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Controle do Crescimento

Microbiano

1. Introduo
1.1. Uso dos agentes de controle
- estudos com microrganismos ou sua aplicao
- evitar ou controlar infeces
- evitar ou minimizar a decomposio de materiais
1.2. Quais os principais fatores limitantes para o
crescimento microbiano?
-

Temperatura
pH
Disponibilidade de H2O
Disponibilidade de O2

Condies que Afetam a Atividade de


um Agente de Controle Microbiano
* tamanho da populao
* intensidade ou concentrao do agente
* tempo de exposio
* temperatura do ambiente
* natureza do meio: umidade, pH...
* tipo de microrganismo**

Influncia do Tamanho Inicial da Populao sobre a


Efetividade de um Agente de Controle

Influncia da concentrao de Fenol sobre o


crescimento de Escherichia coli
Fenol a 35 C

Cortesia da Universidade de Cambridge

Influncia da temperatura no crescimento de


Escherichia coli exposta a Fenol

Cortesia da Universidade de Cambridge

CONCEITOS
ANTIMICROBIANOS:
Substncias que matam os microrganismos ou
inibem o seu crescimento (antibacterianos,
antifngicos, antivirais...).
- MICROBICIDAS: matam (bactericida, fungicida...)
- MICROBIOSTTICOS: inibem
(bacteriosttico, fungisttico...)

crescimento

CONCEITOS
- Esterilizao: destruio de todas as formas de vida
microbiana.
- Desinfeco: destruio de patgenos vegetativos.
- Anti-sepsia: destruio de patgenos vegetativos em
tecido vivo.
- Degerminao: remoo dos micrbios de uma rea
limitada, como o local em torno de uma injeo.
- Sanitizao: tratamento destinado a reduzir as
contagens microbianas nos utenslios alimentares at
nveis seguros.

PADRO DE MORTE EM UMA


POPULAO MICROBIANA
MORTE DE MICRORGANISMO:
Perda da capacidade de reproduo.
Fatores que influenciam a morte microbiana:
Quantidade de microrganismos
Caractersticas microbianas
Fatores ambientais
Tempo de exposio

PADRO DE MORTE EM UMA


POPULAO MICROBIANA
Morte exponencial: morte em relao constante em
dado perodo de tempo.
Exemplo: Agente microbicida que mata 90% de
microrganismos por minuto.
TAXA DE MORTE MICROBIANA (EXEMPLO)
Nmero de
Tempo (min)
Mortes/min
Sobreviventes
0
0
1.000.000
1
900.000
100.000
2
90.000
10.000
3
9000
1.000
4
900
100
5
90
10
6
9
1
Fonte: Microbiologia (Tortora)

3. Tipos de Agentes de Controle e Mecanismos de ao


3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes
Fsicos
- Esterilizao pelo calor
- Esterilizao por radiao
- Esterilizao
por filtrao por Agentes
3.2. Controle
Antimicrobiano
Qumicos
- Agentes qumicos de uso externo (tpico)
3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo
3.3.1. Frmacos antimicrobianos sintticos
3.3.2. Antibiticos
3.3.3. Frmacos antifngicos
3.3.4. Frmacos antivirais

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.1. Calor mido


* desnaturao de protenas e enzimas
a) gua fervente (100 C)
- clulas vegetativas x esporos
b) Sob presso (autoclavagem) 121 C a 1,1 kg cm-2
- rpido aquecimento
- grande penetrao
c) Pasteurizao
1860: Louis Pasteur/vinho
62,8 C/30 min ou 72 C/15 s

Medida da Esterilizao pelo Calor


Efeito da temperatura na
viabilidade de uma
bactria mesoflica

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.2. Calor Seco


* Oxidao dos constituintes orgnicos
* Menor eficincia que o calor mido
a) incinerao: eliminao de contaminantes e cadveres,
esterilizao da ala de platina
b) forno de Pasteur
* 160 C durante 2 h

3.1.3. Baixas Temperaturas


* preservao de alimentos, drogas
* inibio das reaes metablicas
* formao de cristais de gelo (congelamento)
* reduo da gua disponvel

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.4. Radiaes
* Energia eletromagntica: raios csmicos a ondas de rdio
a) ionizante: radiao eletromagntica com energia suficiente
para produzir ons e outras espcies moleculares reativas, a
partir das molculas com as quais as partculas radioativas
colidem

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos

3.1.4. Radiaes
* Energia eletromagntica: raios csmicos a ondas de rdio
a)ionizante: raios gama, raios-X, feixes de eltrons:
*ionizao das molculas:
ex. H2O
OH* (hidroxil) + e- + H*
poderosos oxidantes
* alto poder de penetrao
b) no ionizante:
* luz ultravioleta: 136 a 400 nm (** 260 nm)
* excita os eltrons produzindo vrios tipos de reao:
DNA (mais afetado) - dmeros de pirimidina
* baixo poder de penetrao

Sensibilidade de Microrganismos e de
Funes Biolgicas Radiao
Gray (Gy) uma unidade do
Sistema Internacional de medidas,
que representa
a quantidade de energia de radiao
ionizante absorvida
(ou dose) por unidade de massa,
onde:
1 Gy = 1kg.m-2 s-2
O nome da unidade em
homenagem
a Louis Harold Gray (19051965),
um radiologista britnico.

3.1. Controle Antimicrobiano por Agentes Fsicos


3.1.5. Filtrao
* Chamberland (1884): primeiro filtro bacteriolgico de porcelana
para gua
* Modernos: membranas de steres de celulose
- poros uniformes
- dimetro varivel
- descartveis
* ex. filtros HEPA (high efficiency particulate air):
acetato de celulose dobrado ao redor de folhas
de alumnio - retm 99% da matria particulada

Filtros HEPA Utilizados em Cmaras de


Fluxo Laminar

Unidades de Membranas Filtrantes Descartveis,


Pr-Esterilizadas e Montadas

Fonte: Madigan et al., 2004, 2010. Microbiologia de Brock

Filtros Microbiolgicos

Filtro de profundidade
(Fibras de papel ou de
borossilicato)

Membrana Filtrante
(Acetato de celulose,
nitrocelulose ou
polissulfona)

Filtro Nucleoporo
(Filmes de policarbonato)

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Micrografia Eletrnica de Varredura de Bactrias e


Algas Aquticas Retidas em um Filtro Nucleopore

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Agentes Qumicos
bactericida = mata os microrganismos presentes num meio
bacteriosttico = apenas inibe as atividades metablicas dos
microrganismos presentes num meio

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos


3.2.1. Esterilizantes
a) xido de etileno
* ativo contra clulas vegetativas e endsporos
* alta penetrao, mas necessita longa exposio
* lquido abaixo de 10,8C, acima disso um gs
* inativao das protenas com H lbil (-SH, -NH)
H2C-CH2 + R-SH
O

R-S-CH2CH2O-H
(inativao)

b) Alquilantes (alquilao de protenas: cross-link)


transferncia de um grupo alquila - radical livre, etc.
* -propionolactona
* Glutaraldedo
* Formaldedo (formol)

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos


3.2.2. Desinfetantes
a) Fenis (cido carblico): primeiro agente
qumico usado para o controle microbiano - altera a
estrutura de protenas coagulao
Joseph Lister (1865): agente antissptico efetivo
em hospitais
a) 0.5 1.0% - antissptico
b) 5% desinfetante
c) 89% cauterizante

b) lcoois
* Etlico a 60-85%: mata clulas vegetativas
* Metanol: mais eficiente porm muito txico
* Desnaturam protenas
* Dissolvem os lipdeos da membrana

Joseph Lister

Fenol

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos


c) Halognios: iodo, cloro, bromo
* iodo e compostos relacionados: agente oxidante, combina-se
com a tirosina, inativando protenas
* cloro: formao de cido hipocloroso liberando radicais de
oxignio
d) Metais pesados: chumbo, zinco, prata, cobre, mercrio
* combinam-se com protenas, provocando sua inativao
ex.
SH
enzima

+ HgCl2
SH

enzima

S
Hg + 2HCl
S

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos


e) Detergentes
* desnaturao das membranas
- Aninicos:
[C9H19COO]-Na+
(sabo)
- Catinicos: Cloreto de amnio

- No inicos: octoxinol
(etileno)

3.2. Controle Antimicrobiano por Agentes Qumicos


f) Oznio (desinfeco da gua O3)
a) VANTAGEM: microbicida sem contaminantes
b) DESVANTAGEM: custo oneroso, sem atividade residual

AGENTES QUMICOS
CARACTERSTICAS DE UM AGENTE QUMICO IDEAL
Atividade

antimicrobiana

Poder

de penetrao

Estabilidade

de poderes
corrosivos e tintoriais
Poder desodorizante

Ausncia

Capacidade

Solubilidade

de Toxicidade

Homogeneidade
Inativao

mnima por material

estranho
Atividade

em temperatura
ambiente ou corporal

Ausncia

detergente

Disponibilidade
Baixo

custo

Agentes Antimicrobianos
Utilizados In vivo

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo


- A maioria dos agentes fsicos muito drstica e a maioria
dos agentes qumicos muito txica para uso interno em
humanos
- Mesmo antisspticos moderados podem ser aplicados
somente sobre a pele
- Diferentes tipos de frmacos antimicrobianos so produzidos
continuamente pela indstria farmacutica
- Os frmacos antimicrobianos so classificados de acordo
com sua estrutura molecular, seu mecanismo de ao e
seu espectro de atividade antimicrobiana
- Categorias de frmacos antimicrobianos: Agentes sintticos
Antibiticos

XVI - alquimia

Mercrio : sfilis
sais de potssio, antimnio e arsnico, tinturas

de
plantas, cido clordrico, amonaco, fenis
XIX -

quinina : malria
emetina : amebase e diarria

XX -

QUIMIOTERPICOS

Paul Ehrlich : conceito de quimioterapia


Alexander Fleming : penicilina
Florey & Chain : utilizao experimental da penicilina
Gehard Domagk : sulfas
Waksman : conceito de antibitico;
estreptomicina, neomicina

CLASSIFICAO
ORIGEM :

natural
sintticos (EX: cloranfenic
semi-sintticos (EX: penici

ATIVIDADE: bacteriosttica
bactericida

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo


3.3.1. Frmacos antimicrobianos sintticos
Salvarsan
primeiro agente quimioterpico: composto orgnico com
arsnio
uso do arsnico para tratamento da sfilis: at 1900 (muito
txico)
Paul Erlich - Prmio Nobel 1908

Paul Erlich
Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Salvarsan

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo


3.3.1. Frmacos antimicrobianos sintticos
Sulfonamidas
Jacques Trfoul (Sulfanilamida): anlogo estrutural do PABA
(c. p-aminobenzico) precursor da vitamina cido flico
precursora de aminocidos

(c) cido flico

-PABA: coenzima para formao de c. tetraflico (sntese de


timidina e aminocidos)
-Sulfas: bloqueiam a sntese do cido flico (efetivo somente
contra bactrias)

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo


3.3.2. Antibiticos
-

Definio: Agentes antimicrobianos produzidos por microrganismos


(bactrias e fungos) exibindo funo de inibir ou matar outros
microrganismos

Ganhadores do Premio Nobel em Fisiologia e Medicina de 1945


Descoberta da Penicilina e seus efeitos curativos em vrias
doenas infeciosas"

Sir Alexander Fleming

Ernst B. Chain

Sir Howard Florey

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo


3.3.2. Antibiticos
- Espectro de ao:

* Largo espectro (ex: Tetraciclina)


* Baixo espectro (ex: Vancomicina)

Produo e Utilizao Anual de Antibiticos no Mundo

*
*
*

* Antibiticos -lactmicos

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Principais Agentes Antimicrobianos de Procariotos


Antibiticos -lactmicos:
* Principais representantes: penicilinas e cefalosporinas
* 50% dos antibiticos produzidos mundialmente
* Produtores: Penicillium chrysogenum: penicilina
Acremonium spp.: cefalosporina
* Inibem a sntese de peptidoglicano (transpeptidao)
transpeptidao
* Provocam a liberao de autolisinas: digesto da
parede j existente
* Espectro: ativos contra bactrias Gram positivas
* Aparecimento de resistncia: produo de -lactamases

Principais Agentes Antimicrobianos de Procariotos


Antibiticos Aminoglicosdeos:
* Aminoacares unidos por ligaes glicosdicas
* Principal representante: Estreptomicina (produzida por
Streptomyces griseus)
* Ao: inibio da sntese de protenas (ligao com a subunidade 30S)
* Espectro: ativos contra G- e G+, usados clinicamente contra Gram negativos
* Rpido aparecimento de cepas resistentes
* Apenas 3% do total de antibiticos produzidos

Principais Agentes Antimicrobianos de Procariotos


Antibiticos Macroldeos:
* Grande anel lactona conectado com acares
* Principal representante: Eritromicina (produzida por
Streptomyces erythreus)
* Ao: inibio da sntese de protenas - combina-se com a
subunidade 50S ribossomal
* Ativos contra bactrias Gram + e Gram * Usado em substituio penicilina para
pacientes alrgicos

Eritromicina
Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

POLIMIXINA B
Ligam-se a constituintes normais da membrana

LIPDEOS e

FOSFOLIPDEOS
Funcionam como detergentes, rompendo membrana
Agem principalmente em Gram -negativas ( membrana rica em
fosfatidiletanolamina)
Atuam de maneira bactericida, mesmo na ausncia de
crescimento porque perturbam a estrutura da membrana ao
inserir-se pela sua poro lipoflica.
Baixa toxicidade seletiva (txico para clulas humanas)

AGENTES POLINICOS
Nistatina
Anfotericina B
Ligam-se aos esteris presentes na
membrana celular
Atuam sobre fungos
Baixa toxicidade seletiva
Uso tpico

DNA-girase

Quinolonas
Ciprofloxacina
c. Nalixdico
SULFONAMIDAS

PABA

c. dihidroflico
TRIMETOPRIM
c. flico

RNA-polimerase
Rifampina
Rifamicina
Rifampicina

PURINAS

DNA

TIMIDINA METIONINA

ANTIPARASITRIO

METRONIDAZOL
ANTIBACTERIANO

EFEITO CITOPTICO

Compostos intermedirios reativos

LESO
LESO NO
NO DNA
DNA
BACTERIANO
BACTERIANO
RUPTURA DA MEMBRANA
CELULAR
- Infeces

MORTE

causadas por bactrias anaerbias


(Clostridium spp., Fusobacterium spp., Peptococcus
e Bacteroides spp) e infeces ps-cirrgicas.
-Infeces causadas porTrichomonas(tricomonase),
Giardia (giardase), amebase e vaginites.

ANTIBITICOS ANTI-MICOBACTERIANO
CIDO PARAMINOSALICLICO (bacteriosttico)
- Modo de ao similar as sulfonamidas
- Especfico para Mycobacterium tuberculosis
DAPSONA (bacteriosttico)
- Modo de ao similar as sulfonamidas
- Usado no tratamento da hansenase (Mycobacterium leprae))
ISONIAZIDA
- Modo de ao: inibe a sntese de cidos miclicos (parede)
- Usado no tratamento da tuberculose

Mecanismos de Ao de Alguns dos Principais


Agentes Antimicrobianos de Procariotos
Sntese Protica
(inibidores de 50S)
Eritromicicina (macroldeo)

Sntese Protica
(inibidores de 30S)

* Principais alvos:
- Parede celular
- Membrana plasmtica
- Processos biossintticos:
sntese de protenas
sntese de c. nuclicos

Fonte: Madigan et al., 2010

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo


3.3.3. Frmacos Antifngicos
Apresentam problemas para o desenvolvimento de quimioterpicos
Muitos frmacos antifngicos podem ser utilizados apenas em aplicaes tpicas
Alguns apresentam toxicidade seletiva: afetam estruturas ou processos metablicos
especficos dos fungos
Principais representantes: Polienos (Streptomyces nodosus; S. nursei)
Azis (frmacos sintticos)
Alilaminas

Mecanismos de Ao de Agentes
Quimioterpicos Antifngicos

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo


3.3.3. Frmacos Antivirais
Controle de vrus
* a condio de parasita intracelular obrigatrio
- ntima ligao com as funes da clula hospedeira
- dificuldade de controle pela rpida variao gentica

a) Anlogos de Nucleosdeos
* AZT (Zidovudine): anlogo estrutural da timidina - bloqueia a
sntese de DNA intermedirio dos retrovrus (bloqueia a transcriptase
reversa)
* Aciclovir: inibe o alongamento do cido nucleico viral

b) Neviparina: liga-se transcriptase reversa, inibindo sua ao


c) Rifamicina: inibe a RNA polimerase

3.3. Agentes Antimicrobianos Utilizados In vivo


3.3.3. Frmacos Antivirais
Interferon (citocina):
substncias antivirais produzidas por clulas animais
que impedem a multiplicao viral
* especficos para cada tipo de clula e no de vrus
* eficientes para vrus de baixa virulncia
* sua produo induzida pela presena do vrus, pelo
cido nucleico viral ou pelo vrus inativado por radiao

Drogas Antivirais Criadas por Computador

Drogas antivirais geradas por computador.


Inibidores de proteases virais

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Aparecimento de Resistncia a Drogas


Antimicrobianas em Alguns Patgenos Humanos

*
*

* Apresentam linhagens que no podem ser controladas com os frmacos atualmente conhecidos
Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Aparecimento de Resistncia a Drogas


Antimicrobianas
Neisseria gonorrhoaea

Surgimento de bactrias resistentes s drogas antimicrobianas.


(a) relao entre o uso do antibitico e a porcentagem de bactrias resistentes
(b) porcentagem de casos relatados de gonorria causada por linhagens
resistente s drogas
Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Avaliao da Sensibilidade a Antibiticos por


Mtodos de Diluio

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Teste de Difuso em Discos - Antibiograma

Padres definidos pelo


Instituto de Padres
Clnicos e Laboratoriais
(CLSI)

Fonte: Madigan et al., 2010