PCR

Reaccin en Cadena de la Polimerasa

 Fue inventada por el bioqumico

estadounidense Kary Mullis en 1985.
Tcnica de laboratorio que permite
amplificar pequeos fragmentos de
ADN para estudiarlos.
consigue que un pequeo segmento de
ADN que pasara desapercibido en un
anlisis cualquiera se multiplique millones
de veces y as sea fcil de detectar.
identificacin de cadveres o en el
estudio de escenas del crimen para
buscar rastros del culpable.

Tipos de PCR
PCR anidada: consigue amplificar muestras mnimas de ADN a miles de
millones de fragmentos. Es capaz por lo tanto de detectar trazos
minsculos.
PCR in situ: permite la deteccin de ADN en el mismo lugar de la muestra,
sin tener que procesarla primero con tcnicas de laboratorio. Se suele
utilizar para biopsias o raspados de clulas.
PCR mltiple: con este tipo de PCR se consiguen detectar varios trazos de
ADN a la vez y con una sola muestra.
PCR con transcriptasa inversa: en este caso se utilizan cadenas de ARN
para detectar moldes de ADN. Se utiliza la enzima transcriptasa inversa, la
misma que utiliza el VIH entre otros virus.
PCR en tiempo real o PCR cuantitativa: se aade un componente
fluorescente que permite medir la luz. A ms luz, ms cantidad del ADN
detectado.

REACTIVOS
Los 4 desoxirribonucleotidos-trifosfato
(dNTP).
Cebadores o iniciadores, complementarios
a una de las hebras de ADN (6-40
nucletidos)delimitan la zona a
amplificar.
Iones divalentes Mg2+ (cloruro de
magnesioMgCl2)
Iones monovalentes (potasio)
Solucin tampn o buffer mantener pH
adecuado para la ADN polimerasa

 Sensibilidad: se refiere a la cantidad mnima de ADN

necesaria para que se produzca la amplificacin.
Se relaciona con los falsos negativos, ya que puede que una
muestra sea positivas pero sea dada como negativa porque no se
ha amplificado por no tener suficiente cantidad de ADN.

Especificidad: se refiere a la obtencin de un solo

producto amplificado. Viene determinada por los oligos y la
especificidad con la que se unen al ADN molde.
Si los oligos tienen ms de un sitio al que se pueden unir
aparecer ms de un producto amplificado.

Eficiencia: se refiere a la amplificacin mxima que se

puede obtener en un nmero determinado de ciclos.
Fidelidad: se refiere a los errores que comete la ADN
polimerasa durante la amplificacin.
Una buena fidelidad permite evitar falsos positivos y/o negativos.

Desnaturalizacin
Por calentamiento (94-95C) de la muestra.
La temperatura de desnaturalizacin depende, de
la proporcin de G+C y del largo de la cadena.
Alineamiento o unin del cebador
Unin del cebador a la secuencia complementaria
de ADN molde.
Reduce la temperatura 40-68 oC, durante 20-40
seg.
Forma los puentes de hidrogeno estables entre la
cadena de ADN y la secuencia del cebador.
La polimerasa se une al hibrido de la cadena
molde y cebador, para sintetizar ADN.

Extensin o elongacin de la cadena

AND polimerasa acta para sintetizar la
cadena complementaria a partir del cebador
por lo general a 72 oC.
ADN polimerasa aade los dNTP
complementarios en direccin 5 3.
Elongacin final
Etapa nica que se lleva a cabo a una
temperatura de 70-74C durante 5-15 minutos
tras el ltimo ciclo de PCR.
Se asegura que cualquier ADN de cadena
simple restante sea totalmente ampliado.