INTRODUCCIN

Cncer que se forma en los

tejidos de la mama, por lo
general en los conductos y los
lobulillos. Se puede presentar
tanto en los hombres como en
las mujeres, aunque el cncer
de mama masculino es raro.

EPIDEMIOLOGA

OMS, Carga Mundial de Morbilidad, 2004).

El cncer de
mama es la
neoplasia
maligna ms
comn y ocupa
el segundo
lugar como
causa de
muerte por
cncer entre las
mujeres.
Cancer Statistics, 2008.Dr. Ahmedin
Jemal DVM, et al. Article first published

EPIDEMIOLOGA

Nmero estimado de casos nuevos y muertespor

cncer de mama en los Estados Unidos en 2014:
Casos nuevos: 232 670 (mujeres); 2 360 (hombres)
Muertes: 40 000 (mujeres); 430 (hombres)
National Institute Cancer.
http://seer.cancer.gov/statfacts/html/breast.ht

FACTORES DE RIESGO

DIETA
El consumo de alcohol es el factor diettico ms establecido
asociado con un mayor riesgo de cncer de mama, a pesar
de que hay un inters considerable en otros componentes de
la dieta.
RADIACIN IONIZANTE
Exposicin a la radiacin en dosis bajas a la mama es
cancergeno, y el riesgo aumenta como una funcin lineal de
aumento de la dosis. El riesgo es particularmente alto
durante el desarrollo de las mamas (pubertad) y es mnimo
para las mujeres expuestas despus de la menopausia.
Niederhuber Abeloff's Clinical Oncology, 5th ed.
Cancer of the Breast. Chapter 91. Antonio C. Wolff, Susan M. Domchek, Nancy E. Davidson, Virgilio

FACTORES DE RIESGO

HORMONAS EXGENAS
Los
usuarios
de
hormonas
exgenas
tienen
un
riesgo
ligeramente mayor de desarrollar
cncer de mama. Sin embargo, la
mortalidad asociada a este riesgo
parece estar compensado por una
disminucin en el riesgo de
cncer de colon y el cncer de
ovario, de tal manera que no hay
un aumento en la mortalidad
general por cncer asociado con
su uso.
Niederhuber Abeloff's Clinical Oncology, 5th ed.
Cancer of the Breast. Chapter 91. Antonio C. Wolff, Susan M.
Domchek, Nancy E. Davidson, Virgilio Sacchini, and Beryl

FACTORES DE RIESGO

FACTORES REPRODUCTIVOS Y HORMONAS

ENDGENAS
El riesgo de cncer de mama consistentemente se ha
correlacionado con una edad ms temprana de la menarquia,
edad tarda de la menopausia, la nuliparidad y la edad tarda
de primer parto, todo lo cual determina el nmero acumulado
de los ciclos ovricos. Este hallazgo es consistente con la
correlacin entre los niveles de estrgeno y el riesgo de
cncer de mama.

OBESIDAD Y EL HBITO CORPORAL

Existe una clara asociacin entre la obesidad y el riesgo de

cncer de mama.
Los estrgeno endgenos posiblemente elevan los niveles de
insulina.
Niederhuber Abeloff's Clinical Oncology, 5th ed.
Cancer of the Breast. Chapter 91. Antonio C. Wolff, Susan M. Domchek, Nancy E. Davidson, Virgilio Sacchini, and

BIOLOGA
La expresin de genes podra identificar cinco subgrupos de
cncer de mama hasta la fecha, pero en un contexto clnico los
diferentes subgrupos a menudo se distinguen segn la
presencia/ausencia de receptores esteroides sexuales y HER-2.
La expresin de los receptores de estrgeno y progesterona
nucleares desempea un papel importante en la diferenciacin y
el crecimiento de epitelio de mama normal y la respuesta de las
clulas de cncer de mama a la teraputica hormonales .
ERB B2 (receptor de 2 del factor de crecimiento epidrmico
humano [HER2] ) es una molcula de crecimiento de sealizacin
en la superficie de clulas de mama normales que se
sobreexpresa en aproximadamente el 20 % de los tumores de
cncer de mama, lo que contribuye a la autonoma de
crecimiento y la inestabilidad genmica .

BIOLOGA
Cncer De Mama Triple Negativo (TNBC)
Se refiere a un grupo de tumores, que
no
expresan
receptores
para
estrgenos o progesterona y que no
sobreexpresan el receptor HER-2 y es
por lo tanto difcil de tratar.
TNBCs muestran rasgos clnicos caractersticos y representan
el 10-17% de todos los carcinomas de mama.
Afecta con ms frecuencia los pacientes ms jvenes
Clnicamente ms agresivos
Sensibles a la quimioterapia sistmica
Pronstico de los pacientes es pobre

BIOLOGA
Aproximadamente el 5% de los
cnceres
de
mama
son
hereditarios, de los cuales la
mayor proporcin se debe a la
mutacin de BRCA1.
Riesgo de por vida de 80% de
desarrollar cncer de mama.
Se producen a muy temprana
edad, son clnicamente agresivos
y con un pronstico pobre .
BRCA1 y BRCA2 son genes supresores de tumores que
juegan un papel crtico en la respuesta celular al dao del
ADN; mutaciones heredadas en estos genes estn asociados
con un mayor riesgo de cncer de mama.

INTRODUCCIN
Mecanismos llamados de ''escape inmune'' pueden ser seales
inmunes inhibidoras derivados del tumor como citocinas o factores
unidos a la membrana.
Los tumores pueden secuestrar subconjuntos de clulas inmunes
tolerognicas como los macrfagos tumorales o clulas T reguladoras
que inhiben a las clulas T efectoras especficas de tumor. En estos
casos, el equilibrio intratumoral de clulas T reguladoras y efectoras
puede impedir una posible respuesta inmune eficaz anti-tumoral.
La asociacin de una buena quimiosensibilidad y un pobre pronstico
causado por metstasis podra sugerir que en TNBC, la modulacin
del sistema inmune estn involucradas las clulas tumorales. Por lo
tanto, la infiltracin con clulas inmunes se asocia con
quimiosensibilidad en los cncer de mama, pero por otro lado, un
estudio reciente ha demostrado que las clulas T reguladoras

Investigar la inmunogenicidad de las

clulas TNBC en in vitro, as como la
expresin de AKT, B7H1 y la
infiltracin con clulas T reguladoras
como medios de escape inmune en
muestras de tumores humanos de
TNBCs con y sin mutacin en BRCA1.

MATERIALES Y MTODOS

LNEAS
CELULARES

Cncer
de
mama
ER+
TNBC

MCF 7

MDA-MB-468
MDA-MB-231
HCC-1806
HCC-1937

MUESTRAS DE
TEJIDO

Cncer de
mama
ER
positivos
( n = 13)

Invasivo triple
negativo
Con
mutacin
en BCRA1
( N = 10 )

Sin
mutacin
de BCRA1
(n = 10 )

Control
BRCA 1
negativos
: biopsia
de tejido
benigno
glandular
(N = 6 )

BRCA 1
positivos:
mastecto
-mas
profilctic
as (N = 3
)

Del Departamento de Patologa de la Universidad de Wrzburg.

La clasificacin de las neoplasias malignas de los carcinomas
ductales se evalu segn los criterios Scarff , Bloom y
Richardson.
La estatificacin del tumor se realiz de acuerdo al sistema TNM.

MATERIALES Y MTODOS

INMUNOHISTOQUMICA

NMUNOHISTOQUMICA
Se corto el tejido en secciones de 2 m a partir de
tejido embebido en parafina.
Tratados con una solucin de Ig humana en PBS.
Se incubaron con el Ac vs Fox-P3 (1:100 ), con el Ac
vs pAkt (1:200), con el Ac vs B7H1 (1:1.500)
Seguido por una incubacin con ZytoChem Polmero
Plus HRP (anti-mouse/anti-rabbit) durante 30 min.
Cromgeno: 3,3-diaminobencidina (DAB)
Contratincin: hematoxilina

EVALUACIN
INMUNOHISTOQUMICA
La presencia de clulas FoxP3 positivos , as como la expresin de
AKT y B7H1 fueron evaluados en diez campos visuales aleatorios
para cada muestra por dos investigadores independientes .
Para evaluar el grado de infiltracin de clulas Treg FoxP3+ , se
aplic un sistema de clasificacin semicuantitativa.
Para la localizacin de FoxP3 se distingui su expresin nuclear o
citoplasmtica.

Grado
0:
Ausencia
de
clulas
Treg
FoxP3+

Grado
11:
a3

clulas
Treg
FoxP3+
en < 3
campos

Grado 0 y 1 fueron
considerados como baja
infiltracin

Test no paramtrico de MannWhitney.

Grado
12:
a3
clulas
Treg
FoxP3+
en > 3
campos

Grado
3:3
>
clulas
Treg
FoxP3+
en 3
campos

Grado 2 y 3 se consideraron
tan fuerte infiltracin

GENERACIN DE CLULAS NK
1.PBMC se obtuvo a partir de sangre perifrica de voluntarios sanos por
centrifugacin en gradiente de densidad.
2.Los monocitos se depletaron por adhesin.
3.PBL se cultivaron en clulas RPMI 8866 irradiadas (30 Gy) para
obtener poblaciones de clulas NK policlonales.
4.Clulas NK fueron cosechadas por centrifugacin (1200 rpm, 10 min) y
se utilizan para lisar los ensayos en el da ocho.

ENSAYOS DE LISIS DE CLULAS

NK
Las clulas NK fueron marcadas con eFluor 670

La actividad ltica contra las clulas blanco se marcaron con CFSE

(100.000 clulas diana (T)/pocillo)
Se evalu en un ensayo de FATAL modificado utilizando diversas
proporciones E: T
Las NK y las clulas tumorales se co-cultivaron durante 4 h y que se
desprendieron las clulas.
La lisis de clulas diana se determin por anlisis de citometra de flujo
de 50.000 clulas diana en un citmetro de flujo FACScan.
Las clulas blanco e-Fluor 670 negativas se seleccionaron por gating y se

RESULTADOS
INFILTRACIN CON CLULAS
Treg

Muestras de tumores
(N=33)

23 (69.9%) se encontr
expresin de FoxP3 en las
clulas tumorales.

La tincin fue localizada

principalmente en el
citoplasma de las clulas
de cncer de mama (70%).

Controles (N=9)

Mastectoma profilctica (N
= 3) Fibroadenoma (N = 6)

No se detect infiltracin
Treg.

INFILTRACIN CON CLULAS Treg

Utilizando el sistema de clasificacin semicuantitativo establecido por

Black:

Cncer de
mama ER/PR+
(N = 13)

0.92 0.21

FoxP3 fue
localizado
principalmente en
el citoplasma
(80%)

TNBC
2.10 0.34 en
cncer con
mutaciones BRCA
1
(N = 10; p
0.0166)
FoxP3 tambin se
FoxP3 fue
detect
localizado
principalmente en
principalmente en
el citoplasma de
el citoplasma
las clulas de
(80%).
(70%).

2.30 0.34 en
cncer sin
mutacin BRCA1
(N = 10; p
0.0057)

INFILTRACIN CON CLULAS Treg

EXPRESIN DE AKT Y
B7H1

AKT

No se detect
expresin en las
muestras de
fibroadenoma.
ER/PR+
1.23 0.36 (N = 13)

TNBC

1.78 0.40
Sin mutado BRCA1
2.40 0.30
Con mutacin BRCA
1.

B7H1

0.33 0.33 (n = 6) en
los fibroadenomas
ER/PR+
2.43 0.43 (N = 7)

2.77 0.22
Sin mutado BRCA 1

TNBC
1.90 0.38
Con mutacin BRCA 1.

Se evalu por
inmunohistoqumica
utilizando
anticuerpos
especficos y el
sistema de
clasificacin
semicuantitativa
establecida por
Black.

INDUCCIN DE MUERTE DE CLULAS

HUMANAS DE CNCER DE MAMA
INDUCIDA POR NK

Se realizaron 3 experimentos independientes con clulas NK

para inducir la muerte de las clulas
MCF-7 (ER+)
HCC-1937 (BRCA 1 mutado)
HCC-1806 (BRCA1 sin mutacin)
Se compar en diferentes proporciones de clulas
efectoras/diana.
La muerte celular fue mas elevada en clulas HCC-1937 y
HCC-1806 a diferentes ratios, lo que indica que las clulas
TNBC son ms vulnerables a la lisis inducida por las clulas NK
que las clulas MCF-7.

INDUCCIN DE MUERTE DE CLULAS

HUMANAS DE CNCER DE MAMA
INDUCIDA POR NK

DISCUSIN
En algunos estudios recientes que investigan muestras
humanas de cncer de mama, se encontraron muestras de
TNBC con clulas Treg infiltrantes en un grado
significativamente mayor que otros subtipos de cncer de
mama. Por lo tanto, las clulas Treg pueden jugar un papel
en la induccin de la tolerancia inmune a estos carcinomas
de mama de alto grado y agresivos, adems que son una
diana teraputica potencial para estos tipos de cncer.
Mahmoud SM y colaboradores encontraron en el
2011 que la infiltracin de clulas Treg se asoci
con TNBC.
La asociacin de altas cuentas de clulas CD8+ y
bajas de clulas Treg posterior a la quimioterapia
se asoci con una mejor supervivencia libre de
recadas y la supervivencia global.

DISCUSIN
En consecuencia, en este estudio se demostr mayor infiltracin
de clulas Treg en las muestras TNBC en comparacin ER/PR+.
Se pudo demostrar por primera vez que la infiltracin Treg
tambin fue significativamente mayor en tejido de pacientes con
TNBC con mutaciones en BRCA1.

En modelos animales con enfermedad de injerto contra

husped se demostr que la expansin de clulas Treg se
produce debido a la expresin del homlogo 1 de la
protena inmunosupresora B7 (B7H1) por las APC del
husped.
Expresin de la protena inmunosupresora B7H1 se
incrementa en muchas condiciones patolgicas, incluyendo
el cncer.
La sobreexpresin ser B7H1 es a su vez mediada por la
activacin de la va de AKT debido a la prdida de PTEN.

DISCUSIN
Como era previamente desconocido hasta qu punto las
clulas TNBC estimulan la respuesta inmune antitumoral del
hospedero, se evalu la susceptibilidad de las clulas NK a
inducir la lisis de las clulas tumorales MCF7 de cncer de
mama ER/PR + y en cuatro lneas celulares humanas TNBC.
Los resultados recientes muestran que esta forma de cncer
es una entidad heterognea.

Lehma
nn et
al.
disting
ue
seis
subtip
os

Dos basal-like (BL 1 y 2)

Inmunomodulador (IM)
Mesenquimales (M)
Mesenquimales stem-like (MSL)
Receptor de andrgenos luminal
(LAR)

DISCUSIN
LINEA
CELULAR

SUPTIPO

MUTACION
ES

MDA-MB468

BL1

PTEN; RB1;
SMAD4; TP53.

HCC-1937

BL1 / BL2

BRCA 1; TP53;
MAPK13; MDC1.

HCC 1806

MDA-MB231

BL2

MSL

Gen CDKN2A;
TP53; Genes UTX.
BRAF; CDKN2A;
KRAS; NF2; TP53;
PDGFRA

Sorprendentemente, la lisis inducida por las clulas NK fue

significativamente ms pronunciada en todas las cuatro lneas
de TNBC en comparacin con clulas MCF7 ER+, lo que indica
que las clulas TNBC de la BL 1, BL 2 y MSL subtipo pueden ser
ms inmunognicos que las clulas ER/PR+.

CONCLUSIONES
Se demostr por primera vez que las clulas TNBC
subtipo BL1, BL2 y MSL, son ms vulnerables a la
actividad ltica de las clulas NK humanas que las
clulas de cncer de mama ER+.
En el microambiente de TNBC con BRCA
sin
mutacin se confirm la presencia de mayores
cantidades de clulas Treg y demostr por primera
vez, que en esta forma de cncer con mutacin en
BRCA1, la infiltracin de clulas Treg tambin se
incrementa significativamente.
Los resultados in vitro muestran claramente que las
clulas TNBC per se son vulnerables a la lisis
inducida por las clulas inmunes. Por lo tanto, la
reconstitucin de la respuesta inmune del husped
contra el tumor mediante la terapia dirigida de

GRACIAS!!