COLIFORMES FECALES

(ESCHERICHIA COLI) Y COLIFORMES

TOTALES EN EL AGUA
Coliformes totales
Los coliformes totales son un grupo de microorganismos que comprende varios
gneros de la familia esterobacteriaceae.
Este grupo de microorganismos se encuentra ampliamente difundido en la
naturaleza, agua y suelo, adems, es habitante normal del tracto intestinal del
hombre y animales de sangre caliente.
Se caracterizan por ser bacilos Gram negativos, aerobios o anaerobios
facultativos, son oxidasa negativa, no formadores de esporas y son capaces
de fermentar la lactosa con produccin de cido y gas a 35C +/- 2C en un
tiempo mximo de 48 horas.
Entre los coliformes totales se encuentran los diferentes Escherichia coli,
Citrobacter, Enterobacter y Klebsiella.
Coliformes fecales
Tambin denominados coliformes termotolerantes, llamados as porque
soportan temperaturas hasta 45C.
Comprenden un grupo de microorganismos indicadores de la presencia de
contaminacin fecal de origen humano o animal.
En su mayora estn representados por el microorganismo E. coli pero se
pueden encontrar, entre otros menos frecuentes, Citrobacter freundii y
Klebsiella pneumoniae estos ltimos hacen parte de los coliformes
termotolerantes, pero su origen se asocia normalmente con la vegetacin y
solo ocasionalmente aparecen en el intestino.
Comnmente de los coliformes fecales presentes en la flora intestinal el 90% al
100% son E. coli mientras que en aguas residuales y muestras de agua
contaminadas el porcentaje de E. coli disminuye hasta un 59%.
Diferencias entre Coliformes totales y
Coliformes fecales (E. coli)
Los coliformes fecales integran el grupo de los coliformes totales, pero se
diferencian de los dems microorganismos que hacen parte de este grupo en
que:
Son indol positivo.
Su rango de temperatura ptima de crecimiento es muy amplio (hasta 45C).
Son mejores indicadores de higiene en alimentos y en aguas, debido a que la
presencia de estos indica existencia de contaminacin fecal de origen
humano o animal.
Diferencias entre Coliformes totales y
Coliformes fecales (E. coli)
Escherichia coli - E. coli

Son un tipo de bacterias coliformes fecales que se encuentran comnmente en los

intestinos de los animales y los seres humanos, son tan pequeos que no se pueden ver
sin un microscopio, sin embargo, su crecimiento puede verse como colonias en medios
de agar (como gelatina) en condiciones especiales.
E. coli presenta caractersticas bioqumicas importantes que permiten la diferenciacin
con otros coliformes, como ser positivo para la prueba de indol.
Es la nica especie dentro de las Enterobacterias que presenta la enzima B-D-
Glucoronidasa, que degrada el sustrato 4-metilimberiferil -D-glucornico (MUG),
formando 4-metilumbeliferona, este producto tiene la propiedad de emitir
fluorescencia azul/verde cuando se ilumina con luz ultravioleta.
Escherichia coli - E. coli
Esta bacteria vive y crece de forma natural en el tracto gastrointestinal de los seres
humanos y los animales, pero si entra en un lugar equivocado en el cuerpo, por
ejemplo los riones o la sangre, puede causar enfermedad.
Los alimentos y agua contaminada son las formas ms comunes de ser expuestos a E.
coli.
La mayora de los pacientes se recuperan en el trmino de 10 das, aunque en algunos
casos la enfermedad puede causar la muerte.
Escherichia coli - E. coli
Hay tipos especficos (tambin llamadas cepas) de E. coli:
Anlisis microbiolgico del agua
Las tcnicas aceptadas para realizar el anlisis microbiolgico del agua para
Escherichia coli y Coliformes totales son:
Filtracin por membrana
Sustrato definido
Enzima sustrato
Presencia / ausencia
 TCNICA FILTRACIN POR MEMBRANA

La tcnica cuantitativa de filtro de membrana se fundamenta en la

filtracin de un volumen determinado de muestra (100 mililitros o volmenes
menores segn la densidad bacteriana esperada) a travs de un filtro de
membrana de 0,45 m de dimetro de poro, gracias a una bomba
elctrica que ejerce una presin diferencial sobre la muestra de agua, el
filtro de membrana es colocado sobre un medio de cultivo especfico y
luego incubado a una temperatura adecuada, donde se evidencian el
crecimiento de microorganismos y Unidades Formadoras de Colonia.
EQUIPOS TCNICA FILTRACIN POR MEMBRANA

Autoclave Probetas

Destilador de agua Matraces

Cinta de pH Pinzas (sin dientes)

Incubadora Embudo

Sistema de filtracin y fuente de vaco Filtros de membrana de 0,45 m de

dimetro de poro.
Frascos de vidrio de boca ancha y
esterilizados Mechero de Bunsen

Placas Petri Microscopio

Almohadillas absorbentes Fuente de luz

MATERIALES TCNICA FILTRACIN POR MEMBRANA
Reactivo de Kovacs

Agar Cromgeno para coliformes (m-ColiBlue24)

PROCEDIMIENTO TCNICA FILTRACIN POR MEMBRANA
Mezclar suavemente el caldo.
Colocar en la placa de Petri, una almohadilla absorbente esterilizada, con ayuda de
pinzas.

Verter por medio de una pipeta el medio lquido (aproximadamente 2,0 mL por placa).
El pH final debe ser 7,0 + - 0,2. Tapar la placa de Petri.
PROCEDIMIENTO TCNICA FILTRACIN POR MEMBRANA
Seleccin del tamao de la muestra: El tamao de la muestra se regir por la densidad
bacteriana esperada y, en su caso, por los requisitos reglamentarios. Para el anlisis de agua
potable, el tamao de la muestra se limitar solamente por el grado de turbidez o por el
crecimiento no coliformes en el medio. Un volumen de muestra ideal producir de 20 a 80
colonias de coliformes totales y no ms de 200 colonias de todos los tipos.
PROCEDIMIENTO TCNICA FILTRACIN POR MEMBRANA
Filtracin de la muestra: Limpiar con alcohol la superficie del portafiltros, colocar un filtro de
membrana (rejilla hacia arriba) sobre el soporte con la ayuda de unas pinzas esterilizadas.

Situar el embudo previamente esterilizado sobre el soporte hasta que est fijo. Verter la muestra
de agua en el embudo y aplicar el vaco hasta que el lquido se haya filtrado.
PROCEDIMIENTO TCNICA FILTRACIN POR MEMBRANA
Desenganchar el vaco, retirar el embudo y tomar el filtro de membrana cuidadosamente con las
pinzas esterilizadas y se coloca dentro de una placa Petri sobre el medio de cultivo, con la cuadricula
hacia arriba, procurando que no se formen burbujas entre la membrana y el medio de cultivo. Las
placas se llevan a incubar en posicin invertida en la estufa por 22 a 24 horas a 35 +/- 0,5C.
Posteriormente se procedern a contar el nmero de microorganismos.
ANLISIS TCNICA FILTRACIN POR MEMBRANA
Conteo: Para contar las colonias en filtro de membrana, utilizar un gran campo de baja potencia (10 a 15x)
binocular microscopio de diseccin u otro dispositivo ptico con una fuente de luz fluorescente blanca fra dirigida a
proporcionar una visualizacin ptima.

Las colonias de E. coli son de color azul oscuro a prpura y los coliformes totales son de color salmn a rojo. Si aparecen
colonias azul claro a turquesa o incoloras, puede tratarse de otras bacterias Gram negativas. Para confirmar E.
coli puede cubrirse la colonia azul-prpura con una gota del reactivo de Kovacs. Si este reactivo da un color cereza-
rojo despus de algunos segundos, significa que son colonias indol positivo, que confirma la presencia de E. coli.

Calculo de la densidad de los coliformes

. 100 = 100

100 = 100

TCNICA NMERO MS PROBABLE POR TUBOS MLTIPLES

En esta tcnica los resultados de la fermentacin en tubos mltiples se expresan en

trminos de Nmero Ms Probable (NMP) de microorganismos existentes.
El mtodo del NMP por tubos mltiples se fundamenta en un modelo de clculo de
probabilidades.
De acuerdo con la alternativa de siembra elegida, se selecciona la tabla de NMP
correspondiente para obtener los recuentos de coliformes.
Los tipos de siembra son: Para siembra 10 mL en 10 tubos 20 mL en 5 tubos. (Agua
tratada) y Para siembra de 10, 1 y 0,1 mL de muestra (Agua sin tratamiento)
La tcnica de fermentacin en tubos mltiples para la determinacin de coliformes
totales y termotolerantes (Coliformes fecales) consta de dos fases: la fase presuntiva y la
fase confirmatoria.
EQUIPOS TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES

Autoclave Tubos Durham

Destilador de agua Asa de inoculacin con aro de nquel,
cromo o platino
Cinta de pH
Esptulas
Incubadora
Probetas
Frascos de vidrio de boca ancha y
esterilizados Matraces
Mechero de Bunsen

Tubos de 16x150 mm (o mayores) con

tapones

Frascos de dilucin de 100mL

MATERIALES TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES
Medios de cultivo:

Caldo Lauril triptosa

Caldo verde brillante lactosa bilis 2%

Caldo EC
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES

Preparar caldo de Lauril triptosa a simple (1 X), doble concentracin (2X) o segn se
requiera y dispensar segn el volumen de muestra que se va a sembrar, de tal manera que
las porciones de muestra inoculadas al medio no reduzcan la concentracin de
ingredientes del medio, la cual debe mantenerse constante.
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLE

A continuacin, se debe esterilizar el medio de cultivo en autoclave a 121C

por un tiempo de 12 a 15 minutos. asegurarse que al voltear los frascos no
haya presencia de burbujas de aire. El pH despus de la esterilizacin
debera ser de 6,8 /- 0,2.
Posteriormente colocar en cada tubo un tubo Durham invertido y esterilizar
en autoclave. (Tener la precaucin de que en el momento de iniciar la
prueba presuntiva no estn a la temperatura de refrigeracin y cuidar de
que ninguno de los tubos presente burbujas).
Proceder al marcado de los tubos, anotando el nmero designado por el
laboratorio, el volumen seleccionado de muestra que va a ser inoculado y la
fecha del anlisis.
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES
(Fase presuntiva)
Homogeneizar la muestra de agua, agitando un nmero no menor de 25 veces, inclinando
el frasco y formando un ngulo de aproximadamente 45entre el brazo y el antebrazo.

Con una pipeta estril, sembrar 10 mililitros de muestra en cada uno de los 10 tubos de caldo
lauril triptosa estril de doble concentracin. Verificar que en cada tubo haya un tubo
Durham invertido.
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES
(Fase presuntiva)
Despus de la inoculacin de todos los volmenes de muestra, tapar y agitar
la gradilla con los tubos inoculados. Hacerlo en forma horizontal y evitando
que el medio sembrado llegue a la tapa de los tubos. Colocar la gradilla en la
incubadora a 35 0,5 C durante 24 2 horas.
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES
(Fase presuntiva)
Despus de la incubacin, retirar los tubos de la incubadora para
efectuar la primera lectura de los resultados. Agitar suavemente cada
tubo y examinar la produccin de gas. Retirar los tubos con resultado
positivo (produccin de gas, retenida en el tubo Durham; no es
importante la cantidad de gas) y anotar los resultados.
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES
(Fase presuntiva)
Devolver a la incubadora (35 0,5 C) todos los tubos con resultados
negativos, por un periodo adicional de 24 1 hora. La segunda lectura (a
las 48 3 horas) ser hecha en las mismas condiciones, despus de esta
ltima lectura. Los tubos con resultado positivo sern separados para
continuar la marcha analtica y los que resulten negativos sern
descartados.
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES
(Fase confirmativa)
Para coliformes totales: Agitar cada tubo positivo de la prueba presuntiva
con un asa de siembra estril. Retirar el material e inocular al tubo 10
mililitros de caldo verde brillante lactosa bilis 2% (CLVBB 2%)
correspondiente. Evitar tomar la pelcula superficial.
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES
(Fase confirmativa)
Para coliformes termotolerantes (fecales): La prueba confirmativa para coliformes
termotolerantes se realizar sembrando todos los tubos positivos de la prueba
presuntiva en tubos con 10 mililitros de caldo EC.
Despus de la siembra, agitar la gradilla con los tubos inoculados. Hacerlo en
forma horizontal y evitando que el medio sembrado llegue a la tapa de los tubos.
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES
(Fase confirmativa)
Incubar los tubos de caldo verde brillante lactosa bilis 2% sembrados a 35 0,5 C durante 24 3
horas. Despus de la incubacin, retirarlos tubos para efectuar la primera lectura. Agitar
suavemente cada tubo y examinar la produccin de gas. Retirar los tubos con resulta-do positivo
(produccin de gas en el tubo Durham; no es importante la cantidad de gas) y anotarlos
resultados.

Volver a incubar los tubos negativos a 35 0,5 C durante24 1 horas y repetir el procedimiento de
lectura. Anotar los resultados.
PROCEDIMIENTO TCNICA NMP POR TUBOS MLTIPLES
(Fase confirmativa)
Volver a incubar los tubos negativos a 35 0,5 C durante24 1 horas y repetir el procedimiento de lectura. Anotar los
resultados.

Incubar todos los tubos de caldo EC inoculados (no ms de 30 minutos despus de la inoculacin) en bao Mara a
44,5 0,2 C durante 24 2 horas.

Proceder a la lectura considerando como resultado positivo para la prueba todos los tubos que presentaron
formacin de gas en el tubo Durham.
CALCULO DEL NMERO MS PROBABLE
Para muestras de agua tratada, es decir, las inoculadas en cinco tubos con 20mL cada uno
(Utilizar tabla No.12) o las inoculadas en diez tubos con 10mL cada uno (Utilizar tabla No.13).
CALCULO DEL NMERO MS PROBABLE
Para muestras de agua sin
tratamiento, es decir, las
inoculadas en tres series de cinco
tubos con volmenes de 10
mililitros, 1 mililitro y 0,1mililitros, el
Nmero Ms Probable se obtiene
de la tabla 14.

10
100 = 100

Donde, : volumen ms
bajo de la porcin de la
muestra seleccionada a la
dilucin.
 Presencia / Ausencia

La prueba de presencia-ausencia considera la siembra de 100 mililitros de

muestra en el caldo P-A y est fundamentada sobre el principio de que
los coliformes deben estar ausentes en 100 mililitros de agua potable.
El mtodo de presencia-ausencia es una alternativa para la
determinacin cualitativa de coliformes totales y termotolerantes. Es ms
simple y econmica que las tcnicas de tubos mltiples y de filtro de
membrana, que son pruebas cuantitativas.
Equipo y material
Una incubadora a 35 0,5 C

Una autoclave

Un horno de aire caliente o estufa para esterilizacin

Un destilador de agua

Un potencimetro o cinta de pH universal

Un mechero a gas o alcohol

botellas graduadas con tapa rosca estril de 100 mililitros (si se usan botellas sin graduaciones, la muestra debe medirse con probeta
graduada de 100 mililitros)

Probetas estriles

tubos de ensayo de 250 mililitros con tapa rosca o frascos de vidrio estriles y de boca ancha (solo en el caso de usar caldo P-A)

tubos de ensayo pequeos para utilizarlos como campanas de fermentacin dentro del tubo de ensayo grande (si se usa el caldo
lauril triptosa)

tubos Durham

tubos de 16 x 150 mm

Un inoculador o asa de siembra con aro de nquel o platino

Material para la preparacin de medios de cultivo: esptulas, matraces, probetas,

 Sustancias que se utilizan

Caldo verde brillante

Caldo P-A lactosa bilis Caldo EC.

Componentes Gramos Triptona o tripticasa 20,0 g

Peptona 10,0 g
Extracto De Carne 3,00
Lactosa 5,0 g
Peptona 5,00 Lactosa 10,0 g

Lactosa 7,46 Mezcla de sales biliares o sales

Oxgall (hiel 1,5 g
Triptona 9,83 10,0 g biliares No.3
de buey)
Di Potsico Hidrgeno Fosfato K2HPO4 1,35
Dipotsico K2HPO4 hidrgeno fosfato 4,0 g
Di Hidrgeno De Potasio KH2PO4 1,35 Verde
0,0133 g
brillante Potasio dihidrgeno fosfato KH2PO4 1,5 g
Cloruro De Sodio Nacl 2,46
Lauril Sulfato De Sodio 0,05 Cloruro de sodio (NaCl) 5,0 g
Agua grado
Prpura De Bromo Resol 0,0085 1L
reactivo
Agua grado reactivo 1L
Agua Grado Reactivo 1 litro
Procedimiento
Retirar la envoltura de papel del frasco con la muestra.
Homogeneizar la muestra fuertemente 25 veces.
Sembrar 100 mililitros de muestra en un frasco o tubo de ensayo con 50 mililitros de caldo P-A o caldo lauril
triptosa a triple concentracin. Si el frasco es graduado, incorporar los 100 mililitros de la muestra en forma
directa, bajo condiciones de asepsia Si el frasco no es graduado, usar una probeta estril
Colocar la tapa del frasco o del tubo de ensayo y mezclar hasta que la mezcla sea uniforme. Agitaran
forma horizontal y evitar que el medio sembrado llegue a la tapa del frasco.
Colocar el frasco inoculado en una incubadora a 35 0,5 C por 24 horas. Para el control de esterilidad
del medio, incubar un frasco de medio estril y continuar el procedimiento como si se tratara de una
muestra. El resultado debe ser negativo.
Efectuar la primera lectura. Si se presenta un cambio en el color original del medio, de prpura a amarillo,
es un indicador de que la prueba presuntiva es positiva para la presencia de coliformes. Registrar los
resultados. Los frascos con resultado negativo sern incubados por 24 horas adicionales. Despus de ese
tiempo, efectuar la segunda lectura.
Prueba confirmativa.
La muestra positiva en la prueba presuntiva debe ser sometida a la prueba
confirmativa. Agitar suavemente el frasco que ha resultado positivo en la prueba
presuntiva.
Flamear la boca del frasco, antes y despus de coger los inculos.
Con un asa de siembra estril, transferir un inculo a un tubo con10 mililitros de caldo
verde brillante lactosa bilis 2% (para coliformes totales) y un inculo a un tubo con 10
mililitros de caldo EC (para coliformes termotolerantes).
Incubar los tubos con caldo verde brillante lactosa bilis 2% para la confirmacin de
coliformes totales.
Incubar los tubos en una estufa a 35 0,5 C durante 24-48 horas.
Incubar los tubos de caldo EC, para la confirmacin de coliformes termotolerantes en
bao Mara a 44,5 0,2 C durante 24 2horas.
Lectura
Proceder a la lectura considerando prueba confirmativa positiva para
coliformes totales en el caldo verde brillante lactosa bilis 2% y positivo
para coliformes termotolerantes (coliformes fecales) en caldo EC a todos
los tubos que presentan formacin de gas en el tubo Durham.

Expresar como:
Presencia (o ausencia) de coliformes totales /100 mL
Presencia (o ausencia) de coliformes fecales /100 mL.
 Enzima Sustrato
Esta prueba es un procedimiento simplificado para la determinacin
simultnea de enzimas de coliformes totales y E. coli. en agua destinada
al consumo humano.
La inclusin de un sustrato hidrolizable cromognico (productor de color
en presencia de enzimas de coliformes) y otro fluorognico (productor de
fluorescencia en presencia de enzimas de E. coli) permite la deteccin de
bacterias coliformes totales y de E. coli.
Se recomienda tomar otra muestra en el mismo punto y efectuar
un anlisis cuantitativo.
Equipos y materiales.
Una autoclave
Un horno de aire caliente o estufa para esterilizacin
Un destilador de agua
Un potencimetro o cinta de pH universal
Incubadora a 35 0,5 C
Un mechero a gas o alcohol
Una botella transparente no fluorescente de vidrio boro silicato o equivalente con tapa rosca estril de 100
mililitros
Un frasco estril para el muestreo
Una probeta estril
Lmpara de rayos ultravioleta (366 nanmetros de longitud de onda)
Un comparador de color y de fluorescencia.
Procedimiento.
Retirar la envoltura de papel del frasco con la muestra de agua.
Homogeneizar la muestra agitando fuertemente 25 veces.
En condiciones de asepsia, verterla muestra dentro de la botella estril hasta 100 mililitros. Si
el frasco es graduado, incorporar los100 mililitros de la muestra en forma directa. Si el frasco
no es graduado, usar una probeta estril.
Adicionar el reactivo con sustrato enzimtico.
Colocar la tapa del frasco y mezclar hasta que la mezcla se vuelva uniforme. Agitar en
forma horizontal y evitar que el medio sembrado llegue a la tapa del frasco.
Incubar las botellas en 35 0,5 C por 24 horas. Para el control de esterilidad del medio,
incubar un frasco de medio estril y continuar el procedimiento como si se tratara de una
muestra. El resultado debe ser negativo.
Para el caso de coliformes totales, observar el cambio en el color del medio. Si la botella es
positiva para coli-formes totales, verificar la presencia de E. coli con una lmpara de luz
ultravioleta de 366 manmetros de longitud de onda en un ambiente oscuro.
Sustancias

Sustratos enzimticos para coliformes totales.

Orto-nitrofenil-B-D-galactopiranosido (ONPG)
Rojo de cloro fenol-B-D-galactopiranosido (CPRG).

El sustrato enzimtico para E. coli.

4-metilumbeliferil-B-D-glucoronido (MUG).
Lectura.

Dependiendo del sustrato usado para la prueba, la lectura se efecta as:

Positivo de coliformes
Sustrato totales Positivo De E. Coli Resultado Negativo

ONPG- Azul o
MUG Amarillo fluorescente Incoloro /No fluorescente

CPRG- Azul o
MUG Rojo o magenta fluorescente Amarillo/ No fluorescente
CONCLUSIONES
Es infaltable la evaluacin de caractersticas microbiolgicas como los coliformes totales y coliformes fecales
para muestras de agua, especialmente si su finalidad es el consumo humano, debido al riesgo que representa
para la salud humana la presencia de estos microorganismos.

Las tcnicas para determinar coliformes totales y coliformes fecales (E. coli) pueden ser cualitativas o
cuantitativas, lo que facilita la escogencia del mtodo a utilizar de acuerdo a las necesidades de las partes
interesadas.

La tcnica de filtracin por membrana es til para evaluar grandes volmenes de muestras o al realizar
diariamente muchas pruebas de coliformes y por lo general produce resultados numricos ms rpidamente
que el procedimiento de fermentacin en tubos mltiples, pero tiene limitaciones, en particular cuando se
prueba en aguas con alta turbidez o un gran nmero de bacterias no coliformes.

La tcnica de tubos mltiples (Nmero Ms Probable) es til para evaluar muestras de agua potable, as como
muestras de agua sin tratar con una alta densidad de partculas o coloreadas.

Los mtodos de presencia-ausencia y sustrato enzimtico son alternativas para la determinacin cualitativa
de coliformes totales y fecales. Son ms simples y econmicos que los mtodos cuantitativos.
REFERENCIAS
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Methods for the Examination of Water and Wastewater. New York: 22th Edition.
Aurazo de Zumaeta, M. (2004). Manual para anlisis bsicos de calidad del agua de bebida. Lima: Centro
Panamericano de Ingeniera Sanitaria y Ciencias del Ambiente (CEPIS/OPS).
Carrillo Zapata, E. M., & Lozano Caicedo, A. M. (2008). Validacin del mtodo de deteccin de coliformes totales y
fecales en agua potable utilizando Agar Chromocult. Bogot D.C.
International Water And Health Alliances (IWHA). (s.f.). Obtenido de http://waterinternational.org/wp-
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Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial, Ministerio de la Proteccin Social. (2007). Resolucin 2115.
Organizacin Mundial de la Salud (OMS). (s.f.). Obtenido de http://www.who.int/topics/escherichia_coli_infections/es/
Paez Sanabria, L. J. (2008). Validacin secundaria del mtodo de filtracin por membrana para la deteccin de
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The University of Arizona. (Marzo de 2014). La calidad del agua, E. coli y su salud. Obtenido de
https://extension.arizona.edu/sites/extension.arizona.edu/files/pubs/az1624s.pdf
Universidad de Murcia. (2010). Anlisis microbiolgico de aguas por filtracin. Obtenido de http://ocw.um.es/cc.-de-la-
salud/higiene-inspeccion-y-control-alimentario/practicas-1/practica-1-analisis-microbiologico-de-aguas-por
GRACIAS