UNIVERSIDAD SAN

PEDRO
II CONGRESO NACIONAL DE
INVESTIGACION FITOQUIMICA Y
COSMETICA NATURAL.

METODOS DE
EXTRACCION
Ponente: Dr. Q.F. Segundo Guillermo Ruiz Reyes
Universidad Nacional de Trujillo

guille_ruiz2012@hotmail.com

DEFINICIN
:

LA EXRACCION ES UNA OPERACIN QUE

FORMA PARTE DEL GRUPO DE OPERACIONES
UNITARIAS CONOCIDAD COMO OPERACIONES
DIFUCIONALES O DE TRANSFERENCIA DE
MATERIA.
ES LA TECNICA EMPLEADA PARA SEPARAR
UN PRODUCTO ORGANICO DE UNA MEZCLA O
PARA
AISLARLO
DE
SUS
FUENTES
NATURALES.

CLASIFICACIN DE LOS MTODOS

DE EXTRACCIN
1. Extraccin mecnica.
2. Extraccin por destilacin.
3. Extraccin mediante disolventes.

1.1 EXTRACCIN MECNICA

Consiste en extraer de los tejidos vegetales o
animales, los principios activos disueltos en
los lquidos que impregnan.

Extraccin por incisin

Extraccin por calor
Extraccin por expresin

A. INCISION: CORTE
LATEX DEL OPIO (Papaver
somniferum)

SANGRE DE GRADO(Crotton
lecheria)

MORFINA

ZUMO DE GRANADA (Punica

granatum)

2. EXTRACCIN POR DESTILACIN

ES UNA OPERACIN QUE, MEDIANTE EL CAMBIO DE
ESTADO LQUIDO A VAPOR, PERMITE SEPARAR UN LIQUIDO
DE UN SOLIDO O LQUIDOS MISCIBLES ENTRE S, SOBRE LA
BASE DE SU DIFERENTE VOLATILIDAD.

EXTRACCION DE ACEITE ESENCIAL DE Cinnamomum

verum CANELA

Aldehdo cinmico

Eugenol

3. EXTRACCIN MEDIANTE
DISOLVENTES

3.1 EXTRACCIN LQUIDO-LQUIDO:

CONSISTE
EN
LA
SEPARACIN
DE
LOS
COMPONENTES DE COMPONEN UNA SOLUCIN
POR CONTACTO CON OTRO LQUIDO O DISOLVENTE
NO MISCIBLE CON L.

A.EQUIPOS DE EXTRACCIN
LQUIDO-LQUIDO

3.2 EXTRACCIN SLIDO-LQUIDO.

Se refiere a la separacin de las porciones
medicinalmente activas, a partir de los tejidos de
las plantas y animales de los componentes
inertes de los mismos, mediante el uso de
disolventes
selectivos
denominados
farmacuticamente
menstruos
utilizando
procedimientos
establecidos y correctamente
estandarizados.

A. FUNDAMENTO DEL PROCESO DE EXTRACCIN SLIDO-LQUIDO.

PRIMERA FASE . LEY DE FICK

Sc = Dint . Fs
donde:

C- c .t
l

Sc: Cantidad de sustancia a difundir expresado en kilogramos.

Dint: Coeficiente de difusin interior que CORRESPONDE a la cantidad de
sustancia a difundir en un segundo a travs de una superficie de 1m2.
Fs: Superficie de contacto entre las fases del proceso expresada
en m2.
C-c: Diferencia de las concentraciones de sustancia entre las fases expresada en
kg/m3.
l:
Espesor de la capa a travs de la cual ocurre la difusin expresada en
metros.
t:
Tiempo durante el cual ocurre el proceso de difusin expresado en
segundos.

B. FACTORES QUE INFLUYEN SOBRE

EL PROCESO DE EXTRACCIN.
1. GRADO DE DIVISIN DE LA DROGA.
. MOLIENDA.
Hojas, flores y plantas herbceas, no ms dividido que 5mm.
-.

Cortezas, tallos y races, no ms de 3mm

- Frutos y semillas, no ms de 0,5mm.

2. VISCOSIDAD DEL MEDIO:

Para un buen proceso de

difusin de Fitoconstituyentes no se deben seleccionar solventes de
viscosidad elevada.
Se debe ajustar el tiempo de extraccin procurando que la sustancias
extradas no aumenten la viscosidad del medio.

3. BALANCE DE CONCENTRACIONES:

diferencia de
concentraciones de fitoconstituyetes en la droga y en el menstruo.

4. TEMPERATURA:

generalmente es proporcional a grado de

extraccin, excepto en aceites esenciales y FC TERMOLABILES
(alcaloides).

6. GRADO DE ABSORCIN DE AGUA O DE

MENSTRUO: Necesidad de reponer el agua inicial que
contena la droga para favorecer el proceso de difusin.
Se favorece en un 15-20% el rendimiento.
Para races 1,5 veces el peso.
Para hierbas, cortezas y flores 2,0 veces el peso.
Para semillas 3,0 veces el peso.
A estos valores se les denomina coeficiente de absorcin de agua y pueden
calculados mediante la siguiente expresin:

Cantidad de
Volumen final
agua complementaria = de Extracto

Coeficiente de absorcin
Proporcin de
+ de agua de la droga
la droga

EL TIEMPO DE HUMECTACION FLUCTUA: 15 min- 4 horas.

7. pH DEL MEDIO:
Depende del PA que se desee extraer y sus formas inicas o
no inicas solubles en agua o solventes orgnicos
( ejemplo: ALCALOIDES)
Se utilizan sustancias para variar el pH como: HCl, Amoniaco.

9. NATURALEZA QUMICA DE LA SUSTANCIA A

EXTRAER:
Esto determina la seleccin del solvente a utilizar y del
proceso de extraccin.
Solventes de Alta polaridad
Solventes de Mediana Polaridad
Solventes de Baja Polaridad

Extractos de Hoja de Myrcianthes oreophila con solventes

de diferente polaridad.

C. TCNICAS DE EXTRACCIN SLIDO-LQUIDO.

EN UNA ETAPA: MACERACION
A TEMPERATURA
AMBIENTE

DOBLE MACERACION

EN VARIAS ETAPAS
(FRACCIONADA)

EXTRACCION DISCONTINUA
(ESTATICA)

MACERACION EN BATERIA

A 50-60O C: DIGESTION
A TEMPERATURA
SUPERIOR A LA
AMBIENTE

INSTANTANEA: INFUSION
O

A 100 C O MUY PROXIMA

PROLONGADA: DECOCCION

A PRESION NORMAL: PERCOLACION

A TEMPERATURA
AMBIENTE
EXTACCION CONTINUA

CON AYUDA DE PRESION: DIACOLACION

CON AYUDA DE VACIO: EVACOLACION

(DINAMICA)
A TEMPERATURA CERCANA
A LA DE EBULLICION
DEL DISOLVENTE

EXTRACCION POR SOXHLET

EXTRACCIN
DISCONTINUA
TEMPERATURA AMBIENTE.
MACERACIN.
Tcnica de extraccin que consiste en exponer la droga a una cantidad de
menstruo preestablecida, a temperatura ambiente, en recipiente cerrado durante
un tiempo entre 2-14 das si no se conoce el tiempo necesario para una droga
en particular, se sugiere 7 das como promedio para el proceso.

MACERACION CON ULTRASONIDO

MACERACION CON AGITACION

Extraccin Discontinua a
Temperatura Ambiente.
INFUSIN Y DECOCCIN.
Ambos mtodos de extraccin utilizan el agua como menstruo.

DECOCCCION

TEMPERATURA

INFUSION

TEMPERATURA

EXTRACCIN CONTNUA A TEMPERATURA

AMBIENTE

A PRESIN NORMAL
LIXIVIACIN O PERCOLACIN.

El mtodo de extraccin utiliza

un
equipo denominado lixiviador o percolador
que retiene la droga, a travs de la cual se
hace fluir el menstruo en forma descendente
posterior a un periodo de maceracion.

ETAPAS DEL PROCESO DE

LIXIVIACIN
HUMECTACIN
CARGA DEL PERCOLADOR
MACERACION
DESARROLLO DE LA LIXIVIACIN
Lenta a razn de 1ml /min.
Moderada a razn de 1-3ml /min.
Rpida a razn de 3-5ml /min.

EXTRACCIN CONTNUA A TEMPERATURA

SUPERIOR A LA AMBIENTE
EXTRACCIN POR SOXHLET.

VENTAJAS

El disolvente entra en contacto con el material en elevado

grado de pureza. al evacuarse el extractor y repetirse nuevamente
el ciclo de extraccin, se garantiza que siempre entre en contacto
con el material el disolvente puro y no la disolucin, lo cual
garantiza un mayor grado de extraccin.

La temperatura en la cual entran en contacto la muestra y el

disolvente es bastante cercana a la temperatura de ebullicin, lo
que aumenta la cantidad de compuesto extrado con respecto a
una lixiviacin a temperatura ambiente.

Se trata de un proceso continuo que no requiere de tiempos

excesivamente prolongados.

TIPOS DE EXTRACTOS
Oficialmente se reconocen slo tres tipos
de extractos en cuanto a su forma fsica de
presentacin:
I- Lquidos o semilquidos de consistencia
siruposa. (TINTURAS Y EXTRACTOS FLUIDOS)
II- Masa plstica denominada extracto slido o
pilular. (EXTRACTO BLANDO)
III- Extracto pulverizado o polvo seco. (EXTRACTO
SECO)

I. LQUIDOS O SEMILQUIDOS DE
CONSISTENCIA SIRUPOSA.
A. TINTURAS.
Se definen como soluciones alcohlicas o hidroalcohlicas de
los principios activos contenidos en vegetales.
Para drogas que contienen principios activos muy potentes
se preparan tinturas al 10% que representan el extracto de
10g de la droga en 100ml del disolvente.
Para el resto de las drogas que contienen otros principios
activos se preparan tinturas al 20% que representan el
extracto de 20g de droga en 100ml de disolvente.
Pueden prepararse por el
maceracin.

mtodo

de

percolacin o por

B. EXTRACTOS FLUIDOS.
Se definen como preparaciones
lquidas de los principios
activos
contenidos
en
vegetales, utilizando el etanol o
como
disolvente,
como
conservante de forma tal que:
1 mililitro de extracto contenga
los principios activos que
aporte 1g de droga.

I. LQUIDOS O SEMILQUIDOS DE
CONSISTENCIA SIRUPOSA.
A. EXTRACTO BLANDO.
Se define como el

extracto

de la droga, concentrado con

fluido correspondiente 4-6kg

vaco

a una temperatura

inferior a 60C hasta el peso de 1kg de extracto.

B. EXTRACTO SECO.
Se define como el extracto fluido concentrado con vaco a
una temperatura inferior a 60C, hasta la obtencin de polvo
seco.

TECNICAS DE EXTRACCION
DE COMPUESTOS FENOLICOS
F L AV O N O I D E S

FLAVONOIDES
TECNICAS RECOMENDADAS DE EXTRACCION:
MUESTRA: Debe ser secada previamente y tener tamao
de partcula uniforme.
La muestra puede desengrasarse previamente con n-Hexano o ter de
petrleo.

SOLVENTES:
Polares: Agua o Alcoholes ( metanol, etanol, n-butanol) para
Glicosidos y Agliconas muy Hidroxiladas.
De baja Polaridad: ter o Cloroformo para flavonas
altamente metoxiladas.
Se recomienda usas una sucesin de dos o mas solventes en
orden de: LIPOFILICO => HIDROFILICO.
ter de
petrleo

ter
Etlico

Acetato
de Etilo

Alcohole
s

Agua

FLAVONOIDES
Proceso de Extraccin.
Mtodos.
Maceracin de la muestra en etanol
de 96GL o 70GL.
Reflujo y agitacin magntica.
Percolacin o Lixiviacin.
Soxhlet.

FLAVONOIDES
REACCIONES DE COLORACION.
SHINODA:
Los flavonoides con el ncleo benzopirona (p. ej. flavonas,
flavonoles, flavanonas)producen coloraciones rojizas
cuando a sus disoluciones acuosas o alcohlicas se les
adiciona magnesio seguido de HCl concentrado.
Isoflavonas producen coloracin Amarillo.
NOTA: isoflavononas,
coloracin.

chalconas

auronas

no

dan

FLAVONOIDES
TECNICAS CROMATOGRAFICAS.
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.
SISTEMAS DE SOLVENTES:
BAW (n-Butanol-Acido Actico-Agua) en proporciones:
4:1:5 v/v/v (1)
4:1:1 v/v/v (2)
TBA (t-Butanol-Acido Actico-Agua) en proporcin:
30:10:3 v/v/v
CAW (Cloroformo-Acido Actico-Agua) en proporcin:
30:15:2 v/v/v
FORESTAL: (Actico-Agua-Ac. Clorhdrico) en proporcin: 30:10:3 v/v/v
A4 (Acetato de etilo-Acido frmico-Acido Actico-Agua) en proporcin:
100:11:11:27 (26). v/v/v
A3 (Acetato de etilo-Acido frmico-Agua) en proporcin: 8:1:1 v/v/v

SOPORTES: Slica gel, celulosa y poliamida.

REVELADORES: Luz UV, vapores de amoniaco, Tricloruro Frrico, vainillina clorhdrica.
REVELADOR DE PRODUCTOS NATURALES.

FLAVONOIDES

Muestra: Cascara de Solanum melongena FE:

Slica gel FM: BAW

Amarillo

Amarillo

Azul
fluorescente

Guisao S. Reconocimiento de metabolitos secundarios presentes

en flores de sauco, Sambucus nigra l., caprifoliaceae, e
identificacin de la muestra problema n1 por cromatografa en
capa fina. Universidad de Antioquia. Colombia.

Quercetina
patrn.

30G
L

50G
L

70G
L

96G
L

METAN
OL

Cromatografa en capa fina de extractos etanlicos a

diferentes concentraciones de flores de Cordia lutea.
Sistema A4. Soporte Slica Gel 60 F254.

Vladimir Sanda. Plant Polyphenols as Antioxidants Influencing the Human Health. [online].
University of Zagreb, Faculty of Pharmacy and Biochemistry, Croatia. [Citado el 21 de junio del
2014]. Disponible en: http://cdn.intechopen.com/pdfs-wm/32901.pdf pp:159-161

FLAVONOIDES
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA:
La CC permanece como una tcnica muy usual para purificaciones
preliminares y para separaciones a escala PREPARATIVA de grandes
cantidades de flavonoides de extractos crudos de plantas.

MEK: metiletilcetona, Me2CO: acetona, CHCl3: cloroformo, EtOAc: acetato de etilo.

Cromatografa en Columna
(CC) de sabia de Musa
acuminata.
FE: Slica Gel granulada.
FM: Metanol-Agua en
diferentes proporciones.

FLAVONOIDES
CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO
(HPLC):
En el campo de los flavonoides el HPLC ha sido bastante
utilizado por ser una tcnica precisa y sensible la cual
produce resultados en minutos comparado a los
procedimientos clsicos que requieren dios o semanas y
adems grandes cantidades de material.
Se utilizan comnmente columnas de fase reversa (RP).
Debido a que la fas estacionaria es menos polar que la
fase mvil, de esta manera los solutos mas polares poseen
tiempos de retencin mas cortos que los solutos menos
polares. Des esta manera los glucsidos eluirn primero
seguido de las agliconas en orden de polaridad decreciente.

FLAVONOIDES
HPLC.

Stefova M, Stafilov T and Kulevanova S. HPLC analysis of

Flavonoides. Cyril and Methodius University. Republic of
Macedonia.

FLAVONOIDES
TECNICAS ESPECTROMETRICAS.
El mtodo mas usual para un anlisis preliminar de la
estructura de un flavonoide es quizs la absorcin UV-Vis;
esta tcnica es usada tanto para identificar el tipo de
flavonoide como el modelo de oxigenacin.
Los espectros de los flavonoides se obtienen usualmente
en solucin metanlica.
El espectro tpicamente se compone de dos mximos de
absorcin:
240-285 nm (BANDA I)
300-550 nm (BANDA II)

FLAVONOIDES
RANGO DE LOS VALORES DE ABSORCION PARA LAS BANDAS I Y II
DE LOS DIFERENTES TIPOS DE FLAVONOIDES.

FLAVONOIDES

Espectros UV-Vis de diferentes tipos

de flavonoides con modelos de
hidroxilacin equivalentes.

FLAVONOIDES
OBTENCION DE AGLICONAS
Hidrolisis de Glicsidos: Extracto etanlico + Acido
sulfrico al 10%. (Reflujo) => 2h.
Filtracin al vaco.

Agliconas de Flavonoides totales de las hojas de Sambucus

peruviana H.B.K

FLAVONOIDES
CUANTIFICACION ESPECTROFOTOMETRICA:
Elaboracin de curva de calibracin con patrn.
Preparacin de una solucin madre de concentracin 0.8
mg/ml en etanol de 96GL.
Preparacin de diluciones a partir de la solucin madre:
Medir volmenes de 0.2; 0.4; 0.6; 0.8; 1.0; 1.2 y 1.4 ml de la
solucin patrn y aforar a 100 ml con etanol de 96GL.
DILUCION

[Concentracin]

0.2 ml

0.0016 mg/ml

0.4 ml

0.0032 mg/ml

0.6 ml

0.0048 mg/ml

0.8 ml

0.0064 mg/ml

1 ml

0.008 mg/ml

1.2 ml

0.0096 mg/ml

1.4 ml

0.0112 mg/ml

FLAVONOIDES
Lectura a 256 nm.
0.9000
0.8000
0.7000

f(x) = 71.52x + 0.03

R = 1

0.6000
0.5000

Absorbancia

0.4000

Curva de Calibracin
Linear (Curva de Calibracin)

0.3000
0.2000
0.1000
0.0000
0

0.01 0.01 0.01 0.01

Concentracin (mg/mL)

FLAVONOIDES
PREPARACION DE LA
SOLUCION PROBLEMA.
Peso de agliconas (cristales)
equivalente a 0.5 g de Droga.
Disolucin en etanol de 96GL y
aforo a 100 ml.
La absorbancia de la solucin
problema debe encontrarse entre
0.5-0.8. Si la absorbancia fuera
superior a 1 se recomienda diluir
la muestra.

CONCENTRACION DE FLAVONOIDES DE
LUPULO
#
1
2
3
4
5
6

Name
Flavonoides
Lpulo
Flavonoides
Lpulo
Flavonoides
Lpulo
Flavonoides
Lpulo
Flavonoides
Lpulo
Flavonoides
Lpulo

Dilut. Factor

Quercetina(ug/m
L)

Abs<256nm>

9.9203

0.71144

9.8573

0.70692

9.8805

0.70859

9.8154

0.70392

9.8031

0.70303

9.8218

0.70438

RMN

13

FLAVONOIDES: ANTOCIANINAS
TECNICAS RECOMENDADAS DE EXTRACCION:
MUESTRA: Debe ser secada previamente y tener tamao
de partcula uniforme.
Tener especial consideracin con la exposicin
prolongada a la luz solar.
SOLVENTES:
Polares: Mezclas hidro-alcohlicas Aciduladas.
Suelen utilizarse cidos dbiles como:
Ac. Ctrico
Ac. Actico

TIPO DE EXTRACCION: Extraccin discontinua

(maceracin).

Macerado de fruto de Myrcianthes oreophila con diferentes

concentraciones de acido ctrico en etanol de 70GL.

FLAVONOIDES: ANTOCIANINAS
REACCIONES DE COLORACION:
ROSENHEIM:
Extracto acuoso llevado a sequedad, redisuelto en 1 ml
de reactivo ( HCl 0.2 N/1-propanol), transvasado a un
tubo de ensayo y llevado a ebullicin, finalmente
extrado con 1 ml de alcohol amlico.
Reaccin Positiva:
Rojo (presencia de leucoantocianidinas)
Marrn (presencia de catequinas)

FLAVONOIDES: ANTOCIANINAS
TECNICAS CROMATOGRAFICAS.

Cromatografa ( CCF) de extractos etanlicos del fruto de Myrciantes

oreophila con diferentes concentraciones de acido ctrico. Sistema
A4. Soporte Slica Gel 60 F254.

FLAVONOIDES: ANTOCIANINAS
CUANTIFICACION DE ANTOCIANINAS:
METODO: PH DIFERENCIAL.
Preparacin de extracto al 5% de materia vegetal con una
solucin de acido ctrico al 1% en etanol de 70GL.
Preparacin de Buffers Acetato y cloruro de potasio. (ph= 4.5 y 1
respectivamente).
Dilucin de 1 ml de extracto problema en matraz volumtrico de
10 ml de capacidad con cantidad suficiente de c/u de los buffers.
Lectura a 510 nm, previa calibracin del equipo.
La concentracin de antocianinas ser proporcional a la diferencia
de las observancias obtenidas de las muestras diluidas con los 2
buffers respectivamente.
La muestra debe estar libre de solidos en suspensin y su lectura
a 700 nm debe ser igual a 0. Si la lectura es mayor de 0 esta se
restara de las absorbancias a 510 nm.

PH: 1

PH: 4.5

Soluciones problema de Solanum melanogena diluidas en bufers

cloruro de potasio y acetato respectivamente.

Estructuras de antocianinas en funcin del pH: Cuevas E, Antezana

A, y Winterhalter P. ANLISIS Y CARACTERIZACIN DE
ANTOCIANINAS EN DIFERENTES VARIEDADES DE MAZ (Zea
mays) BOLIVIANO. Institut fr Lebensmittelchemie, Technische
Universitt Braunschweig, Schleinitzstrasse 20, 38106 Braunschweig,

CAPACIDAD
ANTIOXIDANTE

517 nm

Gracias por su
atencin.