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INSULINA

COMO UN CASO DE XITO DE LA CLONACIN

Que es?
Hormonapolipeptdicaformada
por
51aminocidosproducida y secretada por
lasclulas
betade
losisolates
de
Langerhans delpancreas.
Interviene
en
aprovechamientometablicode
nutrientes,
sobre
todo
elanabolismode loscarbohidratos.

el
los
con

Su dficit provoca ladiabetes mellitusy su


exceso
provocahiperinsulinismoconhipoglucemia
.

Estructura de la
insulina

Sir Frederick Grant Banting descubri la


insulina en el ao de 1921 teniendo como
antecedentes los trabajos de Shafer.
Dilucidacin de su estructura, proeza realizada
en 1954 por Frederick Sanger y sus
colaboradores de la Universidad de Cambridge.
La insulina es una molcula muy pequea: slo
contiene 254 tomos de carbono, 337 de
hidrgeno, 65 de nitrgeno, 75 de oxgeno y 6
de azufre.
24 aminocidos posibles, 17 estn presentes en
la insulina.

Sntesis
La insulina se sintetiza en las clulas beta del pncreas y se
libera bajo la influencia de varios estmulos, entre ellos, la
ingesta de protenas, carbohidratos y su paso a la sangre a
partir de los alimentos digeridos.
la insulina se sintetiza a partir de proinsulina, una molcula
precursora, por accin de enzimas proteolticas conocidas
como
convertasas
prohormonas,
especficamente
la
convertasa proprotena 1 y la convertasa proprotena 2, as
como la exoproteasa carboxipeptidasa E.
La produccin endgena de insulina es regulada en varios
pasos a lo largo de una ruta sinttica. Primero sobre la
transcripcin del ADN, especficamente a nivel del gen de la
insulina. Luego a nivel de la estabilidad del ARNm y a nivel de
la traduccin del ARNm. Finalmente, tambin se regula a
nivel de las modificaciones postransduccin.

Cmo se secreta?
Glucosa: Principal
estimulo que
desencadena su
liberacin.
AA, Ac. Grasos,
Cuerpos cetonicos
Glucosa Piruvato
(Glucolisis)
Piruvato entra en Ciclo
de Krebs ATP (salida de
insulina).
La clula tiene muy
poca DHL (piruvato
lactato).

INSULINA
RECOMBINANTE

Historia
Hasta 1983 toda la insulina utilizada para el
tratamiento de la diabetes era extrada de
pncreas de porcino y bovino, sin embargo, el
uso prolongado de este tipo de insulina
provoca, en algunos individuos, una respuesta
inmune.
Adems la disponibilidad de pncreas de los
animales mencionados es limitada, por lo que
es deseable la obtencin y uso de insulina

El objetivo sera conseguir que los


genes humanos, responsables de
la produccin de la hormona
insulina se expresaran en la
bacteria.
De este modo, las bacterias
produciran insulina a grandes
velocidades, pudindose escalar el
modelo en tanques de
fermentacin para la obtencin de
grandes cantidades.

Existen dos rutas para la obtencin de


insulina
humana
utilizando
microorganismos
modificados
por
ingeniera gentica:
Una de ellas, consiste en producir por
separado
ambas
cadenas
para
,
posteriormente, asociarlas qumicamente.
La otra se basa en la produccin de
proinsulina que es procesada hasta insulina
madura mediante mtodos enzimticos.

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En primer lugar, se sintetizaron qumicamente las


cadenas de ADN con las secuencias correspondientes a
las cadenas de glicocola y fenilalanina
siendo necesarias 63 nucletidos para la primera y 90
para la segunda ms un triplete para sealar el fin de la
traduccin

Para facilitar la separacin de los productos


sintetizados, se aadi a cada gen el triplete
correspondiente a la metionina.

Los genes sintticos A y B se insertaron por separado


en el gen bacteriano responsable de la b-galactosidasa y
presente en un plsmido

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Los plsmidos recombinantes se introdujeron en E.


coli donde se multiplicaron, fabricando un ARNm
que tradujo una protena quimrica, en la que una
parte de la secuencia de la b-galactosidasa estaba
unida por una metionina a la cadena de glicocola o
de fenilalanina de la insulina.
Como ninguna de las cadenas de insulina contiene
metionina, esto se aprovecho para separar las
cadenas de la insulina del resto de protena
quimrica rompindola con bromuro de ciangeno
que destruye la metionina

Despus de purificadas, las cadenas se unieron


mediante una reaccin que forma puentes de
disulfuro.