Tema 8

Expresin gnica:
traduccin

Dr. Antonio Barbadilla

Objetivos tema 8
Expresin gnica: traduccin
Debern
Debern quedar
quedar bien
bien claros
claros los
los siguientes
siguientes puntos:
puntos:
Ribosomas
RNA ribosmicos
ribosmicos (rRNA)
(rRNA)
Ribosomas yy RNA
RNA
de transferencia
transferencia (tRNA)
(tRNA)
RNA de
Traduccin:
Iniciacin, Elongacin
Elongacin yy Termincin
Termincin
Traduccin: Iniciacin,
El
cdigo gentico:
gentico: degeneracin,
degeneracin, universalidad
universalidad
El cdigo
Redundancia
tambaleo
Redundancia yy tambaleo
Comparacin
de la
la traduccin
traduccin en
en procariotas
procariotas yy
Comparacin de
eucariotas
eucariotas
Comparacin
entre replicacin,
replicacin, transcripcin
transcripcin yy
Comparacin entre
traduccin
traduccin
Excepciones
Excepciones al
al dogma
dogma del
del flujo
flujo de
de la
la informacin
informacin
Dr. Antonio Barbadilla

Traduccin
Proceso
Proceso por
por el
el que
que la
la secuencia
secuencia de
de nucletidos
nucletidos de
de un
un
mRNA
mRNA determina
determina la
la estructura
estructura primaria
primaria de
de una
una protena
protena
Aparato
decodificador ->
-> Secuencia
Secuencia primaria
primaria de
de
Aparato decodificador
polipptido
polipptido
Ribosomas
Ribosomas (rRNA
(rRNA ++ protenas):
protenas): lugar
lugar de
de sntesis
sntesis 95%
RNA
tRNA:
tRNA: Portador
Portador de
de aminocidos
aminocidos
total
mRNA:
Portador
del
mensaje
cifrado
mRNA: Portador del mensaje cifrado
Factores
Factores adicionales:
adicionales: IF,
IF, EF,
EF, RF,
RF, enlaces
enlaces fosfatos
fosfatos
Separacin
Separacin componentes
componentes mediantes
mediantes centrifugacin
centrifugacin en
en
gradiente
gradiente de
de sacarosa
sacarosa (velocidad
(velocidad de
de sedimentacin,
sedimentacin, SSSvedberg-)
Svedberg-)

Dr. Antonio Barbadilla

Ribosoma

Dr. Antonio Barbadilla

El movimiento browniano es la fuerza

dominante en el contexto celular

Dr. Antonio Barbadilla

Contexto celular

Dr. Antonio Barbadilla

Ribosoma

Dr. Antonio Barbadilla

Ribosoma

Dr. Antonio Barbadilla

Traduccin
El
Ribosoma: agregado
agregado macromolecular
macromolecular protenas
protenas yy rRNA
rRNA
El Ribosoma:
(70S
(70S en
en procariotas
procariotas yy 80S
80S en
en eucariotas)
eucariotas)
Dos
subunidades: 50S
50S con
con rRNA
rRNA 23S
23S yy 5S
5S (60S
(60S 5,
5, 5,8
5,8
Dos subunidades:
yy 28
28 en
en eucariotas)
eucariotas)
Pequea:
Pequea: 30S
30S con
con rRNA
rRNA 16S
16S (40S
(40S yy 18S
18S en
en eucariotas)
eucariotas)
Las
tres molculas
molculas de
de rRNA
rRNA de
de E.
E. coli
coli se
se encuentran
encuentran en
en el
el
Las tres
mismo
mismo transcrito.
transcrito. 5-10
5-10 copias
copias del
del gen
gen que
que codifica
codifica rRNA.
rRNA. Se
Se
obtiene
obtiene proporcin
proporcin 1:1:1
1:1:1
En
eucariotas tambin
tambin se
se transcriben
transcriben conjuntamente
conjuntamente
En eucariotas
excepto
excepto rRNA
rRNA 5S.
5S. D.
D. melanogaster
melanogaster 130
130 copias
copias rRNA
rRNA genes
genes
en
en tndem
tndem cromosomas
cromosomas X
X ee YY (el
(el organizador
organizador nucleolar)
nucleolar) que
que
transcribe
transcribe RNA
RNA pol
pol II ->
-> Nucleolo,
Nucleolo, mancha
mancha oscura
oscura ncleo
ncleo
eucariotas,
eucariotas, lugar
lugar montaje
montaje ribosomas.
ribosomas. Entre
Entre dos
dos copias
copias
consecutivas
consecutivas hay
hay DNA
DNA espaciador.
espaciador.
Dr. Antonio Barbadilla

Transcripcin
rRNA

Nucleolo

Dr. Antonio Barbadilla

10

Mensaje:
Mensaje:
Algunos
Algunos genes
genes codifican
codifican protenas;
protenas; otros
otros genes
genes
especifican
especifican RNA
RNA (tRNA,
(tRNA, rRNA,
rRNA, siRNA)
siRNA) como
como producto
producto
final.
final. Luego,
Luego,
Un
Un gen
gen es
es una
una regin
regin de
de DNA
DNA que
que codifica
codifica RNA
RNA

Dr. Antonio Barbadilla

11

tRNA:
tRNA: la
la molcula
molcula adaptadora
adaptadora

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12

tRNA
tRNA
Regin
Regin especfica
especfica (anticodn)
(anticodn) que
que se
se une
une aa mRNA
mRNA (codn)
(codn)
tRNAs
son muy
muy semejantes.
semejantes. 80
80 nc.
nc. Bases
Bases raras.
raras.
tRNAs son
Lazoz
T, lazo
lazo anticodn
anticodn yy lazo
lazo dihidroU
dihidroU
Lazoz T,
Carga
del aminocido:
aminocido: Aminoacil
Aminoacil tRNA,
tRNA, enlace
enlace ~~
Carga del
Aminoacil
tRNA sintetasa
sintetasa especfica
especfica para
para cada
cada aa
aa
Aminoacil tRNA
(20)
(20)
ATP
ATP
Unin
aa extremo
extremo 3OH
3OH del
del tRNA
tRNA
Unin aa
Algunas
tRNA reconoce
reconoce >> 11 codn:
codn: tambaleo
tambaleo
Algunas tRNA
Aa
Aa ++ ATP
ATP ->
-> aa
aa ~P
~P adenosina
adenosina ++ tRNA
tRNA ->
-> aa~tRNA
aa~tRNA +adenosina+P
+adenosina+P

Durante
la sntesis
sntesis se
se reconoce
reconoce el
el tRNA
tRNA (su
(su anticodn)
anticodn) yy
Durante la
no
no el
el aminocido
aminocido (Experimento
(Experimento de
de Chapeville)
Chapeville)

Dr. Antonio Barbadilla

13

tRNA
tRNA

Dr. Antonio Barbadilla

14

tRNA
tRNA

Dr. Antonio Barbadilla

15

Aminoacil tRNA sintetasas

Dr. Antonio Barbadilla

16

Qu es el segundo cdigo gentico?

Second Genetic
Code Deciphered,
Solving a Protein
Synthesis Puzzle

Dr. Antonio Barbadilla

17

Analysis of a series of mutants of

an Escherichia coli alanine
transfer RNA shows that
substitution of a single G-U base
pair in the acceptor helix
eliminates aminoacylation with
alanine in vivo and in vitro.
Introduction of that base pair into
the analogous position of a
cysteine and a phenylalanine
transfer RNA confers upon each
the ability to be aminoacylated
with alanine. Thus, as little as a
single base pair can direct an
amino acid to a specific transfer
RNA.

Nature 333, 140-145 (12 May

1988) |
doi:10.1038/333140a0;
Accepted 14 April 1988
Ya-Ming Hou
Paul Schimmel
A simple structural feature
is a major determinant of
the identity of a transfer
RNA
Ya-Ming Hou & Paul Schimmel

Traduccin
Traduccin
Iniciacin
Iniciacin
N-formil
metionina aminocido
aminocido inicial.
inicial. Todas
Todas las
las protenas
protenas
N-formil metionina
tienen
tienen f-met
f-met en
en el
el extremo
extremo N-terminal
N-terminal (E.
(E. coli)
coli)
2tRNA
met
2tRNA met
tRNA
met, ff ->
-> reconoce
reconoce AUG
AUG como
como codn
codn inicial
inicial
tRNA met,
tRNA
met, m->
m-> reconoce
reconoce codones
codones AUG
AUG excepto
excepto incial
incial
tRNA met,
Complejo
de iniciacin
iniciacin (requiere
(requiere un
un GTP)
GTP)
Complejo de
Met + 3 factores de
Subunidad
Subunidad 30S
30S ++ mRNA
mRNA ++ tRNA
tRNAMet
ff + 3 factores de
iniciacin
iniciacin IF1,
IF1, IF2,
IF2, IF3
IF3
Secuencia
de Shine-Dalgarno:
Shine-Dalgarno: 16S
16S rRNA
rRNA (3)
(3)
Secuencia de
complementario
complementario mRNA
mRNA (5).
(5). En
En eucariota
eucariota la
la caperuza
caperuza 5
5 (7
(7
metil
metil guanosina)
guanosina)
Subunidad
50S se
se une
une al
al complejo
complejo
Subunidad 50S
Sitio
A (aminoacil):
(aminoacil): entra
entra nuevo
nuevo tRNA
tRNA
Sitio A
Sitio
(peptidil): crecimiento
crecimiento cadena
cadena polipeptdica
polipeptdica
Sitio PP (peptidil):
Sitio
(salida): salida
salida tRNA
tRNA desacilado
desacilado
Sitio EE (salida):
Dr. Antonio Barbadilla

18

Dr. Antonio Barbadilla

19

El elemento Shine-Delgarno se encuentra en el extremo 5' del codn

iniciador AUG en mRNAs policistrnicos de procariotas. El elementos
es complementario a las secuencias presente cerca del extremo 3'
del rRNA 16S del ribosoma procaritico.

Dr. Antonio Barbadilla

20

Traduccin
Traduccin
Elongacin
Elongacin
Segundo
tRNA
Segundo tRNA
Reconocimiento
mediante el
el enlace
enlace de
de hidrgeno
hidrgeno codncodnReconocimiento mediante
anticodn
anticodn
Requiere
GTP ++ 22 factores
factores de
de elongacin
elongacin (EF-Ts
(EF-Ts yy EFEFRequiere GTP
Tu)
Tu)
Formacin
enlace peptdico
peptdico
Formacin enlace
Peptidil
transferasa: centro
centro activo
activo en
en 50S
50S
Peptidil transferasa:
Extremo
carboxil (enlace
(enlace rico
rico en
en energa)
energa) del
del aa
aa en
en
Extremo carboxil
sitio
sitio PP con
con extremo
extremo amino
amino aa
aa sitio
sitio A
A
El
tRNA vaco
vaco (sin
(sin aa)
aa) es
es el
el del
del sito
sito PP
El tRNA
Translocacin:
Movimiento del
del ribosoma
ribosoma respecto
respecto mRNA
mRNA de
de
Translocacin: Movimiento
modo
modo tRNA
tRNA con
con cadena
cadena polipeptdica
polipeptdica pasa
pasa sitio
sitio P,
P, yy sitio
sitio A
A
quede
quede vaco
vaco
Requiere
GTP, yy factor
factor EF-G
EF-G (Translocasa)
(Translocasa)
Requiere GTP,

Dr. Antonio Barbadilla

21

Dr. Antonio Barbadilla

22

Dr. Antonio Barbadilla

23

Dr. Antonio Barbadilla

24

Traduccin
Traduccin
Terminacin
Terminacin
Codn
sin sentido
sentido
Codn sin
No
codifica ningn
ningn aminocido
aminocido
No codifica
UAG
(Ambar), UAA
UAA (Ocre),
(Ocre), UGA
UGA (Opal)
(Opal)
UAG (Ambar),
Factor
de liberacin
liberacin oo terminacin
terminacin (RF)
(RF) yy un
un GTP
GTP ->
-> Liberan
Liberan
Factor de
la
la protena
protena del
del ribosoma
ribosoma
Disociacin
del ribosoma
ribosoma
Disociacin del

Dr. Antonio Barbadilla

25

Dr. Antonio Barbadilla

26

Dr. Antonio Barbadilla

27

Animacin http://www.whfreeman.com/iga9e

Traduccin
Traduccin
Resumen
Resumen
Requiere
mucha energa
energa (90%)
(90%) Un
Un enlace
enlace peptdico
peptdico requiere:
requiere: 22
Requiere mucha
ATP
ATP carga
carga 22 tRNA,
tRNA, 11 GTP
GTP (tRNA
(tRNA en
en sitio
sitio A),
A), 1GTP
1GTP
(translocacin)
(translocacin)
Procariotas:
Procariotas:
Acoplamiento
transcripcin traduccin
traduccin
Acoplamiento transcripcin
Ms
de un
un gen
gen por
por mRNA:
mRNA: mensajeros
mensajeros policistrnicos.
policistrnicos. Vel
Vel
Ms de
sntesis:
sntesis: 300
300 aa/20
aa/20 segundos
segundos

Dr. Antonio Barbadilla

28

Eucariotas:
No acoplamiento,
acoplamiento, mensajeros
mensajeros no
no
Eucariotas: No
policistrnicos.
policistrnicos. Vel
Vel sntesis:
sntesis: 30
30 aa/2,5
aa/2,5 minutos
minutos
Muchos
ribosomas se
se encuentran
encuentran en
en un
un mRNA
mRNA (polisoma
(polisoma oo
Muchos ribosomas
poliribosoma)
poliribosoma)
Protenas
de membrana:
membrana: pptido
pptido seal
seal
Protenas de
Aminocidos
N-terminal (10-20)
(10-20) ++ partcula
partcula
Aminocidos N-terminal
reconocimiento
reconocimiento seal
seal (SRP)
(SRP)
Se
une ribosoma
ribosoma aa una
una protena
protena de
de atraque
atraque de
de la
la
Se une
membrana
membrana
Eliminacin
del pptido
pptido seal
seal
Eliminacin del

Dr. Antonio Barbadilla

29

Poliribosoma
Poliribosoma

Dr. Antonio Barbadilla

30

Cdigo
Cdigo gentico
gentico
Nmero
bases por
por aa
aa
Nmero bases
3
bases (triplete)
(triplete) // aa
aa mnimo
mnimo para
para la
la sntesis
sntesis de
de 20
20 aa
aa
3 bases
Experimento
de Crick
Crick en
en gen
gen rII
rII fago
fago T4
T4 tratado
tratado mutgeno
mutgeno
Experimento de
proflavina
proflavina (aade
(aade oo quita
quita un
un nc)
nc) ->
-> mutacin
mutacin de
de desplazamiento
desplazamiento
pauta
pauta lectura:
lectura:
+1
luego -1,
-1, restablece
restablece una
una mutacin
mutacin
+1 yy luego
+3
-3 tambin
tambin
+3 -3
Solapamiento
puntuacin
Solapamiento yy puntuacin
Mutaciones
conocidas (p.e.,
(p.e., Hb
Hb S)
S) solo
solo cambian
cambian un
un aa
aa
Mutaciones conocidas
mRNA
virus necrosis
necrosis tabaco
tabaco codones
codones justos
justos para
para la
la
mRNA virus
sntesis
sntesis de
de la
la protena
protena de
de membrana
membrana
Descifrado
del cdigo
cdigo (Ochoa,
(Ochoa, Nirenberg)
Nirenberg)
Descifrado del
mRNA
sinttico in
in vitro
vitro enzima
enzima polinucletido
polinucletido fosforilasa
fosforilasa
mRNA sinttico
poliU->Fenilalanina
poliU->Fenilalanina
Proporciones
conocidas de
de nucletidos
nucletidos
Proporciones conocidas
Uso
de codones
codones sintticos
sintticos en
en pruebas
pruebas de
de unin
unin
Uso de

Dr. Antonio Barbadilla

31

Cdigo
Cdigo gentico
gentico

Dr. Antonio Barbadilla

32

Cdigo
Cdigo gentico
gentico

Dr. Antonio Barbadilla

33

Cdigo
Cdigo gentico
gentico

Dr. Antonio Barbadilla

34

Cdigo
Cdigo gentico
gentico
Cdigo
es degenerado:
degenerado: varios
varios codones
codones determinan
determinan el
el
Cdigo es
mismo
mismo aminocido
aminocido
Familias
no compartidas
compartidas de
de codones
codones (8)
(8) GUX
GUX 3
3 base
base
Familias no
no
no importa
importa
Familias
compartidas de
de codones
codones
Familias compartidas
Nmero
de tRNA
tRNA 50
50 << Nmero
Nmero de
de codones
codones 61
61 ->
-> Algunos
Algunos
Nmero de
anticodones
anticodones deben
deben reconocer
reconocer ms
ms de
de un
un codn
codn
61/20
61/20 ~~ 3,5
3,5
Hiptesis
del tambaleo
tambaleo (Crick):
(Crick):
Hiptesis del
El
apareamiento de
de la
la 3
3 base
base del
del codn
codn no
no es
es rgido
rgido
El apareamiento

Dr. Antonio Barbadilla

35

Cdigo
Cdigo gentico
gentico
Hiptesis
del tambaleo
tambaleo (Crick):
(Crick):
Hiptesis del
El
apareamiento de
de la
la 3
3 base
base del
del codn
codn no
no es
es rgido
rgido
El apareamiento

Dr. Antonio Barbadilla

36

Cdigo
Cdigo gentico
gentico
Hiptesis
del tambaleo
tambaleo (Crick):
(Crick):
Hiptesis del
El
apareamiento de
de la
la 3
3 base
base del
del codn
codn no
no es
es rgido
rgido
El apareamiento
Extremo 5 del anticodn
G
C
A
U
I
tRNA isoaceptores

Dr. Antonio Barbadilla

37

Extremo 3 del codn

CoU
Slo G
Slo U
AoG
U, C o A
Anticodn

Codn

tRNASer1

UCG + tambaleo

UCC
UCU

tRNASer2

AGU + tambaleo

UCA
UCG

tRNASer3

UCG + tambaleo

AGC
AGU

Cdigo
Cdigo gentico
gentico
Universalidad
del cdigo
cdigo
Universalidad del
La
inmensa mayora
mayora de
de organismos
organismos usan
usan el
el mismo
mismo
La inmensa
cdigo
cdigo
Mitocondrias
Mitocondrias
U
en sitio
sitio tambaleo
tambaleo en
en tRNA
tRNA pueden
pueden aparear
aparear con
con
U en
todas
todas las
las bases.
bases. Reduccin
Reduccin del
del nmero
nmero de
de tRNAs
tRNAs aa
24
24
CUX:
leu, no
no thr;
thr; UGA:
UGA: trp,
trp, no
no stop
stop
CUX: leu,
Otros
organismos leen
leen codones
codones stops
stops
Otros organismos

Dr. Antonio Barbadilla

38

El dogma central revisado

Dr. Antonio Barbadilla

39

Diferencia entre replicacin y

transcripcin por un lado y traduccin
por el otro
En
En el
el primer
primer paso
paso del
del flujo
flujo de
de la
la informacin,
informacin, de
de DNA
DNA aa
DNA
DNA oo DNA
DNA aa RNA,
RNA, el
el lenguaje
lenguaje es
es lineal
lineal yy biyectivo,
biyectivo, yy por
por
lo
lo tanto
tanto reversible
reversible (como
(como lo
lo muestra
muestra la
la existencia
existencia del
del
fenmeno
fenmeno de
de retrotranscripcin,
retrotranscripcin, pero
pero el
el paso
paso de
de RNA
RNA aa
protena
protena es
es irreversible.
irreversible. El
El cdigo
cdigo es
es degenerado
degenerado yy la
la
protena
protena adquiere,
adquiere, conforme
conforme se
se traduce,
traduce, una
una estructura
estructura
no
no lineal,
lineal, tridimensional
tridimensional

Dr. Antonio Barbadilla

40