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ADN RECOMBINANTE

Qu es la tecnologa del ADN


recombinante?
Es el conjunto de tcnicas que permiten aislar un gen
de un organismo, para su posterior manipulacin e
insercin en otro diferente

Estas tcnicas se emplean para la produccin de


protenas en gran escala:

Hormona de crecimiento Enzima tripsina

Enzima lactasa
Cmo cortar y pegar el ADN?

Tijeras moleculares: Enzimas de restriccin


Enzimas de restriccin
Descubiertas en 1975 por Daniel Nathans y
Hamilton O. Smith
Cortan la doble cadena de ADN a travs del
esqueleto de fosfatos sin daar las bases.
Son producidas naturalmente por bacterias
como mtodo de defensa contra virus y
degradan el ADN extrao
Cmo cortan las enzimas de restriccin?

Las enzimas de restriccin cortan dejando extremos


cohesivos o romos

El corte genera
extremos simple
cadena

El corte genera
extremos doble
cadena

Permiten cortar el genoma de cualquier organismo en


pequeos fragmentos llamados fragmentos de restriccin
Cmo introducir ADN recombinante en las
bacterias?
Mediante la utilizacin de plasmidos

ADN circular extra-cromosomal presente en


bacterias que puede replicar de manera
autonoma dentro de las mismas
Proceso de obtencin de plasmido
recombinante
1- Se corta el plsmido con enzimas de restriccin, para generar extremos cohesivos.
2- Se corta ADN que queremos multiplicar con las mismas enzimas de restriccin que el
plasmido.
3- Unimos el gen que queremos introducir (inserto) por medio de la enzima ADN-ligasa y luego
introducimos el plsmido con inserto en bacterias.
4- Seleccionamos las bacterias que hayan introducido el plsmido con la ayuda de antibiticos.
Proceso de obtencin de plasmido
recombinante
Cmo encontrar el gen adecuado?

Imanes biolgicos: sondas y anticuerpos


Las sondas son fragmentos de ADN o ARN de simple cadena complementarias a la
regin de ADN o ARN que queremos encontrar. Contienen alguna "marca" que permite
revelar su unin (hibridacin) a la secuencia elegida y de esa manera revela presencia
de la regin buscada.
Cmo encontrar el gen adecuado?
Los anticuerpos marcados sirven para la
deteccin del gen insertado mediante el
reconocimiento de su producto proteico
Separacin de cidos nucleicos y protenas:
Electroforesis en gel
Tcnica que se utiliza para separar cidos nucleicos y
proteinas, de acuerdo a su tamao
se logra por la diferencia de desplazamiento de las molculas
a lo largo de un gel sometido a un campo elctrico.
La carga elctrica sirve como fuerza impulsora que atrae las
molculas cargadas negativamente hacia el otro extremo del
gel que posee carga positiva.
Existen distintos tipos de gel: agarosa o poliacrilamida
Electroforesis en gel (ADN y protenas)
Cmo estudiar la expresin de diversos
genes?
Southern blot: sirve para la deteccin de ADN.
Consiste en una electroforesis seguida de transferencia donde
se emplean secuencias especficas (sondas) complementarias
a la molcula de ADN a identificar
Cmo estudiar la expresin de diversos
genes?
Northern blot: sirve para la deteccin de ARN. Consiste en
una electroforesis seguida de transferencia donde se emplean
secuencias especficas (sondas) complementarias a la
molcula de ARN a identificar
Diferencias entre Southern y Northern

Southern: se usa, por ejemplo, para estudiar


mutaciones en el genoma. Nos permite
evidenciar el mismo material gentico
El Northern, en cambio, permite detectar qu
genes son transcriptos en determinadas
condiciones. Nos permite evidenciar la
expresin de diferentes genes
Cmo estudiar la expresin de diversos
genes?
Western blot: sirve para la deteccin de protenas.
Una vez que la muestra con las protenas que se quiere
identificar ha corrido en un gel, se la transfiere a una
membrana especial donde las protenas quedan "ancladas" o
adheridas. Despus, se incuba esta membrana con el
anticuerpo especfico contra la protena blanco, y se revela

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