARACION DE LAS DILUCIONES
se prepararon usando 5 y 50 L del aceite esencial
de mua diluido en 10 mL del agar DTM fundido e
inoculado con el dermatofito de prueba. La lectura
de la prueba
fue medida segn la presencia o ausencia del
crecimiento de los hongos. Las pruebas se
realizaron por triplicado y con un grupo control
(alcohol).

RESULTADOS

EXTRACCION DE ACEITE
CARACTERSTICAS Y METABOLITOS DEL
ACEITE ESENCIAL DE MUA
El rendimiento del proceso de extraccin del
aceite esencial de mua por el mtodo de
arrastre con vapor de agua, fue de 0,19% p/p.
Las caractersticas organolpticas y propiedades
fisicoqumicas se detallan en la tabla 1.
Por el anlisis de cromatografa de gases se
encontr en mayor proporcin pulegona, luego
mentona y limoneno, sin encontrarse mentol
(Tabla 2).

ACTIVIDAD ANTIMICOTICA
C. albicans.
Se observ un halo inhibitorio
de 30 mm con el aceite
esencial de mua al 100% y
de 35 mm al 50%. No se
observ halo en las placas
control.

T. tonsurans, M canis y T.
mentagrophytes.
No se observ crecimiento
fngico en todo el dimetro
de las placas con aceite
esencial de mua al 50 y
100% para todos los
dermatofitos ensayados con
la prueba de difusin de agar.
Las placas controles no
presentaron halo inhibitorio.
Para la prueba de dilucin en
tubo no se evidenci
crecimiento en ambas dosis
(5 y 50 L) para todos los
dermatofitos .

Cepa Candida albicans

PRUEBAS DIFUSIN EN AGAR

Prueba de
control
negativo con
etanol al
95%.

Concentraci
n del
Aceite
esencial
50%

Concentracin del

Aceite esencial
100%

Cepa Mycrosporum canis

PRUEBAS AGAR EN DIFUSIN / DILUCIN EN TUBO

1) Concentracin
del aceite esencial
al 50%
2) Concentracin
del aceite esencial
al 100%

Prueba de
control

Tubos control
(derecha)
tubo con AEMM
(izquierda)

Cepa Trichophyton tonsurans

PRUEBAS AGAR EN DIFUSIN / DILUCIN EN TUBO

Prueba de
control

1) Concentracin
del aceite esencial
al 50%
2) Concentracin
del aceite esencial
al 100%

Tubos control
(derecha)
tubo con AEMM
(izquierda)

Cepa Trichophyton mentagrophytes

PRUEBAS AGAR EN DIFUSIN / DILUCIN EN TUBO

Concentracin
del aceite
esencial al
100%

Prueba de
control

tubos control
(derecha)
tubo con AEMM
(izquierda)

DISCUCION