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I N G . L A U R A V Z Q U E Z
CROMATOGRAFA
Fase estacionaria: slido o lquido fijado a un slido
Fase mvil: fludo (lquido o gas) que arrastra la muestra a travs de la
fase estacionaria
=
coeficiente de reparto
[molculas adsorbidas]
[mol. adsorbidas] + [mol. desorbidas]
FASE MVIL
FASE
ESTACIONARIA
Clasificaciones de cromatografa
1. Segn como se encuentre la fase estacionaria
a. columna
Fase estacionaria
Fase mvil
Slida
Lquida o gaseosa
Lquido adsorbido
Lquida o gaseosa
Permite trabajar con flujos altos para lo que se requiere aplicar presin
Separacin y purificacin
Separacin, cuantificacin y
caracterizacin
Preparativa
Analtica
carga-carga
efecto hidrofbico
enlaces covalentes
dipolos
Aplicacin de la muestra
Condiciones iniciales
+
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-
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- + ++ +
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+ + +
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+
+ + +
-
Cromatografa de afinidad
Se basa en una interaccin biolgica especfica:
Enzima-sustrato
Anticuerpo-antgeno
Enzima-coenzima
Protena-ligando especfico
La elucin se puede lograr agregando el ligando (el que est unido a la
columna) en solucin o mediante cambios en el buffer que sean
capaces de debilitar la interaccin
Cola de (Histidina)6
Ni2+
Salting out
Para la elucin se disminuye la concentracin de sales en la fase mvil
Se utiliza en HPLC
Mltiples aplicaciones:
Cambios de buffer
Separacin de molculas de bajo peso molecular de otras de mayor
tamao
Determinacin del peso molecular
Velucin (mL)
Velucin (mL)
Concluyendo.
La pregunta ms importante